喷昔洛韦与阿昔洛韦治疗豚鼠单纯疱疹的疗效比较
作者：李向群 毛琳 文莉 侯伟 肖红 杨占秋
单位：湖北医科大学病毒研究所临床病毒室，武汉 430071
关键词：喷昔洛韦；阿昔洛韦；1型单纯疱疹病毒；单纯疱疹；疗效
沈阳药科大学学报000422 摘 要 为比较喷昔洛韦(PCV)与阿昔洛韦(ACV)对单纯疱疹的疗效，建立了豚鼠皮肤单纯疱疹的模型，比较不同时间的疗效积分和皮损处1型单纯疱疹病毒(HSV-1)发现：0.2%PCV组对疱疹疗效及对HSV-1抑制作用要比1%ACV组好，表明PCV治疗单纯疱疹的疗效要比ACV好，其抗HSV-1活性也比ACV高.
分类号 R978.7
The Comparison of Efficacies of Penciclovir and Acyclovir Treating the Herpes Simplex in Guinea-Pigs
, http://www.100md.com
Li Xiangqun,Mao Lin,Wen Li,Hou Wei,Xiao Hong,Yang Zhanqiu
(Department of Clinical Virology, Institute of Viral Research of Hubei Medical University, Wuhan 430071)
Abstract To compare efficacies of penciclovir and acyclovir treating herpes simplex in guinea-pigs, the animal model of guinea-pig skin herpes simplex was established. The therapeutic score and the viral titers were recorded and compared in various drug treatment groups of different periods after treating. The results showed that the therapeutic effects of the 0.2% PCV group on herpes simplex was better than that of the 1% ACV, and the viral titer in skin lesion of the 0.2% PCV group was lower than that of the 1% ACV group. These results suggested that the therapeutic efficacies of PCV on herpes simplex was better than that of ACV, and the antiviral activity of PCV was higher than that of ACV.
, 百拇医药
Key words penciclovir；acyclovir；herpes simplex；herpes simplex virus type l；therapeutic effect
喷昔洛韦(penciclovir, PCV)为1996年上市 的抗疱疹病毒药，该药为无环鸟苷的衍生物，其抗病毒谱、结构和代谢与阿昔洛韦(acyclovir, ACV)相同〔1，2〕.但其活性形式-喷昔洛韦三磷酸(PCV-Tp)在细胞内的半衰期为10 h，比阿昔洛韦三磷酸(ACV-Tp)要长14倍〔3〕.在细胞水平上已证实，PCV抗疱疹病毒的活性要比ACV 强.但在疱疹病毒性疾病的动物模型水平的两药疗效比较研究却鲜有报道.本研究建立了豚鼠皮肤单纯疱疹的动物模型，并用之比较PCV和ACV对皮肤单纯疱疹的疗效.
1 材料与方法
病毒与细胞 1型单纯疱疹病毒(HSV-1)SM-44及Hep-2细胞由本室保存，HSV-1在Hep-2细胞上增殖，实验用病毒的滴度为106 TCID50/0.1 mL.
, 百拇医药
动物 雄性豚鼠，体重为300～350 g，共160只，购自湖北医科大学动物中心.
药物 喷昔洛韦霜剂(0.2%，1%)及1%阿昔洛韦霜剂，由湖北省医药工业研究所熊慧清高级工程师惠赠.
1.1 豚鼠分组
将豚鼠随机分为4组：2种不同浓度PCV组(0.2%、1% PCV)，1%ACV组，阴性对照组(PCV霜剂的基质)；每组40只豚鼠，再分5个平行组，其中1个平行组用于观察疱疹的疗效，另4个平行组用于检测用药后不同时间病毒滴度.
1.2 豚鼠皮肤单纯疱疹动物模型建立
将自制的动物去毛剂(硫化钡25 g、面粉35 g、滑石粉35 g、肥皂粉5 g.用双蒸水配成糊状)涂抹在豚鼠背部，直径约为3 cm的园形，15 min后，用止血钳脱毛，暴露皮肤，用碘酒、酒精消毒后，皮下注射0.1 mL纯化了的HSV-1(106 TCID50/0.1 mL)病毒液，另一处注射0.1 mL eagle细胞培养液作为阴性对照，观察并记录疱疹出现时间和特征.
