人脑胶质瘤Cyclin D1蛋白表达的研究
作者：张显峰 赵刚 王文军
单位：张显峰 赵刚(第一临床学院神经外科 吉林 长春130021)；王文军(第三临床学院骨科)
关键词：脑胶质瘤；细胞周期素D1；蛋白表达
白求恩医科大学学报000217
〔提 要〕 目的：观察不同级别脑胶质瘤细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达情况。方法：采用免疫组化技术结合高温高压抗原修复法观察肿瘤细胞Cyclin D1阳性表达率。结果：胶质瘤Cyclin D1阳性率明显高于正常对照组，并有随肿瘤恶性程度增加而升高的趋势，但Ⅲ、Ⅳ级肿瘤间差异不显著(P>0.05)。结论：脑胶质瘤存在Cyclin D1蛋白过表达现象，推测与维持肿瘤增殖活性有关。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R730.45 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0154-02
细胞周期素D1(Cyclin D1)是最早被证明为癌基因的细胞周期素。近期大量相关研究表明人类许多类型肿瘤均存在不同程度的Cyclin D1基因扩增和蛋白过表达情况，提示Cyclin D1的异常表达可能与肿瘤发生、发展过程密切相关。本研究检测了53例脑胶质瘤石蜡标本Cyclin D1蛋白的表达情况，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 对 象 本实验随机抽取我科1997年4月～1999年1月间脑胶质瘤术后石蜡病理标本53例。全部病例按WHO胶质瘤病理分级判定标准分级，其中Ⅰ级9例、Ⅱ级15例、Ⅲ级18例、Ⅳ级11例。另取5例脑外伤内减压切除脑组织为正常对照组。经病史回顾，所有病人均为首次发病，术前未经任何治疗。
, 百拇医药
1.2 免疫组化染色 4 μm石蜡病理切片，常规ABC染色。染色前需采用高温高压抗原修复以提高阳性检出率。一抗为鼠抗单克隆抗体(DCS-6)，阳性对照为一例典型胞核染色的乳腺癌石蜡切片(均由福州迈新公司提供)。
1.3 结果评价 在阳性细胞集中分布区域，随机记取10个高倍视野(40×)下1 000个细胞以上的阳性细胞率，每个样本重复记数3次，取平均值。统计方法采用F检验。
2 结 果
本实验免疫组化结果显示，Cyclin D1呈典型胞核表达，核膜染色明显。有时因胞内染色质淡染和核膜深度着色，而使整个阳性核看似空泡状。肿瘤组织和周边反应增生性胶质细胞、小胶质细胞、增生性血管内皮细胞均有Cyclin D1阳性表达，而正常对照组则偶见。与正常脑组织相比，胶质瘤有一定程度的Cyclin D1过表达现象，并有随肿瘤恶性程度升高而增加的趋势，但Ⅲ、Ⅳ级肿瘤间阳性率差异不显著(P>0.05)，见附表。
, http://www.100md.com
Table Expression of Cyclin D1 protein in glioma Group
n
Cyclin D1
(M±s,%)
NC
5
0.72±0.36
Ⅰ
9
3.54±1.23
Ⅱ
, 百拇医药
15
6.65±2.30
Ⅲ
18
10.73±4.25*
Ⅳ
11
9.56±5.40
* Except Ⅲ and Ⅳ,comparison of Cyclin D1 among all groups is P<0.05 (F test). 3 讨 论
Cyclin D1蛋白由位于11q13的CCND1基因编码，分子量36 000 Da。作为G1期细胞周期素的Cyclin D1主要通过激活CDK4或CDK6加快细胞G1/M期转换过程，促进细胞生长〔1〕。1991年，Morokura等〔2〕的研究就发现人甲状旁腺瘤中定位于11q13的PRAD1基因(即Cyclin D1基因)可因染色体倒位而在甲状旁腺素启动子内过度表达，提示其与甲状旁腺瘤的发生密切相关。其后，许多相关研究表明Cyclin D1基因与蛋白产物的异常改变是某些人类恶性肿瘤发生、发展的重要原因。值得注意的是，Cyclin D1基因克隆的提取最早是在U118MG胶质母细胞瘤系中完成的，这一事实已暗示Cyclin D1可能与胶质瘤存在某些联系。近期，有研究报道人胶质瘤有Cyclin D1过表达现象，并与肿瘤病理级别呈正比〔3〕。本研究虽然得出类似的结果，但发现高级别胶质瘤间Cyclin D1蛋白表达并无显著性差异(P>0.05)，提示Cyclin D1蛋白表达与胶质瘤病理分级不直接相关。Cyclin D1蛋白过表达除与基因扩增有关外，转录翻译后水平的异常可能也是其原因之一。例如，最近发现一种不依赖基因扩增、不易降解、稳定性强的Cyclin D1蛋白变异体，它可存在于整个细胞周期并导致细胞恶性增殖〔4〕。