L-NAME对电刺激内脏大神经传入纤维引起血压变化的影响
作者：赵锁安 陈渝 史 潘培森 张林
单位：赵锁安 陈渝 史 潘培森(中国人民解放军石家庄医学高等专科学校 石家庄 050081)；张林(中国人民解放军白求恩国际和平医院 石家庄 050082)
关键词：内脏-减压反应；内脏大神经传入纤维；N-硝基-L精氨酸甲酯(L-NAME)；一氧化氮
解放军药学学报990405 摘 要 目的：观察L-NAME对内脏-减压反应的影响，并探讨内脏疼痛引起休克的机理。方法：用电刺激内脏大神经传入纤维的方法模拟内脏痛，比较静脉注入L-NAME前后刺激神经时血压的变化情况。结果：用药后基础血压升高(P<0.01)。用药前刺激神经时为降压反应，ΔMBP＝
-4.17±1.79kPa，而用药后刺激时却为升压反应，ΔMBP＝+1.22±1.93kPa(P<0.001)；注射L-NA
, http://www.100md.com
ME前先注入L-精氨酸，不管是基础血压还是刺激后的反应性血压，其变化均未达到统计学显著水平。结论：在大鼠身上刺激内脏大神经传入纤维可引起内脏-减压反应；发现了L-NAME对上述反应有翻转作用。该作用的原因，可能是抑制了内源性一氧化氮的生成。
中国图书资料分类号 R965
EFFECT OF L-NAME ON THE DEPRESSOR RESPONSE-INDUCED BY STIMULATING GREATER-SPLANCHNOAFFERENTS
Zhao Suoan，Chen Yu，Shi Yue,Pan Peisen,Zhang Lin
(Department of physiology,Shijiazhuang Medical College of PLA.Shijiazhuang 050081
, http://www.100md.com
Bethune International Peace Hospital of PLA.Shijiazhuang 050082)
Abstract AIM To study the effect of L-NAME on the viscero-depressor response and to probe into the mechanism and the prevention of shock induced by visceral pain.METHOD The visceral pain was imitated by electric stimulation of the greater
-splanchnoafferents.The basal blood pressure (BP) and the pressure responses to the electric stimulation were observed before or after intravenous injection of L-NAME
, http://www.100md.com
.RESULTS The basal BP was increased after injection of L-NAME (P<0.01).When the nerve was stimulated without injection of L-NAME,BP was deceased by 4.17±1.79kPa,while the responsive BP was increased by 1.22±1.93kPa (P<0.001) after injection of L-NAME.If L-arginine was injected before L-NAME,both the basal BP and the responsive BP were unchanged (P>0.05).CONCLUSION The viscero-depressor response was induced by stimulating the greater-splanchnoafferents in rats,which would be reversed by L-NAME,due to the inhibition of the intrinsic nitric oxide synthesis.
, http://www.100md.com
Key words Viscero-depressor response;Greater-splanchnoafferents;L-NAME；Nitric Oxide