, 百拇医药
1.3 给药量及方法
待动物出现明显疱疹时(HSV-1感染后第3天)将PCV. ACV霜剂用50℃水浴加热，用微量移液器吸取各种药100 μL滴在皮损处，PCV组，2次/隔日，共4次；ACV组，4次/日连用4天，阴性对照用同量的溶剂4次/日，连用4天.
1.4 疗效判定
采用积分法来表示疱疹不同愈合程度，1分：脓疱干枯，且有结痂；2分：50%～70%痂块脱落;3分：70%～90%痂块脱落；4分：痂块完全脱落，疱疹愈合，记录各用药组不同时间豚鼠疱疹疗效积分.
1.5 治疗后不同时间病损处病毒滴度的检测
在用药后第1、3、5、7天处死豚鼠，切取皮损处皮肤组织0.5 g.用无菌眼科剪剪碎迅速置于液氮中，在冰冻状态下研磨成粉状，立即加4.5 mL eagle细胞培养基，4℃下，3 000 r/min,离心10 min，取上清，该上清视为1∶10的病毒液，再作10倍的系列稀释，用Hep-2细胞在24孔板上检测病毒，并按Reed-Muench法计算病毒的滴度(TCID50)〔6〕.
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1.6 统计学分析方法
采用t检验进行实验数据的分析和比较.
2 结果
2.1 豚鼠皮肤疱疹的特点
在HSV-1感染后1天内，局部皮肤无变化.第二天感染处皮肤出现约0.3 cm的红斑，以后红斑逐渐增多且融合，皮肤红肿范围逐渐增大，在感染的68 h，融合红斑出现脓疱，周围皮肤红肿范围约0.6 cm，呈典型的皮肤单纯疱疹病变，以后疱疹逐渐结痂，在感染后第6天结痂开始脱落，至14天，结痂完全脱落，疱疹痊愈，阴性对照处皮肤无任何变化.
2.2 PCV与ACV治疗疱疹的疗效比较
各用药组疗效积分见表1，从表1中可见自治疗后第3天各用药组与阴性对照组比较有疗效，有显著性差别(P<0.01)；PCV组与AVC组比较，亦有显著性差别(P<0.01).
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Tab.1 Comparison of efficacies of PCV and ACV treating the skin herpes simplex in guinea-pigs Drug treatment
Lesion number
Times after treatment(d)/therapeutic score(x±SD)
1
3
5
7
0.2%PCV
8
, 百拇医药
0.4±0.4
2.2±0.3**ΔΔ
2.8±0.4**ΔΔ
3.5±0.4**ΔΔ
1%PCV
8
0.4±0.2
2.5±0.3**ΔΔ
3.0±0.5**ΔΔ
4.0±0.0**ΔΔ
, http://www.100md.com
1%ACV
8
0.5±0.1
1.9±0.5**
2.4±0.3**
3.0±0.4**
Negative Control
8
0.4±0.6
0.4±0.8
0.5±0.3
, http://www.100md.com
1.0±0.5
**P<0.01(The comparison of therapeutic score of various drug treatments and negative control);ΔΔ P<0.01(The comparison of therapeutic score of PCV and ACV)2.3 PCV与ACV对皮肤损处HSV-1病毒抑制比较
在用药后第3天各组药即显示抑制HSV-1的作用，治疗后的第5天病毒滴度继续下降，至第7天病毒滴度较前两次都低，但下降幅度不及以前，比较不同时间各用药组与阴性对照组的病毒滴度，发现在用药的第3、5、7天，用药组豚鼠皮损处的病毒滴度较同时间阴性对照组滴度低，有显著性差别(P<0.01).PCV组与ACV 组在抑制HSV-1病毒的作用亦有差别(P<0.01)，结果见表2.Tab.2 Comparison of HSV-1 inhibition of PCV and ACV in herpes simplex lesion of guinea-pigs Drug treatment
, 百拇医药
Lesion number
Times after treating(d)/Viral titers(TCID50)(x±SD)
1
3
5
7
0.2%PCV
8
5.2±0.2
3.3±0.5**ΔΔ
1.3±0.3**ΔΔ
, 百拇医药
1.0±0.2**ΔΔ
1%PCV
8
5.1±0.3
3.2±0.4**ΔΔ
1.4±0.5**ΔΔ
1.0±0.3**ΔΔ
1%ACV
8
5.1±0.3
4.4±0.2**
, 百拇医药
2.5±0.3**
1.6±0.1**
Negative Control
8
5.0±0.4
5.0±0.3
4.8±0.3
1.0±0.4
**P<0.01(The comparison of viral titers between the various drug treatments and negative group);ΔΔ P<0.01(The comparison of viral titers between PCV and ACV)
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3 讨论