有关上述机理是否为胶质瘤Cyclin D1蛋白过表达的原因尚待进一步研究。考虑到Cyclin D1具有明显的促生长作用，因此，本研究推测Cyclin D1过表达可能与维持胶质瘤恶性增殖活性密切相关。尽管大部分证据表明胶质瘤存在Cyclin D1过表达现象，但Numa等〔5〕对三种胶质瘤母细胞瘤系Cyclin D1蛋白表达情况进行研究后，未发现其表达增多的迹象。可见，胶质瘤中是否有Cyclin D1蛋白过表达现象尚存在争议；但本研究结果进一步证实了Cyclin D1蛋白过表达在人脑胶质瘤中是较普遍的现象，考虑Cyclin D1表达情况的差异可能与胶质瘤细胞遗传背景的异质性有关。
, 百拇医药
〔作者简介〕 张显峰(1970-)，男，吉林省长春市人，主治医师，医学博士，主要从事脑胶质瘤发病机理的研究。
〔参考文献〕
〔1〕Tony Hunter,Jonathon Pinest.Cyclins and cancer Ⅱ:Cyclin D1 and CDK inhibitors come of age〔J〕.Cell,1994,79:573～582.
〔2〕Xiong Y.Human D-type cyclin〔J〕.Cell,1991,65:691～699.
〔3〕Cavalla P,Dutto A,Piva R,et al.Cyclin D1 expression in glioma〔J〕.Acta Neuropathol,1998,95:131～135.
, http://www.100md.com
〔4〕Welcker M,Lukas J,Strauss M,et al.Enhanced protein stability:a novel mechanism of D-type cyclin over-abundance identified in human sarcoma cells〔J〕.Oncogene,1996,13(2):419～425.
〔5〕Numa Y,Tsukazaki Y,Yamamoto M,et al.Cyclin protein expression on malignant glioma cells〔J〕.Hum Cell,1998,11(1)：21～26.
〔收稿日期〕 1999-05-28, 百拇医药
单位：张显峰 赵刚(第一临床学院神经外科 吉林 长春130021)；王文军(第三临床学院骨科)
关键词：脑胶质瘤；细胞周期素D1；蛋白表达
白求恩医科大学学报000217
〔提 要〕 目的：观察不同级别脑胶质瘤细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达情况。方法：采用免疫组化技术结合高温高压抗原修复法观察肿瘤细胞Cyclin D1阳性表达率。结果：胶质瘤Cyclin D1阳性率明显高于正常对照组，并有随肿瘤恶性程度增加而升高的趋势，但Ⅲ、Ⅳ级肿瘤间差异不显著(P>0.05)。结论：脑胶质瘤存在Cyclin D1蛋白过表达现象，推测与维持肿瘤增殖活性有关。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R730.45 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0154-02
细胞周期素D1(Cyclin D1)是最早被证明为癌基因的细胞周期素。近期大量相关研究表明人类许多类型肿瘤均存在不同程度的Cyclin D1基因扩增和蛋白过表达情况，提示Cyclin D1的异常表达可能与肿瘤发生、发展过程密切相关。本研究检测了53例脑胶质瘤石蜡标本Cyclin D1蛋白的表达情况，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 对 象 本实验随机抽取我科1997年4月～1999年1月间脑胶质瘤术后石蜡病理标本53例。全部病例按WHO胶质瘤病理分级判定标准分级，其中Ⅰ级9例、Ⅱ级15例、Ⅲ级18例、Ⅳ级11例。另取5例脑外伤内减压切除脑组织为正常对照组。经病史回顾，所有病人均为首次发病，术前未经任何治疗。
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1.2 免疫组化染色 4 μm石蜡病理切片，常规ABC染色。染色前需采用高温高压抗原修复以提高阳性检出率。一抗为鼠抗单克隆抗体(DCS-6)，阳性对照为一例典型胞核染色的乳腺癌石蜡切片(均由福州迈新公司提供)。
1.3 结果评价 在阳性细胞集中分布区域，随机记取10个高倍视野(40×)下1 000个细胞以上的阳性细胞率，每个样本重复记数3次，取平均值。统计方法采用F检验。
