酚取代双膦酸酯Schiff碱的合成及抗癌活性研究
作者：谢雨礼 宋琳 朱勤 谢毓元
单位：中国科学院上海药物研究所,上海 200031
关键词：酚取代双膦酸酯；Schiff碱；体外抗癌活性；酚羟基
中国药物化学杂志000203 摘要 设计合成了11个含有Schiff碱双键的酚取代双膦酸酯类化合物.对小鼠白血病细胞P388、人肺腺癌细胞A-549的体外抗癌活性实验表明：目标分子中酚羟基的位置对化合物的活性有着重要影响，当酚羟基位于Schiff碱双键的邻位时，其活性明显高于其他化合物.
Studies on Synthesis and Antitumor Activity of Phenol Substituted Bisphosphonate Schiff Base
Xie Yuli Song Lin Zhu Qin Xie Yuyuan
, 百拇医药
(Shanghai Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200031)
Abstract In searching of effective new antitumor drugs,eleven phenol substituted bisphosphonates with the structure of the Schiff base were synthesized.Their antitumor activities on P388 cells and A-549 cells in vitro were tested.Preliminary results showed that the position of the phenol hydroxyl group had important effect on the antitumor activity,compounds with the phenol hydroxyl group next to the double bond of the Schiff bases seem more effective than others.
, 百拇医药
Key words phenol substituted bisphosphonates;Schiff base;antitumor activity in vitro;phenol hydroxyl group
双膦酸及其酯是以P—C—P键为特征的类似天然焦磷酸的一类低聚膦酸类化合物〔1〕，具有亲骨性以及与金属离子的良好螯合作用，在治疗骨质疏松、高钙血症、关节炎等骨和钙代谢疾病方面得到广泛应用〔2～6〕.近年来，此类化合物已成为药物学家的一个研究热点.最近有文献报道酚取代双膦酸酯还具有抗肿瘤作用〔7〕.20世纪70年代Hodnett等发现含有Schiff碱双键的化合物具有一定的抗肿瘤活性〔8〕.本实验设计合成了一系列含有Schiff碱双键的酚取代双膦酸酯，并进行了体外抗肿瘤活性测试，以期找到活性较好的化合物.
1 合成路线
, 百拇医药
以间或对硝基苯胺为起始原料，经过膦酸化、还原、与取代苯甲醛缩合制得目标化合物，合成路线见图1.
Makoto等〔9〕报道了氨基亚甲基双膦酸酯的合成方法，本实验以芳香胺取代脂肪胺，通过延长反应时间，得到了高产率的苯胺基亚甲基双膦酸酯.催化氢化硝基，还原产物未经分离直接用于下一步缩合反应.在缩合反应中，常规的回流反应条件(甲醇为溶剂)产率很低，生成大量聚合物；室温下反应则得到令人满意的产率.
Fig.1 The route of synthesis
2 合成实验
熔点用Fisher-John熔点仪测定，温度未经校正.核磁共振谱用Bruker AM-400型光谱仪测定.红外光谱用Perkin-Elmer 983G红外光谱仪测定，KBr压片.质谱用VG-707E质谱仪测定.元素分析用Carlo Erba 1106型元素分析仪测定.
, 百拇医药
2.1 N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间硝基苯胺的制备
取13.8 g(0.1 mol)间硝基苯胺、17.8 g(0.12 mol)原甲酸三乙酯、44.0 g(0.4 mol)亚膦酸二甲酯置于250 mL圆底烧瓶中，于150 ℃加热反应3 h，用旋转蒸发仪减压蒸去低沸物得棕红色粘状物，冷至室温结成红色固体，乙酸乙酯-石油醚重结晶得黄色结晶30.8 g，mp 122～123℃，产率：83.7%.元素分析C11H18N2P2O8，理论值(%)：C 35.88，H 4.93，N 7.61；实测值(%)：C 35.68，H 5.06，N 7.45.IR(KBr)
cm-1：3288.1，1621.9，1525.4，1349.9，1240.0，1031.7，848.5，528.4.1H-NMR(CDCl3)δ：1.21～1.35(m，1H，NH<)，3.73～3.91(m，12H，—OCH3)，4.28～4.42(m，1H，—CH<)，6.98～7.62(m，4H，Ar-H).
