叶巢外睾吸虫在天然贝类宿主体内发育及生活史的观察
作者：叶向群
单位：叶向群(厦门大学寄生动物研究室，厦门 361005)
关键词：叶巢外睾吸虫；图氏窄口螺；鲶鱼；生活史；闽江口
寄生虫与医学昆虫学报000206摘要 本文报告叶巢外睾吸虫(Exorchis ovariolobularis)幼虫期人工感染图氏窄口螺(Stenothyra toucheana)，在其体中发育的全过程。从实验螺获得的本吸虫成熟尾蚴，在实验室内经实验小鱼获得囊蚴。用囊蚴感染阴性鲶鱼(Parasilurus asotus)，获得本吸虫的童虫和成虫。由此证明图氏窄口螺是本吸虫的适宜的贝类宿主。
叶巢外睾吸虫是寄生在闽江下游的鲶鱼肠道，闽江两岸河畔有大量图氏窄口螺孳生栖息，但没有钉螺。已故唐仲璋教授早年在福州闽江已发现鲶鱼肠中的外睾吸虫成虫及在图氏窄口螺体中的本吸虫尾蚴，绘有草图，并推测该尾蚴可能是外睾吸虫的幼虫期。本文实验证实了他的推断。证明图氏窄口螺是福建闽江鲶鱼的叶巢外睾吸虫的天然贝类宿主。该地区本吸虫天然流行的具体情况有待进一步调查。
, http://www.100md.com
OBSERVATIONS ON THELIFE CYCLE OF EXORCHIS
OVARIOLOBULARIS AND ITS DEVEL OPMENT IN THE NATURAL
MOLLUSCAN HOST
Ye Xiangqun
(Parastiology Research Laboratory,Xiamen University,Xiamen,Fujian 361005)
Abstract Observations on the experimental infection of Exorchis ovariolobularis in Stenothyra toucheana and the whole life cycle of this trematode species were repsrted.The mature cercariae were obtained from the experimentally infected snails, and then were transformed into metacercariae in experimental fishes.The metacercariae were fed to negative Parasilurus asotus, and juveniles and adults could be obtained from P.asotus's intestine. This experiment demonstrated that S.toucheana is an appropriate molluscan host of this trematode species.
, 百拇医药
E.ovariolobularis parasitizes the intestine of Parasilurus asotus of lower reaches of Min River. On the sides of lower reaches of Min River, There are many snails of S.toucheana which is the major species in that enviornment where no Oncomelania hupensis can be found.The late professor Tang C.C.had found adults of E.ovariolobularis in the intestine of Parasilurus asotus and cercaria of this species of tremotode in S.toucheana. He supposed that this cercaria should be the larval stage of E.ovariolobularis. This experiment confirmed his conjecture and demonstrated that S.toucheana is the natural molluscan host of E.ovariolobularis. The natural epidemiology of E.ovariolobularis needs further investigations.
, http://www.100md.com
Key words Exorchis ovariolobularis Stenothyra toucheana Parasilurus asotus Life cycle Estuary of Min River
