薄层扫描法测定止血定痛片中人参皂甙Rg1含量
作者：蒋 林 农毅清 陈洪涛 卢尼斌
单位：广西中医学院制药厂 530023
关键词：薄层扫描法；止血定痛片；人参皂甙Rg1
中国药事990625 摘要 用超声波提取、薄层扫描法测定止血定痛片中人参皂甙Rg1的含量，方法简便，结果准确。薄层条件为：含0.2%CMC-Na的硅胶G板，[正丁醇-乙酸乙酯-水(3∶2∶5)]上层液-甲醇(10∶1)为展开剂(展开缸预先用氨蒸汽饱和半小时)，10%硫酸乙醇加热显色。扫描波长λs=530nm, λR=700nm,平均回收率为96.38%,RSD为1.05%。
Quantitative Determination of Ginsenside-Rg1 of Zhixue Dingtong
, 百拇医药
Tablet by TLC Scanning
Jiang Lin, Nong Yiqing, Chen Hongtao and Lu Nibin
(The Pharmaceutical Factory, Guangxi College of Traditional Chinese Medicine, 530023)
ABSTRACT A simple, rapid and accurate TLC scanning method for the quantitative determination of Ginsenside-Rg1 in Zhixue Dingtong tablet has been established. The sample was extracted by ultrasonic method. The plate was coated with silica gel G added 0.2% CMC-Na. Using upper mixture [n-butanol-ethyl acetate-water (3∶2∶5)]-methanol (10∶1) as developing solvent. The plate was scanned at λs=530nm, λR=700nm. The average recovery was 96.38% with a RSD of 1.05%.
, 百拇医药
KEY WORDS TLC; Zhixue Dingtong Tablet; Ginsenside-Rg1
止血定痛片系由三七、甘草等四味中药组成，收载于部颁标准(中药成方制剂第三分册)，目前，质量控制仅限于定性分析。为更好控制产品质量，采用薄层扫描法对处方中主药三七的主要成份人参皂甙Rg1[1]进行含量测定。方法简便，结果准确，重现性好。
1 仪器与试药
岛津CS-9301PC双波长薄层扫描仪；939型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(USA DRUMMONEL SCIENTIFIC.CO);超声波清洗器(上海必能信超声波有限公司 SB2200)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯。
止血定痛片(广西中医学院制药厂生产)；人参皂甙Rg1(中国药品生物制品检定所提供)。
, http://www.100md.com
2 溶液的配制
2.1 供试品溶液
取本品20片，研细，精密称取1g,置具塞离心管中，加入正丁醇10ml，浸泡过夜，超声提取50min，离心，取上清液，用少量正丁醇洗涤药渣，与上清液合并，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至10ml, 摇匀为供试品溶液。
2.2 阴性对照液
取止血定痛片方中除三七外的其余原辅料制成阴性对照品，然后按供试品溶液制备项同法制成阴性对照液。
2.3 对照品溶液
精密称取人参皂甙Rg1对照品5mg,置5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。摇匀，制成1.000 mg/ml的对照品溶液。
, 百拇医药
3 实验条件及其考察
3.1 薄层层析条件
[正丁醇-乙酸乙酯-水(3∶2∶5)]上层液-甲醇(10∶1)为展开剂(展开缸预先用氨蒸汽饱和半小时)，10%硫酸乙醇液显色，110℃烘5～7min。薄层色谱图如下：
图 薄层色谱图
a.样品溶液 b.阴性对照品溶液 c.人参皂甙Rg1对照品
3.2 扫描波长的选择及有关仪器参数的确定
将对照品溶液与样品溶液在薄层板上所显的相应斑点在可见光区(370～700nm)进行光谱扫描，结果均在530nm波长处有最大吸收，在700nm波长处为最小吸收，故确定λs为530nm, λR为700nm,双波长反射锯齿法扫描,狭缝0.4mm×0.4mm,SX=3,扫描间距8mm,灵敏度中等。
, 百拇医药
3.3 标准曲线的绘制
用定量毛细管精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6μl，分别点于同一硅胶板上，展开约16cm,取出，晾干，用10%的硫酸乙醇液浸板，110℃烘5～7min，斑点显色清晰后进行扫描测定,以点样量为横坐标，斑点峰面积为纵坐标，进行回归处理，得回归方程：Y=414.31X-2.0236，r=0.9998。人参皂甙Rg1在1.0～6.0μg范围内与峰面积呈线性关系。