, 百拇医药
N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-对硝基苯胺用类似的方法制备，mp 120～121℃，产率：85.6%.元素分析C11H18N2P2O8，理论值(%)：C 35.88，H 4.93，N 7.61；实测值(%)：C 36.09，H 5.17，N 7.45.IR(KBr)cm-1：3266.9，1596.8，1479.2，1315.1，1286.3，1114.7，1035.6，848.5，534.2.1H-NMR(CDCl3)δ：1.25～1.38(m，1H，NH<)，3.74～3.95(m，12H，—OCH3)，4.19～4.40(m，1H，—CH<)，6.65～6.75(d，2H，Ar-H)，8.08～8.85(d，2H，Ar-H).
, 百拇医药
2.2 邻香兰醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A1)的制备
取N-(亚甲基-1，1-双膦酸四甲酯)-间硝基苯胺0.40 g(1.1 mol)溶于10 mL甲醇，加于0.04 g Pd-C(5%)，常温常压下通人H2搅拌过夜.过滤，往滤液中快速加入0.25 g(1.65 mol)邻香兰醛，室温搅拌1 h.减压抽干后，残留物通过硅胶柱分离，以乙酸乙酯-甲醇(V∶V=10∶3)为洗脱液，收集淡黄色色带，得黄色结晶0.32 g.产率：62.7%，mp 163～165℃.元素分析C19H26N2P2O8，理论值(%)：C 48.31，H 5.55，N 5.93；实测值(%)：C 48.66，H 5.66，N 5.74.IR(KBr)cm-1：3307.4(NH<)，1596.8(—CN—)，1253.5(PO)，1031.7(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ：1.20～1.39(m，1H，N—H)，3.71～3.85(m，12H，—OCH3)，3.92(s，3H，ArOCH3)，4.15～4.39(m，1H，—CH<)，6.59～7.38(m，7H，Ar-H)，8.60(s，1H，—CHN—).13C-NMR(CDCl3)δ：53.80～54.21(m，1C，—CH<)，56.13(s，1C，ArOCH3)，76.51～77.36(t，4C，—OCH3)，162.53(s，1C，—CHN—).MS(EI)m/z：472(M+)，363(100%).
, http://www.100md.com
2.3 2,3-二羟基苯甲醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A4)的制备
按上述方法得N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺的甲醇溶液10 mL，快速加入0.23 g(1.65 mmol)2，3-二羟基苯甲醛，室温搅拌片刻产生大量沉淀，1 h后过滤得红色固体0.38 g.产率：74.5%，mp 195～196 ℃.元素分析C18H24N2P2O8，理论值(%)：C 47.17，H 5.28 ，N 6.11；实测值(%)：C 47.52，H 5.49，N 6.03.IR(KBr)cm-1：3309.3(NH<)，1594.9(—CN—)，1240.0(PO)，1029.8(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ： 1.21～1.36(m，1H，NH<)，3.69～3.90(m，12H，—OCH3)，4.20～4.45(m，1H，—CH<)，6.61～7.38(m，7H，Ar-H)，8.58(s，1H，—CHN—)，9.90(s，1H，—OH).13C-NMR(CDCl3)δ：53.84～54.24(m，1C，—CH<),76.51～77.35(t，4C，—OCH3)，162.01(s，1C，—CHN—).MS(EI)m/z：458(M+)，197(100%).