外睾吸虫(Exorchis,spp)属于隐殖科〔Cryptogonimidae(Ward,1917) Ciurea,1933〕外睾吸虫属(Exorchis Kobayashi，1913)。自Kobayashi(1915)报告卵形外睾吸虫(E.oviformis)以来又发现了多黄外睾吸虫(E.multivitellaris Pan，1984)、叶巢外睾吸虫(E.ovariolobularis Cao,1990)及洞庭湖外睾吸虫(E.dongtinghuensis Zhang et al.,1993) 等种类。张仁利等(1993)从洞庭湖畔的湖北钉螺(Oncomelania hupensis)发现了此类吸虫的成熟尾蚴，通过生活史研究证实了其终宿主是洞庭湖中的鲶鱼(Parasilurus asotus),湖北钉螺是它的第一中间宿主。曹华(1990)描述的叶巢外睾吸虫是寄生在福建闽江下游的鲶鱼肠道中。在闽江河畔没有钉螺，只有图氏窄口螺。叶巢外睾吸虫的全程生活史虽经阐明，但是在实验室内用人工感染湖北钉螺进行观察的(唐崇惕、王云，1997)。已故唐仲璋教授早年从福州闽江鲶鱼见到叶巢外睾吸虫，也从闽江中的图氏窄口螺见有此吸虫的属蚴，绘有草图，并推测此尾蚴是该吸虫的幼虫期(未发表资料)。唐崇惕等也应用石蜡切片方法观察到叶巢外睾吸虫人工感染图氏窄口螺后的早期发育阶段(待发表)，而对此吸虫在窄口螺体内发育全过程尚未经详细研究。作者在进行应用叶巢外睾吸虫为材料对日本血吸虫病媒介钉螺生物防治的研究工作中用此吸虫在其正常贝类宿主的发育情况作为对照，详细观察了本吸虫幼虫期人工感染在窄口螺体内发育的全过程，并获得成熟尾蚴。用此成熟尾蚴感染金鱼获得了成熟囊蚴(后期尾蚴)，工作结果与唐崇惕等(1997)用湖北钉螺作为实验螺所进行本吸虫全程生活史是完全一致的。由于唐崇惕等(1997)的实验工作是在冬季进行，而作者进行工作是在夏季，这样不仅在科学上阐明了本吸虫在其天然环境(闽江)的贝类宿主(图氏窄口螺)体内的正常发育情况，而且也发现本吸虫在贝类宿主体内发育在夏季速度比冬季快。现将观察结果介绍于下。
, 百拇医药
1 材料与方法
含有叶巢外睾吸虫的鲶鱼捕自闽江下游，实验用的图氏窄口螺采自福州闽江口泥滩及厦门九龙江口的泥滩上，感染实验用的鲫鱼苗、鲤鱼苗及泥鳅均为实验室饲养，鲶鱼为人工养殖场养殖，各都经过抽样检查无外睾吸虫的天然感染。曾检查大量九龙江口的窄口螺未见外睾吸虫的幼虫期。从鲶鱼肠中所得的成熟外睾吸虫成虫，将从其子宫中分离的虫卵与食物混合饲喂窄口螺，感染后定期剖检实验螺，活体观察本吸虫幼虫期发育情况，本吸虫幼虫期在窄口螺发育成熟逸出尾蚴，将它们放在盛有去氯水的100mL的烧杯内，放入实验小鱼。8h后将小鱼放回水族器内饲养并定期剖检。剖检所得成熟囊蚴哺食人工饲养的阴性鲶鱼，获得了童虫和成虫。同时将各期实验螺固定作石蜡连续切片，进行观察并显微摄影。虫体测量单位为mm。
所有标本保存在厦门大学寄生动物研究室。
2 观察结果
, 百拇医药 2.1 闽江口鲶鱼感染叶巢外睾吸虫情况
叶巢外睾吸虫(Exorchis ovariolobularis Cao,1990)多数寄生于鲶鱼的胃肠交接处。闽江下游的鲶鱼肠管中的叶巢外睾吸虫数目差异很大，各鱼体中所含虫体的大小和发育程度常有显著差异(见表1)。根据对体内含有成熟虫卵的成虫的观测，体长宽为0.412±0.012×0.398±0.014。成虫与曹华(1990)所描述的叶巢外睾吸虫新种及唐崇惕等(1997)所补充的主要特征一致。
表1 闽江口鲶鱼自然感染叶巢外睾吸虫的情况
Tab.1 The condition of the natural infections of Exorchis ovariolobularis
in Stenothyra toucheana of the Min River 剖检时间
, http://www.100md.com
Time of dissection
检查鱼体数
Number of fish examined
阳性数
Number of
positive fish
感染率(%)
Infection rate
感染强度
Infection intensity
1998.5
, http://www.100md.com
9
7
77.8
325±261
1998.8
15
11
73.7
113±66
1998.11
5
4
80
, http://www.100md.com
74±55
2.2 叶巢外睾吸虫在图氏窄口螺体内发育的各幼虫期(图版Ⅳ-1～7)
在图氏窄口螺体内的叶巢外睾吸虫幼虫期(Larval stsges of E.ovariolobularis in S.toucheana)
, http://www.100md.com
1 早期雷蚴在螺消化管周围(×375)
Early rediae in the circumjacent tissue of snail's digestive canal)
2 雷蚴及尾蚴(71×)(Radiae and cercariae)
3 成熟尾蚴在螺消化腺中(712×)(Mature cercaria in snail's digestive gland)
4 雷蚴胚球在螺消化腺间隙(1784×)
(Early germ balls of rediae in the tissue of rediae in the tissue of snail's digestive gland)
, http://www.100md.com
5 早期雷蚴在螺内脏团中(357×)(Early rediae in the snail's visceral mass))
6 中期雷蚴(712×)(Middle-term rediae)
7 成熟雷蚴在螺消化腺中(712×)(Mature rediae in snail's digestive gland)
C.尾蚴(cercaria) G.胚球(germ ball) I.肠管(intestine) R.雷蚴(redia)