阿昔洛韦(ACV)用于治疗疱疹病毒所致的疾病已有十余年，该药虽有疗效可靠，不良反应少的优点，但近年来，有耐药性的报道，使其应用受限〔7〕.喷昔洛韦(PCV)是一种新开发的抗疱疹病毒药物，该药的作用机制与ACV一样，为DNA多聚酶选择性抑制剂〔8〕.PCV进入疱疹病毒感染的细胞内被迅速地磷酸化形成PCV-Tp.PCV-Tp易被感染细胞浓集，且其维持的时间要比ACV-Tp长.
我们建立了豚鼠单纯疱疹的模型，并用于比较PCV 与ACV对单纯疱疹的疗效及对HSV-1抑制作用.结果证明在PCV的浓度仅为ACV的1/5，用药次数比ACP要少1/4的情况下，PCV对疱疹的疗效要优于ACV；且对HSV-1抑制作用比ACV强.这些结果与上述国外在细胞水平所得的结论相符.这说明PCV在局部用药的情况下其抗疱疹病毒的活性要比 ACV高，其机理与该药在皮肤组织内的有效浓度要比ACV高，且维持的时间要长有关.我们的研究不仅为抗疱疹病毒药物的疗效评估提供了一个实用、简易的动物模型，而且为PCV的临床应用提供了有力的实验依据.
, http://www.100md.com
参考文献
1，Sutton D,Boyd M R.Comparative activity of peniclovir and acyclovir in mice infected intraperitoneally with Herpes simplex virus type 1 sc16.Antimicrob Agenchemother，1993，37(4):642～645
2，Boyd M R， Bacon T H， Sutton D,et al.Antiherpesvirus activity of (4-hydroxy-3-hydroxymethyl-yl)guanine(BRL.39123)in cell culture.Antimicrob Agents Chemother,1989,30:598～605
3，Weinberg A，Jane B B,Hellen B M,et al.In vitro activities of penciclovir and acyclovir against Herpes simplex virus type 1 and type 2. Antimicrob Agent Chemother,1992,36(9):2037～2038
, http://www.100md.com
4，Gheeraet P，Program.Abstr.32nd.Interscie Conf Artimicro Agent Chemother.Abstr 1994，38(1):1108～115
5，Boyd M R,Bacon T H,Sutton D.Antiherpesvirus activity of(-4-hydnoxy-3-hydroxymethyt-but-1-yl)guanine(BRl 39123) in animals.Antimicrob Agents Chemother，1988，32:358～363
6，Cunninghan C R.Quantitative and enumerative titeration of virus in cell cultures,Tissue culture;Methods and application.New york:Academie press,1993.527～532
, 百拇医药
7，Ellis M N,Martin J L,Darlton S D，et al. Induction of acyclovir resistarce mutants of Herpes simplex virus type1 in athymic nude mice.J Antimicrob Chemother，1986,18 (suppl:B):95～101
8，Earnshow D L,Bacon T H, Darlison S J,et al. Mode of antiviral action of pencielovir in MRC-5 cell infected with Herpes simplex virus type 1(HSV-1), HSV-2, and varicella-zoster virus. Antimicrobl Agent Chmother，1992, 36(12):2747～2757
收稿日期:1999-11-29
, 百拇医药
单位：湖北医科大学病毒研究所临床病毒室，武汉 430071
关键词：喷昔洛韦；阿昔洛韦；1型单纯疱疹病毒；单纯疱疹；疗效
沈阳药科大学学报000422 摘 要 为比较喷昔洛韦(PCV)与阿昔洛韦(ACV)对单纯疱疹的疗效，建立了豚鼠皮肤单纯疱疹的模型，比较不同时间的疗效积分和皮损处1型单纯疱疹病毒(HSV-1)发现：0.2%PCV组对疱疹疗效及对HSV-1抑制作用要比1%ACV组好，表明PCV治疗单纯疱疹的疗效要比ACV好，其抗HSV-1活性也比ACV高.
