金银花水煎剂对绿脓杆菌P29株R质粒体内体外消除作用的实验研究
作者：王云 于军 肖洋 程力 关显智
单位：基础医学院病原生物教研室 吉林 长春130021
关键词：金银花；绿脓杆菌；R质粒；消除作用
白求恩医科大学学报000210
〔提 要〕 目的：探讨金银花对绿脓杆菌R质粒消除作用。方法：体外试验 金银花水煎剂亚抑菌浓度作用绿脓杆菌P29 48 h后，影印培养，计数消除子；体内试验 建立肠道去污染小鼠动物模型后，经口感染绿脓杆菌，同时给金银花水煎剂，灌胃给药，2 mg/只，24 h后再次给药，剂量同上，48 h后处死小鼠，分离培养细菌，计数消除子数。消除子经质粒抽提琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果：金银花水煎剂对绿脓杆菌P29株R质粒体外消除率为0，体内消除率为8%。结论：金银花水煎剂对去污染小鼠感染绿脓杆菌P29株R质粒具有消除作用，消除子主要表现对单一抗生素恢复敏感性；体外没有消除R质粒作用。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 Q782 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0139-02
Studies on the elimination of resistance plasmid from
P.aeruginosa in vitro and vivo with Lonicera japonica
Wang Yun,Yu Jun,Xiao Yang,Cheng Li,Guan Xianzhi
(Department of Pathogenobiology)
〔Abstract〕 Objective:To explore eliminating effect of Lonicera japonica on R plasmid from P.aeruginosa.Methods:Replica plating and counting of colonies resisting to antibiotics were carried out in vitro.Germ-free mice in intestine were orally inoculated with P.aeruginosa,then water decoct agent of Loponica japonica was given orally in 2 mg per mouse,and same dosage of Loponica japonica were repeatedly given 24 h late.Eliminant of P.aeruginosa was identified by replica plating and colony counting after 48 h.Results:No strain of eliminated R plasmid was obtained in vitro,but there were 80 strains in vivo,and elimination rate was eight percent (8%).Conclusion:Water decoct agent of Loponica japonica showed stronger effect on elimination of resistance plasmid from P.aeruginosa in vivo.The elinination rate was eight percent (8%).
, 百拇医药
〔Key words〕 Lonicera japonica;P.aeruginosa;R plasmid;eliminating effect
绿脓杆菌为天然耐药菌，对多种抗生素具有耐药性，其耐药机理可能与质粒的存在与传播有关〔1〕，中药金银花具有广谱抗菌作用，可抑制绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌的生长繁殖〔2〕。为探讨金银花对绿脓杆菌R质粒有无消除作用，本文作者取金银花水煎剂亚抑菌浓度对绿脓杆菌P29株R质粒进行体内体外消除试验，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌 株
绿脓杆菌P29株，为本室保存菌种。经鉴定含45.4 MD质粒。该质粒决定宿主菌对卡那霉素(Km)、庆大霉素(Gm)，四环素(Tc)和链霉素(Sm)的耐药性。
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1.2 试 剂
卡那霉素、庆大霉素、四环素、链霉素均为国产标准品。金银花购自吉林大药房，由白求恩医大基础药理教研室鉴定。SDS(十二烷基硫酸钠)购自华美公司。
1.3 培养基
LB肉汤培养基，4%琼脂营养培养基。
1.4 实验动物
昆明种小鼠，18～20 g，雌雄不限，由本校实验动物部提供。
1.5 方 法
1.5.1 体外消除试验方法 将绿脓杆菌P29株接种于LB肉汤培养基中，37℃过夜振荡培养，调菌液浓度1.5×109。实验组：取菌液分别加入含不同浓度的金银花(自200 g/L开始，连续递倍稀释至第7管，第8管不加药为对照管)LB液体培养基中，每管5 μl。37℃振荡培养48 h后取出，观察细菌生长现象，判定亚抑菌浓度。取亚抑菌浓度培养物接种在4%营养琼脂平板上，37℃培养24 h，挑取单个菌落1 000个，影印培养〔3〕。对照组：消除剂为SDS，消除试验方法同上。确认消除子：经快速质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳，检测R质粒消除结果。
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1.5.2 体内消除试验方法 肠道去污染小鼠动物模型建立后〔3〕经口感染绿脓杆菌P29株(菌液浓度1.5×109) 0.2 ml/只，随机分2组，每组6只。试验组感染细菌同时灌胃给予金银花水煎剂，2 mg/只，24 h后再次给药，剂量同上，48 h后处死小鼠，取盲肠内容物分离单个菌落，随机取1 000个菌落影印培养，计数消除子：经质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳鉴定。对照组感染的细菌同时仅给营养液，不给药物。
