三种细胞用于脊髓灰质炎病原监测的比较
作者:田宏 罗云秋 孟昭英
单位:天津市卫生防病中心,天津 300011
关键词:
中国计划免疫000419 中图分类号:R512.4 文献标识码:B
文章编号:1006-916X(2000)04-0236-02
世界卫生组织(WHO)1998年推荐的L20B细胞整合了脊髓灰质炎(脊灰)病毒(PV)受体基因而对PV敏感,有助于从急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本中分离到PV。而非脊灰肠道病毒(NPEV)则要通过Hep-2和RD细胞检出。1999年我们采用L20B、Hep-2和RD三种细胞同时进行病毒分离与鉴定,比较三种细胞对不同肠道病毒(EV)的敏感性。
1 标本来源 1999年天津市AFP病例监测系统报告的AFP病例及其密切接触者和健康人的粪便标本。
, 百拇医药
2 PV在三种细胞中的生长情况 L20B、Hep-2、RD三种细胞由中国预防医学科学院国家脊灰实验室提供。将这三种细胞各分成10个管备用。接种病毒前三种细胞分别换1ml MM(维持液)。接种用毒株脊灰Ⅰ型的效价为107.0TCID50/0.1ml,接种前将病毒稀释至105.0TCID50/0.1ml。往上述每个细胞管中各接种0.1ml稀释好的病毒,于接种后0、2、5、7、24、48、72、96小时收获,置-20℃保存。将各个时间收获的病毒株用RD细胞测定其效价。
病毒在进入细胞后2小时滴度最低,24~48小时滴度达到高峰,48小时以后滴度缓慢下降。PV在3种细胞中的滴度以Hep-2最高,其次是RD,L20B最低(表1)。
表1 PV在三种细胞不同时间的滴度
(LogTCID50/0.1ml) 间隔(小时)
, 百拇医药
Hep-2
RD
L20B
0
4.25
4.00
4.25
2
3.50
3.75
4.00
5
4.75
, http://www.100md.com
4.00
4.00
7
5.50
4.75
4.50
24
7.75
7.75
6.50
48
8.00
7.25
, 百拇医药
6.75
72
8.00
7.75
6.75
96
8.00
6.75
6.50
3 病毒检测 使用L20B、Hep-2和RD三种细胞以常规方法进行EV分离鉴定。脊灰抗血清由WHO提供。所分离出的脊灰阳性株送国家脊灰实验室进行型内鉴定。
1999年共检测粪便标本152份,分离到EV19株,阳性率12.5%。其中5株为PVⅢ型,分离率为3.3%,经国家脊灰实验室采用PCR-RFLP方法鉴定均为疫苗相关株。另外14株为NPEV,分离率为9.2%。
, 百拇医药
4 三种细胞病毒分离情况 使用Hep-2和RD细胞分离EV,结果漏检1株PV,漏检率为20%;使用L20B和RD细胞漏检NPEV12株,漏检率高达85.7%;使用L20B和Hep-2细胞漏检2株NPEV,漏检率为14.3%,而采用三种细胞同时分离EV,检出率达100%(表2、3)。表2 不同病毒在不同细胞的分离情况
L20B(+)
RD(+)
Hep-2(+)
PV
5
4
4
NPEV
, http://www.100md.com
0
2
12
合计
5
6
16
表3 使用不同细胞病毒分离情况
L20B
+RD
L20B+
Hep-2
Hep-2
, http://www.100md.com
+RD
L20B+Hep
-2+RD
PV
5
5
4
5
NPEV
2
12
14
14
, http://www.100md.com 合计
7
17
18
19
4 讨论 从PV在三种细胞的生长曲线可以看到,尽管L20B细胞对PV敏感,但PV在L20B细胞中繁殖的滴度要略低于Hep-2和RD细胞,因此最好同时用3种细胞分离EV。用3种细胞分离EV的另一好处是可以避免NPEV的漏检。从表2可以看出,L20B细胞对PV的检出率是100%,但不能检出NPEV,要达到WHO对脊灰实验室提出的NPEV检出率10%的要求,则要依靠Hep-2和RD
细胞。以往我市的NPEV大多是通过RD细胞检出,而1999年85.7%的NPEV是通过Hep-2细胞检出。这是由于Hep-2和RD细胞对不同EV的敏感性不同,不同年份EV流行型别的变化将使两种细胞的EV分离率有所不同。因此同时采用3种细胞分离EV,既可以提高PV的检出率,又可避免NPEV漏检,有利于EV监测工作更好地完成。
作者简介:田宏(1968-),女,湖北省宜城县人,天津市卫生防疫中心技师,医学学士,从事脊髓灰质炎病毒检验工作。
收稿日期:2000-03-21
修回日期:2000-04-10, 百拇医药
单位:天津市卫生防病中心,天津 300011
关键词:
中国计划免疫000419 中图分类号:R512.4 文献标识码:B
文章编号:1006-916X(2000)04-0236-02
世界卫生组织(WHO)1998年推荐的L20B细胞整合了脊髓灰质炎(脊灰)病毒(PV)受体基因而对PV敏感,有助于从急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本中分离到PV。而非脊灰肠道病毒(NPEV)则要通过Hep-2和RD细胞检出。1999年我们采用L20B、Hep-2和RD三种细胞同时进行病毒分离与鉴定,比较三种细胞对不同肠道病毒(EV)的敏感性。