在临床工作中，常见到腹腔脏器的疼痛引起心血管系统的功能障碍，如致使血压下降乃至休克。为了研究这一反应的机理，并试图进一步探讨防治措施，我们采用电刺激大鼠内脏大神经传入纤维的方法，对模拟的内脏痛进行了观察。内源性一氧化氮(NO)对心血管系统的功能有着广泛影响[1]，但在上述反应中所起的作用尚未见报道。在本实验中，我们选用N-硝基-L精氨酸甲酯(L-NAME)作为一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂，对内源性NO在这一反应中所起的作用进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 Sprague-Dawley大鼠48只，♂，体重260～320g(河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：04036)。
, 百拇医药
1.2 仪器和药品 记录和刺激仪器为MacLab/4e套装(澳大利亚AD Instruments公司),信号采集和数据处理用Chart软件；氨基甲酸乙酯(上海化学试剂采购供应站试剂厂，批号 901212)；L-NAME(Sigma公司，批号 lot 14HO135)和L-精氨酸(Sigma公司，批号 A5131)。
1.3 手术过程 动物麻醉用氨基甲酸乙酯溶液(1g.kg-1)，ip。切开颈部皮肤，逐层分离皮下组织，暴露气管，进行气管插管；沿左侧腰方肌外缘作切口，逐层分离皮下组织和肌肉，从腹膜后暴露内脏大神经。仔细分离内脏大神经，于腹腔神经节的近端结扎并剪断，将中枢端置于自制的铂丝双极电极上以备刺激用。神经表面滴温石蜡油。刺激参数为：波宽5ms，强度5V，频率50Hz，串长20s；于右股部内侧切开皮肤，分离出股动脉和股静脉，分别插管，其动脉插管连接血压传感器(内充肝素溶液)，用以记录动脉血压；静脉插管为给药途径，每次给药于20s内注完；心电图记录的连接方式为标准肢体导联Ⅱ，一方面用于记录心电，另一方面用于检测刺激伪迹，证明每次为有效刺激；整个实验过程中动物为自主呼吸；肛温维持在37℃。
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1.4 统计学处理 全部数据用均值±标准差(
±s)表示，判别差异的显著性时，计量资料用配对t检验(双侧)，计数资料用x2检验，多组间比较用方差分析。
2 结 果
2.1 L-NAME的作用 (1) L-NAME对基础血压的影响(n=6) 为了确定注入L-NAME后刺激内脏大神经的时机，以便保证使刺激信号正好处在该药物发挥作用的期间内，我们对单用L-NAME后，基础血压变化情况进行了观察。结果：静脉注射L-NAME(15mg.kg-1，0.5ml)，血压逐渐升高，10min之内均能升到最高水平，从13.60±1.33kPa升至18.67±1.07kPa(P<0.01)，与前人结果相似[1]，并可在较高水平维持1.5h(1.5h以后未观察)。
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(2) L-NAME对反应性血压的影响(n=16) 在基础状态下刺激内脏大神经中枢端，均可引起明显的血压下降(16/16)。待血压恢复后，静脉内注入L-NAME(15mg.kg-1，0.5ml)，给药15min后再刺激，血压的变化却为升压效应，见图1，表1。其中高出基线的有12例，高出幅度为2.16±1.05kPa；其余4例虽未高出基线，但下降幅度明显小于该4例自身用药前下降的幅度(用药前ΔMBP=-3.93±0.54kPa，用药后ΔMBP=-1.60±0.63kPa，P<0.05)。根据用药前后刺激时血压偏离基线方向的相同(n=4)或相反(n=12)情况，经x2检验也证明，L-NAME确实翻转了这一反应(P<0.001)。
图1 注射L-NAME前后刺激内脏大神经中枢端血压变化情况
a注射前 b注射后 ch1心电图(mV) ch2动脉血压(kPa) ch3刺激信号
, 百拇医药
(3) L-精氨酸+L-NAME对反应性血压的影响(n=8) 在基础状态下刺激时，8例血压均下降。待血压恢复后静脉注射L-精氨酸(200mg.kg-1，0.5ml)，血压略有下降，很快又恢复到基线水平。注入L-精氨酸5min后注射L-NAME(剂量同前)，血压仍有上升趋势，但未能达统计学显著水平(P>0.05)。注射后15min刺激内脏大神经中枢端，每例又均表现为降压效应，下降幅度与用药前无显著差异，见表1。
表1 L-NAME对刺激内脏大神经中枢端血压变化的影响(±s) 药 物
n
血压(kPa)
血压基线(MBP)
, 百拇医药
刺激效应(△MBP)
用药前
16
15.10±2.78