2.2.1 虫卵及毛蚴：在叶巢外睾吸虫成虫子宫中的虫卵随着发育成熟程度不同，颜色由浅白色逐渐变成深棕色。大小为22±8μm×11±7μm。卵壳表面呈波浪形的凹凸不平状，具卵盖，成熟虫卵内的毛蚴梨形。毛蚴头端有2个单细胞腺体，毛蚴上部体内有1对斜列的含小颗粒的小球体。体后部充满有6～7个胚细胞。毛蚴体表披有柔细的长纤毛。但在卵中未见活动。
, 百拇医药
2.2.2 雷蚴：本项实验工作，用叶巢外睾吸虫虫卵饲喂图氏窄口螺，4批共128粒，感染率为27.6%～60.6%，平均为46.1%(见表2)。
表2 叶巢外睾吸虫实验感染图氏窄口螺情况
Tab.2 The conditions of the experiment infection of E.ovariolobularis in S.toucheana 组别
Group
实验螺数
Number of snails cxposed
阳性螺数
Number of positive
, 百拇医药
snails
感染率(%)
Infection rate
平均室温(℃)
Room temperature
(Avcragc)
Ⅰ(5.16～7.17)
33
20
60.6
29
Ⅱ(5.17～8.1)
, http://www.100md.com
40
20
50
29.2
Ⅲ(5.17～7.4)
29
8
27.6
28.4
Ⅳ(5.20～8.9)
26
11
42.3
, 百拇医药
30
合计
128
59
46.1
29.15
从实验窄口螺的石蜡连续切片中观察到，吞食虫卵后一周左右的窄口螺胃肠壁外围有血淋巴细胞大量围绕的现象，其中包围着若干本吸虫的胚细胞，它们随着宿主的循环系统输送到宿主消化腺和生殖腺组织间隙中，发育成散在分布的早期胚球，这一现象与唐崇惕等(待刊)所述一致。由雷蚴胚球发育成的早期雷蚴散布在内脏团及头足窦中，通过本实验的观察，本吸虫经过毛蚴的胚细胞繁殖后，只经过一代雷蚴产生尾蚴的生活史方式，与唐崇惕等(1997)对本吸虫在湖北钉镙中发育的观察是一致的。
从表3可以看出，在1998年5～8月平均室温29.15℃的条件下，窄口螺在感染外睾吸虫虫卵后，19天左右出现由胚细胞发育成的早期胚球；感染后35天左右出现散在的早期雷坳。早期雷蚴呈窄条状，头端具有巨大的肌质咽；45天左右的中期雷蚴，体内具有尾蚴胚球。在厦门夏天气温(平均29～30℃)中，叶巢外睾吸虫尾蚴在感染后51～79天从切片见到具有成熟的体形，但尾蚴从窄口螺中逸出时间是在感染后95～119天(见表4)。表3 叶巢外睾吸虫幼虫期在图氏窄口螺中的发育
, 百拇医药
Tab.3 The development of larval E.ovariolobularis in S.toucheana 发育期
Development
stages
感染后时间(天)
Days after
infection
平均室温(℃)
Room temperature
(Average)
虫体大小(mm)
, 百拇医药
Measurement of larvae
雷蚴胚球
19±2
28.1
0.008±0.002
Germ ball
(17～21)
早期雷蚴
35±6
28.9
0.085±0.012×0.015±0.001
Early redia
, http://www.100md.com
(29～41)
中期雷蚴
45±9
29.1
0.140±0.011×0.020±0.001
Middle-term redia
(36～54)
成熟雷蚴
58±15
29.7
0.440±0.071×0.032±0.004
Mature redia
, 百拇医药
(43～73)
成熟尾蚴
65±14
29.95
体部：0.097±0.003×0.046±0.001
Mature cercaria
(51～79)
尾部：0.255±0.008×0.019±0.001
表4 窄口螺人工感染叶巢外睾吸虫后尾蚴逸出情况*
Tab.4 The emergence condition of E.ovariolobularis cercariae in infected S.toucheana 组别
, 百拇医药
Group
实验螺数
Number of
snails exposed
感染后时间(天)
Days after
infection
尾蚴逸出阳性螺数
Number of
positive snails
感染率(%)
Infection rate
, 百拇医药
平均室温(℃)
Room temperatur
(Average)
Ⅰ
30
110
13
56.7
30.5
117
4
Ⅱ
47
, http://www.100md.com
112
20
51.1
30.5
119
4
Ⅲ
2
95
1
50
30.5
Ⅳ
26
, http://www.100md.com
108
10
46.2
30.5
112
2
合计
105
106.3
54
51.4
30.5
*各组第1次逸尾蚴试验后没有外睾尾蚴逸出的窄口螺再进行第2次逸尾螺试验。第2次试验无外睾尾蚴逸出的窄口螺经石蜡切片观察均为阴性。
, 百拇医药
感染后118天(平均气温30.5℃)活体检查实验窄口螺，它们内脏团中充满发育程度不一致的本吸虫雷蚴，雷蚴体内充满胚细胞、大小胚球及成熟度不等的尾蚴胚体，叶巢外睾吸虫成熟雷蚴体大小0.431～1.380×0.091～0.169，咽0.032～0.047×0.036～0.039，肠管0.023～0.028×0.024～0.029，生产孔开口于体前端左侧，与头端距离占体长的比例为1∶13.59，生产道长0.071，产孔直径0.024，产道壁上由细胞结构，产孔为肌质性。