, 百拇医药
2.4 胡椒醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A5)的制备
同上操作，将0.25 g(1.65 mmol)胡椒醛快速加入N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺的甲醇溶液10 mL中，室温搅拌20 min后有沉淀产生，1 h后放置冰箱冷却过夜.过滤得粗品，氯仿-甲醇重结晶得淡黄色结晶0.25 g.产率：47.0%，mp 168～170℃.元素分析C19H24N2P2O8，理论值(%)：C 48.52，H 5.14，N 5.96；实测值(%)：C 48.62，H 5.36，N 5.96.IR(KBr)cm-1：3309.3(NH<)，1589.1(—CN—)，1259.3(PO)，1047.2(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ：1.21～1.37(m，1H，NH<)，3.69～3.90(m，12H，—OCH3)，4.20～4.41(m，1H，—CH<)，6.12(s，2H，CH2<)，6.21～7.58(m，7H，Ar-H)，8.40(s，1H，—CHN—).13C-NMR(CDCl3)δ：49.73(s，1C，CH2<)，53.72～54.18(m，1C，—CH<)，76.51～77.36(t，4C，—OCH3)，159.33(s，—CHN—).MS(EI)m/z：470(M+)，259(100%).
, http://www.100md.com
目标化合物的理化常数见表1和表2.
Tab.1 The 1H-NMR data of the title compounds
Compd.
1H-NMR δ
A2
1.21～1.36(m,1H,NH<),3.65～3.90(m,12H,—OCH3),4.20～4.45(m,1H,—CH<),6.01～7.50(m,7H,Ar-H),8.50(s,1H,—CHN—),9.78(s,1H,—OH)
A3
, http://www.100md.com 1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.85(m,12H,—OCH3),3.92(s,3H,Ar-OCH3),4.11～4.40(m,1H,—CH<),6.11～7.43(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—),9.80(s,1H,—OH)
A6
1.18～1.36(m,1H,NH<),2.35(s,3H,CH3CO—),3.75～3.89(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),6.38～7.50(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
A7
1.20～1.38(m,1H,NH<),3.75～3.90(m,12H,—OCH3),4.18～4.40(m,1H,—CH<),6.41～7.41(m,8H,Ar-H),8.60(s,1H,—CHN—)
, http://www.100md.com
A8
1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.85(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),3.94(s,3H,Ar-OCH3),4.18～4.36(m,1H,—CH<),6.40～7.53(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
B1
1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.81(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),4.15～4.40(m,1H,—CH<),6.69～7.35(m,7H,Ar-H),8.60(s,1H,—CHN—)
B2
, 百拇医药
1.18～1.37(m,1H,NH<),3.69～3.90(m,12H,—OCH3),4.18～4.38(m,1H,—CH<),6.20(s,2H,CH2<),6.60～7.10(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
B3
1.20～1.38(m,1H,NH<),3.72～3.85(m,12H,—OCH3),3.89(s,3H,Ar-OCH3),3.92(s,3H,Ar-OCH3),4.18～4.40(m,1H,—CH<),6.60～7.90(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
Tab.2 Physical and analytical data of the title compounds
, 百拇医药
Compd.
R
Formula
mp/℃
Elemental analysis/%
Calcd.
Found
C
H
N
C
H
N
, 百拇医药
A2
3,4-2OH
C18H24N2P2O8
163～165
47.14
5.28
6.11
47.47
5.58
6.27
A3
, 百拇医药
3-OCH3-4-OH
C19H26N2P2O8
145～147
48.31
5.55
5.93
48.73
5.93
5.79
A6
3-OCH3-4-OAc
, 百拇医药
C21H28N2P2O9
159～160
49.03
5.49
5.45
49.13
5.47
5.37
A7
2-OH
C18H24N2P2O7
, 百拇医药
144～145
48.88
5.47
6.33
49.33
5.67
6.31
A8
3,4-2OCH3
C20H28N2P2O8
145～147
, 百拇医药
49.39
5.80
5.76
49.25
6.02
5.74
B1
2-OH-3-OCH3
C19H26N2P2O8
147～149
48.31
, 百拇医药
5.55
5.93
48.72
5.73
5.79
B2
3,4-CH2O2
C19H24N2P2O8
154～156
48.52
, 百拇医药 5.14
5.96
48.87
5.38
5.85
B3
3,4-2OCH3
C20H28N2P2O8
150～152
49.39
5.80
, http://www.100md.com
5.76
49.64
5.74
5.78
3 药理实验
体外抗肿瘤实验采用的筛药模型为小鼠白血病细胞P388及人肺腺细胞A-549.通过对药理实验结果(见表3和表4)的分析发现：目标分子中酚羟基的位置对化合物的活性影响很大，当酚羟基位于Schiff碱双键的邻位时，活性相对较好.这可能是由于当酚羟基位于邻位时，目标分子形成分子内氢键而更加稳定.这从化合物的1H-NMR数据可以看出.如化合物A4，从其1H-NMR数据分析，在低场(δ 9.90)只出现间位酚羟基的信号，邻位酚羟基质子信号由于形成分子内氢键移向更低场而未出现(见图2).这一发现对以后的工作具有一定的指导意义.