-4.17±1.79
L-NAME
17.20±3.85c
+1.22±1.93d
用药前
8
15.89±2.58
-4.44±1.09
, 百拇医药
L-Arg+L-NAME
19.11±3.76
-4.11±1.22
注：与用药前相比较，cP<0.01,dP<0.001
2.2 各种排除性对照实验 ①容量对照实验(n=6)：实验方法和给药顺序与“L-NAME对反应性血压的影响”相同，只是把静脉注射L-NAME时改为注入生理盐水。结果，每只大鼠前后两次刺激均为降压反应，下降幅度无统计学差异(P>0.05)。②时间对照实验(n=6)：每隔15min刺激1次，共7次(持续1.5h)，经方差分析，各次刺激时血压下降幅度无统计学差异(P>0.05)。③频率和串间隔对照实验(n=6)：刺激强度和串长保持不变，以不同的频率和不同的串间隔刺激。频率变化包括1、2、5、10、50Hz；串间隔变化包括2、5、15、30min。结果，所有引出的反应均为降压效应，无一例升压效应者。
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3 讨 论
3.1 以往，对内脏痛引起血压反应的实验观察非常少，模拟内脏痛的方法多是在内脏器官上施加机械刺激，由此所产生的降压效应称内脏-减压反应[2]，所用动物为狗、猫、兔等，为食肉或食草动物，在我们的实验中，选用大鼠作为观察对象，为这一领域的研究开辟了一条新的途径。我们观察48只动物，在对照状态下所有刺激后的效应均为降压，这说明内脏-减压反应在大鼠身上是很稳定的，同时也证明内脏大神经传入纤维在该反应中起着重要作用。
3.2 在实验中发现，L-NAME可使内脏-减压反应的效应发生翻转，即刺激内脏大神经的中枢端原本是引起降血压，由于注入了L-NAME，其效应却变成了升高血压。这一发现对传统的观点提出了质疑。一般认为，一种特定的生理过程，尤其是刺激内感受器引起的反应，其反应模式是相当稳定的，药物只能起到易化或抑制作用，而不能改变其效应的性质[3]。但是，在我们的实验中却把降压效应翻转成了升压效应。为了证明改变这一效应的原因确实是L-NAME引起的，我们进行了多种排除性对照实验。证实这种效应不是静脉注射操作、血容量扩充、反复刺激、刺激频率等因素所引起。
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3.3 在体内，内源性NO是以L-精氨酸为底物，在NOS的作用下经氧化，脱氢，裂解，水解等反应生成的[4]。L-NAME是NOS的竞争性抑制剂，其原理是由于L-NAME与L-精氨酸结构相似，两者之间发生竞争，当L-NAME过多时，可以抑制L-精氨酸生成NO的过程，而L-精氨酸过多时，又可抵消L-NAME的抑制作用。在我们的实验中，注射L-NAME之前预先注射L-精氨酸可以抵消L-NAME的作用，这说明L-NAME对内脏-减压反应的翻转作用是通过抑制NO的生成而实现的。至于为什么内源性NO的生成过程被L-NAME抑制就会翻转内脏-减压反应为升压反应。可能的原因是内脏大神经传入纤维的冲动传到中枢后，同时激活心血管加压中枢和减压中枢，正常情况下减压中枢占优势，所以表现为降压反应。内源性NO有可能是其中的一种递质或介质[5]。在本实验中，当用L-NAME将NO的生成过程抑制后，再刺激内脏大神经的传入纤维，减压中枢便不能激活或不能完全激活，于是，加压中枢占了优势，表现出的则是升压反应。总之，揭示L-NAME的这种作用，对于阐明内脏-减压反应的机制和防治由此而引起的并发症具有十分重要的价值。
, 百拇医药
4 结 论
在大鼠身上用刺激内脏大神经的方法模拟内脏痛，为研究内脏-减压反应开辟了新的途径。证明了内脏大神经传入纤维在内脏-减压反应中起着重要作用。发现了L-NAME可以翻转这一反应，提示了L-NAME的翻转作用是通过抑制内源性NO的生成而实现的。
作者简介：男，副教授，全军生理专业委员会委员，河北省生理科学会理事。
参考文献
1 赵锁安.一氧化氮与医学.第一版.石家庄:河北人民出版社,1995；1～228
2 陈尚恭,雷勋兰.内脏传入神经对血压影响的研究.生理学报,1965；28(3):321
3 徐叔云.现代实用临床药理学.第一版.北京:华夏出版社,1996；33～46
4 赵锁安,金恒启,耿进霞.一氧化氮的生成及易被误解的几个基本概念.生理科学进展,1997；28(3):218
5 Snyder SH.Nitric oxide:first in a new class of neurotransmitters?Science,1992;257(5069):494
(1998-12-22收稿 1999-01-28修回), 百拇医药
