唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原检测在大肠癌原发灶及转移灶中的表达及其意义
作者：李小卫 丁彦青 蔡俊杰
单位：李小卫(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)；丁彦青(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)；蔡俊杰(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)
关键词：路易斯寡糖抗原；结肠肿瘤；肝转移
第一军医大学学报000419 摘要：目的 探讨唾液酸化的路易斯寡糖-X (sLex)抗原在大肠癌及大肠癌肝转移病人中表达的临床意义。方法 应用LSAB法检测原发性大肠癌及大肠癌肝转移灶中sLex抗原的表达。结果 在原发性大肠癌中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高分化腺癌sLex抗原表达呈弱阳性，低分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性；在大肠癌肝转移灶中，sLex抗原染色阳性率为100%，肝转移灶中sLex抗原的表达强于原发灶中sLex抗原的表达。结论 sLex抗原的检测可作为大肠癌肝转移及预后指标，对判断大肠癌肝转移及估价预后有重要意义。
, 百拇医药
中图分类号：R446.62; R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-0306-02
Expression and significance of sLex antigen in primary lesion and liver metastases from colorectal cancer
LI Xiao-wei, DING Yan-qing, CAI Jun-jie
(Department of Pathology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
Abstract: Objective To explore the clinical significance of the expression of sialyl Lewis-X (sLex) antigen in the patients with primary colorectal cancer or colorectal liver metastases. Methods The expression of sLex antigen was detected in both primary tumors and matched metastatic liver lesion of colorectal cancer using immunohistochemical method. Results In primary colorectal cancer, the positive expression ratio of sLex antigen was 100%. It was found that the poorly differentiated tumor cells expressed higher sLex antigen than moderately or well-differentiated ones and the expression of sLex antigen was more intense in liver metastases than in primary lesion. Conclusions SLex antigen can be used as a marker for indicating early liver metastasis of colorectal cancer and its prognosis, and its detection plays a significant role in judging liver metastasis and evaluating the prognosis of colorectal cancer.
, 百拇医药
Key words: sialyl Lewis-X antigen; colonic neoplasms; liver metastasis
大肠癌细胞表面的粘附分子唾液酸化的路易斯寡糖-X(Sialyl Lewis-X，sLex)抗原，作为肝血管内皮细胞表面E-selectin受体的配体，在大肠癌肝转移中起重要作用。为了解sLex抗原在原发性大肠癌及大肠癌肝转移病人中表达的临床意义，以便将sLex抗原检测用于临床。我们应用免疫组化方法，检测了30例原发性大肠癌病人术后标本及30例大肠癌肝转移术后标本sLex抗原的表达情况。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1标本 原发性大肠癌病人术后标本的石蜡包埋块由南方医院病理科提供，其中高、中、低分化腺癌各10例。大肠癌肝转移病人术后标本由本教研室提供，其中高分化腺癌17例，中分化腺癌13例。所有标本均经病理检查证实。
, 百拇医药
1.1.2主要试剂 sLex鼠抗人单克隆抗体(CD15S)为美国Pharmingen公司产品；生物素化的羊抗鼠IgM二抗为美国Sigma公司产品；LSAB免疫组化试剂盒为丹麦DAKO公司产品。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化染色和结果判断 采用LSAB法染色。sLex抗原表达阳性区被染成棕黄色，呈深棕色的为强阳性，浅棕色或近黄色染色的为弱阳性。
1.2.2 图像分析 Leica-Q500MC图像分析系统，400倍光镜下，在高、中、低分化的原发性大肠癌病人的每张切片中，粘膜层随机取10个阳性细胞；在所有的大肠癌病人的切片中每张切片的粘膜层和肌层各随机取10个阳性细胞；原发性高分化大肠腺癌病人的每张切片中，粘膜层和肌层各随机取10个阳性细胞；大肠癌肝转移灶中随机取10个阳性细胞。测量显色阳性区灰度(Gα)及其背景灰度(Gβ)，使用Origin50软件，计算其阳性单位(PU=100| Gα- Gβ|/256)[1]。
