上皮性卵巢癌组织中血管内皮生长因子的表达及其临床意义*
作者：严瑞兰 惠宏襄 辛晓燕 王剑波 王健
单位：严瑞兰 辛晓燕 王健 第四军医大学西京医院妇产科，710032 第四军医大学 惠宏襄 第四军医大学西京医院妇产科，710032生化学 王剑波 第四军医大学西京医院妇产科，710032病理学教研室
关键词：卵巢肿瘤；血管内皮生长因子；免疫组织化学
现代妇产科时进展990102 摘要 目的：探讨上皮性卵巢癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义。方法：以SABC免疫组化分析法检测37例上皮性卵巢癌组织中VEGF的表达。结果：上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤及良性肿瘤组织中VEGF阳性表达率分别为72.97%、62.50%及38.46%，恶性肿瘤及交界性肿瘤组织中VEGF表达率较良性肿瘤者明显增高(P<0.05)，且前两者的VEGF强阳性表达率也较良性肿瘤者明显增高(P<0.05)。上皮性卵巢癌中VEGF阳性表达率与有淋巴结转移者密切相关(P<0.05)。VEGF表达率与卵巢癌的临床分期及病理分级未见显著相关性。结论：VEGF在上皮性卵巢癌的生长及转移中可能起着重要作用。
, 百拇医药
Expression of vascular endothelial growth factor in epithelial ovarian cancer and its clinical significance.
Yan Ruilan，Hui Hongxiang，Xi Xiaoyan，et al.
Xinjing Hospital of Fouth Military Medical University，710032
Abstract Objective：To investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)in ovarian epithelial cancer(OEC)tissues and its clinical significance.Methods：Thirty-seven samples of OEC taken from Xijing Hospital were examined for VEGF expressions using SABC immunohistochemical analysis.Results：The positive rates of VEGF expression in OEC，borderline tumor and benign tumor were 72.97%，62.50% and 38.46% respectively.The rates of VEGF expression in malignant and borderline tumor were higher than that in benign tumor(P<0.05).The rates of VEGF strong expression in malignant and borderline tumor were higher than that in benign tumor (P<0.05).Good correlation of VEGF expression was noted with lymph node metastasis (P<0.05).Statistical analysis did not show a close correlation among VEGF expression and pathological grades as well as chinical cancer stages.Conclusion：VEGF plays an important role in the tumorigenicity and metastasis of OEC.
, 百拇医药
Key words Ovarian neoplasms；Vascular endothelial growth factors；Immnuohistochemistry
肿瘤血管的形成与转移依赖于多种相关因子的诱导和调节，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是促进血管形成的主要因素之一，可促进肿瘤血管生长。我们采用免疫组化方法检测了37份卵巢上皮性癌(OEC)组织中VEGF的表达情况并就其临床意义进行了初步研究。
1 资料和方法
1.1 样本来源 收集1992年6月至1997年12月期间第四军医大学西京医院病理科OEC、交界性卵巢肿瘤和良性卵巢肿瘤手术切除标本蜡块，连续切片，厚4μm。卵巢恶性肿瘤标本37份，患者年龄平均43y，术前均未接受化疗或放疗，其中浆液性囊腺癌25份，粘液性囊腺癌7份，子宫内膜样癌5份。按FIGO分期标准，Ⅰ期和Ⅱ期归入早期，共6份，Ⅲ期和Ⅳ期归入晚期，共31份，交界性卵巢肿瘤16份，其中交界性粘液性囊腺瘤8份，交界性浆液性囊腺瘤8份，患者年龄平均41y。良性卵巢肿瘤13份，其中浆液性囊腺瘤4份，粘液性囊腺瘤9份，患者年龄平均40y。选择同期因子宫良性肿瘤行切除术的10份正常卵巢组织作对照。
, http://www.100md.com
1.2 主要试剂 兔抗人VEGF蛋白多克隆抗体为美国Santa Cruz Biotechnology Inc产品，SABC kit为武汉博士德公司产品。
1.3 SABC免疫组化染色方法 参照SABC使用说明书进行。具体步骤从略。抗体工作浓度为1∶100，以磷酸缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照，阳性对照采用已知的阳性切片。
1.4 结果判定标准 根据阳性细胞的比例判定，5%～<50%细胞VEGF阳性染色者定为阳性(+)，阳性细胞比例≥50%定为强阳性(
)，<5%的细胞着色或细胞与背景均不着色定为阴性(-)。
2 结果
2.1 VEGF的分布形式 阳性染色为棕黄色细颗粒，主要定位于肿瘤细胞的细胞浆及部分基质血管内皮内，其阳性细胞呈局灶性或弥漫性分布。
, 百拇医药
2.2 VEGF在上皮卵巢肿瘤中的表达 见表1。
表1 VEGF在上皮卵巢肿瘤中的表达 类 型
n
VEGF表达阳性
-
+
n
%
恶性肿瘤
交界性肿瘤
良性肿瘤
, 百拇医药
37
16
13
10
6
8
10
5
4
17
5
1
27
10
, http://www.100md.com
5
72.97
62.50
38.46
恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF表达率均明显高于良性肿瘤(P<0.05)，恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF强阳性表达率分别为45.95%及31.25%，显著高于良性肿瘤的7.69%(P<0.05)。