单位：赵锁安 陈渝 史 潘培森(中国人民解放军石家庄医学高等专科学校 石家庄 050081)；张林(中国人民解放军白求恩国际和平医院 石家庄 050082)
关键词：内脏-减压反应；内脏大神经传入纤维；N-硝基-L精氨酸甲酯(L-NAME)；一氧化氮
解放军药学学报990405 摘 要 目的：观察L-NAME对内脏-减压反应的影响，并探讨内脏疼痛引起休克的机理。方法：用电刺激内脏大神经传入纤维的方法模拟内脏痛，比较静脉注入L-NAME前后刺激神经时血压的变化情况。结果：用药后基础血压升高(P<0.01)。用药前刺激神经时为降压反应，ΔMBP＝
-4.17±1.79kPa，而用药后刺激时却为升压反应，ΔMBP＝+1.22±1.93kPa(P<0.001)；注射L-NA
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ME前先注入L-精氨酸，不管是基础血压还是刺激后的反应性血压，其变化均未达到统计学显著水平。结论：在大鼠身上刺激内脏大神经传入纤维可引起内脏-减压反应；发现了L-NAME对上述反应有翻转作用。该作用的原因，可能是抑制了内源性一氧化氮的生成。
中国图书资料分类号 R965
EFFECT OF L-NAME ON THE DEPRESSOR RESPONSE-INDUCED BY STIMULATING GREATER-SPLANCHNOAFFERENTS
Zhao Suoan，Chen Yu，Shi Yue,Pan Peisen,Zhang Lin
(Department of physiology,Shijiazhuang Medical College of PLA.Shijiazhuang 050081
, http://www.100md.com
Bethune International Peace Hospital of PLA.Shijiazhuang 050082)
Abstract AIM To study the effect of L-NAME on the viscero-depressor response and to probe into the mechanism and the prevention of shock induced by visceral pain.METHOD The visceral pain was imitated by electric stimulation of the greater
-splanchnoafferents.The basal blood pressure (BP) and the pressure responses to the electric stimulation were observed before or after intravenous injection of L-NAME
, http://www.100md.com
.RESULTS The basal BP was increased after injection of L-NAME (P<0.01).When the nerve was stimulated without injection of L-NAME,BP was deceased by 4.17±1.79kPa,while the responsive BP was increased by 1.22±1.93kPa (P<0.001) after injection of L-NAME.If L-arginine was injected before L-NAME,both the basal BP and the responsive BP were unchanged (P>0.05).CONCLUSION The viscero-depressor response was induced by stimulating the greater-splanchnoafferents in rats,which would be reversed by L-NAME,due to the inhibition of the intrinsic nitric oxide synthesis.
, http://www.100md.com
Key words Viscero-depressor response;Greater-splanchnoafferents;L-NAME；Nitric Oxide
