右归丸治疗肾阳虚证与微量元素相关性的实验研究
作者：郭 洪 薛 莎 马 威
单位：郭 洪 武汉市第六医院 430013； 薛 莎 马 威 武汉市中西医结合医院
关键词：右归丸；肾阳虚证；微量元素；相关性；实验研究
湖北中医学院学报/990125
摘要 以右归丸为代表方，灌服于肾阳虚家兔模型体内，发现机体内微量元素含量与生化指标改变相关联。肾阳虚证模型全血铜、铁、锰、铬、镍、钴等元素含量下降，血浆中的生化指标如TP、CHOL显著降低，BuN、Cr、LDH、TG等升高。模型动物灌服右归丸后，微量元素恢复正常，BuN、Cr、LDH、TG等下降至正常范围，TP、CHOL明显升高，恢复正常。证明了微量元素与生化指标一样在体内的生物代谢过程中有着特定的作用，从而说明了血液微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的重要指标。
, http://www.100md.com
中国图书分类号 R289.1
目前，中医药学的现代研究仍处于一个探索阶段，本研究通过观察用右归丸煎剂灌服肾阳虚动物模型的治疗过程，发现动物全血中微量元素平衡系统经历了“平衡→失衡→再平衡”的动态改变，从而证实了中药对机体的治疗作用与微量元素密切相关，能够作为中药功用效应的一个主要衡量标准。
1 材料和方法
1.1 右归丸煎剂的配方和制备
1.1.1 右归丸配方[1]
全部实验药材从武汉市药材公司一次足量购进，并经武汉市药检所鉴定。见表1。
表1 实验药材 药名
份量(g)
, 百拇医药
产地
药名
份量(g)
产地
熟 地
24
河南
杜 仲
12
湖北
山 药
12
河南
, http://www.100md.com 当 归
9
安徽
山茱萸
9
浙江
肉 桂
6
越南
枸 杞
12
宁夏
制附子
6
, 百拇医药
湖北
鹿角胶
12
新疆
菟丝子
12
江西
1.1.2 右归丸煎剂制备方法
将一份完整配方药物(鹿角胶除外)经纯水漂洗后，放在纯净刻度玻璃烧杯中混匀，用纯水800ml浸渍1h后，在电热板上控温100°C煎煮至500ml，过滤药渣出药液约300ml；再加入400ml纯水继续煎煮至300ml，过滤药渣出药液约200ml。过滤合并两次煎煮液。鹿角胶用小烧杯盛装，于电热板上隔水加热至烊化，兑入煎煮液中混匀，最后调液至500ml，装纯净玻璃药瓶备用。
, http://www.100md.com
1.2 实验纯水的制备
用上海亚荣生化仪器厂SZ-93自动双重纯水蒸馏器生产实验用纯水，纯净聚乙烯塑料桶盛装，每次生产1周用量。
1.3 实验动物及饲养环境
本课题选用日本种大耳白家兔，均雄性，体重2000g左右，武汉市生物制品研究所提供(湖北省医学实验动物管理委员会指定单位)。25°C恒温恒湿动物房，不锈钢笼分笼饲养。同批固体饲料，干燥保存。不锈钢容器盛放饲料和饮用纯水。每日专人观察并作记录。
1.4 动物实验器材
1.4.1 肝素抗凝试管
将常用于肝素粉剂(100～125u)配成1.0g/L的纯水溶液，每试管0.5ml，37～50°C烘干后备用。每支试管能抗凝5ml全血，供生化检测用[2]。
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1.4.2 羟基脲
片剂，500mg/片，济南制药厂生产，批号：970109。
1.4.3 微量元素分析试管
5ml带盖塑料试管放在稀硝酸和稀盐酸的混合液中浸泡48h，然后用双蒸水冲洗3次，再用纯水冲洗3次，37～50°C烘干备用。
1.4.4 其它器材
烘箱、分析天平、开口器、注射器、手术器械等。
1.5 家兔肾阳虚模型的制作方法
本研究采用羟基脲灌胃法制作家兔肾阳虚模型[3]。
1.6 用药剂量
, http://www.100md.com
1.6.1 模型制作
用羟基脲法制作家兔肾阳虚模型，剂量为500mg/kg/d，连续服用8d。