分类号 R978.7
The Comparison of Efficacies of Penciclovir and Acyclovir Treating the Herpes Simplex in Guinea-Pigs
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Li Xiangqun,Mao Lin,Wen Li,Hou Wei,Xiao Hong,Yang Zhanqiu
(Department of Clinical Virology, Institute of Viral Research of Hubei Medical University, Wuhan 430071)
Abstract To compare efficacies of penciclovir and acyclovir treating herpes simplex in guinea-pigs, the animal model of guinea-pig skin herpes simplex was established. The therapeutic score and the viral titers were recorded and compared in various drug treatment groups of different periods after treating. The results showed that the therapeutic effects of the 0.2% PCV group on herpes simplex was better than that of the 1% ACV, and the viral titer in skin lesion of the 0.2% PCV group was lower than that of the 1% ACV group. These results suggested that the therapeutic efficacies of PCV on herpes simplex was better than that of ACV, and the antiviral activity of PCV was higher than that of ACV.
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Key words penciclovir；acyclovir；herpes simplex；herpes simplex virus type l；therapeutic effect
喷昔洛韦(penciclovir, PCV)为1996年上市 的抗疱疹病毒药，该药为无环鸟苷的衍生物，其抗病毒谱、结构和代谢与阿昔洛韦(acyclovir, ACV)相同〔1，2〕.但其活性形式-喷昔洛韦三磷酸(PCV-Tp)在细胞内的半衰期为10 h，比阿昔洛韦三磷酸(ACV-Tp)要长14倍〔3〕.在细胞水平上已证实，PCV抗疱疹病毒的活性要比ACV 强.但在疱疹病毒性疾病的动物模型水平的两药疗效比较研究却鲜有报道.本研究建立了豚鼠皮肤单纯疱疹的动物模型，并用之比较PCV和ACV对皮肤单纯疱疹的疗效.
1 材料与方法
病毒与细胞 1型单纯疱疹病毒(HSV-1)SM-44及Hep-2细胞由本室保存，HSV-1在Hep-2细胞上增殖，实验用病毒的滴度为106 TCID50/0.1 mL.
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动物 雄性豚鼠，体重为300～350 g，共160只，购自湖北医科大学动物中心.
药物 喷昔洛韦霜剂(0.2%，1%)及1%阿昔洛韦霜剂，由湖北省医药工业研究所熊慧清高级工程师惠赠.
1.1 豚鼠分组
将豚鼠随机分为4组：2种不同浓度PCV组(0.2%、1% PCV)，1%ACV组，阴性对照组(PCV霜剂的基质)；每组40只豚鼠，再分5个平行组，其中1个平行组用于观察疱疹的疗效，另4个平行组用于检测用药后不同时间病毒滴度.
1.2 豚鼠皮肤单纯疱疹动物模型建立
将自制的动物去毛剂(硫化钡25 g、面粉35 g、滑石粉35 g、肥皂粉5 g.用双蒸水配成糊状)涂抹在豚鼠背部，直径约为3 cm的园形，15 min后，用止血钳脱毛，暴露皮肤，用碘酒、酒精消毒后，皮下注射0.1 mL纯化了的HSV-1(106 TCID50/0.1 mL)病毒液，另一处注射0.1 mL eagle细胞培养液作为阴性对照，观察并记录疱疹出现时间和特征.