, 百拇医药
Fig.2 The intramolecular hydrogen bonding of A4
Tab.3 Antitumor activity against A-549①
Compd.
Concentration/mol*L-1
1×10-4
1×10-5
1×10-6
1×10-7
, http://www.100md.com 1×10-8
A1
83.1
7.8
2.6
3.9
6.5
A2
55.8
0.0
0.0
5.2
6.5
, http://www.100md.com
A3
3.9
0.0
0.0
0.0
0.0
A4
100.0
27.3
2.6
2.6
0.0
A5
, 百拇医药
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
A6
33.7
3.4
5.6
11.2
7.9
A7
25.8
, 百拇医药
11.2
9.0
9.0
11.2
A8
2.2
0.0
3.4
4.5
7.9
B1
76.4
14.6
, 百拇医药
6.7
6.7
4.5
B2
3.4
0.0
0.0
2.2
3.4
B3
0.0
0.0
0.0
, 百拇医药
0.0
0.0
①The percentage of growth inhibition
Tab.4 Antitumor activity against P338②
Compd.
Concentration/mol*L-1
1×10-4
1×10-5
1×10-6
, 百拇医药 1×10-7
1×10-8
A1
69.3
3.4
1.1
3.4
4.5
A2
61.4
25.0
2.3
, http://www.100md.com
0.0
0.0
A3
39.8
3.4
4.5
1.1
2.3
A4
42.0
33.0
8.0
4.5
, http://www.100md.com
8.0
A5
36.4
9.1
5.7
2.3
5.7
A6
59.7
3.9
2.6
1.3
1.3
, 百拇医药
A7
32.5
2.6
3.9
3.9
6.5
A8
33.8
3.9
5.2
2.6
5.2
B1
, http://www.100md.com
59.7
9.1
11.7
13.0
13.0
B2
35.1
9.1
7.8
7.8
1.3
B3
5.4
, http://www.100md.com
0.0
0.0
0.0
0.0
②The percentage of growth inhibition 参考文献
1，Griffith EJ,Grayson M.Topics in phosphorus chemistry.New York:Interscience,1972.37～39
2，Fleisch H.Bisphosphonates:A new class of drugs in diseases of bone and calcium metabolism.Recent Results Cancer Res,1989,116(1):1～28
, 百拇医药
3，Deluca HF,Mazess R.Osteoporosis physiological basis,assessment and treatment.New York:Elsevier,1990.321～338
4，Coleman RE,Rubens RD.3-Amino-1,1-hydroxypropylidene bisphosphonate(APD) for hypercalcaemia of breast cancer.Br J Cancer,1987,56(4):465～469
5，Adami S,Salvago G,Guarrera G,et al.Treatment of Paget′s disease of bone with intravenous 4-amino-1-hydroxy butylidene-1,1-bisphosphonate.Calcif Tissue Int,1986,39(4):226～229
, 百拇医药
6，Schlachter ST,Galinet LA,Shields SK,et al.Antiinflammatory and antiarthritic ketonic bisphosphonic acid esters.Bioorg Med Chem Letters,1998,8(9):1093～1096
7，Niesor E,Bentzen CL,Nguyen LM,et al.Use of phenol substituted diphosphonates as antineoplastic agents.PCT Int Appl,WO 9704785,1997-02-13
8，Hodnett ME,Mooney PD.Antitumor activities of some Schiff base.J Med Chem,1970,13(4):786
9，Takeuchi M,Sakamoto S,Yoshida M,et al.Studies on novel bone resorption inhibitors I.Synthesis and pharmacological activities of aminomethylenebisphosphonate derivatives.Chem Pharm Bull,1993,41(4):688～693
收稿日期:2000-01-24, http://www.100md.com
单位：中国科学院上海药物研究所,上海 200031
关键词：酚取代双膦酸酯；Schiff碱；体外抗癌活性；酚羟基
中国药物化学杂志000203 摘要 设计合成了11个含有Schiff碱双键的酚取代双膦酸酯类化合物.对小鼠白血病细胞P388、人肺腺癌细胞A-549的体外抗癌活性实验表明：目标分子中酚羟基的位置对化合物的活性有着重要影响，当酚羟基位于Schiff碱双键的邻位时，其活性明显高于其他化合物.
