非淋菌性尿道炎并发前列腺炎34例PCR检测
作者：田 宇 潘国胜 田 俊 孔繁荣
单位：田宇 潘国胜 田俊(罗山县人民医院皮肤科 罗山 464200)；孔繁荣(北京医科大学第一医院皮肤科 北京 100034)
关键词：非淋菌性尿道炎；前列腺炎；PCR；病原学
河南医科大学学报990252 采用PCR方法对34例非淋菌性尿道炎(NGU)并发前列腺炎患者的前列腺液进行了沙眼衣原体(CT)、生殖支原体(MG)、解脲支原体(UU)检测，以期了解三者与前列腺炎的关系，现报道如下。
1 对象与方法
1.1 病例选择 采集从1996年6月～1997年6月在性病门诊的患者，均有婚外性接触，确诊男性非淋菌性尿道炎并发前列腺34例，年龄20～40岁。平均病程3个月以上，为实验组。
, 百拇医药
1.2 对照选择 随机选择无婚外性接触史，近2月无泌尿系感染症状，尿液、前列腺液常规及体检正常的22例患者为对照组。
1.3 取材 常规获取受检者的前列腺液，均作镜检，部分按Maeres定位方法收集首段尿，中段尿，前列腺液和按摩后尿作细菌培养。同时取前列腺液标本在Eppendorf管中-20℃保存备用。
1.4 实验室检查 实验组前列腺液镜检白细胞>10个/HP，卵磷脂<22例；白细胞>50个/HP，卵磷脂<4例；白细胞<10个/HP8例。前列腺液细菌培养分离出金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌各1例，大肠杆菌3例。对照组22例前列腺液镜检正常，细菌培养阴性。
1.5 标准株 沙眼衣原体L2血清型，Mccoy细胞(北京协和医院病毒室惠赠)，解脲支原体1-14血清型，生殖支原体G37血清型(首都儿研所提供)。特异性实验中使用了其他15种常见或可见于泌尿生殖道的微生物。
, 百拇医药
1.6 DNA模板的制备 向存有前列腺液标本的1.5mlEppendorf管中加入600μl抽提液，65℃水浴20min，加入3mol/L醋酸钠300μl；冰水浴20min；10000r/min离心10min，移上清液入另一管；加入异丙醇600μl，室温放置20min、12000r/min离心10min，2倍体积分数为70%乙醇及无水乙醇各沉淀1次，风干，溶于50μlTE溶液(pH8，10mmol/LTris*HCl，1mmol/LEDTA)。
1.7 PCR 引物由北京医科大学第一医院性病研究室提供，三对引物序列及预期扩增片段长度见表1。PCR采用25μl反应体系，共进行40个循环。取10μlPCR产物在20g/L琼脂糖凝胶(含1g/L溴氏乙锭)中进行电泳，在紫外灯下观察结果，出现预期长度扩增片段为阳性。
表1 引物的序列及扩增片段长度 序 列
预期扩增
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片段长度
CT-A 5′CAG ATA CAT TAA ACG AAG CAG C3′
CT-B 5′GTG GTG ACA TAC CAC TAA C3′
207bp
MG-A 5′AGT TGA TGA AAC CTT AAC CCC GTG TTG G3′
MG-B 5′CGG TTG AGG GGT TTT CCA TTT TTG C3′
384bp
UU-A 5′TGT GGA TCC TTC TGG GCT ATG ACA TTA GGT TGT GTT ACC3′
, 百拇医药
UU-B 5′GTC GAA TTT CAC CTG GTT GTG TAG TTT CAA AGT TCA C3′
429bp
2 结果
2.1 PCR结果的灵敏性和特异性 对引物均能准确检出标准株中相应对照，其余阴性对照株经PCR检测均阴性。3对引物扩增其他15种微生物DNA结果均阴性。
2.2 实验组PCR检测结果 在34例患者中，21例电泳后出现长度429bpUU的特异性扩增片段，其中1例UU阳性者同时出现长度为207bpCT特异性扩增片段，MG未出现阳性扩增片段。
2.3 对照组PCR扩增结果 22例标本电泳后2例出现长度为429bp阳性扩增片段，CT、MG均阴性。2组间的阳性率差异有显著性(P<0.01)。
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3 讨论
非淋菌性尿道炎是一个世界性流行的性病，目前已肯定主要由沙眼衣原体和解脲支原体引起[1]。自1981年Tuuly在2名NGU尿道中分离出生殖支原体后，也明确了MG在NGU中的致病性。前列腺炎是NGU常见并发症，并且往往是NGU顽固不愈和复发的主要原因。为了探索3种病原体在NGU并发前列腺炎中的致病性，应用PCR方法分别对34例NGU并发前列腺炎患者前列腺液进行了检测，结果UU21例阳性，阳性率61.8%，且其中1例UU阳性者同时检测出CT，阳性率为2.1%；MG未检出。提示UU可能是NGU并发前列腺炎的主要病原体，UU导致的前列腺炎是NGU的常见并发症，沙眼衣原体可能与前列腺炎有一定相关性，或与UU协同致病。可能是由于本组样本太小，本实验没有在患者前列腺液中检出MG，虽不能除外它引起前列腺炎的可能，但在NGU并发前列腺炎中似乎并不是主要病原体。
国外学者用组织培养法检测UU所致前列腺炎，检出率为20.3%[2]，作者用PCR方法检测UU，检出率为61.8%，明显高于培养法。说明PCR方法特异、敏感，阳性率高。