, 百拇医药
1.2.3 统计学处理 使用SPSS软件，将所得计量数据以平均数±标准差(
±s)表示，确定方差齐性后，进行t检验或方差分析，P<0.05为显著性差异。
2 结果
在30例原发性大肠癌中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高分化腺癌sLex抗原表达呈弱阳性，中分化腺癌sLex抗原表达呈阳性，低分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性。高、中分化腺癌间，高、低分化腺癌间，中、低分化腺癌间sLex抗原表达有显著性差异(P<0.005，表1)。血管内癌栓sLex抗原表达呈阳性或强阳性。同一张切片上，肌层的sLex抗原表达强于粘膜层(P<0.028，表2)。癌细胞阳性染色特征为腔缘及全浆。在30例大肠癌肝转移灶中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高、中分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性。同为高分化腺癌，大肠癌原发灶中，粘膜层的sLex抗原表达弱于肌层，肌层的sLex抗原表达弱于转移灶中sLex抗原的表达。两者之间，sLex抗原表达有显著性差异(P<0.001，表3)。
, 百拇医药
表1 不同分化程度大肠癌sLex抗原表达结果(n=10)
Tab.1 sLex expression in differentiated colorectal cancer (n=10)
Histological differentiation
Positive unit (Mean±SD)
Well
15.0363±4.4409
Moderately
27.3547±6.9186*
Poorly
, 百拇医药
36.1621±7.6299☆□
F test; *P<0.005 vs well differentiated cancer; ☆P<0.005 vs well-differentiated cancer; □P<0.0001 vs moderately differentiated cancer
表2 原发性大肠癌粘膜层与肌层sLex抗原表达结果(n=30)
Tab.2 sLex expression in the mucosal layer and
muscle layer of primary colorectal cancer (n=30)
Site of cancer
, 百拇医药 Positive unit (Mean±SD)
Mucosal layer
24.6504±8.9431
Muscle layer
28.9536±9.3217
P<0.028
表3 原发性大肠癌粘膜层、肌层，大肠癌肝转移灶中sLex
表达结果(n=10)
Tab.3 sLex expression in primary lesions of the mucosal
layer and muscle layer and liver metastases (n=10)
, 百拇医药
Region of cancer
Positive unit (Mean±SD)
Mucosa layer
15.0129±4.4191
Muscle layer
20.1578±6.5389△
Liver metastases
45.8727±4.4568☆□
F test; △P<0.001 vs mucosa layer, ☆P<0.001 vs mucosa layer, □P<0.001 vs muscle layer
, 百拇医药
3 讨论
原发灶中存在着高转移潜能的肿瘤细胞(高表达sLex抗原)和低转移的肿瘤细胞(低表达sLex抗原)，高表达sLex抗原的肿瘤细胞由原发灶脱落，进入血管，粘附于肝血管内皮上生长，并形成肝转移瘤。高表达sLex抗原的细胞更易浸润基底膜，粘附于激活的人血管内皮细胞，形成肝转移。这是由于肿瘤细胞表面sLex抗原作为毛细血管内皮细胞表面E-selectin的配体，介导肿瘤细胞与靶器官血管内皮细胞的粘附[2]，促进肿瘤细胞的定向性趋化运动，从而导致转移。Yoshifumi[3]使用多种单克隆抗体检测大肠癌肝转移病人原发灶和转移灶中sLex抗原的表达水平，得出转移灶中sLex抗原表达强于原发灶中sLex抗原的表达。许多研究也已证实这一结论[4、5]。
我们的研究发现：在原发性大肠癌病人中，sLex抗原表达均为阳性，与Itzkowitz[6]的研究结果一致。而高、中分化腺癌的染色强度弱于低分化腺癌，与Yoshifumi[3]的观点一致。在原发性大肠癌的同一张切片上，深部sLex抗原的表达强于浅部，即肌层sLex抗原表达强于粘膜层；血管内癌栓sLex抗原的表达呈阳性及强阳性。同为高分化大肠腺癌，原发灶中sLex抗原的表达弱于转移灶中sLex抗原的表达。原因可能是，原发瘤并不是由单一类型的细胞所构成，而是含有多个不同的肿瘤细胞亚群，这些亚群在肿瘤发展过程中，其侵袭能力、转移能力并不一致。具有高侵袭和转移能力的肿瘤细胞选择性地生长，导致肿瘤的浸润和转移。在原发性大肠癌中，粘膜层中sLex抗原高表达的细胞株具有高侵袭性和转移性，易向肌层和远距离浸润和转移。因sLex抗原是肝血管内皮细胞表面E-selectin的配体，因此，具有高表达sLex抗原的大肠癌细胞易转移至肝，肝成为大肠癌转移的特异性器官。因此，我们提出，sLex抗原的检测可作为大肠癌肝转移及预后指标，对判断大肠癌肝转移及估价预后有重要意义。
, http://www.100md.com
基金项目：军队重点攻关资助课题(96Z028)；广东省自然基金课题(970335)
作者简介：李小卫(1961-)，女，山东蓬莱人，1999年毕业于第一军医大学，硕士，主治医师，电话：85148360
参考文献：
[1] 申 洪，陆药丹. 免疫组织化学染色的定量方法研究[J].生物医学工程学杂志, 1993, (4):281-4.