Studies on Synthesis and Antitumor Activity of Phenol Substituted Bisphosphonate Schiff Base
Xie Yuli Song Lin Zhu Qin Xie Yuyuan
, 百拇医药
(Shanghai Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200031)
Abstract In searching of effective new antitumor drugs,eleven phenol substituted bisphosphonates with the structure of the Schiff base were synthesized.Their antitumor activities on P388 cells and A-549 cells in vitro were tested.Preliminary results showed that the position of the phenol hydroxyl group had important effect on the antitumor activity,compounds with the phenol hydroxyl group next to the double bond of the Schiff bases seem more effective than others.
, 百拇医药
Key words phenol substituted bisphosphonates;Schiff base;antitumor activity in vitro;phenol hydroxyl group
双膦酸及其酯是以P—C—P键为特征的类似天然焦磷酸的一类低聚膦酸类化合物〔1〕，具有亲骨性以及与金属离子的良好螯合作用，在治疗骨质疏松、高钙血症、关节炎等骨和钙代谢疾病方面得到广泛应用〔2～6〕.近年来，此类化合物已成为药物学家的一个研究热点.最近有文献报道酚取代双膦酸酯还具有抗肿瘤作用〔7〕.20世纪70年代Hodnett等发现含有Schiff碱双键的化合物具有一定的抗肿瘤活性〔8〕.本实验设计合成了一系列含有Schiff碱双键的酚取代双膦酸酯，并进行了体外抗肿瘤活性测试，以期找到活性较好的化合物.
1 合成路线
, 百拇医药
以间或对硝基苯胺为起始原料，经过膦酸化、还原、与取代苯甲醛缩合制得目标化合物，合成路线见图1.
Makoto等〔9〕报道了氨基亚甲基双膦酸酯的合成方法，本实验以芳香胺取代脂肪胺，通过延长反应时间，得到了高产率的苯胺基亚甲基双膦酸酯.催化氢化硝基，还原产物未经分离直接用于下一步缩合反应.在缩合反应中，常规的回流反应条件(甲醇为溶剂)产率很低，生成大量聚合物；室温下反应则得到令人满意的产率.
Fig.1 The route of synthesis
2 合成实验
熔点用Fisher-John熔点仪测定，温度未经校正.核磁共振谱用Bruker AM-400型光谱仪测定.红外光谱用Perkin-Elmer 983G红外光谱仪测定，KBr压片.质谱用VG-707E质谱仪测定.元素分析用Carlo Erba 1106型元素分析仪测定.