在临床工作中，常见到腹腔脏器的疼痛引起心血管系统的功能障碍，如致使血压下降乃至休克。为了研究这一反应的机理，并试图进一步探讨防治措施，我们采用电刺激大鼠内脏大神经传入纤维的方法，对模拟的内脏痛进行了观察。内源性一氧化氮(NO)对心血管系统的功能有着广泛影响[1]，但在上述反应中所起的作用尚未见报道。在本实验中，我们选用N-硝基-L精氨酸甲酯(L-NAME)作为一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂，对内源性NO在这一反应中所起的作用进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 Sprague-Dawley大鼠48只，♂，体重260～320g(河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：04036)。
, 百拇医药
1.2 仪器和药品 记录和刺激仪器为MacLab/4e套装(澳大利亚AD Instruments公司),信号采集和数据处理用Chart软件；氨基甲酸乙酯(上海化学试剂采购供应站试剂厂，批号 901212)；L-NAME(Sigma公司，批号 lot 14HO135)和L-精氨酸(Sigma公司，批号 A5131)。
1.3 手术过程 动物麻醉用氨基甲酸乙酯溶液(1g.kg-1)，ip。切开颈部皮肤，逐层分离皮下组织，暴露气管，进行气管插管；沿左侧腰方肌外缘作切口，逐层分离皮下组织和肌肉，从腹膜后暴露内脏大神经。仔细分离内脏大神经，于腹腔神经节的近端结扎并剪断，将中枢端置于自制的铂丝双极电极上以备刺激用。神经表面滴温石蜡油。刺激参数为：波宽5ms，强度5V，频率50Hz，串长20s；于右股部内侧切开皮肤，分离出股动脉和股静脉，分别插管，其动脉插管连接血压传感器(内充肝素溶液)，用以记录动脉血压；静脉插管为给药途径，每次给药于20s内注完；心电图记录的连接方式为标准肢体导联Ⅱ，一方面用于记录心电，另一方面用于检测刺激伪迹，证明每次为有效刺激；整个实验过程中动物为自主呼吸；肛温维持在37℃。
, http://www.100md.com
1.4 统计学处理 全部数据用均值±标准差(
±s)表示，判别差异的显著性时，计量资料用配对t检验(双侧)，计数资料用x2检验，多组间比较用方差分析。2 结 果
2.1 L-NAME的作用 (1) L-NAME对基础血压的影响(n=6) 为了确定注入L-NAME后刺激内脏大神经的时机，以便保证使刺激信号正好处在该药物发挥作用的期间内，我们对单用L-NAME后，基础血压变化情况进行了观察。结果：静脉注射L-NAME(15mg.kg-1，0.5ml)，血压逐渐升高，10min之内均能升到最高水平，从13.60±1.33kPa升至18.67±1.07kPa(P<0.01)，与前人结果相似[1]，并可在较高水平维持1.5h(1.5h以后未观察)。
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(2) L-NAME对反应性血压的影响(n=16) 在基础状态下刺激内脏大神经中枢端，均可引起明显的血压下降(16/16)。待血压恢复后，静脉内注入L-NAME(15mg.kg-1，0.5ml)，给药15min后再刺激，血压的变化却为升压效应，见图1，表1。其中高出基线的有12例，高出幅度为2.16±1.05kPa；其余4例虽未高出基线，但下降幅度明显小于该4例自身用药前下降的幅度(用药前ΔMBP=-3.93±0.54kPa，用药后ΔMBP=-1.60±0.63kPa，P<0.05)。根据用药前后刺激时血压偏离基线方向的相同(n=4)或相反(n=12)情况，经x2检验也证明，L-NAME确实翻转了这一反应(P<0.001)。
图1 注射L-NAME前后刺激内脏大神经中枢端血压变化情况
a注射前 b注射后 ch1心电图(mV) ch2动脉血压(kPa) ch3刺激信号
, 百拇医药
(3) L-精氨酸+L-NAME对反应性血压的影响(n=8) 在基础状态下刺激时，8例血压均下降。待血压恢复后静脉注射L-精氨酸(200mg.kg-1，0.5ml)，血压略有下降，很快又恢复到基线水平。注入L-精氨酸5min后注射L-NAME(剂量同前)，血压仍有上升趋势，但未能达统计学显著水平(P>0.05)。注射后15min刺激内脏大神经中枢端，每例又均表现为降压效应，下降幅度与用药前无显著差异，见表1。
表1 L-NAME对刺激内脏大神经中枢端血压变化的影响(
±s) 药 物n
血压(kPa)
血压基线(MBP)
, 百拇医药
刺激效应(△MBP)
用药前
16
15.10±2.78
-4.17±1.79
L-NAME
17.20±3.85c
+1.22±1.93d
用药前
8
