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编号:10281067
两种提取石蜡包埋组织DNA方法的比较
http://www.100md.com 《诊断病理学杂志》 2000年第2期
     作者:张金生 刘鸿瑞

    单位:中国医学科学院 中国协和医科大学 北京协和医院病理科 100730

    关键词:

    诊断病理学杂志000229分类号:R361.2 文献标识码:B

    文章编号:1007-8096(2000)02-0083-01 从石蜡包埋组织提取组织DNA的质量是关系到PCR是否成功的关键因素之一,我们对Thomais等人提出的方法与传统酚-氯仿抽提法从石蜡包埋组织提取组织DNA进行了比较,并加以评价。

    1材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 23例石蜡包埋肺癌组织标本为我科存档1991~1996年间外科手术切除标本。

    1.1.2 引物 K-ras和p16基因第2外显子引物均由赛百盛公司合成。

    1.2 方法

    1.2.1 酚-氯仿抽提法 甲醛固定,常规石蜡包埋组织块,经对原片观察后,标出所需部位。用一次性紫外消毒刀片,lOum连续切片,割弃不需组织(主要为纤维结缔组织及坏死组织,在癌组织尽量剔除正常组织),将约2cm×2cm组织蜡片放入1.5ml离心管中,加二甲苯1.5ml,20min×3,脱蜡后梯度乙醇脱水,蛋白酶K缓冲液漂洗2次,加入400ul蛋白酶K缓冲液,75ug蛋白酶K,55℃消化至组织片消失(4h后如不消失,再补加50u蛋白酶K),用等体积蛋白抽提液Ⅰ及Ⅱ各抽提一次;上清加1/10体积3mol NaAc后,沿管壁轻轻加入2.5倍体积冰乙醇,颠倒混匀后置-80℃ 4h;4℃10,000 rpm15min,沉淀用75%乙醇漂洗2次,溶于100ul TE 缓冲液中。取石蜡组织DNA 2ul行1%琼脂糖凝胶电泳,以确定其分子量大小,分子量小于300bp者不能作PCR,需重新提取。全部样本取2ul测OD 260/280定量,-20℃贮存。

    1.2.2 Thomais S方法 连续切5~lOum厚石蜡包埋肺癌组织切片,根据HE切片最大限度剔除不需要部分,刮入1.5ml离心管中、加入二甲苯100ul、缓慢混匀、12000rpm 10min,加入二甲苯100ul、100%乙醇100ul、缓慢混匀、12000rpm 10min,55℃烤干,移入500um离心管中,加入Tris 100ul 50mM,(全文详见pdf)

    收稿日期:1999-06-30, 百拇医药