2.2.3 尾蚴：人工感染叶巢外睾吸虫的窄口螺分为4组，在感染后95～199天中进行逸出尾蚴实验。在平均室温30.5℃条件下，叶巢外睾吸虫幼虫期在图氏窄口螺中发育达到开始有尾蚴逸出的时间平均为106.3天(结果见表4)。
活体检查感染的窄口螺，得到不同发育阶段的尾蚴，尾蚴胚体体部为0.155×0.092，尾部为0.101×0.042大小时，眼点明显并可见4对穿刺腺细胞。腺管中出现有规则排列的颗粒。排泄管已出现雏形；在体部0.190×0.122，尾部0.098×0.045的早期尾蚴见到口吸盘、咽和5对穿刺腺细胞，排泄管结构明显。体中部有一团可能是腹吸盘的原基。
, 百拇医药
成熟尾蚴具尾鳍膜，尾蚴体部呈梨形，大小为0.229～0.235×0.109～0.128，具眼点，穿刺腺约5～6对。腹吸盘仍呈原基状，位于穿刺腺细胞之后。排泄囊圆形，直径0.030～0.062。从其两侧斜伸出2根排泄管，长0.022～0.029，排泄管壁为交错排列的圆形细胞构成。尾部长宽为0.450～0.482×0.031～0.033，尾排泄管在尾部约尾长前方1/5水平的两侧开口。
2.2.4 囊蚴：用从实验窄口螺逸出的叶巢外睾吸虫尾蚴感染实验室中的小鲫鱼苗，感染后48h从鱼鳃组织压片检获囊蚴，后期尾蚴披有薄膜状的囊壁，在虫体与囊壁间充满细小颗粒。后蚴圆形或亚圆形，直径约0.202，口吸盘0.070×0.051，咽圆形，直径0.027，腹吸盘直径0.030，有眼点，两肠管直伸到体后部。排泄囊为Y形，主干长0.083，分支长0.062。感染后第5～10天获得的囊蚴在虫体的两侧出现明显的睾丸；感染后20天的后蚴大小为0.271×0.280，还可见卵巢、储精囊及Y形排泄囊。
, http://www.100md.com
除鲫鱼外，用本吸虫尾蚴感染金鱼、鲤鱼苗、泥鳅等也可得到不同发育程度的囊蚴，由此说明它们均可能充当本吸虫的第二中间宿主，可见叶巢外睾吸虫的第二中间宿主是极其广泛的，这也可能是造成闽江中鲶鱼广泛流行感染的原因。
2.2.5 童虫及成虫：用外睾吸虫囊蚴人工感染鲶鱼，24天后从其肠道中检获的童虫大小为0.312±0.021×0.295±0.011，形态与成熟后蚴相似，子宫中没有虫卵。感染后32天的鲶鱼肠道中查见成熟外睾成虫，子宫已有虫卵。平均感染强度为83只。
3 讨论
曹华(1990)进行福建沿海地区海洋和淡水鱼类的寄生虫区系调查时，在闽江下游的鲶鱼肠管中发现叶巢外睾吸虫。在闽江口泥滩上大量孳生的图氏窄口螺(S.toucheana)为该生态环境中的优势螺，通过本文实验证实图氏窄口螺是叶巢外睾吸虫适宜的贝类宿主。在自然环境中的窄口螺还感染有其他种类吸虫幼虫期。本实验在5月到9月平均室温30.5℃条件下，实验窄口螺最早在感染后95天有大量叶巢外睾吸虫尾蚴逸出。唐崇惕等(1997)观察叶巢外睾吸虫在湖北钉螺体内的发育，在实验室冬天的条件下，在感染后198天才有成熟尾蚴逸出，说明温度对本吸虫生活史中的幼虫期发育具有影响。本吸虫生活史经历3个宿主：终宿主鲶鱼、第一中间宿主(贝类宿主)窄口螺及第二中间宿主小鲫鱼等，它们均是生活于闽江及其江岸泥滩环境中的常见种类，本吸虫在这样的环境中，生活史得以循环，并造成闽江中鲶鱼的感染。但在该环境中窄口螺对本吸虫幼虫期的天然感染率如何，尚待进一步调查。
, 百拇医药
自Kobayshi(1920)报告卵形外睾吸虫后，Okabe(1936)完成了它的生活史。他指出，卵形外睾吸虫只见于沿海地区，因为其贝类宿主日本狭口螺Stenothyra japonica只生活在靠近海岸的淡水中。叶巢外睾吸虫的发现地点是在闽江下游，靠近入海口处。而张仁利等(1993)发现的洞庭湖外睾吸虫发现地点是洞庭湖区，离海岸已较远，其贝类宿主为湖北钉螺。在那里鲶鱼和钉螺的天然感染率都较高，这说明洞庭湖外睾吸虫和湖北钉螺已有了很好的适应。洞庭湖属于长江水系，和闽江水系并不交通。有关该属吸虫的区系分布及与其贝类宿主的关系均有待于进一步的研究。
致谢 本项研究工作在唐崇惕教授指导下进行，特此致以衷心的感谢。
参考文献
1，潘金培.1984.中国隐殖科吸虫Cryptogonimidae Ciurea的研究包括一新属四新种的描述.中国淡水鱼类论文集，北京：农业出版社，115～124.
, http://www.100md.com
2，张仁利，左家铮，刘柏香，等.1993.洞庭湖外睾吸虫新种及其生活史研究.动物学报，39(2)：124～129.
3，曹华.1990.福建沿海鱼类吸虫二新种.动物分类学报，15(2)：144～147.
4，唐崇惕，王云.1997.叶巢外睾吸虫幼虫期在湖北钉螺体内的发育及生活史研究.寄生虫与医学昆虫学报，4(2)：83～87.
5，唐崇惕，舒利民.外睾吸虫幼虫期的早期发育及贝类宿主的反应.动物学报(待刊)。
6，Kobayashi,H.1920.On some digenetic trematodes in Japan.Parasitol.12(4):380～410.
Okabe,K.1936.On the life history of Exorchis oviformis.J.Fukuoka.Med.Univ.29(1):211～220.