[2] 高 进. 癌的侵袭与转移[M]. 北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1996.64-5.
[3] Yoshifumi M, Karen RC, David MO, et al. Sialyl-dimeric lewis-x antigen expressed on mucin-like glycoproteins in colorectal cancer metastasis[J]. Lab Invest, 1990, 63(6):780-91.
, 百拇医药
[4] Nobuya Y, Yong-Suk C, Kiyoshi M, et al. Increased expression of sialyl Lewis a and sialyl x in liver metastasis of human colorectal carcinoma[J]. Invasion Metastasis, 1995, 15:95-102.
[5] Shoji N, Masao K, Shingi I, et al. Increased expression of sialyl lewisx antigen correlates with poor survival in patients with colorectal carcinoma: clinicopathological and immuno-histochemical study[J]. Cancer Res, 1993, 53 (15):3632-7.
[6] Itzkowitz SH,Yuan M, Fukushi Y, et al. Lewis x and sialylated lewis x-related antigen expression in human malignant and nonmalignant colon
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：李小卫(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)；丁彦青(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)；蔡俊杰(第一军医大学病理教研室，广东 广州 510515)
关键词：路易斯寡糖抗原；结肠肿瘤；肝转移
第一军医大学学报000419 摘要：目的 探讨唾液酸化的路易斯寡糖-X (sLex)抗原在大肠癌及大肠癌肝转移病人中表达的临床意义。方法 应用LSAB法检测原发性大肠癌及大肠癌肝转移灶中sLex抗原的表达。结果 在原发性大肠癌中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高分化腺癌sLex抗原表达呈弱阳性，低分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性；在大肠癌肝转移灶中，sLex抗原染色阳性率为100%，肝转移灶中sLex抗原的表达强于原发灶中sLex抗原的表达。结论 sLex抗原的检测可作为大肠癌肝转移及预后指标，对判断大肠癌肝转移及估价预后有重要意义。
, 百拇医药
中图分类号：R446.62; R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-0306-02
Expression and significance of sLex antigen in primary lesion and liver metastases from colorectal cancer
LI Xiao-wei, DING Yan-qing, CAI Jun-jie
(Department of Pathology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
Abstract: Objective To explore the clinical significance of the expression of sialyl Lewis-X (sLex) antigen in the patients with primary colorectal cancer or colorectal liver metastases. Methods The expression of sLex antigen was detected in both primary tumors and matched metastatic liver lesion of colorectal cancer using immunohistochemical method. Results In primary colorectal cancer, the positive expression ratio of sLex antigen was 100%. It was found that the poorly differentiated tumor cells expressed higher sLex antigen than moderately or well-differentiated ones and the expression of sLex antigen was more intense in liver metastases than in primary lesion. Conclusions SLex antigen can be used as a marker for indicating early liver metastasis of colorectal cancer and its prognosis, and its detection plays a significant role in judging liver metastasis and evaluating the prognosis of colorectal cancer.