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1.3 给药量及方法
待动物出现明显疱疹时(HSV-1感染后第3天)将PCV. ACV霜剂用50℃水浴加热，用微量移液器吸取各种药100 μL滴在皮损处，PCV组，2次/隔日，共4次；ACV组，4次/日连用4天，阴性对照用同量的溶剂4次/日，连用4天.
1.4 疗效判定
采用积分法来表示疱疹不同愈合程度，1分：脓疱干枯，且有结痂；2分：50%～70%痂块脱落;3分：70%～90%痂块脱落；4分：痂块完全脱落，疱疹愈合，记录各用药组不同时间豚鼠疱疹疗效积分.
1.5 治疗后不同时间病损处病毒滴度的检测
在用药后第1、3、5、7天处死豚鼠，切取皮损处皮肤组织0.5 g.用无菌眼科剪剪碎迅速置于液氮中，在冰冻状态下研磨成粉状，立即加4.5 mL eagle细胞培养基，4℃下，3 000 r/min,离心10 min，取上清，该上清视为1∶10的病毒液，再作10倍的系列稀释，用Hep-2细胞在24孔板上检测病毒，并按Reed-Muench法计算病毒的滴度(TCID50)〔6〕.
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1.6 统计学分析方法
采用t检验进行实验数据的分析和比较.
2 结果
2.1 豚鼠皮肤疱疹的特点
在HSV-1感染后1天内，局部皮肤无变化.第二天感染处皮肤出现约0.3 cm的红斑，以后红斑逐渐增多且融合，皮肤红肿范围逐渐增大，在感染的68 h，融合红斑出现脓疱，周围皮肤红肿范围约0.6 cm，呈典型的皮肤单纯疱疹病变，以后疱疹逐渐结痂，在感染后第6天结痂开始脱落，至14天，结痂完全脱落，疱疹痊愈，阴性对照处皮肤无任何变化.
2.2 PCV与ACV治疗疱疹的疗效比较
各用药组疗效积分见表1，从表1中可见自治疗后第3天各用药组与阴性对照组比较有疗效，有显著性差别(P<0.01)；PCV组与AVC组比较，亦有显著性差别(P<0.01).
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Tab.1 Comparison of efficacies of PCV and ACV treating the skin herpes simplex in guinea-pigs Drug treatment
Lesion number
Times after treatment(d)/therapeutic score(x±SD)
1
3
5
7
0.2%PCV
8
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0.4±0.4
2.2±0.3**ΔΔ
2.8±0.4**ΔΔ
3.5±0.4**ΔΔ
1%PCV
8
0.4±0.2
2.5±0.3**ΔΔ
3.0±0.5**ΔΔ
4.0±0.0**ΔΔ
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1%ACV
8
0.5±0.1
1.9±0.5**
2.4±0.3**
3.0±0.4**
Negative Control
8
0.4±0.6
0.4±0.8
0.5±0.3
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1.0±0.5
**P<0.01(The comparison of therapeutic score of various drug treatments and negative control);ΔΔ P<0.01(The comparison of therapeutic score of PCV and ACV)2.3 PCV与ACV对皮肤损处HSV-1病毒抑制比较
在用药后第3天各组药即显示抑制HSV-1的作用，治疗后的第5天病毒滴度继续下降，至第7天病毒滴度较前两次都低，但下降幅度不及以前，比较不同时间各用药组与阴性对照组的病毒滴度，发现在用药的第3、5、7天，用药组豚鼠皮损处的病毒滴度较同时间阴性对照组滴度低，有显著性差别(P<0.01).PCV组与ACV 组在抑制HSV-1病毒的作用亦有差别(P<0.01)，结果见表2.Tab.2 Comparison of HSV-1 inhibition of PCV and ACV in herpes simplex lesion of guinea-pigs Drug treatment
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Lesion number
Times after treating(d)/Viral titers(TCID50)(x±SD)
1
3
5
7
0.2%PCV
8
5.2±0.2
3.3±0.5**ΔΔ
1.3±0.3**ΔΔ
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1.0±0.2**ΔΔ
1%PCV
8
5.1±0.3
3.2±0.4**ΔΔ
1.4±0.5**ΔΔ
1.0±0.3**ΔΔ
1%ACV
8
5.1±0.3
4.4±0.2**
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2.5±0.3**
1.6±0.1**