收稿日期：1999-07-07, 百拇医药
单位：叶向群(厦门大学寄生动物研究室，厦门 361005)
关键词：叶巢外睾吸虫；图氏窄口螺；鲶鱼；生活史；闽江口
寄生虫与医学昆虫学报000206摘要 本文报告叶巢外睾吸虫(Exorchis ovariolobularis)幼虫期人工感染图氏窄口螺(Stenothyra toucheana)，在其体中发育的全过程。从实验螺获得的本吸虫成熟尾蚴，在实验室内经实验小鱼获得囊蚴。用囊蚴感染阴性鲶鱼(Parasilurus asotus)，获得本吸虫的童虫和成虫。由此证明图氏窄口螺是本吸虫的适宜的贝类宿主。
叶巢外睾吸虫是寄生在闽江下游的鲶鱼肠道，闽江两岸河畔有大量图氏窄口螺孳生栖息，但没有钉螺。已故唐仲璋教授早年在福州闽江已发现鲶鱼肠中的外睾吸虫成虫及在图氏窄口螺体中的本吸虫尾蚴，绘有草图，并推测该尾蚴可能是外睾吸虫的幼虫期。本文实验证实了他的推断。证明图氏窄口螺是福建闽江鲶鱼的叶巢外睾吸虫的天然贝类宿主。该地区本吸虫天然流行的具体情况有待进一步调查。
, http://www.100md.com
OBSERVATIONS ON THELIFE CYCLE OF EXORCHIS
OVARIOLOBULARIS AND ITS DEVEL OPMENT IN THE NATURAL
MOLLUSCAN HOST
Ye Xiangqun
(Parastiology Research Laboratory,Xiamen University,Xiamen,Fujian 361005)
Abstract Observations on the experimental infection of Exorchis ovariolobularis in Stenothyra toucheana and the whole life cycle of this trematode species were repsrted.The mature cercariae were obtained from the experimentally infected snails, and then were transformed into metacercariae in experimental fishes.The metacercariae were fed to negative Parasilurus asotus, and juveniles and adults could be obtained from P.asotus's intestine. This experiment demonstrated that S.toucheana is an appropriate molluscan host of this trematode species.
, 百拇医药
E.ovariolobularis parasitizes the intestine of Parasilurus asotus of lower reaches of Min River. On the sides of lower reaches of Min River, There are many snails of S.toucheana which is the major species in that enviornment where no Oncomelania hupensis can be found.The late professor Tang C.C.had found adults of E.ovariolobularis in the intestine of Parasilurus asotus and cercaria of this species of tremotode in S.toucheana. He supposed that this cercaria should be the larval stage of E.ovariolobularis. This experiment confirmed his conjecture and demonstrated that S.toucheana is the natural molluscan host of E.ovariolobularis. The natural epidemiology of E.ovariolobularis needs further investigations.
, http://www.100md.com
Key words Exorchis ovariolobularis Stenothyra toucheana Parasilurus asotus Life cycle Estuary of Min River