2 结 果
本实验免疫组化结果显示，Cyclin D1呈典型胞核表达，核膜染色明显。有时因胞内染色质淡染和核膜深度着色，而使整个阳性核看似空泡状。肿瘤组织和周边反应增生性胶质细胞、小胶质细胞、增生性血管内皮细胞均有Cyclin D1阳性表达，而正常对照组则偶见。与正常脑组织相比，胶质瘤有一定程度的Cyclin D1过表达现象，并有随肿瘤恶性程度升高而增加的趋势，但Ⅲ、Ⅳ级肿瘤间阳性率差异不显著(P>0.05)，见附表。
, http://www.100md.com
Table Expression of Cyclin D1 protein in glioma Group
n
Cyclin D1
(M±s,%)
NC
5
0.72±0.36
Ⅰ
9
3.54±1.23
Ⅱ
, 百拇医药
15
6.65±2.30
Ⅲ
18
10.73±4.25*
Ⅳ
11
9.56±5.40
* Except Ⅲ and Ⅳ,comparison of Cyclin D1 among all groups is P<0.05 (F test). 3 讨 论
Cyclin D1蛋白由位于11q13的CCND1基因编码，分子量36 000 Da。作为G1期细胞周期素的Cyclin D1主要通过激活CDK4或CDK6加快细胞G1/M期转换过程，促进细胞生长〔1〕。1991年，Morokura等〔2〕的研究就发现人甲状旁腺瘤中定位于11q13的PRAD1基因(即Cyclin D1基因)可因染色体倒位而在甲状旁腺素启动子内过度表达，提示其与甲状旁腺瘤的发生密切相关。其后，许多相关研究表明Cyclin D1基因与蛋白产物的异常改变是某些人类恶性肿瘤发生、发展的重要原因。值得注意的是，Cyclin D1基因克隆的提取最早是在U118MG胶质母细胞瘤系中完成的，这一事实已暗示Cyclin D1可能与胶质瘤存在某些联系。近期，有研究报道人胶质瘤有Cyclin D1过表达现象，并与肿瘤病理级别呈正比〔3〕。本研究虽然得出类似的结果，但发现高级别胶质瘤间Cyclin D1蛋白表达并无显著性差异(P>0.05)，提示Cyclin D1蛋白表达与胶质瘤病理分级不直接相关。Cyclin D1蛋白过表达除与基因扩增有关外，转录翻译后水平的异常可能也是其原因之一。例如，最近发现一种不依赖基因扩增、不易降解、稳定性强的Cyclin D1蛋白变异体，它可存在于整个细胞周期并导致细胞恶性增殖〔4〕。有关上述机理是否为胶质瘤Cyclin D1蛋白过表达的原因尚待进一步研究。考虑到Cyclin D1具有明显的促生长作用，因此，本研究推测Cyclin D1过表达可能与维持胶质瘤恶性增殖活性密切相关。尽管大部分证据表明胶质瘤存在Cyclin D1过表达现象，但Numa等〔5〕对三种胶质瘤母细胞瘤系Cyclin D1蛋白表达情况进行研究后，未发现其表达增多的迹象。可见，胶质瘤中是否有Cyclin D1蛋白过表达现象尚存在争议；但本研究结果进一步证实了Cyclin D1蛋白过表达在人脑胶质瘤中是较普遍的现象，考虑Cyclin D1表达情况的差异可能与胶质瘤细胞遗传背景的异质性有关。
, 百拇医药
〔作者简介〕 张显峰(1970-)，男，吉林省长春市人，主治医师，医学博士，主要从事脑胶质瘤发病机理的研究。
〔参考文献〕
〔1〕Tony Hunter,Jonathon Pinest.Cyclins and cancer Ⅱ:Cyclin D1 and CDK inhibitors come of age〔J〕.Cell,1994,79:573～582.
〔2〕Xiong Y.Human D-type cyclin〔J〕.Cell,1991,65:691～699.
〔3〕Cavalla P,Dutto A,Piva R,et al.Cyclin D1 expression in glioma〔J〕.Acta Neuropathol,1998,95:131～135.
, http://www.100md.com
〔4〕Welcker M,Lukas J,Strauss M,et al.Enhanced protein stability:a novel mechanism of D-type cyclin over-abundance identified in human sarcoma cells〔J〕.Oncogene,1996,13(2):419～425.
〔5〕Numa Y,Tsukazaki Y,Yamamoto M,et al.Cyclin protein expression on malignant glioma cells〔J〕.Hum Cell,1998,11(1)：21～26.
〔收稿日期〕 1999-05-28, 百拇医药