3.4 精密度实验
仪器精密度：对同一板上同一斑点连续扫描5次，测得峰面积值为1847.20，RSD=0.14%,n=5。
同板精密度：对同板间5个点样量均为3μl，浓度为1.00mg/ml的标准品斑点进行扫描，测得峰面积值为1847.21，RSD=1.51%,n=5。
, http://www.100md.com
3.5 稳定性实验
对同一斑点每隔半小时测一次峰面积值1818.41，RSD=0.92%,n=6，结果说明斑点在3h内保持稳定。
3.6 重现性实验
用定量毛细管吸取对照品溶液2μl和4μl、样品溶液4μl分别点于同一薄层板上，展开，晾干，加热，显色，扫描测定，根据对照品与样品的吸收度积分值，按外标两点法计算止血定痛片中人参皂甙Rg1的含量，χ=5.754mg/g，RSD=2.90%(n=5)。
4 加样回收试验
取0.5g已知含量的止血定痛片，精密加入3ml浓度为0.98mg/ml的人参皂甙Rg1对照品，依法操作后进行测定，结果见表1。
, 百拇医药
表1 人参皂甙Rg1加样回收率试验结果 序 号
已知量/mg
加入量/mg
实测量/mg
回收率/%
1
2.91
2.94
5.70
95.03
2
2.90
, 百拇医药
2.94
5.72
96.10
3
2.90
2.94
5.77
97.65
4
2.91
2.94
5.79
97.97
, 百拇医药
5
2.91
2.94
5.73
96.06
注：平均回收率=96.38%,RSD=1.05% ，n=5
5 样品测定
依法对3批止血定痛片进行测定，结果见表2。
表2 样品中人参皂甙Rg1含量测定结果(n=4) 批 号
含量/mg.g-1
, 百拇医药 RSD/%
970708
4.933
2.38
970928
5.246
3.92
980218
5.467
3.26
6 讨论
6.1 曾试用过加热回流法，但需6h才能达到提取完全，而采用将样品浸泡过夜再超声提取50min后，经薄层检验已将人参皂甙Rg1提取完全，故采用本文方法更为简便。
, 百拇医药
6.2 曾试过氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(5∶3∶2∶1)，正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)为展开剂，展开效果均不理想，采用正文所用展开剂，阴性无干扰，Rf值约为0.6。
6.3 人参皂甙Rg1虽不是三七中特征皂甙，但三七中人参皂甙Rg1含量最高[2] ，而且止血定痛片中仅有三七含有人参皂甙Rg1，故本法以人参皂甙Rg1作为定量检测指标，来控制止血定痛片的质量是可行的。
6.4 本法采用薄层扫描法测定止血定痛片中人参皂甙Rg1含量，方法简便，结果准确，可作为止血定痛片的质量检测手段。
参考文献
1 周志华，章观德，王菊芬.三七中皂甙成分分析的研究.药学学报，1981，16(7)：535
2 刘
，安丰堂，尹政元，等.脑得生片中三七皂甙的含量测定.中医药学报，1992，6：50, 百拇医药
单位：广西中医学院制药厂 530023
关键词：薄层扫描法；止血定痛片；人参皂甙Rg1
中国药事990625 摘要 用超声波提取、薄层扫描法测定止血定痛片中人参皂甙Rg1的含量，方法简便，结果准确。薄层条件为：含0.2%CMC-Na的硅胶G板，[正丁醇-乙酸乙酯-水(3∶2∶5)]上层液-甲醇(10∶1)为展开剂(展开缸预先用氨蒸汽饱和半小时)，10%硫酸乙醇加热显色。扫描波长λs=530nm, λR=700nm,平均回收率为96.38%,RSD为1.05%。
Quantitative Determination of Ginsenside-Rg1 of Zhixue Dingtong
, 百拇医药
Tablet by TLC Scanning
Jiang Lin, Nong Yiqing, Chen Hongtao and Lu Nibin
(The Pharmaceutical Factory, Guangxi College of Traditional Chinese Medicine, 530023)
ABSTRACT A simple, rapid and accurate TLC scanning method for the quantitative determination of Ginsenside-Rg1 in Zhixue Dingtong tablet has been established. The sample was extracted by ultrasonic method. The plate was coated with silica gel G added 0.2% CMC-Na. Using upper mixture [n-butanol-ethyl acetate-water (3∶2∶5)]-methanol (10∶1) as developing solvent. The plate was scanned at λs=530nm, λR=700nm. The average recovery was 96.38% with a RSD of 1.05%.