2.3 OEC中VEGF表达与临床病理学指标的关系 见表2。表2 OEC中VEGF表达与临床病理学指标的关系 临床病理学指标
n
VEGF表达阳性
P值
, 百拇医药
n
%
淋巴转移
转移
15
13
86.67
<0.05
无转移
22
14
63.64
病理分级
, 百拇医药
Ⅰ级
8
7
87.50
>0.05
Ⅱ级
16
11
68.75
Ⅲ级
13
9
69.50
, http://www.100md.com 临床分期
早期(Ⅰ+Ⅱ)
6
6
100.00
>0.05
晚期(Ⅲ+Ⅳ)
31
21
67.74
我们还观察了10份正常卵巢组织，其中6份VEGF表达阳性，但无1份强阳性，其染色强度明显弱于恶性肿瘤。
3 讨论
, 百拇医药
VEGF是近年新发现的一种多肽类细胞因子，由多种亚型组成，分子量为34～42KD，以其能提高血管通透性，因而称为血管通透性因子(VPF)。VEGF可直接刺激内皮细胞生长，提高血管通透性，促进血浆蛋白外渗，在很多正常组织中也呈低水平表达。研究表明，VEGF与肿瘤生长及转移密切相关。Plate等[1]报道，胶质母细胞瘤中VEGF mRNA及其蛋白均呈高水平表达，在坏死区附近残留的瘤细胞及新生毛细血管袢表达最高，在缺氧状态下胶质瘤细胞中VEGF表达也增高，提示如果肿瘤发生血管化或供氧不足，VEGF会增多，以增强血管形成。有关OEC中VEGF的表达状况国内尚未见报道。Nakamishi等[2]的研究发现，OEC中VEGF表达增加，且VEGF强染区的微血管密度明显增强，推测OEC中肿瘤血管形成可能是一个早发现象。Paley等[3]对早期OEC的研究表明，VEGF阳性表达者的生存期较未表达者明显降低。
我们的研究表明，恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF表达率较良性肿瘤明显增多，且恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF强阳性表达率与良性肿瘤相比差异亦有显著性。Yamamoto等[4]报道的卵巢肿瘤中VEGF表达情况与本结果相近。对恶性肿瘤中有无淋巴结转移者的VEGF表达进行分析，结果表明，有淋巴结转移的VEGF表达率较无淋巴结转移者明显增高，但VEGF表达与恶性肿瘤的病理分级及临床分期无关。以上结果提示VEGF与OEC的生长及转移有关。。
, http://www.100md.com
我们在正常卵巢的部分血管内皮细胞中观察到VEGF表达，但未发现VEGF强阳性表达，Graxziella等[5]的报道与本结果一致。这可能是尽管在正常卵巢中无血管增殖，但VEGF在维持原有血管内皮细胞的完整性、血管的密度及维持血管运输营养物质所必需的通透性上有重要作用。
总之，VEGF在OEC的生长及转移中可能起重要作用。采用现代分子生物学技术抑制VEGF合成与分泌，或阻止VEGF与其受体结合，或抑制VEGF的表达，可以阻断VEGF对血管的作用，从而达到抑制肿瘤生长与转移以及手术后复发的目的。
参考文献
1.Plate KT，Breier G，Weich HA，et al.Vascular endothelial growth factor is a potential tumor angiogenesis factor in human gliomas in vivo.Nature 1992；359：845
, 百拇医药
2.Nakanishi Y，Kodama J，Yoshinouchi M，et al.The expression of vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta associates with angiogenesis in epithelial ovarian cancer.Int J Gyecol Pathol 1997；16(3)：256
3.Paley PJ，Staskus KA，Gebhard K，et al.Vascular endothelial growth factor expression in early stage ovarian carcinoma.Cancer 1997；80(1)：98
4.Yamamoto S，Konishi I，Mandai M，et al.Expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)in epithelial ovarian neoplisms：Correlation with clinicopathology and patient survial，and analysis of serum VEGF levels.Br J Cancer 1997；76(9)：1221
5.Graziella M，James D，Jonatham et al.Strong expression of vascular permeability factor(vascular endothelial growth factor)and its receptors in ovarian borderline and malignant neoplasms.Lab Invest 1996；74(6)：1105
(收稿日期 1998-11-15), 百拇医药
单位：严瑞兰 辛晓燕 王健 第四军医大学西京医院妇产科，710032 第四军医大学 惠宏襄 第四军医大学西京医院妇产科，710032生化学 王剑波 第四军医大学西京医院妇产科，710032病理学教研室
关键词：卵巢肿瘤；血管内皮生长因子；免疫组织化学
现代妇产科时进展990102 摘要 目的：探讨上皮性卵巢癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义。方法：以SABC免疫组化分析法检测37例上皮性卵巢癌组织中VEGF的表达。结果：上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤及良性肿瘤组织中VEGF阳性表达率分别为72.97%、62.50%及38.46%，恶性肿瘤及交界性肿瘤组织中VEGF表达率较良性肿瘤者明显增高(P<0.05)，且前两者的VEGF强阳性表达率也较良性肿瘤者明显增高(P<0.05)。上皮性卵巢癌中VEGF阳性表达率与有淋巴结转移者密切相关(P<0.05)。VEGF表达率与卵巢癌的临床分期及病理分级未见显著相关性。结论：VEGF在上皮性卵巢癌的生长及转移中可能起着重要作用。
, 百拇医药
Expression of vascular endothelial growth factor in epithelial ovarian cancer and its clinical significance.