1.6.2 右归丸煎剂用量换算
按70kg成年人每日一付药，每付药500ml煎剂计算，1500g家兔的右归丸煎剂灌服用量换算公式为：
1500g家兔日服总量=人日服总量×兔与人体表面积比=500ml×0.07=35ml
本实验中12只家兔的用药剂量见表2。表2 实验家兔体重与羟基脲、右归丸煎剂用量对照表 编号
体重(g)
羟基脲(mg)
体重(g)
, 百拇医药
右归丸(ml)
1
2000
1000
1880
43.8
2
1800
900
1920
44.7
3
2400
, http://www.100md.com
1200
-
-
4
1800
900
1850
43.1
5
2300
1150
2000
46.6
, http://www.100md.com
6
2500
1250
-
-
7
1800
900
1750
40.8
8
2000
1000
, 百拇医药 1800
41.9
9
1950
1975
1770
41.2
10
1800
900
1850
43.1
11
, 百拇医药
1850
925
1850
43.1
12
2100
1050
1850
43.1
注：造模过程中3号和6号家兔分别在第6天和第7天死于衰竭。
1.7 实验方法及步骤
1.7.1 实验前准备
, 百拇医药
实验家兔12只，自购回之日起适应性饲养1周。
1.7.2 动物造模前各项观察指标的检测
实验家兔适应性饲养1周后，分别记录皮温、体重，并各抽取股动脉血3ml送检。首先准确取1ml置于微量元素分析试管中检测微量元素；2ml置于肝素抗凝管中检测生化指标。
1.7.3 模型制作
将羟基脲片剂碾碎，按表2剂量，称取羟基脲，碾碎后用水溶解，灌胃。连续用药8d，密切观察其毛发、精神状态及饮食情况，记录皮温、体重改变。
在造模第9d，分别抽取各模型家兔股动脉血4ml送检，检测微量元素、生化指标。
1.7.4 造模后用药
, 百拇医药 从造模完成后的第1天开始，按表2右归丸剂量，分每天早晚2次，以右归丸煎煮液灌胃。连续用药8天，密切观察其毛发、精神状态及饮食情况，记录皮温、体重改变。在用药第9天，分别抽取各模型家兔股动脉血4ml。检测微量元素、生化指标。
1.8 微量元素检测
本实验重点检测锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、锰(Mn)、锶(Sr)、钴(Co)、镍(Ni)、铬(Cr)等8种元素。
1.9 生化指标检测
重点检测血浆尿素氮(BuN)、肌苷(Cr)、谷丙氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白(TP)、总胆固醇(TChol)、甘油三脂(TG)等7项生化指标。
1.10 生理指标监测
皮温测定方法：剪去家兔前肢腋窝部兔毛，将温度计放于此处，合拢前肢呈夹住温度计状，固定1分钟后，取出温度计读数，连续测定3次。若3次测定误差在±1°C以内时，取其平均值为本次测定的皮温值，否则重新测定。同时观察记录每日动物饮食、精神状态、毛发及体重改变。
, 百拇医药
2 结果和分析
2.1 实验前后模型家兔生理指标检测结果
造模过程中，实验家兔逐渐出现饮食减少，消瘦，毛发失去光泽，脱毛，体重和皮温明显下降，反应迟钝，倦怠，弓背等不良反应，第6天和第7天分别有一只实验家兔死亡。经右归丸煎剂灌服后，实验家兔饮食逐渐增加，毛发逐渐恢复光泽，脱毛现象逐渐减少，精神好转，体重明显增加，皮温明显升高。
实验前后模型家兔皮温及体重变化情况见表3。
表3 家兔皮温及体重变化情况(
±SD)
皮温(°C)
体重(kg)
, http://www.100md.com
例数
造模前
38.80±0.28
2.03±0.25
12
模 型
34.00±1.14*
1.84±0.07*
10
用药后
37.70±0.98＃
2.05±0.17＃