1 标本来源 1999年天津市AFP病例监测系统报告的AFP病例及其密切接触者和健康人的粪便标本。
, 百拇医药
2 PV在三种细胞中的生长情况 L20B、Hep-2、RD三种细胞由中国预防医学科学院国家脊灰实验室提供。将这三种细胞各分成10个管备用。接种病毒前三种细胞分别换1ml MM(维持液)。接种用毒株脊灰Ⅰ型的效价为107.0TCID50/0.1ml,接种前将病毒稀释至105.0TCID50/0.1ml。往上述每个细胞管中各接种0.1ml稀释好的病毒,于接种后0、2、5、7、24、48、72、96小时收获,置-20℃保存。将各个时间收获的病毒株用RD细胞测定其效价。
病毒在进入细胞后2小时滴度最低,24~48小时滴度达到高峰,48小时以后滴度缓慢下降。PV在3种细胞中的滴度以Hep-2最高,其次是RD,L20B最低(表1)。
表1 PV在三种细胞不同时间的滴度
(LogTCID50/0.1ml) 间隔(小时)
, 百拇医药
Hep-2
RD
L20B
0
4.25
4.00
4.25
2
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3.75
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5
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, http://www.100md.com
4.00
4.00
7
5.50
4.75
4.50
24
7.75
7.75
6.50
48
8.00
7.25
, 百拇医药
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72
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96
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3 病毒检测 使用L20B、Hep-2和RD三种细胞以常规方法进行EV分离鉴定。脊灰抗血清由WHO提供。所分离出的脊灰阳性株送国家脊灰实验室进行型内鉴定。
1999年共检测粪便标本152份,分离到EV19株,阳性率12.5%。其中5株为PVⅢ型,分离率为3.3%,经国家脊灰实验室采用PCR-RFLP方法鉴定均为疫苗相关株。另外14株为NPEV,分离率为9.2%。
, 百拇医药
4 三种细胞病毒分离情况 使用Hep-2和RD细胞分离EV,结果漏检1株PV,漏检率为20%;使用L20B和RD细胞漏检NPEV12株,漏检率高达85.7%;使用L20B和Hep-2细胞漏检2株NPEV,漏检率为14.3%,而采用三种细胞同时分离EV,检出率达100%(表2、3)。表2 不同病毒在不同细胞的分离情况
L20B(+)
RD(+)
Hep-2(+)
PV
5
4
4
NPEV
, http://www.100md.com
0
2
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合计
5
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表3 使用不同细胞病毒分离情况
L20B
+RD
L20B+
Hep-2
Hep-2
, http://www.100md.com
+RD
L20B+Hep
-2+RD
PV
5
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NPEV
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, http://www.100md.com 合计
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4 讨论 从PV在三种细胞的生长曲线可以看到,尽管L20B细胞对PV敏感,但PV在L20B细胞中繁殖的滴度要略低于Hep-2和RD细胞,因此最好同时用3种细胞分离EV。用3种细胞分离EV的另一好处是可以避免NPEV的漏检。从表2可以看出,L20B细胞对PV的检出率是100%,但不能检出NPEV,要达到WHO对脊灰实验室提出的NPEV检出率10%的要求,则要依靠Hep-2和RD
细胞。以往我市的NPEV大多是通过RD细胞检出,而1999年85.7%的NPEV是通过Hep-2细胞检出。这是由于Hep-2和RD细胞对不同EV的敏感性不同,不同年份EV流行型别的变化将使两种细胞的EV分离率有所不同。因此同时采用3种细胞分离EV,既可以提高PV的检出率,又可避免NPEV漏检,有利于EV监测工作更好地完成。
作者简介:田宏(1968-),女,湖北省宜城县人,天津市卫生防疫中心技师,医学学士,从事脊髓灰质炎病毒检验工作。
收稿日期:2000-03-21
修回日期:2000-04-10, 百拇医药