, 百拇医药
Key words: sialyl Lewis-X antigen; colonic neoplasms; liver metastasis
大肠癌细胞表面的粘附分子唾液酸化的路易斯寡糖-X(Sialyl Lewis-X，sLex)抗原，作为肝血管内皮细胞表面E-selectin受体的配体，在大肠癌肝转移中起重要作用。为了解sLex抗原在原发性大肠癌及大肠癌肝转移病人中表达的临床意义，以便将sLex抗原检测用于临床。我们应用免疫组化方法，检测了30例原发性大肠癌病人术后标本及30例大肠癌肝转移术后标本sLex抗原的表达情况。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1标本 原发性大肠癌病人术后标本的石蜡包埋块由南方医院病理科提供，其中高、中、低分化腺癌各10例。大肠癌肝转移病人术后标本由本教研室提供，其中高分化腺癌17例，中分化腺癌13例。所有标本均经病理检查证实。
, 百拇医药
1.1.2主要试剂 sLex鼠抗人单克隆抗体(CD15S)为美国Pharmingen公司产品；生物素化的羊抗鼠IgM二抗为美国Sigma公司产品；LSAB免疫组化试剂盒为丹麦DAKO公司产品。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化染色和结果判断 采用LSAB法染色。sLex抗原表达阳性区被染成棕黄色，呈深棕色的为强阳性，浅棕色或近黄色染色的为弱阳性。
1.2.2 图像分析 Leica-Q500MC图像分析系统，400倍光镜下，在高、中、低分化的原发性大肠癌病人的每张切片中，粘膜层随机取10个阳性细胞；在所有的大肠癌病人的切片中每张切片的粘膜层和肌层各随机取10个阳性细胞；原发性高分化大肠腺癌病人的每张切片中，粘膜层和肌层各随机取10个阳性细胞；大肠癌肝转移灶中随机取10个阳性细胞。测量显色阳性区灰度(Gα)及其背景灰度(Gβ)，使用Origin50软件，计算其阳性单位(PU=100| Gα- Gβ|/256)[1]。
, 百拇医药
1.2.3 统计学处理 使用SPSS软件，将所得计量数据以平均数±标准差(
±s)表示，确定方差齐性后，进行t检验或方差分析，P<0.05为显著性差异。2 结果
在30例原发性大肠癌中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高分化腺癌sLex抗原表达呈弱阳性，中分化腺癌sLex抗原表达呈阳性，低分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性。高、中分化腺癌间，高、低分化腺癌间，中、低分化腺癌间sLex抗原表达有显著性差异(P<0.005，表1)。血管内癌栓sLex抗原表达呈阳性或强阳性。同一张切片上，肌层的sLex抗原表达强于粘膜层(P<0.028，表2)。癌细胞阳性染色特征为腔缘及全浆。在30例大肠癌肝转移灶中，sLex抗原染色阳性率为100%，其中高、中分化腺癌sLex抗原表达呈阳性或强阳性。同为高分化腺癌，大肠癌原发灶中，粘膜层的sLex抗原表达弱于肌层，肌层的sLex抗原表达弱于转移灶中sLex抗原的表达。两者之间，sLex抗原表达有显著性差异(P<0.001，表3)。
, 百拇医药
表1 不同分化程度大肠癌sLex抗原表达结果(n=10)
Tab.1 sLex expression in differentiated colorectal cancer (n=10)
Histological differentiation
Positive unit (Mean±SD)
Well
15.0363±4.4409
Moderately
27.3547±6.9186*
Poorly
, 百拇医药
36.1621±7.6299☆□
F test; *P<0.005 vs well differentiated cancer; ☆P<0.005 vs well-differentiated cancer; □P<0.0001 vs moderately differentiated cancer
表2 原发性大肠癌粘膜层与肌层sLex抗原表达结果(n=30)
Tab.2 sLex expression in the mucosal layer and
muscle layer of primary colorectal cancer (n=30)
Site of cancer
, 百拇医药 Positive unit (Mean±SD)
Mucosal layer
24.6504±8.9431
Muscle layer
28.9536±9.3217
P<0.028
表3 原发性大肠癌粘膜层、肌层，大肠癌肝转移灶中sLex
表达结果(n=10)
Tab.3 sLex expression in primary lesions of the mucosal
layer and muscle layer and liver metastases (n=10)