2 结 果
2.1 体外R质粒消除结果
金银花水煎剂对绿脓杆菌P29抑菌浓度为62.5 g/L。亚抑菌浓度31.25 g/L作用绿脓杆菌P29株48 h后，没有获得消除子。对照组获消除子240株，消除率为24%，其中237株消除子恢复对Gm敏感性，3株消除子恢复对Gm、Tc敏感性。绿脓杆菌P29株自然消除率为0。
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2.2 体内R质粒消除结果
试验组获得消除子共80株，消除率为8%，其中60株恢复对Gm敏感性，8株恢复对Km敏感性，12株恢复对Gm、Km、Tc、Sm敏感性。经质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳，结果显示消除子丢失了45.5 MD质粒。对照组未获得消除子。
3 讨 论
R质粒常常赋予宿主菌对多种抗生素产生耐药性。随着广谱抗生素的广泛应用，药物敏感菌株受到抑制或杀死，使具有R质粒的耐药菌株大量增殖，为临床治疗带来困难。长期以来，人们试图从中药中寻找有效的R质粒消除剂，以协助抗菌药物治疗传染性疾病。金银花不仅对绿脓杆菌P29株有较强的抑制作用，同时在体内对绿脓杆菌R质粒也具有消除作用。本试验证明，消除子主要表现对庆大霉素耐药性的丢失，少数消除子表现为多重耐药性的丢失。对照组未获得消除子。实验组与对照组比较有显著差异。体外消除试验未获得消除子，其可能原因是由于体内体外试验环境不同，药物在体内的疗效不仅受到药物和细菌两方面的因素影响，同时也受到机体内环境的制约，特别是免疫功能的影响。
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〔作者简介〕 王 云(1957-)，女，吉林省长春市人，副教授，医学硕士，主要从事细菌质粒研究。
肖洋 研究生；程力 进修生
〔参考文献〕
〔1〕叶高峰.医院感染绿脓杆菌对抗生素类药物感染性及质粒DNA检测〔J〕.航空军医，1997，25(6)：354～335.
〔2〕江苏新医学院.中药大辞典〔M〕.上海：上海科学技术出版社出版，1996.
〔3〕关显智.黄芩对痢疾杆菌F13R质粒体外及体内消除作用的对比实验研究〔J〕.中华流行病学杂志，1992，13(2)：11～13.
〔4〕陈小英.大黄素对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用〔J〕.南京药学院学报，1985，16(2)：48～49.
〔收稿日期〕 1999-01-19, 百拇医药
单位：基础医学院病原生物教研室 吉林 长春130021
关键词：金银花；绿脓杆菌；R质粒；消除作用
白求恩医科大学学报000210
〔提 要〕 目的：探讨金银花对绿脓杆菌R质粒消除作用。方法：体外试验 金银花水煎剂亚抑菌浓度作用绿脓杆菌P29 48 h后，影印培养，计数消除子；体内试验 建立肠道去污染小鼠动物模型后，经口感染绿脓杆菌，同时给金银花水煎剂，灌胃给药，2 mg/只，24 h后再次给药，剂量同上，48 h后处死小鼠，分离培养细菌，计数消除子数。消除子经质粒抽提琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果：金银花水煎剂对绿脓杆菌P29株R质粒体外消除率为0，体内消除率为8%。结论：金银花水煎剂对去污染小鼠感染绿脓杆菌P29株R质粒具有消除作用，消除子主要表现对单一抗生素恢复敏感性；体外没有消除R质粒作用。
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〔中图分类号〕 Q782 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0139-02
Studies on the elimination of resistance plasmid from
P.aeruginosa in vitro and vivo with Lonicera japonica
Wang Yun,Yu Jun,Xiao Yang,Cheng Li,Guan Xianzhi
(Department of Pathogenobiology)
〔Abstract〕 Objective:To explore eliminating effect of Lonicera japonica on R plasmid from P.aeruginosa.Methods:Replica plating and counting of colonies resisting to antibiotics were carried out in vitro.Germ-free mice in intestine were orally inoculated with P.aeruginosa,then water decoct agent of Loponica japonica was given orally in 2 mg per mouse,and same dosage of Loponica japonica were repeatedly given 24 h late.Eliminant of P.aeruginosa was identified by replica plating and colony counting after 48 h.Results:No strain of eliminated R plasmid was obtained in vitro,but there were 80 strains in vivo,and elimination rate was eight percent (8%).Conclusion:Water decoct agent of Loponica japonica showed stronger effect on elimination of resistance plasmid from P.aeruginosa in vivo.The elinination rate was eight percent (8%).