, 百拇医药
KEY WORDS TLC; Zhixue Dingtong Tablet; Ginsenside-Rg1
止血定痛片系由三七、甘草等四味中药组成，收载于部颁标准(中药成方制剂第三分册)，目前，质量控制仅限于定性分析。为更好控制产品质量，采用薄层扫描法对处方中主药三七的主要成份人参皂甙Rg1[1]进行含量测定。方法简便，结果准确，重现性好。
1 仪器与试药
岛津CS-9301PC双波长薄层扫描仪；939型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(USA DRUMMONEL SCIENTIFIC.CO);超声波清洗器(上海必能信超声波有限公司 SB2200)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯。
止血定痛片(广西中医学院制药厂生产)；人参皂甙Rg1(中国药品生物制品检定所提供)。
, http://www.100md.com
2 溶液的配制
2.1 供试品溶液
取本品20片，研细，精密称取1g,置具塞离心管中，加入正丁醇10ml，浸泡过夜，超声提取50min，离心，取上清液，用少量正丁醇洗涤药渣，与上清液合并，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至10ml, 摇匀为供试品溶液。
2.2 阴性对照液
取止血定痛片方中除三七外的其余原辅料制成阴性对照品，然后按供试品溶液制备项同法制成阴性对照液。
2.3 对照品溶液
精密称取人参皂甙Rg1对照品5mg,置5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。摇匀，制成1.000 mg/ml的对照品溶液。
, 百拇医药
3 实验条件及其考察
3.1 薄层层析条件
[正丁醇-乙酸乙酯-水(3∶2∶5)]上层液-甲醇(10∶1)为展开剂(展开缸预先用氨蒸汽饱和半小时)，10%硫酸乙醇液显色，110℃烘5～7min。薄层色谱图如下：
图 薄层色谱图
a.样品溶液 b.阴性对照品溶液 c.人参皂甙Rg1对照品
3.2 扫描波长的选择及有关仪器参数的确定
将对照品溶液与样品溶液在薄层板上所显的相应斑点在可见光区(370～700nm)进行光谱扫描，结果均在530nm波长处有最大吸收，在700nm波长处为最小吸收，故确定λs为530nm, λR为700nm,双波长反射锯齿法扫描,狭缝0.4mm×0.4mm,SX=3,扫描间距8mm,灵敏度中等。
, 百拇医药
3.3 标准曲线的绘制
用定量毛细管精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6μl，分别点于同一硅胶板上，展开约16cm,取出，晾干，用10%的硫酸乙醇液浸板，110℃烘5～7min，斑点显色清晰后进行扫描测定,以点样量为横坐标，斑点峰面积为纵坐标，进行回归处理，得回归方程：Y=414.31X-2.0236，r=0.9998。人参皂甙Rg1在1.0～6.0μg范围内与峰面积呈线性关系。
3.4 精密度实验
仪器精密度：对同一板上同一斑点连续扫描5次，测得峰面积值为1847.20，RSD=0.14%,n=5。
同板精密度：对同板间5个点样量均为3μl，浓度为1.00mg/ml的标准品斑点进行扫描，测得峰面积值为1847.21，RSD=1.51%,n=5。
, http://www.100md.com
3.5 稳定性实验
对同一斑点每隔半小时测一次峰面积值1818.41，RSD=0.92%,n=6，结果说明斑点在3h内保持稳定。
3.6 重现性实验
用定量毛细管吸取对照品溶液2μl和4μl、样品溶液4μl分别点于同一薄层板上，展开，晾干，加热，显色，扫描测定，根据对照品与样品的吸收度积分值，按外标两点法计算止血定痛片中人参皂甙Rg1的含量，χ=5.754mg/g，RSD=2.90%(n=5)。
4 加样回收试验
取0.5g已知含量的止血定痛片，精密加入3ml浓度为0.98mg/ml的人参皂甙Rg1对照品，依法操作后进行测定，结果见表1。
, 百拇医药
表1 人参皂甙Rg1加样回收率试验结果 序 号
已知量/mg
加入量/mg
实测量/mg
回收率/%
1
2.91
2.94
5.70
95.03
2
2.90
, 百拇医药
2.94
5.72
96.10
3
2.90
2.94
5.77
97.65
4
2.91
2.94
5.79
97.97
, 百拇医药
5
2.91
2.94
5.73
96.06
注：平均回收率=96.38%,RSD=1.05% ，n=5
5 样品测定
依法对3批止血定痛片进行测定，结果见表2。
表2 样品中人参皂甙Rg1含量测定结果(n=4) 批 号
含量/mg.g-1
, 百拇医药 RSD/%
970708
4.933
2.38
970928
5.246
3.92
980218
5.467
3.26
6 讨论
6.1 曾试用过加热回流法，但需6h才能达到提取完全，而采用将样品浸泡过夜再超声提取50min后，经薄层检验已将人参皂甙Rg1提取完全，故采用本文方法更为简便。
, 百拇医药
6.2 曾试过氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(5∶3∶2∶1)，正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)为展开剂，展开效果均不理想，采用正文所用展开剂，阴性无干扰，Rf值约为0.6。
6.3 人参皂甙Rg1虽不是三七中特征皂甙，但三七中人参皂甙Rg1含量最高[2] ，而且止血定痛片中仅有三七含有人参皂甙Rg1，故本法以人参皂甙Rg1作为定量检测指标，来控制止血定痛片的质量是可行的。
6.4 本法采用薄层扫描法测定止血定痛片中人参皂甙Rg1含量，方法简便，结果准确，可作为止血定痛片的质量检测手段。
参考文献
1 周志华，章观德，王菊芬.三七中皂甙成分分析的研究.药学学报，1981，16(7)：535
2 刘
，安丰堂，尹政元，等.脑得生片中三七皂甙的含量测定.中医药学报，1992，6：50, 百拇医药