, 百拇医药
Region of cancer
Positive unit (Mean±SD)
Mucosa layer
15.0129±4.4191
Muscle layer
20.1578±6.5389△
Liver metastases
45.8727±4.4568☆□
F test; △P<0.001 vs mucosa layer, ☆P<0.001 vs mucosa layer, □P<0.001 vs muscle layer
, 百拇医药
3 讨论
原发灶中存在着高转移潜能的肿瘤细胞(高表达sLex抗原)和低转移的肿瘤细胞(低表达sLex抗原)，高表达sLex抗原的肿瘤细胞由原发灶脱落，进入血管，粘附于肝血管内皮上生长，并形成肝转移瘤。高表达sLex抗原的细胞更易浸润基底膜，粘附于激活的人血管内皮细胞，形成肝转移。这是由于肿瘤细胞表面sLex抗原作为毛细血管内皮细胞表面E-selectin的配体，介导肿瘤细胞与靶器官血管内皮细胞的粘附[2]，促进肿瘤细胞的定向性趋化运动，从而导致转移。Yoshifumi[3]使用多种单克隆抗体检测大肠癌肝转移病人原发灶和转移灶中sLex抗原的表达水平，得出转移灶中sLex抗原表达强于原发灶中sLex抗原的表达。许多研究也已证实这一结论[4、5]。
我们的研究发现：在原发性大肠癌病人中，sLex抗原表达均为阳性，与Itzkowitz[6]的研究结果一致。而高、中分化腺癌的染色强度弱于低分化腺癌，与Yoshifumi[3]的观点一致。在原发性大肠癌的同一张切片上，深部sLex抗原的表达强于浅部，即肌层sLex抗原表达强于粘膜层；血管内癌栓sLex抗原的表达呈阳性及强阳性。同为高分化大肠腺癌，原发灶中sLex抗原的表达弱于转移灶中sLex抗原的表达。原因可能是，原发瘤并不是由单一类型的细胞所构成，而是含有多个不同的肿瘤细胞亚群，这些亚群在肿瘤发展过程中，其侵袭能力、转移能力并不一致。具有高侵袭和转移能力的肿瘤细胞选择性地生长，导致肿瘤的浸润和转移。在原发性大肠癌中，粘膜层中sLex抗原高表达的细胞株具有高侵袭性和转移性，易向肌层和远距离浸润和转移。因sLex抗原是肝血管内皮细胞表面E-selectin的配体，因此，具有高表达sLex抗原的大肠癌细胞易转移至肝，肝成为大肠癌转移的特异性器官。因此，我们提出，sLex抗原的检测可作为大肠癌肝转移及预后指标，对判断大肠癌肝转移及估价预后有重要意义。
, http://www.100md.com
基金项目：军队重点攻关资助课题(96Z028)；广东省自然基金课题(970335)
作者简介：李小卫(1961-)，女，山东蓬莱人，1999年毕业于第一军医大学，硕士，主治医师，电话：85148360
参考文献：
[1] 申 洪，陆药丹. 免疫组织化学染色的定量方法研究[J].生物医学工程学杂志, 1993, (4):281-4.
[2] 高 进. 癌的侵袭与转移[M]. 北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1996.64-5.
[3] Yoshifumi M, Karen RC, David MO, et al. Sialyl-dimeric lewis-x antigen expressed on mucin-like glycoproteins in colorectal cancer metastasis[J]. Lab Invest, 1990, 63(6):780-91.
, 百拇医药
[4] Nobuya Y, Yong-Suk C, Kiyoshi M, et al. Increased expression of sialyl Lewis a and sialyl x in liver metastasis of human colorectal carcinoma[J]. Invasion Metastasis, 1995, 15:95-102.
[5] Shoji N, Masao K, Shingi I, et al. Increased expression of sialyl lewisx antigen correlates with poor survival in patients with colorectal carcinoma: clinicopathological and immuno-histochemical study[J]. Cancer Res, 1993, 53 (15):3632-7.
[6] Itzkowitz SH,Yuan M, Fukushi Y, et al. Lewis x and sialylated lewis x-related antigen expression in human malignant and nonmalignant colon
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药