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编号:10280947
大部脾栓塞术对重型地中海贫血患儿免疫功能影响的研究
http://www.100md.com 《中华儿科杂志》 1998年第2期
     作者:赵玉洁 程少杰 钱新华 朱为国

    单位:510515 广州,第一军医大学南方医院儿科(程少洁、钱新华、朱为国);解放军第五二一医院(赵玉洁)

    关键词:贫血;珠蛋白生成障碍性;栓塞;治疗性;抗体生成;T淋巴细胞亚群

    中华儿科杂志980206.htm 【摘要】 目的 评估大部脾栓塞术后重型地中海贫血患儿免疫功能的变化。方法 对62例患儿行脾大部栓塞术。结果 IgG在术后1周(13±4 g/L)和术前(16±6 g/L)差异有显著意义(P<0.05),术后3周恢复术前水平(16±5 g/L)。IgA、IgM术前及术后各周均无明显差异。T细胞亚群中总T细胞数术前(49±12)和术后(60±12)差异有非常显著意义(P<0.01)。T辅助淋巴细胞(TH)术前(38±9)与术后(45±7)比较差异有非常显著意义(P<0.01)。TH/TS比值术后(1.6±0.3)与术前(1.29±0.4)比较差异有非常显著意义(P<0.01),而T抑制淋巴细胞(Ts)术后(29±7)与术前(31±6)比较差异无显著意义(P>0.05)。纤维连接蛋白术后(248±78)与术前(118±41)比较差异有显著意义(P<0.05)。结论 PSE后免疫功能在术后3周迅速恢复。
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    Immunologic function of children with severe mediterranean anemia after partial splenic embolization Zhao Yujie*, Cheng Shaojie, Qian Xinhua, et al. *Department of Paediatrics, Nanfang Hospital Guangzhou 510515

    【Abstract】 Objective The purpose of this study was to assess the effect of partial splenic embolization (PSE) on immunologic function of patients with severe mediterranean anemia (SMA). Methods immunoglobulins were determined in 62 children with SMA before and after PSE. Also, lymphocyte subpopulation, lysozyme and fibronectin were measured in 40 cases. Results IgG was significantly lower one week after operation (12.8±4.3 g/L) than that before operation (16.2±5.5 g/L) (P<0.05). It recovered three weeks after operation (15.8±5.1 g/L). Fibronectin was significantly higher after PSE (248±78 g/L) than that before PSE (118±41 g/L), but IgA, IgM and lysozyme levels remained unchanged during PSE. Total T, T-helper lymphocytes (TH) and TH/TS ratio increased after PSE as compared with those before PSE (P<0.01). Whereas, T-suppressor lymphocytes (Ts) level remained unchanged during operation.Conclusion Immunologic function of children with SMA increased 3 weeks after PSE.
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    【Key words】 Thalassemia Embolization, therapeutic Antibody formation T-lymphocyte subsets

    地中海贫血(简称地贫)是遗传性珠蛋白生成障碍所致的慢性溶血性贫血,目前尚无可行的防治方法。本院开展了大部脾栓塞术(partial splenic embolization, PSE)介入治疗重型地贫,对改善贫血取得良好疗效[1],但对PSE后能否维持正常的免疫功能,尚需探讨。为此,我们观察了62例重型地贫患儿行PSE前后不同时期(1~52周)体液免疫的变化,以及40例患儿的细胞免疫功能及纤维连接蛋白(Fn)的动态变化,旨在探讨PSE后患儿免疫功能是否降低。从而说明PSE治疗地贫的可行性。

    对象和方法

    一、对象

    1.患儿组:62例均为住本院的患儿,其中男37例,女25例;年龄1岁半~14岁,其中5岁以下32例,占51.6%。重型β地贫54例(其中合并6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)缺陷6例)。重型α地贫即血红蛋白H(HbH)病8例(合并G-6-PD缺陷6例)。患儿均于生后3个月~3岁发现贫血,且渐加重,每隔15~60天输血1次,但仍有重度贫血。术前每月患上呼吸道感染达28例,患肺炎每年约有12例。体检:β地贫患儿均呈典型贫血貌,α地贫颅形改变较轻。脾明显肿大,左肋缘下最长径3~6 cm者20例,6 cm以上42例,其中10~15 cm 32例,15 cm以上10例。以上病例均经血红蛋白F(HbF)、肽链解离及红细胞脆性检查符合重型地贫诊断[1]
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    2.对照组:20例,均为14岁以下正常儿童。