, http://www.100md.com
10
*与造模前对照相比，P<0.001；＃与模型组相比，P<0.001
2.2 实验前后模型家兔血液微量元素含量检测结果 见表4。表4 实验前后模型家兔血液微量元素含量检测结果(±SD)单位：mg/L
Cu
Zn
Fe
Ni
造模前
0.81±0.18&
3.80±0.60
, 百拇医药
754.61±127.52
0.14±0.02&
造模后
0.61±0.22*
3.37±0.52*
570.73±93.54*
0.08±0.01
用药后
0.76±0.16#
4.09±0.56#
708.06±90.28#
, 百拇医药 0.20±0.05#
Mn
Cr
Co
Sr
造模前
0.06±0.02&
1.03±0.03&
0.11±0.01
0.12±0.02
造模后
0.03±0.01
, 百拇医药
0.63±0.01
0.08±0.01
0.03±0.01
用药后
0.10±0.03#
1.44±0.05#
0.18±0.03
0.08±0.01
*造模后与造模前比，P<0.05；#用药后与造模后比，P<0.05；&用药后与造模前比，P<0.05
2.3 实验前后模型家兔血液生化指标检测结果 见表5。表5 实验前后模型家兔血液生化指标检测结果(±SD)
, 百拇医药
TChol(mmol/L)
TG(mmol/L)
ALT(u/L)
造模前
1.72±0.63
132.86±70.46
71.30±26.8
造模后
1.47±0.37*
199.31±48.08*
100.6±46.6*
用药后
, 百拇医药
1.62±0.70#
149.50±47.60#
73.20±28.6#
LDH(u/L)
BuN(mmol/L)
Cr(umol/L)
TP(g/L)
造模前
681.10±144.77
6.91±1.42
110.42±22.90
, 百拇医药 75.27±9.21&
造模后
346.29±94.83*
7.79±2.60*
133.27±30.14*
54.19±4.00*
用药后
914.67±112.75#
5.84±0.57#
96.72±6.89#
66.95±3.08
, 百拇医药 *造模后与造模前比，P<0.05；#用药后与造模后比，P<0.05；&用药后与造模前比，P<0.05
2.4 实验前后微量元素与生化指标t检验结果
分别以正常对照组、模型组和中药组、中药组和正常对照组为对象，进行t检验。
2.4.1 微量元素t检验结果
经统计，造模后全血铜、锌、铁元素含量较造模前显著降低(P<0.05)。用药后全血铜、锌、铁、镍、锰、镉元素含量较造模后显著升高(P<0.05)。造模前与用药后相比，铜元素显著降低(P<0.05)，镍、锰、镉元素显著升高(P<0.05)。
2.4.2 生化指标t检验结果
经统计，造模后总胆固醇、乳酸脱氢酶，总蛋白较造模前显著降低(P<0.05)；而甘油三脂、ALT、尿素氮、肌苷显著升高(P<0.05)。用药后总胆固醇、乳酸脱氢酶较造模后显著升高(P<0.05)；而甘油三脂、ALT、尿素氮、肌苷显著降低(P<0.05)；总蛋白升高不明显(P>0.05)。造模前与用药后相比，除总蛋白有显著差异外(P<0.05)，其它指标无显著性差异。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 肾阳虚动物模型的造模情况
肾阳虚动物模型的制作方法较多，主要有激素类和药物类。激素类主要有皮质激素阳虚型，甲状腺减退阳虚型等；药物类主要有羟基尿阳虚型，腺嘌呤阳虚型等[4]。本研究对这些方法的成功经验进行了比较分析，选用了较为简便、经济的羟基脲造模法，此方法是《中药新药研制与申报》[5]中指定的肾阳虚造模方法之一。