15.89±2.58
-4.44±1.09
, 百拇医药
L-Arg+L-NAME
19.11±3.76
-4.11±1.22
注：与用药前相比较，cP<0.01,dP<0.001
2.2 各种排除性对照实验 ①容量对照实验(n=6)：实验方法和给药顺序与“L-NAME对反应性血压的影响”相同，只是把静脉注射L-NAME时改为注入生理盐水。结果，每只大鼠前后两次刺激均为降压反应，下降幅度无统计学差异(P>0.05)。②时间对照实验(n=6)：每隔15min刺激1次，共7次(持续1.5h)，经方差分析，各次刺激时血压下降幅度无统计学差异(P>0.05)。③频率和串间隔对照实验(n=6)：刺激强度和串长保持不变，以不同的频率和不同的串间隔刺激。频率变化包括1、2、5、10、50Hz；串间隔变化包括2、5、15、30min。结果，所有引出的反应均为降压效应，无一例升压效应者。
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3 讨 论
3.1 以往，对内脏痛引起血压反应的实验观察非常少，模拟内脏痛的方法多是在内脏器官上施加机械刺激，由此所产生的降压效应称内脏-减压反应[2]，所用动物为狗、猫、兔等，为食肉或食草动物，在我们的实验中，选用大鼠作为观察对象，为这一领域的研究开辟了一条新的途径。我们观察48只动物，在对照状态下所有刺激后的效应均为降压，这说明内脏-减压反应在大鼠身上是很稳定的，同时也证明内脏大神经传入纤维在该反应中起着重要作用。
3.2 在实验中发现，L-NAME可使内脏-减压反应的效应发生翻转，即刺激内脏大神经的中枢端原本是引起降血压，由于注入了L-NAME，其效应却变成了升高血压。这一发现对传统的观点提出了质疑。一般认为，一种特定的生理过程，尤其是刺激内感受器引起的反应，其反应模式是相当稳定的，药物只能起到易化或抑制作用，而不能改变其效应的性质[3]。但是，在我们的实验中却把降压效应翻转成了升压效应。为了证明改变这一效应的原因确实是L-NAME引起的，我们进行了多种排除性对照实验。证实这种效应不是静脉注射操作、血容量扩充、反复刺激、刺激频率等因素所引起。
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3.3 在体内，内源性NO是以L-精氨酸为底物，在NOS的作用下经氧化，脱氢，裂解，水解等反应生成的[4]。L-NAME是NOS的竞争性抑制剂，其原理是由于L-NAME与L-精氨酸结构相似，两者之间发生竞争，当L-NAME过多时，可以抑制L-精氨酸生成NO的过程，而L-精氨酸过多时，又可抵消L-NAME的抑制作用。在我们的实验中，注射L-NAME之前预先注射L-精氨酸可以抵消L-NAME的作用，这说明L-NAME对内脏-减压反应的翻转作用是通过抑制NO的生成而实现的。至于为什么内源性NO的生成过程被L-NAME抑制就会翻转内脏-减压反应为升压反应。可能的原因是内脏大神经传入纤维的冲动传到中枢后，同时激活心血管加压中枢和减压中枢，正常情况下减压中枢占优势，所以表现为降压反应。内源性NO有可能是其中的一种递质或介质[5]。在本实验中，当用L-NAME将NO的生成过程抑制后，再刺激内脏大神经的传入纤维，减压中枢便不能激活或不能完全激活，于是，加压中枢占了优势，表现出的则是升压反应。总之，揭示L-NAME的这种作用，对于阐明内脏-减压反应的机制和防治由此而引起的并发症具有十分重要的价值。
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在大鼠身上用刺激内脏大神经的方法模拟内脏痛，为研究内脏-减压反应开辟了新的途径。证明了内脏大神经传入纤维在内脏-减压反应中起着重要作用。发现了L-NAME可以翻转这一反应，提示了L-NAME的翻转作用是通过抑制内源性NO的生成而实现的。
作者简介：男，副教授，全军生理专业委员会委员，河北省生理科学会理事。
参考文献
1 赵锁安.一氧化氮与医学.第一版.石家庄:河北人民出版社,1995；1～228
2 陈尚恭,雷勋兰.内脏传入神经对血压影响的研究.生理学报,1965；28(3):321
3 徐叔云.现代实用临床药理学.第一版.北京:华夏出版社,1996；33～46
4 赵锁安,金恒启,耿进霞.一氧化氮的生成及易被误解的几个基本概念.生理科学进展,1997；28(3):218
5 Snyder SH.Nitric oxide:first in a new class of neurotransmitters?Science,1992;257(5069):494
(1998-12-22收稿 1999-01-28修回), 百拇医药