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Bowie等[3]报道40%～50%非淋菌性尿道炎感染为沙眼衣原体，其余大部分为解脲支原体。而本研究发现前列腺炎标本中UU明显高于CT提示，在致病性方面，可能二者在尿道和前列腺体内是不同的[4，5]。
在正常对照组中出现2例UU阳性，可能因为菌量太少，并不意味着炎症必然存在。文献记载UU致病可能和其数量增多有关[6]。
PCR假阳性是PCR技术中的难点，操作中避免污染，合理的引物设计是保证PCR成功关键。作者采用引物对阳性和阴性对照进行检测均能准确检出，说明PCR检测CT、MG、UU是一种准确，可靠的方法。
总之，应用PCR方法对NGU并发前列炎患者前列腺液进行了CT，MG，UU感染的检测，一方面说明PCR是一种快速，敏感，特异的检测方法[7]，另一方面UU可能是NGU并发前列腺炎的主要病原体之一，UU引起前列腺炎是NGU常见并发症，CT与前列腺炎可能有相关性。
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参考文献
[1] 杨国亮，王侠生主编.现代皮肤病学.上海：上海医科大学出版社，1996.375
[2] Bruner H. Studies on the role of ueaplasma,uealy ticum and Mycoplsma Honinis in proslaritis. J lnfect Dis，1983，147：807
[3] Bowie WR，Wang SP，Alexander ER，et al. Etiology of nongonococcal urethritis: evidence for chlamydia traehomatis and Ureaplasma Urealyticum. J Chin lwest，1977，58：735
[4] Doble A，Taylor Robinson D，Thomas BJ，et al. Acute epididymitis：a microbioloical and mtrosonographis study. British J Urol，1989，63：90
[5] 曹玉璞.支原体研究的进展.中华流行病学杂志，1995，16(2B)：123
[6] Brumer J，Weidner W，Schiefer HG. Guantitalive stuelies on the role of uresaplasma Urealyticum in Mngonococwl urethritis and chronic Drostatitis yale. J Biol Med，1983，56：545
[7] 吴乔华.聚合酶链式反应在性病研究中的应用.国外医学.皮肤病学分册，1992，18(1)：3, 百拇医药
单位：田宇 潘国胜 田俊(罗山县人民医院皮肤科 罗山 464200)；孔繁荣(北京医科大学第一医院皮肤科 北京 100034)
关键词：非淋菌性尿道炎；前列腺炎；PCR；病原学
河南医科大学学报990252 采用PCR方法对34例非淋菌性尿道炎(NGU)并发前列腺炎患者的前列腺液进行了沙眼衣原体(CT)、生殖支原体(MG)、解脲支原体(UU)检测，以期了解三者与前列腺炎的关系，现报道如下。
1 对象与方法
1.1 病例选择 采集从1996年6月～1997年6月在性病门诊的患者，均有婚外性接触，确诊男性非淋菌性尿道炎并发前列腺34例，年龄20～40岁。平均病程3个月以上，为实验组。
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1.2 对照选择 随机选择无婚外性接触史，近2月无泌尿系感染症状，尿液、前列腺液常规及体检正常的22例患者为对照组。
1.3 取材 常规获取受检者的前列腺液，均作镜检，部分按Maeres定位方法收集首段尿，中段尿，前列腺液和按摩后尿作细菌培养。同时取前列腺液标本在Eppendorf管中-20℃保存备用。
1.4 实验室检查 实验组前列腺液镜检白细胞>10个/HP，卵磷脂<22例；白细胞>50个/HP，卵磷脂<4例；白细胞<10个/HP8例。前列腺液细菌培养分离出金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌各1例，大肠杆菌3例。对照组22例前列腺液镜检正常，细菌培养阴性。
1.5 标准株 沙眼衣原体L2血清型，Mccoy细胞(北京协和医院病毒室惠赠)，解脲支原体1-14血清型，生殖支原体G37血清型(首都儿研所提供)。特异性实验中使用了其他15种常见或可见于泌尿生殖道的微生物。
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1.6 DNA模板的制备 向存有前列腺液标本的1.5mlEppendorf管中加入600μl抽提液，65℃水浴20min，加入3mol/L醋酸钠300μl；冰水浴20min；10000r/min离心10min，移上清液入另一管；加入异丙醇600μl，室温放置20min、12000r/min离心10min，2倍体积分数为70%乙醇及无水乙醇各沉淀1次，风干，溶于50μlTE溶液(pH8，10mmol/LTris*HCl，1mmol/LEDTA)。
1.7 PCR 引物由北京医科大学第一医院性病研究室提供，三对引物序列及预期扩增片段长度见表1。PCR采用25μl反应体系，共进行40个循环。取10μlPCR产物在20g/L琼脂糖凝胶(含1g/L溴氏乙锭)中进行电泳，在紫外灯下观察结果，出现预期长度扩增片段为阳性。