临床上肾阳虚病人一般有DNA合成率降低的现象[3]，而羟基脲是一种抗肿瘤药物，它能抑制DNA还原酶活性而使DNA合成率下降，DNA合成的抑制导致了体内蛋白质合成障碍，由于蛋白质在体内代谢及生理功能的维持上起着重要的作用，从而可导致体内生理、生化代谢功能的低下和紊乱，并且羟基脲导致的肾阳虚模型形成的微量元素含量和分布的改变与临床报道[6]肾阳虚病人的微量元素平衡紊乱状况相似，这是羟基脲导致肾阳虚的内在机理，说明选用羟基脲模型用于本研究是比较合适的。
, 百拇医药
3.2 模型家兔造模前后生理、生化指标变化情况分析
健康家兔由于羟基脲的药理作用，在连续用药8d完成造模后，由于体内蛋白质合成受到抑制，总蛋白水平显著下降，肝功能(ALT)、肾功能(BuN、Cr)急性损伤，导致饮食不振、消瘦、精神状态萎靡，伴随发生了一系列体内代谢紊乱。
3.3 模型家兔用药前后生理、生化指标变化情况分析
右归丸是温补肾阳的经典代表方，出自《景岳全书》，诸药配伍，共具温阳补肾、填精补血，以收培补肾中元阳之效。有研究证实[7]，右归丸可以使肝酶活性升高(GDH、SDH、MAO、LDH、G-6-P)等，增加DNA含量，有效改善实验动物外观。
在本实验中，肾阳虚模型经右归丸治疗后，体内蛋白质合成障碍排除，总蛋白水平有所恢复，说明模型家兔经治疗后营养状况有所改善；ALT、BuN、Cr水平大幅降低，肝功能和肾功能急性损伤得到了及时有效的控制和改善。经右归丸治疗后，模型饮食渐增，体重增加，脱毛现象减少，毛发渐有光泽。
, 百拇医药
TChol合成量增加，TG水平明显回落，LDH水平显著升高，糖代谢的紊乱状况得到了显著改善，糖合成量增加，糖酵解强度提高，模型家兔体温回升，精神明显好转。
与造模前比较，肾阳虚模型经右归丸治疗后除总蛋白尚未恢复外，其它各项生化指标均恢复至造模前水平。模型家兔经右归丸煎剂灌服8d后，一系列代谢紊乱得到了良好的纠正和改善。
3.4 实验过程中模型家兔血液微量元素呈现明显动态变化规律
实验过程中，在肾阳虚模型家兔生化指标逐渐恶化的同时，全血元素铜、锌、铁等含量上与造模前相比显著降低(P<0.05)，经右归丸煎剂灌服治疗后，症状得到缓解，在生化指标明显改善的同时，全血元素铜、锌、铁、锰、镉、镍等含量较用药前相比显著性增高(P<0.05)。
从单个元素含量上看，造模后元素含量分布较造模前明显下降，用了右归丸，各元素含量又回升并高于造模前水平；从整体水平来看，模型组动物在用药后，微量元素含量水平趋向正常。
, 百拇医药
以上充分说明，造模及用药前后模型家兔体内微量元素平衡系统，确实经历了“平衡→失衡→再平衡”这样一个动态变化的过程，造模所致的机体代谢紊乱在用药后得到了良好的调节改善。
本实验反映出的模型家兔血液微量元素动态变化规律，不仅说明了血液微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的良好指标，并且充分证明了，在中药对证治疗过程中，蕴含着中药对机体微量元素平衡体的整体调控作用。
参 考 文 献
1.许济群.高等中医药院校教材《方剂学》.上海科学技术出版社，1985.113
2.叶应妩.全国临床检验操作规程.第二版.东南大学出版社，1997.1
3.陈小野.实用中医证候动物模型.北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1993.128
4.李仪奎.中药药理实验方法学.上海科技出版社，1991.276
5.王北婴.中药新药研制与申报.中国中医药出版社，1995.228
6.管竞环.中医药理论量化与微量元素.湖北科技出版社，1998.85
7.白刚.中药方剂研究与应用大全.北京：中国科学技术出版社，1995.100
收稿日期：1999-01-18, 百拇医药
单位：郭 洪 武汉市第六医院 430013； 薛 莎 马 威 武汉市中西医结合医院
关键词：右归丸；肾阳虚证；微量元素；相关性；实验研究
湖北中医学院学报/990125