, 百拇医药
2.1 N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间硝基苯胺的制备
取13.8 g(0.1 mol)间硝基苯胺、17.8 g(0.12 mol)原甲酸三乙酯、44.0 g(0.4 mol)亚膦酸二甲酯置于250 mL圆底烧瓶中，于150 ℃加热反应3 h，用旋转蒸发仪减压蒸去低沸物得棕红色粘状物，冷至室温结成红色固体，乙酸乙酯-石油醚重结晶得黄色结晶30.8 g，mp 122～123℃，产率：83.7%.元素分析C11H18N2P2O8，理论值(%)：C 35.88，H 4.93，N 7.61；实测值(%)：C 35.68，H 5.06，N 7.45.IR(KBr)
cm-1：3288.1，1621.9，1525.4，1349.9，1240.0，1031.7，848.5，528.4.1H-NMR(CDCl3)δ：1.21～1.35(m，1H，NH<)，3.73～3.91(m，12H，—OCH3)，4.28～4.42(m，1H，—CH<)，6.98～7.62(m，4H，Ar-H)., 百拇医药
N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-对硝基苯胺用类似的方法制备，mp 120～121℃，产率：85.6%.元素分析C11H18N2P2O8，理论值(%)：C 35.88，H 4.93，N 7.61；实测值(%)：C 36.09，H 5.17，N 7.45.IR(KBr)
cm-1：3266.9，1596.8，1479.2，1315.1，1286.3，1114.7，1035.6，848.5，534.2.1H-NMR(CDCl3)δ：1.25～1.38(m，1H，NH<)，3.74～3.95(m，12H，—OCH3)，4.19～4.40(m，1H，—CH<)，6.65～6.75(d，2H，Ar-H)，8.08～8.85(d，2H，Ar-H)., 百拇医药
2.2 邻香兰醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A1)的制备
取N-(亚甲基-1，1-双膦酸四甲酯)-间硝基苯胺0.40 g(1.1 mol)溶于10 mL甲醇，加于0.04 g Pd-C(5%)，常温常压下通人H2搅拌过夜.过滤，往滤液中快速加入0.25 g(1.65 mol)邻香兰醛，室温搅拌1 h.减压抽干后，残留物通过硅胶柱分离，以乙酸乙酯-甲醇(V∶V=10∶3)为洗脱液，收集淡黄色色带，得黄色结晶0.32 g.产率：62.7%，mp 163～165℃.元素分析C19H26N2P2O8，理论值(%)：C 48.31，H 5.55，N 5.93；实测值(%)：C 48.66，H 5.66，N 5.74.IR(KBr)
cm-1：3307.4(NH<)，1596.8(—CN—)，1253.5(PO)，1031.7(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ：1.20～1.39(m，1H，N—H)，3.71～3.85(m，12H，—OCH3)，3.92(s，3H，ArOCH3)，4.15～4.39(m，1H，—CH<)，6.59～7.38(m，7H，Ar-H)，8.60(s，1H，—CHN—).13C-NMR(CDCl3)δ：53.80～54.21(m，1C，—CH<)，56.13(s，1C，ArOCH3)，76.51～77.36(t，4C，—OCH3)，162.53(s，1C，—CHN—).MS(EI)m/z：472(M+)，363(100%)., http://www.100md.com
2.3 2,3-二羟基苯甲醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A4)的制备
按上述方法得N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺的甲醇溶液10 mL，快速加入0.23 g(1.65 mmol)2，3-二羟基苯甲醛，室温搅拌片刻产生大量沉淀，1 h后过滤得红色固体0.38 g.产率：74.5%，mp 195～196 ℃.元素分析C18H24N2P2O8，理论值(%)：C 47.17，H 5.28 ，N 6.11；实测值(%)：C 47.52，H 5.49，N 6.03.IR(KBr)
cm-1：3309.3(NH<)，1594.9(—CN—)，1240.0(PO)，1029.8(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ： 1.21～1.36(m，1H，NH<)，3.69～3.90(m，12H，—OCH3)，4.20～4.45(m，1H，—CH<)，6.61～7.38(m，7H，Ar-H)，8.58(s，1H，—CHN—)，9.90(s，1H，—OH).13C-NMR(CDCl3)δ：53.84～54.24(m，1C，—CH<),76.51～77.35(t，4C，—OCH3)，162.01(s，1C，—CHN—).MS(EI)m/z：458(M+)，197(100%)., 百拇医药