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〔Key words〕 Lonicera japonica;P.aeruginosa;R plasmid;eliminating effect
绿脓杆菌为天然耐药菌，对多种抗生素具有耐药性，其耐药机理可能与质粒的存在与传播有关〔1〕，中药金银花具有广谱抗菌作用，可抑制绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌的生长繁殖〔2〕。为探讨金银花对绿脓杆菌R质粒有无消除作用，本文作者取金银花水煎剂亚抑菌浓度对绿脓杆菌P29株R质粒进行体内体外消除试验，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌 株
绿脓杆菌P29株，为本室保存菌种。经鉴定含45.4 MD质粒。该质粒决定宿主菌对卡那霉素(Km)、庆大霉素(Gm)，四环素(Tc)和链霉素(Sm)的耐药性。
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1.2 试 剂
卡那霉素、庆大霉素、四环素、链霉素均为国产标准品。金银花购自吉林大药房，由白求恩医大基础药理教研室鉴定。SDS(十二烷基硫酸钠)购自华美公司。
1.3 培养基
LB肉汤培养基，4%琼脂营养培养基。
1.4 实验动物
昆明种小鼠，18～20 g，雌雄不限，由本校实验动物部提供。
1.5 方 法
1.5.1 体外消除试验方法 将绿脓杆菌P29株接种于LB肉汤培养基中，37℃过夜振荡培养，调菌液浓度1.5×109。实验组：取菌液分别加入含不同浓度的金银花(自200 g/L开始，连续递倍稀释至第7管，第8管不加药为对照管)LB液体培养基中，每管5 μl。37℃振荡培养48 h后取出，观察细菌生长现象，判定亚抑菌浓度。取亚抑菌浓度培养物接种在4%营养琼脂平板上，37℃培养24 h，挑取单个菌落1 000个，影印培养〔3〕。对照组：消除剂为SDS，消除试验方法同上。确认消除子：经快速质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳，检测R质粒消除结果。
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1.5.2 体内消除试验方法 肠道去污染小鼠动物模型建立后〔3〕经口感染绿脓杆菌P29株(菌液浓度1.5×109) 0.2 ml/只，随机分2组，每组6只。试验组感染细菌同时灌胃给予金银花水煎剂，2 mg/只，24 h后再次给药，剂量同上，48 h后处死小鼠，取盲肠内容物分离单个菌落，随机取1 000个菌落影印培养，计数消除子：经质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳鉴定。对照组感染的细菌同时仅给营养液，不给药物。
2 结 果
2.1 体外R质粒消除结果
金银花水煎剂对绿脓杆菌P29抑菌浓度为62.5 g/L。亚抑菌浓度31.25 g/L作用绿脓杆菌P29株48 h后，没有获得消除子。对照组获消除子240株，消除率为24%，其中237株消除子恢复对Gm敏感性，3株消除子恢复对Gm、Tc敏感性。绿脓杆菌P29株自然消除率为0。
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2.2 体内R质粒消除结果
试验组获得消除子共80株，消除率为8%，其中60株恢复对Gm敏感性，8株恢复对Km敏感性，12株恢复对Gm、Km、Tc、Sm敏感性。经质粒抽提，琼脂糖凝胶电泳，结果显示消除子丢失了45.5 MD质粒。对照组未获得消除子。
3 讨 论
R质粒常常赋予宿主菌对多种抗生素产生耐药性。随着广谱抗生素的广泛应用，药物敏感菌株受到抑制或杀死，使具有R质粒的耐药菌株大量增殖，为临床治疗带来困难。长期以来，人们试图从中药中寻找有效的R质粒消除剂，以协助抗菌药物治疗传染性疾病。金银花不仅对绿脓杆菌P29株有较强的抑制作用，同时在体内对绿脓杆菌R质粒也具有消除作用。本试验证明，消除子主要表现对庆大霉素耐药性的丢失，少数消除子表现为多重耐药性的丢失。对照组未获得消除子。实验组与对照组比较有显著差异。体外消除试验未获得消除子，其可能原因是由于体内体外试验环境不同，药物在体内的疗效不仅受到药物和细菌两方面的因素影响，同时也受到机体内环境的制约，特别是免疫功能的影响。
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〔作者简介〕 王 云(1957-)，女，吉林省长春市人，副教授，医学硕士，主要从事细菌质粒研究。
肖洋 研究生；程力 进修生
〔参考文献〕
〔1〕叶高峰.医院感染绿脓杆菌对抗生素类药物感染性及质粒DNA检测〔J〕.航空军医，1997，25(6)：354～335.
〔2〕江苏新医学院.中药大辞典〔M〕.上海：上海科学技术出版社出版，1996.
〔3〕关显智.黄芩对痢疾杆菌F13R质粒体外及体内消除作用的对比实验研究〔J〕.中华流行病学杂志，1992，13(2)：11～13.
〔4〕陈小英.大黄素对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用〔J〕.南京药学院学报，1985，16(2)：48～49.
〔收稿日期〕 1999-01-19, 百拇医药