摘要 以右归丸为代表方，灌服于肾阳虚家兔模型体内，发现机体内微量元素含量与生化指标改变相关联。肾阳虚证模型全血铜、铁、锰、铬、镍、钴等元素含量下降，血浆中的生化指标如TP、CHOL显著降低，BuN、Cr、LDH、TG等升高。模型动物灌服右归丸后，微量元素恢复正常，BuN、Cr、LDH、TG等下降至正常范围，TP、CHOL明显升高，恢复正常。证明了微量元素与生化指标一样在体内的生物代谢过程中有着特定的作用，从而说明了血液微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的重要指标。
, http://www.100md.com
中国图书分类号 R289.1
目前，中医药学的现代研究仍处于一个探索阶段，本研究通过观察用右归丸煎剂灌服肾阳虚动物模型的治疗过程，发现动物全血中微量元素平衡系统经历了“平衡→失衡→再平衡”的动态改变，从而证实了中药对机体的治疗作用与微量元素密切相关，能够作为中药功用效应的一个主要衡量标准。
1 材料和方法
1.1 右归丸煎剂的配方和制备
1.1.1 右归丸配方[1]
全部实验药材从武汉市药材公司一次足量购进，并经武汉市药检所鉴定。见表1。
表1 实验药材 药名
份量(g)
, 百拇医药
产地
药名
份量(g)
产地
熟 地
24
河南
杜 仲
12
湖北
山 药
12
河南
, http://www.100md.com 当 归
9
安徽
山茱萸
9
浙江
肉 桂
6
越南
枸 杞
12
宁夏
制附子
6
, 百拇医药
湖北
鹿角胶
12
新疆
菟丝子
12
江西
1.1.2 右归丸煎剂制备方法
将一份完整配方药物(鹿角胶除外)经纯水漂洗后，放在纯净刻度玻璃烧杯中混匀，用纯水800ml浸渍1h后，在电热板上控温100°C煎煮至500ml，过滤药渣出药液约300ml；再加入400ml纯水继续煎煮至300ml，过滤药渣出药液约200ml。过滤合并两次煎煮液。鹿角胶用小烧杯盛装，于电热板上隔水加热至烊化，兑入煎煮液中混匀，最后调液至500ml，装纯净玻璃药瓶备用。
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1.2 实验纯水的制备
用上海亚荣生化仪器厂SZ-93自动双重纯水蒸馏器生产实验用纯水，纯净聚乙烯塑料桶盛装，每次生产1周用量。
1.3 实验动物及饲养环境
本课题选用日本种大耳白家兔，均雄性，体重2000g左右，武汉市生物制品研究所提供(湖北省医学实验动物管理委员会指定单位)。25°C恒温恒湿动物房，不锈钢笼分笼饲养。同批固体饲料，干燥保存。不锈钢容器盛放饲料和饮用纯水。每日专人观察并作记录。
1.4 动物实验器材
1.4.1 肝素抗凝试管
将常用于肝素粉剂(100～125u)配成1.0g/L的纯水溶液，每试管0.5ml，37～50°C烘干后备用。每支试管能抗凝5ml全血，供生化检测用[2]。
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1.4.2 羟基脲
片剂，500mg/片，济南制药厂生产，批号：970109。
1.4.3 微量元素分析试管
5ml带盖塑料试管放在稀硝酸和稀盐酸的混合液中浸泡48h，然后用双蒸水冲洗3次，再用纯水冲洗3次，37～50°C烘干备用。
1.4.4 其它器材
烘箱、分析天平、开口器、注射器、手术器械等。
1.5 家兔肾阳虚模型的制作方法
本研究采用羟基脲灌胃法制作家兔肾阳虚模型[3]。
1.6 用药剂量
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1.6.1 模型制作
用羟基脲法制作家兔肾阳虚模型，剂量为500mg/kg/d，连续服用8d。
1.6.2 右归丸煎剂用量换算
按70kg成年人每日一付药，每付药500ml煎剂计算，1500g家兔的右归丸煎剂灌服用量换算公式为：