外睾吸虫(Exorchis,spp)属于隐殖科〔Cryptogonimidae(Ward,1917) Ciurea,1933〕外睾吸虫属(Exorchis Kobayashi，1913)。自Kobayashi(1915)报告卵形外睾吸虫(E.oviformis)以来又发现了多黄外睾吸虫(E.multivitellaris Pan，1984)、叶巢外睾吸虫(E.ovariolobularis Cao,1990)及洞庭湖外睾吸虫(E.dongtinghuensis Zhang et al.,1993) 等种类。张仁利等(1993)从洞庭湖畔的湖北钉螺(Oncomelania hupensis)发现了此类吸虫的成熟尾蚴，通过生活史研究证实了其终宿主是洞庭湖中的鲶鱼(Parasilurus asotus),湖北钉螺是它的第一中间宿主。曹华(1990)描述的叶巢外睾吸虫是寄生在福建闽江下游的鲶鱼肠道中。在闽江河畔没有钉螺，只有图氏窄口螺。叶巢外睾吸虫的全程生活史虽经阐明，但是在实验室内用人工感染湖北钉螺进行观察的(唐崇惕、王云，1997)。已故唐仲璋教授早年从福州闽江鲶鱼见到叶巢外睾吸虫，也从闽江中的图氏窄口螺见有此吸虫的属蚴，绘有草图，并推测此尾蚴是该吸虫的幼虫期(未发表资料)。唐崇惕等也应用石蜡切片方法观察到叶巢外睾吸虫人工感染图氏窄口螺后的早期发育阶段(待发表)，而对此吸虫在窄口螺体内发育全过程尚未经详细研究。作者在进行应用叶巢外睾吸虫为材料对日本血吸虫病媒介钉螺生物防治的研究工作中用此吸虫在其正常贝类宿主的发育情况作为对照，详细观察了本吸虫幼虫期人工感染在窄口螺体内发育的全过程，并获得成熟尾蚴。用此成熟尾蚴感染金鱼获得了成熟囊蚴(后期尾蚴)，工作结果与唐崇惕等(1997)用湖北钉螺作为实验螺所进行本吸虫全程生活史是完全一致的。由于唐崇惕等(1997)的实验工作是在冬季进行，而作者进行工作是在夏季，这样不仅在科学上阐明了本吸虫在其天然环境(闽江)的贝类宿主(图氏窄口螺)体内的正常发育情况，而且也发现本吸虫在贝类宿主体内发育在夏季速度比冬季快。现将观察结果介绍于下。
, 百拇医药
1 材料与方法
含有叶巢外睾吸虫的鲶鱼捕自闽江下游，实验用的图氏窄口螺采自福州闽江口泥滩及厦门九龙江口的泥滩上，感染实验用的鲫鱼苗、鲤鱼苗及泥鳅均为实验室饲养，鲶鱼为人工养殖场养殖，各都经过抽样检查无外睾吸虫的天然感染。曾检查大量九龙江口的窄口螺未见外睾吸虫的幼虫期。从鲶鱼肠中所得的成熟外睾吸虫成虫，将从其子宫中分离的虫卵与食物混合饲喂窄口螺，感染后定期剖检实验螺，活体观察本吸虫幼虫期发育情况，本吸虫幼虫期在窄口螺发育成熟逸出尾蚴，将它们放在盛有去氯水的100mL的烧杯内，放入实验小鱼。8h后将小鱼放回水族器内饲养并定期剖检。剖检所得成熟囊蚴哺食人工饲养的阴性鲶鱼，获得了童虫和成虫。同时将各期实验螺固定作石蜡连续切片，进行观察并显微摄影。虫体测量单位为mm。
所有标本保存在厦门大学寄生动物研究室。
2 观察结果
, 百拇医药 2.1 闽江口鲶鱼感染叶巢外睾吸虫情况
叶巢外睾吸虫(Exorchis ovariolobularis Cao,1990)多数寄生于鲶鱼的胃肠交接处。闽江下游的鲶鱼肠管中的叶巢外睾吸虫数目差异很大，各鱼体中所含虫体的大小和发育程度常有显著差异(见表1)。根据对体内含有成熟虫卵的成虫的观测，体长宽为0.412±0.012×0.398±0.014。成虫与曹华(1990)所描述的叶巢外睾吸虫新种及唐崇惕等(1997)所补充的主要特征一致。
表1 闽江口鲶鱼自然感染叶巢外睾吸虫的情况
Tab.1 The condition of the natural infections of Exorchis ovariolobularis
in Stenothyra toucheana of the Min River 剖检时间
, http://www.100md.com
Time of dissection
检查鱼体数
Number of fish examined
阳性数
Number of
positive fish
感染率(%)
Infection rate
感染强度
Infection intensity
1998.5
, http://www.100md.com
9
7
77.8
325±261
1998.8
15
11
73.7
113±66
1998.11
5
4
80
, http://www.100md.com
74±55
2.2 叶巢外睾吸虫在图氏窄口螺体内发育的各幼虫期(图版Ⅳ-1～7)
在图氏窄口螺体内的叶巢外睾吸虫幼虫期(Larval stsges of E.ovariolobularis in S.toucheana)
, http://www.100md.com
1 早期雷蚴在螺消化管周围(×375)
Early rediae in the circumjacent tissue of snail's digestive canal)
2 雷蚴及尾蚴(71×)(Radiae and cercariae)
3 成熟尾蚴在螺消化腺中(712×)(Mature cercaria in snail's digestive gland)
4 雷蚴胚球在螺消化腺间隙(1784×)
(Early germ balls of rediae in the tissue of rediae in the tissue of snail's digestive gland)
, http://www.100md.com
5 早期雷蚴在螺内脏团中(357×)(Early rediae in the snail's visceral mass))
6 中期雷蚴(712×)(Middle-term rediae)
7 成熟雷蚴在螺消化腺中(712×)(Mature rediae in snail's digestive gland)
C.尾蚴(cercaria) G.胚球(germ ball) I.肠管(intestine) R.雷蚴(redia)