Negative Control
8
5.0±0.4
5.0±0.3
4.8±0.3
1.0±0.4
**P<0.01(The comparison of viral titers between the various drug treatments and negative group);ΔΔ P<0.01(The comparison of viral titers between PCV and ACV)
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3 讨论
阿昔洛韦(ACV)用于治疗疱疹病毒所致的疾病已有十余年，该药虽有疗效可靠，不良反应少的优点，但近年来，有耐药性的报道，使其应用受限〔7〕.喷昔洛韦(PCV)是一种新开发的抗疱疹病毒药物，该药的作用机制与ACV一样，为DNA多聚酶选择性抑制剂〔8〕.PCV进入疱疹病毒感染的细胞内被迅速地磷酸化形成PCV-Tp.PCV-Tp易被感染细胞浓集，且其维持的时间要比ACV-Tp长.
我们建立了豚鼠单纯疱疹的模型，并用于比较PCV 与ACV对单纯疱疹的疗效及对HSV-1抑制作用.结果证明在PCV的浓度仅为ACV的1/5，用药次数比ACP要少1/4的情况下，PCV对疱疹的疗效要优于ACV；且对HSV-1抑制作用比ACV强.这些结果与上述国外在细胞水平所得的结论相符.这说明PCV在局部用药的情况下其抗疱疹病毒的活性要比 ACV高，其机理与该药在皮肤组织内的有效浓度要比ACV高，且维持的时间要长有关.我们的研究不仅为抗疱疹病毒药物的疗效评估提供了一个实用、简易的动物模型，而且为PCV的临床应用提供了有力的实验依据.
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1，Sutton D,Boyd M R.Comparative activity of peniclovir and acyclovir in mice infected intraperitoneally with Herpes simplex virus type 1 sc16.Antimicrob Agenchemother，1993，37(4):642～645
2，Boyd M R， Bacon T H， Sutton D,et al.Antiherpesvirus activity of (4-hydroxy-3-hydroxymethyl-yl)guanine(BRL.39123)in cell culture.Antimicrob Agents Chemother,1989,30:598～605
3，Weinberg A，Jane B B,Hellen B M,et al.In vitro activities of penciclovir and acyclovir against Herpes simplex virus type 1 and type 2. Antimicrob Agent Chemother,1992,36(9):2037～2038
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4，Gheeraet P，Program.Abstr.32nd.Interscie Conf Artimicro Agent Chemother.Abstr 1994，38(1):1108～115
5，Boyd M R,Bacon T H,Sutton D.Antiherpesvirus activity of(-4-hydnoxy-3-hydroxymethyt-but-1-yl)guanine(BRl 39123) in animals.Antimicrob Agents Chemother，1988，32:358～363
6，Cunninghan C R.Quantitative and enumerative titeration of virus in cell cultures,Tissue culture;Methods and application.New york:Academie press,1993.527～532
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7，Ellis M N,Martin J L,Darlton S D，et al. Induction of acyclovir resistarce mutants of Herpes simplex virus type1 in athymic nude mice.J Antimicrob Chemother，1986,18 (suppl:B):95～101
8，Earnshow D L,Bacon T H, Darlison S J,et al. Mode of antiviral action of pencielovir in MRC-5 cell infected with Herpes simplex virus type 1(HSV-1), HSV-2, and varicella-zoster virus. Antimicrobl Agent Chmother，1992, 36(12):2747～2757
收稿日期:1999-11-29
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