1500g家兔日服总量=人日服总量×兔与人体表面积比=500ml×0.07=35ml
本实验中12只家兔的用药剂量见表2。表2 实验家兔体重与羟基脲、右归丸煎剂用量对照表 编号
体重(g)
羟基脲(mg)
体重(g)
, 百拇医药
右归丸(ml)
1
2000
1000
1880
43.8
2
1800
900
1920
44.7
3
2400
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1200
-
-
4
1800
900
1850
43.1
5
2300
1150
2000
46.6
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6
2500
1250
-
-
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900
1750
40.8
8
2000
1000
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41.9
9
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1975
1770
41.2
10
1800
900
1850
43.1
11
, 百拇医药
1850
925
1850
43.1
12
2100
1050
1850
43.1
注：造模过程中3号和6号家兔分别在第6天和第7天死于衰竭。
1.7 实验方法及步骤
1.7.1 实验前准备
, 百拇医药
实验家兔12只，自购回之日起适应性饲养1周。
1.7.2 动物造模前各项观察指标的检测
实验家兔适应性饲养1周后，分别记录皮温、体重，并各抽取股动脉血3ml送检。首先准确取1ml置于微量元素分析试管中检测微量元素；2ml置于肝素抗凝管中检测生化指标。
1.7.3 模型制作
将羟基脲片剂碾碎，按表2剂量，称取羟基脲，碾碎后用水溶解，灌胃。连续用药8d，密切观察其毛发、精神状态及饮食情况，记录皮温、体重改变。
在造模第9d，分别抽取各模型家兔股动脉血4ml送检，检测微量元素、生化指标。
1.7.4 造模后用药
, 百拇医药 从造模完成后的第1天开始，按表2右归丸剂量，分每天早晚2次，以右归丸煎煮液灌胃。连续用药8天，密切观察其毛发、精神状态及饮食情况，记录皮温、体重改变。在用药第9天，分别抽取各模型家兔股动脉血4ml。检测微量元素、生化指标。
1.8 微量元素检测
本实验重点检测锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、锰(Mn)、锶(Sr)、钴(Co)、镍(Ni)、铬(Cr)等8种元素。
1.9 生化指标检测
重点检测血浆尿素氮(BuN)、肌苷(Cr)、谷丙氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白(TP)、总胆固醇(TChol)、甘油三脂(TG)等7项生化指标。
1.10 生理指标监测
皮温测定方法：剪去家兔前肢腋窝部兔毛，将温度计放于此处，合拢前肢呈夹住温度计状，固定1分钟后，取出温度计读数，连续测定3次。若3次测定误差在±1°C以内时，取其平均值为本次测定的皮温值，否则重新测定。同时观察记录每日动物饮食、精神状态、毛发及体重改变。
, 百拇医药
2 结果和分析
2.1 实验前后模型家兔生理指标检测结果
造模过程中，实验家兔逐渐出现饮食减少，消瘦，毛发失去光泽，脱毛，体重和皮温明显下降，反应迟钝，倦怠，弓背等不良反应，第6天和第7天分别有一只实验家兔死亡。经右归丸煎剂灌服后，实验家兔饮食逐渐增加，毛发逐渐恢复光泽，脱毛现象逐渐减少，精神好转，体重明显增加，皮温明显升高。
实验前后模型家兔皮温及体重变化情况见表3。
表3 家兔皮温及体重变化情况(
±SD)皮温(°C)
体重(kg)