    二、观察指标

    术前及术后1、3、6、12、26、52周均进行免疫球蛋白测定。术前、术后6周、12周进行T细胞亚群、Fn及C-反应蛋白测定。

    三、检测方法

    采用自动速率散射比浊法测定免疫球蛋白。以动力学测定单位时间内抗原抗体结合形成复合物的速度,以速率单位表示散射值,该值与免疫球蛋白含量成线性关系,微电脑自动数据处理并显示免疫球蛋白含量。所使用仪器为美国贝克曼公司的免疫化学系统(ICS-I),ICS-I主机及其222A高精度电脑稀释器;ICS配套各种自动卡;加样器;反应杯等;上海生物制品研究所提供的羊抗人特定蛋白血清,参考血清,按照上海长征医院临床免疫室提供的缓冲液,稀释液配方。

    T淋巴细胞检测采用单克隆APAAP方法,试剂:单克隆抗体(McAb),鼠抗人McAb,CD3、CD4、CD8,第二抗体,第三抗体APAAP复合物,底物显色液均购自军事医学科学院。用淋巴细胞分离液常规分离单个核细胞,调整细胞浓度(1~3)×105/ml,离心涂片,吹干,固定加一抗二抗底物显色,计数200个淋巴细胞,统计阳性细胞百分率。
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    四、统计学处理

    结果以均数±标准差(±s)表示,显著性检验采用方差分析和t检验。

    结果

    一、体液免疫(表1)

    经方差分析,IgG组差异有显著意义(P<0.05)。组间两两比较,第1与第2组比较,差异有非常显著意义(P<0.01);第2与第3组比较,差异有显著意义(P<0.05);第1与第3组比较,差异无显著意义(P>0.05)。IgA、IgM各组比较,差异无显著意义(P>0.05)。

    表1 重型地中海贫血患儿PSE前后血清

    免疫球蛋白的动态变化(g/L,±s)
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    组别

    时间

    例数

    IgG

    IgA

    IgM

    1

    术前

    62

    16±6

    2.9±0.6

    2.0±0.9

    2
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    术后1周

    62

    13±4

    3.2±0.6

    1.8±0.8

    3

    术后3周

    52

    16±5

    2.1±0.7

    2.3±0.9

    4

    术后6周
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    40

    16±4

    2.2±0.8

    2.2±0.8

    5

    术后12周

    37

    15±4

    2.6±0.8

    1.9±0.8

    6

    术后26周

    30
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    15±4

    2.3±0.7

    2.0±0.8

    7

    术后52周

    20

    15±4

    2.9±0.7

    2.1±0.8

    二、细胞免疫功能(表2)

    经方差分析:CD+3、CD+4及CD4/CD8比值在手术前后差异有非常显著意义(P<0.01)。经t检验:术后12周与正常组差异无显著意义(P>0.05)。经t检验:术前与正常组比较,CD+3差异有非常显著意义(P<0.01),CD+4差异有显著意义(P<0.05),CD+8差异无显著意义(P>0.05),CD+4/CD+8比值差异有显著意义(P<0.05)。表2 重型地中海贫血患儿PSE前后及正常
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    儿童T细胞亚群分布(±s,%)

    时间

    例数

    CD3+

    CD4+

    CD8+

    CD4+/CD8+

    术前

    40
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    47±12

    38±9

    31±6

    1.29±0.4

    术后6周

    36

    59±8

    37±7

    27±7

    1.32±0.32

    术后12周

    30

    60±12
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    45±7

    29±7

    1.57±0.34

    正常组

    20

    59±10

    43±7

    31±6

    1.46±0.29

    三、Fn变化

    40例患儿PSE前Fn为118±41 g/L,术后6周Fn为209±82 g/L;12周28例的Fn为248±78 g/L,术后6、12周与术前比较,差异有非常显著意义(P<0.01)。
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    四、C-反应蛋白在PSE前后变化

    观察62例患儿,术前C-反应蛋白有2例阳性,术后9例阳性,术后阳性率为15%。讨论

    一、PSE前后体液免疫变化

    免疫学指标中免疫球蛋白IgA、IgM术前及术后1~52周比较均未见差异(P>0.05),说明PSE术后脾脏分泌IgM的功能不受限制,因发生感染时,IgM是最早产生的抗体。此IgM手术前后各周均无差异,说明剩余的脾组织足够维持体液免疫功能。IgG术后1周和术前比较差异有显著意义(P<0.05),术后3周则基本恢复术前水平。IgG术后略降低可能是脾栓塞后部分脾脏梗死,一部分产生免疫球蛋白的淋巴细胞减少所致[1]。已证明当机体受抗原反复刺激后,免疫细胞处于疲惫状态,出现免疫反应降低,可致反复感染[2]。此组患儿经PSE后1~52周免疫球蛋白无明显变化,可见PSE后液化坏死的脾脏组织刺激机体并未引起免疫功能降低,残留脾的B淋巴细胞合成和分泌的功能正常,即患儿进行PSE后不易感染的原因之一。
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    二、T细胞亚群在地贫患儿的分布特点:

    术前地贫患儿的T细胞亚群与正常对照组CD+3、CD+4/CD+8比值与CD+4比较差异有显著意义(P<0.05),而CD+8差异无显著意义(P>0.05)。说明地贫患儿本身就存在细胞免疫缺陷,致使临床上所见患儿易感染。由于地贫患儿总T细胞功能降低,T辅助细胞(TH)也降低,T抑制细胞(TS)相对升高,致使TH/TS比值降低或倒置。TH具有协助B细胞产生抗体和辅助其它T细胞亚群的功能,TS细胞具有抑制B细胞产生抗体和抑制其它淋巴细胞的功能。本组术前测的T细胞亚群值与既往报告地贫TH减少或(和)TS增多,致使TH/TS比值降低[3,4]相一致。多数免疫缺陷病CD+4细胞数下降,CD+4/CD+8比值也下降,反之多数自身性免疫性疾病CD+4细胞数及CD+4/CD+8比值升高[5]
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    三、PSE后T细胞亚群分布特点

    CD+3术前与术后12周比较,CD+4术前与术后12周比较及CD+4/CD+8术前与术后12周比较,差异有非常显著意义(P<0.01)。而CD+8术前术后比较,差异无显著意义。术后12周与正常对照组比较差异无显著意义(P>0.05),说明经PSE后不影响患儿整体的细胞免疫功能,且至术后12周患儿细胞免疫功能已达正常水平,正常机体TH/TS比值维持动态平衡,TH细胞和TS细胞二者相互协调,相互制约,调节机体免疫功能和维持免疫稳定性[2]。辅助和抑制的任何一方过高或过低,调节网络失去平衡,就可能导致疾病的发生。PSE后T细胞亚群不降低反而升高,可能是临床所见患儿抗病能力恢复的原因。
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    四、C-反应蛋白和FH在PSE前后变化特点

    C-反应蛋白在某些疾病的急性期出现于患者血清中的一种异常蛋白质。已证明感染时Fn功能下降。而PSE前后Fn差异有显著意义,术后比术前升高,这可能也是PSE后抗感染能力增强的原因之一。

    综合以上观察表明,患儿经PSE后整体免疫功能不受影响,其中T细胞亚群功能和Fn功能有所增强。免疫学认为,免疫应答反应的完成,是特异性和非特异性免疫反应细胞免疫和体液免疫的综合结果无法截然分开。其中起重要调节作用的是T细胞,可以说免疫应答的最终表现形式、强弱和发生部位,都与T细胞功能状态密切相关,本研究总结PSE患儿的细胞免疫功能和体液免疫功能,它们相互起调节作用也是无法分割的。脾是人体最大免疫器官,为减轻地贫溶血行脾切除术,致使免疫功能大为降低,尤其小儿脾切除术,易造成败血症等凶险感染,发生率高达24.8%,死亡率高达50%[6]。常在几小时或几十小时内死亡[7]。本组采用50%~85%脾栓塞,剩余的脾组织保留了足够的免疫功能。术后免疫功能不受影响,甚至细胞免疫功能和Fn功能均增强。脾栓塞的安全性也较高。有的学者认为,脾动脉部分栓塞是保留脾脏细胞,提高免疫力的有效措施。PSE后只有少数发生并发症,感染性肺炎2例,脓肿1例,感染率为2.3%[7]。明显低于脾切除并发症的发生率,证明PSE不失为治疗地贫有效的方法。
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    参考文献

    1 张亚莉,黄锦明,程少杰.β-地中海贫血患儿部分脾栓塞后免疫球蛋白水平的动态观察.中国实验临床免疫学杂志,1994,6:39.

    2 Reinherz EL, Schlossman SF. Current concepts in immunology. Regulation of immune response-inducer and suppressor T lymphocyte subsets in humanbeings. N Engl J Med, 1980, 303:370.

    3 Lombardi G Matera R, Minrrvini MM, et al. Serum levels of cytokines and soluble antigens in ploytransfused patients with beta-thalassemia major: relationship to immune status. Haematologica, 1994, 79:406.
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    4 杨锡强.细胞免疫功能测定的临床意义.中国实用儿科杂志,1993,8:271.

    5 Shah R, Mahour GH, Ford E G, et al. Partial splenic embolization. Aneffective alternative to splenectomy for hypersplenism. Am Surg, 1990, 56:774.

    6 Stryker RM, Orton Dw. Overwhelming postsplenectomy infection. Ann Emerg Med, 1988, 17:161.

    7 郭筱兰,叶明,阮庆兰,等.儿童脾切除术后外周血T淋巴细胞亚群的分布和免疫学观察.中华小儿外科杂志,1991,12:3.

    (收稿:1996-09-03 修回:1997-07-10), 百拇医药