2.2.1 虫卵及毛蚴：在叶巢外睾吸虫成虫子宫中的虫卵随着发育成熟程度不同，颜色由浅白色逐渐变成深棕色。大小为22±8μm×11±7μm。卵壳表面呈波浪形的凹凸不平状，具卵盖，成熟虫卵内的毛蚴梨形。毛蚴头端有2个单细胞腺体，毛蚴上部体内有1对斜列的含小颗粒的小球体。体后部充满有6～7个胚细胞。毛蚴体表披有柔细的长纤毛。但在卵中未见活动。
, 百拇医药
2.2.2 雷蚴：本项实验工作，用叶巢外睾吸虫虫卵饲喂图氏窄口螺，4批共128粒，感染率为27.6%～60.6%，平均为46.1%(见表2)。
表2 叶巢外睾吸虫实验感染图氏窄口螺情况
Tab.2 The conditions of the experiment infection of E.ovariolobularis in S.toucheana 组别
Group
实验螺数
Number of snails cxposed
阳性螺数
Number of positive
, 百拇医药
snails
感染率(%)
Infection rate
平均室温(℃)
Room temperature
(Avcragc)
Ⅰ(5.16～7.17)
33
20
60.6
29
Ⅱ(5.17～8.1)
, http://www.100md.com
40
20
50
29.2
Ⅲ(5.17～7.4)
29
8
27.6
28.4
Ⅳ(5.20～8.9)
26
11
42.3
, 百拇医药
30
合计
128
59
46.1
29.15
从实验窄口螺的石蜡连续切片中观察到，吞食虫卵后一周左右的窄口螺胃肠壁外围有血淋巴细胞大量围绕的现象，其中包围着若干本吸虫的胚细胞，它们随着宿主的循环系统输送到宿主消化腺和生殖腺组织间隙中，发育成散在分布的早期胚球，这一现象与唐崇惕等(待刊)所述一致。由雷蚴胚球发育成的早期雷蚴散布在内脏团及头足窦中，通过本实验的观察，本吸虫经过毛蚴的胚细胞繁殖后，只经过一代雷蚴产生尾蚴的生活史方式，与唐崇惕等(1997)对本吸虫在湖北钉镙中发育的观察是一致的。
从表3可以看出，在1998年5～8月平均室温29.15℃的条件下，窄口螺在感染外睾吸虫虫卵后，19天左右出现由胚细胞发育成的早期胚球；感染后35天左右出现散在的早期雷坳。早期雷蚴呈窄条状，头端具有巨大的肌质咽；45天左右的中期雷蚴，体内具有尾蚴胚球。在厦门夏天气温(平均29～30℃)中，叶巢外睾吸虫尾蚴在感染后51～79天从切片见到具有成熟的体形，但尾蚴从窄口螺中逸出时间是在感染后95～119天(见表4)。表3 叶巢外睾吸虫幼虫期在图氏窄口螺中的发育
, 百拇医药
Tab.3 The development of larval E.ovariolobularis in S.toucheana 发育期
Development
stages
感染后时间(天)
Days after
infection
平均室温(℃)
Room temperature
(Average)
虫体大小(mm)
, 百拇医药
Measurement of larvae
雷蚴胚球
19±2
28.1
0.008±0.002
Germ ball
(17～21)
早期雷蚴
35±6
28.9
0.085±0.012×0.015±0.001
Early redia
, http://www.100md.com
(29～41)
中期雷蚴
45±9
29.1
0.140±0.011×0.020±0.001
Middle-term redia
(36～54)
成熟雷蚴
58±15
29.7
0.440±0.071×0.032±0.004
Mature redia
, 百拇医药
(43～73)
成熟尾蚴
65±14
29.95
体部：0.097±0.003×0.046±0.001
Mature cercaria
(51～79)
尾部：0.255±0.008×0.019±0.001
表4 窄口螺人工感染叶巢外睾吸虫后尾蚴逸出情况*
Tab.4 The emergence condition of E.ovariolobularis cercariae in infected S.toucheana 组别
, 百拇医药
Group
实验螺数
Number of
snails exposed
感染后时间(天)
Days after
infection
尾蚴逸出阳性螺数
Number of
positive snails
感染率(%)
Infection rate
, 百拇医药
平均室温(℃)
Room temperatur
(Average)
Ⅰ
30
110
13
56.7
30.5
117
4
Ⅱ
47
, http://www.100md.com
112
20
51.1
30.5
119
4
Ⅲ
2
95
1
50
30.5
Ⅳ
26
, http://www.100md.com
108
10
46.2
30.5
112
2
合计
105
106.3
54
51.4
30.5
*各组第1次逸尾蚴试验后没有外睾尾蚴逸出的窄口螺再进行第2次逸尾螺试验。第2次试验无外睾尾蚴逸出的窄口螺经石蜡切片观察均为阴性。
, 百拇医药
感染后118天(平均气温30.5℃)活体检查实验窄口螺，它们内脏团中充满发育程度不一致的本吸虫雷蚴，雷蚴体内充满胚细胞、大小胚球及成熟度不等的尾蚴胚体，叶巢外睾吸虫成熟雷蚴体大小0.431～1.380×0.091～0.169，咽0.032～0.047×0.036～0.039，肠管0.023～0.028×0.024～0.029，生产孔开口于体前端左侧，与头端距离占体长的比例为1∶13.59，生产道长0.071，产孔直径0.024，产道壁上由细胞结构，产孔为肌质性。