2.4 胡椒醛缩N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺(A5)的制备
同上操作，将0.25 g(1.65 mmol)胡椒醛快速加入N-(亚甲基-1,1-双膦酸四甲酯)-间氨基苯胺的甲醇溶液10 mL中，室温搅拌20 min后有沉淀产生，1 h后放置冰箱冷却过夜.过滤得粗品，氯仿-甲醇重结晶得淡黄色结晶0.25 g.产率：47.0%，mp 168～170℃.元素分析C19H24N2P2O8，理论值(%)：C 48.52，H 5.14，N 5.96；实测值(%)：C 48.62，H 5.36，N 5.96.IR(KBr)
cm-1：3309.3(NH<)，1589.1(—CN—)，1259.3(PO)，1047.2(P—O).1H-NMR(CDCl3)δ：1.21～1.37(m，1H，NH<)，3.69～3.90(m，12H，—OCH3)，4.20～4.41(m，1H，—CH<)，6.12(s，2H，CH2<)，6.21～7.58(m，7H，Ar-H)，8.40(s，1H，—CHN—).13C-NMR(CDCl3)δ：49.73(s，1C，CH2<)，53.72～54.18(m，1C，—CH<)，76.51～77.36(t，4C，—OCH3)，159.33(s，—CHN—).MS(EI)m/z：470(M+)，259(100%)., http://www.100md.com
目标化合物的理化常数见表1和表2.
Tab.1 The 1H-NMR data of the title compounds
Compd.
1H-NMR δ
A2
1.21～1.36(m,1H,NH<),3.65～3.90(m,12H,—OCH3),4.20～4.45(m,1H,—CH<),6.01～7.50(m,7H,Ar-H),8.50(s,1H,—CHN—),9.78(s,1H,—OH)
A3
, http://www.100md.com 1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.85(m,12H,—OCH3),3.92(s,3H,Ar-OCH3),4.11～4.40(m,1H,—CH<),6.11～7.43(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—),9.80(s,1H,—OH)
A6
1.18～1.36(m,1H,NH<),2.35(s,3H,CH3CO—),3.75～3.89(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),6.38～7.50(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
A7
1.20～1.38(m,1H,NH<),3.75～3.90(m,12H,—OCH3),4.18～4.40(m,1H,—CH<),6.41～7.41(m,8H,Ar-H),8.60(s,1H,—CHN—)
, http://www.100md.com
A8
1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.85(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),3.94(s,3H,Ar-OCH3),4.18～4.36(m,1H,—CH<),6.40～7.53(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
B1
1.18～1.35(m,1H,NH<),3.70～3.81(m,12H,—OCH3),3.90(s,3H,Ar-OCH3),4.15～4.40(m,1H,—CH<),6.69～7.35(m,7H,Ar-H),8.60(s,1H,—CHN—)
B2
, 百拇医药
1.18～1.37(m,1H,NH<),3.69～3.90(m,12H,—OCH3),4.18～4.38(m,1H,—CH<),6.20(s,2H,CH2<),6.60～7.10(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
B3
1.20～1.38(m,1H,NH<),3.72～3.85(m,12H,—OCH3),3.89(s,3H,Ar-OCH3),3.92(s,3H,Ar-OCH3),4.18～4.40(m,1H,—CH<),6.60～7.90(m,7H,Ar-H),8.40(s,1H,—CHN—)
Tab.2 Physical and analytical data of the title compounds
, 百拇医药
Compd.
R
Formula
mp/℃
Elemental analysis/%
Calcd.