Yan Ruilan，Hui Hongxiang，Xi Xiaoyan，et al.
Xinjing Hospital of Fouth Military Medical University，710032
Abstract Objective：To investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)in ovarian epithelial cancer(OEC)tissues and its clinical significance.Methods：Thirty-seven samples of OEC taken from Xijing Hospital were examined for VEGF expressions using SABC immunohistochemical analysis.Results：The positive rates of VEGF expression in OEC，borderline tumor and benign tumor were 72.97%，62.50% and 38.46% respectively.The rates of VEGF expression in malignant and borderline tumor were higher than that in benign tumor(P<0.05).The rates of VEGF strong expression in malignant and borderline tumor were higher than that in benign tumor (P<0.05).Good correlation of VEGF expression was noted with lymph node metastasis (P<0.05).Statistical analysis did not show a close correlation among VEGF expression and pathological grades as well as chinical cancer stages.Conclusion：VEGF plays an important role in the tumorigenicity and metastasis of OEC.
, 百拇医药
Key words Ovarian neoplasms；Vascular endothelial growth factors；Immnuohistochemistry
肿瘤血管的形成与转移依赖于多种相关因子的诱导和调节，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是促进血管形成的主要因素之一，可促进肿瘤血管生长。我们采用免疫组化方法检测了37份卵巢上皮性癌(OEC)组织中VEGF的表达情况并就其临床意义进行了初步研究。
1 资料和方法
1.1 样本来源 收集1992年6月至1997年12月期间第四军医大学西京医院病理科OEC、交界性卵巢肿瘤和良性卵巢肿瘤手术切除标本蜡块，连续切片，厚4μm。卵巢恶性肿瘤标本37份，患者年龄平均43y，术前均未接受化疗或放疗，其中浆液性囊腺癌25份，粘液性囊腺癌7份，子宫内膜样癌5份。按FIGO分期标准，Ⅰ期和Ⅱ期归入早期，共6份，Ⅲ期和Ⅳ期归入晚期，共31份，交界性卵巢肿瘤16份，其中交界性粘液性囊腺瘤8份，交界性浆液性囊腺瘤8份，患者年龄平均41y。良性卵巢肿瘤13份，其中浆液性囊腺瘤4份，粘液性囊腺瘤9份，患者年龄平均40y。选择同期因子宫良性肿瘤行切除术的10份正常卵巢组织作对照。
, http://www.100md.com
1.2 主要试剂 兔抗人VEGF蛋白多克隆抗体为美国Santa Cruz Biotechnology Inc产品，SABC kit为武汉博士德公司产品。
1.3 SABC免疫组化染色方法 参照SABC使用说明书进行。具体步骤从略。抗体工作浓度为1∶100，以磷酸缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照，阳性对照采用已知的阳性切片。
1.4 结果判定标准 根据阳性细胞的比例判定，5%～<50%细胞VEGF阳性染色者定为阳性(+)，阳性细胞比例≥50%定为强阳性(
)，<5%的细胞着色或细胞与背景均不着色定为阴性(-)。2 结果
2.1 VEGF的分布形式 阳性染色为棕黄色细颗粒，主要定位于肿瘤细胞的细胞浆及部分基质血管内皮内，其阳性细胞呈局灶性或弥漫性分布。
, 百拇医药
2.2 VEGF在上皮卵巢肿瘤中的表达 见表1。
表1 VEGF在上皮卵巢肿瘤中的表达 类 型
n
VEGF表达阳性
-
+
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%
恶性肿瘤
交界性肿瘤
良性肿瘤
, 百拇医药
37
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10
6
8
10
5
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17
5
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27
10
, http://www.100md.com
5
72.97
62.50
38.46
恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF表达率均明显高于良性肿瘤(P<0.05)，恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF强阳性表达率分别为45.95%及31.25%，显著高于良性肿瘤的7.69%(P<0.05)。
2.3 OEC中VEGF表达与临床病理学指标的关系 见表2。表2 OEC中VEGF表达与临床病理学指标的关系 临床病理学指标
n
VEGF表达阳性
P值
, 百拇医药
n
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淋巴转移
转移
15
13
86.67
<0.05
无转移
22
14
63.64
病理分级
, 百拇医药
Ⅰ级
8
7
87.50
>0.05
Ⅱ级
16
11
68.75
Ⅲ级
13
9
69.50
, http://www.100md.com 临床分期
早期(Ⅰ+Ⅱ)
6
6
100.00
>0.05
晚期(Ⅲ+Ⅳ)
31
21
67.74
我们还观察了10份正常卵巢组织，其中6份VEGF表达阳性，但无1份强阳性，其染色强度明显弱于恶性肿瘤。
3 讨论
, 百拇医药
VEGF是近年新发现的一种多肽类细胞因子，由多种亚型组成，分子量为34～42KD，以其能提高血管通透性，因而称为血管通透性因子(VPF)。VEGF可直接刺激内皮细胞生长，提高血管通透性，促进血浆蛋白外渗，在很多正常组织中也呈低水平表达。研究表明，VEGF与肿瘤生长及转移密切相关。Plate等[1]报道，胶质母细胞瘤中VEGF mRNA及其蛋白均呈高水平表达，在坏死区附近残留的瘤细胞及新生毛细血管袢表达最高，在缺氧状态下胶质瘤细胞中VEGF表达也增高，提示如果肿瘤发生血管化或供氧不足，VEGF会增多，以增强血管形成。有关OEC中VEGF的表达状况国内尚未见报道。Nakamishi等[2]的研究发现，OEC中VEGF表达增加，且VEGF强染区的微血管密度明显增强，推测OEC中肿瘤血管形成可能是一个早发现象。Paley等[3]对早期OEC的研究表明，VEGF阳性表达者的生存期较未表达者明显降低。
我们的研究表明，恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF表达率较良性肿瘤明显增多，且恶性肿瘤及交界性肿瘤中VEGF强阳性表达率与良性肿瘤相比差异亦有显著性。Yamamoto等[4]报道的卵巢肿瘤中VEGF表达情况与本结果相近。对恶性肿瘤中有无淋巴结转移者的VEGF表达进行分析，结果表明，有淋巴结转移的VEGF表达率较无淋巴结转移者明显增高，但VEGF表达与恶性肿瘤的病理分级及临床分期无关。以上结果提示VEGF与OEC的生长及转移有关。。
, http://www.100md.com
我们在正常卵巢的部分血管内皮细胞中观察到VEGF表达，但未发现VEGF强阳性表达，Graxziella等[5]的报道与本结果一致。这可能是尽管在正常卵巢中无血管增殖，但VEGF在维持原有血管内皮细胞的完整性、血管的密度及维持血管运输营养物质所必需的通透性上有重要作用。
总之，VEGF在OEC的生长及转移中可能起重要作用。采用现代分子生物学技术抑制VEGF合成与分泌，或阻止VEGF与其受体结合，或抑制VEGF的表达，可以阻断VEGF对血管的作用，从而达到抑制肿瘤生长与转移以及手术后复发的目的。
参考文献
1.Plate KT，Breier G，Weich HA，et al.Vascular endothelial growth factor is a potential tumor angiogenesis factor in human gliomas in vivo.Nature 1992；359：845
, 百拇医药
2.Nakanishi Y，Kodama J，Yoshinouchi M，et al.The expression of vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta associates with angiogenesis in epithelial ovarian cancer.Int J Gyecol Pathol 1997；16(3)：256
3.Paley PJ，Staskus KA，Gebhard K，et al.Vascular endothelial growth factor expression in early stage ovarian carcinoma.Cancer 1997；80(1)：98
4.Yamamoto S，Konishi I，Mandai M，et al.Expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)in epithelial ovarian neoplisms：Correlation with clinicopathology and patient survial，and analysis of serum VEGF levels.Br J Cancer 1997；76(9)：1221
5.Graziella M，James D，Jonatham et al.Strong expression of vascular permeability factor(vascular endothelial growth factor)and its receptors in ovarian borderline and malignant neoplasms.Lab Invest 1996；74(6)：1105
(收稿日期 1998-11-15), 百拇医药