2.2.3 尾蚴：人工感染叶巢外睾吸虫的窄口螺分为4组，在感染后95～199天中进行逸出尾蚴实验。在平均室温30.5℃条件下，叶巢外睾吸虫幼虫期在图氏窄口螺中发育达到开始有尾蚴逸出的时间平均为106.3天(结果见表4)。
活体检查感染的窄口螺，得到不同发育阶段的尾蚴，尾蚴胚体体部为0.155×0.092，尾部为0.101×0.042大小时，眼点明显并可见4对穿刺腺细胞。腺管中出现有规则排列的颗粒。排泄管已出现雏形；在体部0.190×0.122，尾部0.098×0.045的早期尾蚴见到口吸盘、咽和5对穿刺腺细胞，排泄管结构明显。体中部有一团可能是腹吸盘的原基。
, 百拇医药
成熟尾蚴具尾鳍膜，尾蚴体部呈梨形，大小为0.229～0.235×0.109～0.128，具眼点，穿刺腺约5～6对。腹吸盘仍呈原基状，位于穿刺腺细胞之后。排泄囊圆形，直径0.030～0.062。从其两侧斜伸出2根排泄管，长0.022～0.029，排泄管壁为交错排列的圆形细胞构成。尾部长宽为0.450～0.482×0.031～0.033，尾排泄管在尾部约尾长前方1/5水平的两侧开口。
2.2.4 囊蚴：用从实验窄口螺逸出的叶巢外睾吸虫尾蚴感染实验室中的小鲫鱼苗，感染后48h从鱼鳃组织压片检获囊蚴，后期尾蚴披有薄膜状的囊壁，在虫体与囊壁间充满细小颗粒。后蚴圆形或亚圆形，直径约0.202，口吸盘0.070×0.051，咽圆形，直径0.027，腹吸盘直径0.030，有眼点，两肠管直伸到体后部。排泄囊为Y形，主干长0.083，分支长0.062。感染后第5～10天获得的囊蚴在虫体的两侧出现明显的睾丸；感染后20天的后蚴大小为0.271×0.280，还可见卵巢、储精囊及Y形排泄囊。
, http://www.100md.com
除鲫鱼外，用本吸虫尾蚴感染金鱼、鲤鱼苗、泥鳅等也可得到不同发育程度的囊蚴，由此说明它们均可能充当本吸虫的第二中间宿主，可见叶巢外睾吸虫的第二中间宿主是极其广泛的，这也可能是造成闽江中鲶鱼广泛流行感染的原因。
2.2.5 童虫及成虫：用外睾吸虫囊蚴人工感染鲶鱼，24天后从其肠道中检获的童虫大小为0.312±0.021×0.295±0.011，形态与成熟后蚴相似，子宫中没有虫卵。感染后32天的鲶鱼肠道中查见成熟外睾成虫，子宫已有虫卵。平均感染强度为83只。
3 讨论
曹华(1990)进行福建沿海地区海洋和淡水鱼类的寄生虫区系调查时，在闽江下游的鲶鱼肠管中发现叶巢外睾吸虫。在闽江口泥滩上大量孳生的图氏窄口螺(S.toucheana)为该生态环境中的优势螺，通过本文实验证实图氏窄口螺是叶巢外睾吸虫适宜的贝类宿主。在自然环境中的窄口螺还感染有其他种类吸虫幼虫期。本实验在5月到9月平均室温30.5℃条件下，实验窄口螺最早在感染后95天有大量叶巢外睾吸虫尾蚴逸出。唐崇惕等(1997)观察叶巢外睾吸虫在湖北钉螺体内的发育，在实验室冬天的条件下，在感染后198天才有成熟尾蚴逸出，说明温度对本吸虫生活史中的幼虫期发育具有影响。本吸虫生活史经历3个宿主：终宿主鲶鱼、第一中间宿主(贝类宿主)窄口螺及第二中间宿主小鲫鱼等，它们均是生活于闽江及其江岸泥滩环境中的常见种类，本吸虫在这样的环境中，生活史得以循环，并造成闽江中鲶鱼的感染。但在该环境中窄口螺对本吸虫幼虫期的天然感染率如何，尚待进一步调查。
, 百拇医药
自Kobayshi(1920)报告卵形外睾吸虫后，Okabe(1936)完成了它的生活史。他指出，卵形外睾吸虫只见于沿海地区，因为其贝类宿主日本狭口螺Stenothyra japonica只生活在靠近海岸的淡水中。叶巢外睾吸虫的发现地点是在闽江下游，靠近入海口处。而张仁利等(1993)发现的洞庭湖外睾吸虫发现地点是洞庭湖区，离海岸已较远，其贝类宿主为湖北钉螺。在那里鲶鱼和钉螺的天然感染率都较高，这说明洞庭湖外睾吸虫和湖北钉螺已有了很好的适应。洞庭湖属于长江水系，和闽江水系并不交通。有关该属吸虫的区系分布及与其贝类宿主的关系均有待于进一步的研究。
致谢 本项研究工作在唐崇惕教授指导下进行，特此致以衷心的感谢。
参考文献
1，潘金培.1984.中国隐殖科吸虫Cryptogonimidae Ciurea的研究包括一新属四新种的描述.中国淡水鱼类论文集，北京：农业出版社，115～124.
, http://www.100md.com
2，张仁利，左家铮，刘柏香，等.1993.洞庭湖外睾吸虫新种及其生活史研究.动物学报，39(2)：124～129.
3，曹华.1990.福建沿海鱼类吸虫二新种.动物分类学报，15(2)：144～147.
4，唐崇惕，王云.1997.叶巢外睾吸虫幼虫期在湖北钉螺体内的发育及生活史研究.寄生虫与医学昆虫学报，4(2)：83～87.
5，唐崇惕，舒利民.外睾吸虫幼虫期的早期发育及贝类宿主的反应.动物学报(待刊)。
6，Kobayashi,H.1920.On some digenetic trematodes in Japan.Parasitol.12(4):380～410.
Okabe,K.1936.On the life history of Exorchis oviformis.J.Fukuoka.Med.Univ.29(1):211～220.
收稿日期：1999-07-07, 百拇医药