Found
C
H
N
C
H
N
, 百拇医药
A2
3,4-2OH
C18H24N2P2O8
163～165
47.14
5.28
6.11
47.47
5.58
6.27
A3
, 百拇医药
3-OCH3-4-OH
C19H26N2P2O8
145～147
48.31
5.55
5.93
48.73
5.93
5.79
A6
3-OCH3-4-OAc
, 百拇医药
C21H28N2P2O9
159～160
49.03
5.49
5.45
49.13
5.47
5.37
A7
2-OH
C18H24N2P2O7
, 百拇医药
144～145
48.88
5.47
6.33
49.33
5.67
6.31
A8
3,4-2OCH3
C20H28N2P2O8
145～147
, 百拇医药
49.39
5.80
5.76
49.25
6.02
5.74
B1
2-OH-3-OCH3
C19H26N2P2O8
147～149
48.31
, 百拇医药
5.55
5.93
48.72
5.73
5.79
B2
3,4-CH2O2
C19H24N2P2O8
154～156
48.52
, 百拇医药 5.14
5.96
48.87
5.38
5.85
B3
3,4-2OCH3
C20H28N2P2O8
150～152
49.39
5.80
, http://www.100md.com
5.76
49.64
5.74
5.78
3 药理实验
体外抗肿瘤实验采用的筛药模型为小鼠白血病细胞P388及人肺腺细胞A-549.通过对药理实验结果(见表3和表4)的分析发现：目标分子中酚羟基的位置对化合物的活性影响很大，当酚羟基位于Schiff碱双键的邻位时，活性相对较好.这可能是由于当酚羟基位于邻位时，目标分子形成分子内氢键而更加稳定.这从化合物的1H-NMR数据可以看出.如化合物A4，从其1H-NMR数据分析，在低场(δ 9.90)只出现间位酚羟基的信号，邻位酚羟基质子信号由于形成分子内氢键移向更低场而未出现(见图2).这一发现对以后的工作具有一定的指导意义.
, 百拇医药
Fig.2 The intramolecular hydrogen bonding of A4
Tab.3 Antitumor activity against A-549①
Compd.
Concentration/mol*L-1
1×10-4
1×10-5
1×10-6
1×10-7
, http://www.100md.com 1×10-8
A1
83.1
7.8
2.6
3.9
6.5
A2
55.8
0.0
0.0
5.2
6.5
, http://www.100md.com
A3
3.9
0.0
0.0
0.0
0.0
A4
100.0
27.3
2.6
2.6
0.0
A5
, 百拇医药
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
A6
33.7
3.4
5.6
11.2
7.9
A7
25.8
, 百拇医药
11.2
9.0
9.0
11.2
A8
2.2
0.0
3.4
4.5
7.9
B1
76.4
14.6
, 百拇医药
6.7
6.7
4.5
B2
3.4
0.0
0.0
2.2
3.4
B3
0.0
0.0
0.0
, 百拇医药
0.0
0.0
①The percentage of growth inhibition
Tab.4 Antitumor activity against P338②
Compd.
Concentration/mol*L-1
1×10-4
1×10-5
1×10-6
, 百拇医药 1×10-7
1×10-8
A1
69.3
3.4
1.1
3.4
4.5
A2
61.4
25.0
2.3
, http://www.100md.com
0.0
0.0
A3
39.8
3.4
4.5
1.1
2.3
A4
42.0
33.0
8.0
4.5
, http://www.100md.com
8.0
A5
36.4
9.1
5.7
2.3
5.7
A6
59.7
3.9
2.6
1.3
1.3
, 百拇医药
A7
32.5
2.6
3.9
3.9
6.5
A8
33.8
3.9
5.2
2.6
5.2
B1
, http://www.100md.com
59.7
9.1
11.7
13.0
13.0
B2
35.1
9.1
7.8
7.8
1.3
B3
5.4
, http://www.100md.com
0.0
0.0
0.0
0.0
②The percentage of growth inhibition 参考文献
1，Griffith EJ,Grayson M.Topics in phosphorus chemistry.New York:Interscience,1972.37～39
2，Fleisch H.Bisphosphonates:A new class of drugs in diseases of bone and calcium metabolism.Recent Results Cancer Res,1989,116(1):1～28
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收稿日期:2000-01-24, http://www.100md.com