, http://www.100md.com
例数
造模前
38.80±0.28
2.03±0.25
12
模 型
34.00±1.14*
1.84±0.07*
10
用药后
37.70±0.98＃
2.05±0.17＃
, http://www.100md.com
10
*与造模前对照相比，P<0.001；＃与模型组相比，P<0.001
2.2 实验前后模型家兔血液微量元素含量检测结果 见表4。表4 实验前后模型家兔血液微量元素含量检测结果(
±SD)单位：mg/LCu
Zn
Fe
Ni
造模前
0.81±0.18&
3.80±0.60
, 百拇医药
754.61±127.52
0.14±0.02&
造模后
0.61±0.22*
3.37±0.52*
570.73±93.54*
0.08±0.01
用药后
0.76±0.16#
4.09±0.56#
708.06±90.28#
, 百拇医药 0.20±0.05#
Mn
Cr
Co
Sr
造模前
0.06±0.02&
1.03±0.03&
0.11±0.01
0.12±0.02
造模后
0.03±0.01
, 百拇医药
0.63±0.01
0.08±0.01
0.03±0.01
用药后
0.10±0.03#
1.44±0.05#
0.18±0.03
0.08±0.01
*造模后与造模前比，P<0.05；#用药后与造模后比，P<0.05；&用药后与造模前比，P<0.05
2.3 实验前后模型家兔血液生化指标检测结果 见表5。表5 实验前后模型家兔血液生化指标检测结果(
±SD), 百拇医药
TChol(mmol/L)
TG(mmol/L)
ALT(u/L)
造模前
1.72±0.63
132.86±70.46
71.30±26.8
造模后
1.47±0.37*
199.31±48.08*
100.6±46.6*
用药后
, 百拇医药
1.62±0.70#
149.50±47.60#
73.20±28.6#
LDH(u/L)
BuN(mmol/L)
Cr(umol/L)
TP(g/L)
造模前
681.10±144.77
6.91±1.42
110.42±22.90
, 百拇医药 75.27±9.21&
造模后
346.29±94.83*
7.79±2.60*
133.27±30.14*
54.19±4.00*
用药后
914.67±112.75#
5.84±0.57#
96.72±6.89#
66.95±3.08
, 百拇医药 *造模后与造模前比，P<0.05；#用药后与造模后比，P<0.05；&用药后与造模前比，P<0.05
2.4 实验前后微量元素与生化指标t检验结果
分别以正常对照组、模型组和中药组、中药组和正常对照组为对象，进行t检验。
2.4.1 微量元素t检验结果
经统计，造模后全血铜、锌、铁元素含量较造模前显著降低(P<0.05)。用药后全血铜、锌、铁、镍、锰、镉元素含量较造模后显著升高(P<0.05)。造模前与用药后相比，铜元素显著降低(P<0.05)，镍、锰、镉元素显著升高(P<0.05)。
2.4.2 生化指标t检验结果
经统计，造模后总胆固醇、乳酸脱氢酶，总蛋白较造模前显著降低(P<0.05)；而甘油三脂、ALT、尿素氮、肌苷显著升高(P<0.05)。用药后总胆固醇、乳酸脱氢酶较造模后显著升高(P<0.05)；而甘油三脂、ALT、尿素氮、肌苷显著降低(P<0.05)；总蛋白升高不明显(P>0.05)。造模前与用药后相比，除总蛋白有显著差异外(P<0.05)，其它指标无显著性差异。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 肾阳虚动物模型的造模情况
肾阳虚动物模型的制作方法较多，主要有激素类和药物类。激素类主要有皮质激素阳虚型，甲状腺减退阳虚型等；药物类主要有羟基尿阳虚型，腺嘌呤阳虚型等[4]。本研究对这些方法的成功经验进行了比较分析，选用了较为简便、经济的羟基脲造模法，此方法是《中药新药研制与申报》[5]中指定的肾阳虚造模方法之一。