表1 引物的序列及扩增片段长度 序 列
预期扩增
, 百拇医药
片段长度
CT-A 5′CAG ATA CAT TAA ACG AAG CAG C3′
CT-B 5′GTG GTG ACA TAC CAC TAA C3′
207bp
MG-A 5′AGT TGA TGA AAC CTT AAC CCC GTG TTG G3′
MG-B 5′CGG TTG AGG GGT TTT CCA TTT TTG C3′
384bp
UU-A 5′TGT GGA TCC TTC TGG GCT ATG ACA TTA GGT TGT GTT ACC3′
, 百拇医药
UU-B 5′GTC GAA TTT CAC CTG GTT GTG TAG TTT CAA AGT TCA C3′
429bp
2 结果
2.1 PCR结果的灵敏性和特异性 对引物均能准确检出标准株中相应对照，其余阴性对照株经PCR检测均阴性。3对引物扩增其他15种微生物DNA结果均阴性。
2.2 实验组PCR检测结果 在34例患者中，21例电泳后出现长度429bpUU的特异性扩增片段，其中1例UU阳性者同时出现长度为207bpCT特异性扩增片段，MG未出现阳性扩增片段。
2.3 对照组PCR扩增结果 22例标本电泳后2例出现长度为429bp阳性扩增片段，CT、MG均阴性。2组间的阳性率差异有显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
3 讨论
非淋菌性尿道炎是一个世界性流行的性病，目前已肯定主要由沙眼衣原体和解脲支原体引起[1]。自1981年Tuuly在2名NGU尿道中分离出生殖支原体后，也明确了MG在NGU中的致病性。前列腺炎是NGU常见并发症，并且往往是NGU顽固不愈和复发的主要原因。为了探索3种病原体在NGU并发前列腺炎中的致病性，应用PCR方法分别对34例NGU并发前列腺炎患者前列腺液进行了检测，结果UU21例阳性，阳性率61.8%，且其中1例UU阳性者同时检测出CT，阳性率为2.1%；MG未检出。提示UU可能是NGU并发前列腺炎的主要病原体，UU导致的前列腺炎是NGU的常见并发症，沙眼衣原体可能与前列腺炎有一定相关性，或与UU协同致病。可能是由于本组样本太小，本实验没有在患者前列腺液中检出MG，虽不能除外它引起前列腺炎的可能，但在NGU并发前列腺炎中似乎并不是主要病原体。
国外学者用组织培养法检测UU所致前列腺炎，检出率为20.3%[2]，作者用PCR方法检测UU，检出率为61.8%，明显高于培养法。说明PCR方法特异、敏感，阳性率高。
, 百拇医药
Bowie等[3]报道40%～50%非淋菌性尿道炎感染为沙眼衣原体，其余大部分为解脲支原体。而本研究发现前列腺炎标本中UU明显高于CT提示，在致病性方面，可能二者在尿道和前列腺体内是不同的[4，5]。
在正常对照组中出现2例UU阳性，可能因为菌量太少，并不意味着炎症必然存在。文献记载UU致病可能和其数量增多有关[6]。
PCR假阳性是PCR技术中的难点，操作中避免污染，合理的引物设计是保证PCR成功关键。作者采用引物对阳性和阴性对照进行检测均能准确检出，说明PCR检测CT、MG、UU是一种准确，可靠的方法。
总之，应用PCR方法对NGU并发前列炎患者前列腺液进行了CT，MG，UU感染的检测，一方面说明PCR是一种快速，敏感，特异的检测方法[7]，另一方面UU可能是NGU并发前列腺炎的主要病原体之一，UU引起前列腺炎是NGU常见并发症，CT与前列腺炎可能有相关性。
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参考文献
[1] 杨国亮，王侠生主编.现代皮肤病学.上海：上海医科大学出版社，1996.375
[2] Bruner H. Studies on the role of ueaplasma,uealy ticum and Mycoplsma Honinis in proslaritis. J lnfect Dis，1983，147：807
[3] Bowie WR，Wang SP，Alexander ER，et al. Etiology of nongonococcal urethritis: evidence for chlamydia traehomatis and Ureaplasma Urealyticum. J Chin lwest，1977，58：735
[4] Doble A，Taylor Robinson D，Thomas BJ，et al. Acute epididymitis：a microbioloical and mtrosonographis study. British J Urol，1989，63：90
[5] 曹玉璞.支原体研究的进展.中华流行病学杂志，1995，16(2B)：123
[6] Brumer J，Weidner W，Schiefer HG. Guantitalive stuelies on the role of uresaplasma Urealyticum in Mngonococwl urethritis and chronic Drostatitis yale. J Biol Med，1983，56：545
[7] 吴乔华.聚合酶链式反应在性病研究中的应用.国外医学.皮肤病学分册，1992，18(1)：3, 百拇医药