临床上肾阳虚病人一般有DNA合成率降低的现象[3]，而羟基脲是一种抗肿瘤药物，它能抑制DNA还原酶活性而使DNA合成率下降，DNA合成的抑制导致了体内蛋白质合成障碍，由于蛋白质在体内代谢及生理功能的维持上起着重要的作用，从而可导致体内生理、生化代谢功能的低下和紊乱，并且羟基脲导致的肾阳虚模型形成的微量元素含量和分布的改变与临床报道[6]肾阳虚病人的微量元素平衡紊乱状况相似，这是羟基脲导致肾阳虚的内在机理，说明选用羟基脲模型用于本研究是比较合适的。
, 百拇医药
3.2 模型家兔造模前后生理、生化指标变化情况分析
健康家兔由于羟基脲的药理作用，在连续用药8d完成造模后，由于体内蛋白质合成受到抑制，总蛋白水平显著下降，肝功能(ALT)、肾功能(BuN、Cr)急性损伤，导致饮食不振、消瘦、精神状态萎靡，伴随发生了一系列体内代谢紊乱。
3.3 模型家兔用药前后生理、生化指标变化情况分析
右归丸是温补肾阳的经典代表方，出自《景岳全书》，诸药配伍，共具温阳补肾、填精补血，以收培补肾中元阳之效。有研究证实[7]，右归丸可以使肝酶活性升高(GDH、SDH、MAO、LDH、G-6-P)等，增加DNA含量，有效改善实验动物外观。
在本实验中，肾阳虚模型经右归丸治疗后，体内蛋白质合成障碍排除，总蛋白水平有所恢复，说明模型家兔经治疗后营养状况有所改善；ALT、BuN、Cr水平大幅降低，肝功能和肾功能急性损伤得到了及时有效的控制和改善。经右归丸治疗后，模型饮食渐增，体重增加，脱毛现象减少，毛发渐有光泽。
, 百拇医药
TChol合成量增加，TG水平明显回落，LDH水平显著升高，糖代谢的紊乱状况得到了显著改善，糖合成量增加，糖酵解强度提高，模型家兔体温回升，精神明显好转。
与造模前比较，肾阳虚模型经右归丸治疗后除总蛋白尚未恢复外，其它各项生化指标均恢复至造模前水平。模型家兔经右归丸煎剂灌服8d后，一系列代谢紊乱得到了良好的纠正和改善。
3.4 实验过程中模型家兔血液微量元素呈现明显动态变化规律
实验过程中，在肾阳虚模型家兔生化指标逐渐恶化的同时，全血元素铜、锌、铁等含量上与造模前相比显著降低(P<0.05)，经右归丸煎剂灌服治疗后，症状得到缓解，在生化指标明显改善的同时，全血元素铜、锌、铁、锰、镉、镍等含量较用药前相比显著性增高(P<0.05)。
从单个元素含量上看，造模后元素含量分布较造模前明显下降，用了右归丸，各元素含量又回升并高于造模前水平；从整体水平来看，模型组动物在用药后，微量元素含量水平趋向正常。
, 百拇医药
以上充分说明，造模及用药前后模型家兔体内微量元素平衡系统，确实经历了“平衡→失衡→再平衡”这样一个动态变化的过程，造模所致的机体代谢紊乱在用药后得到了良好的调节改善。
本实验反映出的模型家兔血液微量元素动态变化规律，不仅说明了血液微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的良好指标，并且充分证明了，在中药对证治疗过程中，蕴含着中药对机体微量元素平衡体的整体调控作用。
参 考 文 献
1.许济群.高等中医药院校教材《方剂学》.上海科学技术出版社，1985.113
2.叶应妩.全国临床检验操作规程.第二版.东南大学出版社，1997.1
3.陈小野.实用中医证候动物模型.北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1993.128
4.李仪奎.中药药理实验方法学.上海科技出版社，1991.276
5.王北婴.中药新药研制与申报.中国中医药出版社，1995.228
6.管竞环.中医药理论量化与微量元素.湖北科技出版社，1998.85
7.白刚.中药方剂研究与应用大全.北京：中国科学技术出版社，1995.100
收稿日期：1999-01-18, 百拇医药