不同条件下胆红素对血清肌酐测定的影响
作者：杨九华 邢凌生 吕礼应 黄 颖
单位：安徽医科大学第一附属医院检验科，合肥 230022
关键词：肌酸酐；血液；胆红素
安徽医科大学学报990627 中国图书资料分类法分类号 R914.4
关于血清肌酐测定的方法，长期以来一直沿用苦味酸法，近年用酶法测定逐渐普遍。苦味酸法测定黄疸血清肌酐时，受胆红素干扰很大，使肌酐测定结果偏低甚至出现负值。在消除胆红素对血清肌酐测定干扰的方法中，酶法被认为是较为理想的方法之一〔1，2〕。但在研究胆红素对肌酐测定的影响中，以往〔3，4〕多采用标准品胆红素作干扰物。资料表明〔2〕标准品胆红素在较高浓度下(200 μmol.L-1)对苦味酸法测定血清肌酐无明显干扰，而在日常工作中，当血清胆红素达到此浓度时实际干扰很大。提示不同来源及不同浓度胆红素对酶法及苦味酸法测定血清肌酐的影响不同，本研究旨在对此现象做初步探讨。
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1 材料与方法
1.1 试剂和仪器 酶法测定肌酐试剂盒：科华—东菱诊断用品有限公司提供。苦味酸法(Jaffe反应)测定肌酐试剂盒：长征医学有限公司提供。胆红素标准品(10 mg总胆红素干粉)及测定药盒：元生公司(台湾)提供。高胆红素血清、胆汁样品：来源于住院病人。仪器：岛津CL-7200型全自动生化分析仪(日本)。
1.2 测定方法 测定肌酐和胆红素的过程及参数均按试剂说明书操作，并根据本实验室条件略作改进。
1.2.1 留取不同浓度胆红素血清120份(正常血清20份，黄疸血清100份)，采用两种方法分别测定肌酐浓度，观察其相关性。
1.2.2 留取10份高肌酐正常胆红素血清，分别加入不同浓度的标准品胆红素(干粉以水溶解)或胆汁，使血清胆红素和肌酐(根据计算)达某一水平，再以两种方法分别测定肌酐浓度，观察其与理论值的差异。
, 百拇医药
2 结果
对100例总胆红素水平在35～540 μmol.L-1的血清，两法测定肌酐的均值分别为酶法76.27 μmol.L-1和苦味酸法64.36 μmol.L-1；相关系数r=0.93，P<0.01(见图1)，回归方程
=0.9X-5.2。结果显示，当胆红素浓度<100 μmol.L-1时，两法测定肌酐差异无显著性；当胆红素浓度>100 μmol.L-1时，两法测定结果差异有高度显著性。根据不同浓度胆红素水平进行分组处理，两法测定结果的差值及配对t检验见表1。
表1 胆红素浓度对酶法与苦味酸法测定肌酐干扰的比较(
±s) 胆红素浓度(μmol.L-1)
, 百拇医药
n
肌酐浓度(μmol.L-1)
差值
t
酶法
苦味酸法
<21
20
60.4±18.9
61.5±16.1
-1.1±5.3
0.9172
, 百拇医药
35.1～98.8
46
86.6±490.4
80.9±42.6
1.2±5.7
1.4758
102.2～199.6
22
65.5±20.7
58.2±22.0
7.3±4.9
7.0361**
, 百拇医药
200.7～472.3
19
70.0±25.5
43.0±28.9
27.0±20.5
5.7541**
512.6～543.2
13
36.7±5.6
-5.9±19.8
42.63±11.7
, 百拇医药
13.1819**
两法比较：**P<0.01
图1 两种方法对不同浓度胆红素时血清肌酐测定的相关性
在非黄疸血清中加入标准品胆红素或胆汁胆红素，分别测得肌酐结果的均数与理论值比较的单侧t检验见表2。加标准品胆红素，当总胆红素浓度达480 μmol.L-1时，对苦味酸法有明显干扰，浓度达830 μmol.L-1时，对酶法仍无干扰；加胆汁胆红素，当总胆红素浓度达200 μmol.L-1时对苦味酸法有明显干扰，当总胆红素浓度达480 μmol.L-1时，对酶法也产生明显干扰。
, 百拇医药
表2 血清中加入不同来源胆红素对肌酐测定的影响(±s) 胆红素浓度(μmol.L-1)
n
肌酐理
论均值
肌酐测定值(μmol.L-1)
加标准品
加胆汁
酶法
苦味酸法
酶法
, 百拇医药
苦味酸法
119
10
140
141±3.2
144±6.3
140±1.1
138±4.3
200
10
140
141±3.3
139±5.4
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138±4.3
120±19.5*
240
10
140
142±4.2
138±4.2
136.5±5.5
97±22.1**
480
10
140
138±4.2
, http://www.100md.com
125.5±18.7*
131±11.3*
63.6±24.4**
830
10
140
143.6±6.1
112.9±28.5**
117.75±17.1*
11.15±21.1**
与理论均值比较：*P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药 3 讨论
胆红素对Jaffe反应的干扰，主要是由于胆红素的氧化产物减少了Jaffe反应的吸收率，从而对肌酐的测定产生负干扰；胆红素酶法测定血清肌酐的干扰原因还不清楚。我们对不同程度黄疸血清的肌酐测定发现：酶法与苦味酸法有较好的相关性，但从分组处理看，随总胆红素浓度增加，两法测定的肌酐浓度差异有显著性或高度显著性。据此可推论：当胆红素浓度在100 μmol.L-1以内时，对肌酐的测定几乎不产生影响；100～400 μmol.L-1时，对苦味酸法产生明显干扰，随总胆红素浓度的递增，负干扰增大，对酶法干扰较苦味酸法小；而在400 μmol.L-1以上时，对两者均产生明显干扰，但对酶法相对较轻。
文献认为在血清胆红素浓度<200 μmol.L-1时对其无明显干扰〔2〕，这与本研究的结果不相一致，但其实验中采用的是标准品胆红素作为肌酐测定的干扰物。本组实验采用胆汁作为肌酐测定的干扰物，发现当胆红素浓度<200 μmol.L-1时也有明显的干扰，这一点证实了上述推论。
, 百拇医药
消除胆红素对肌酐测定干扰的方法学研究报道较多〔3～5〕，酶法被认为是较理想的方法。但有关胆红素对酶法测定血清肌酐的干扰方面的报道甚少。我们的研究结果显示，标准品胆红素对血清肌酐测定的干扰仅表现在苦味酸法中，对酶法无干扰；但当以胆汁胆红素作干扰时，对两者均有干扰，但对酶法干扰较轻。因而，消除胆红素对肌酐测定的干扰需进一步探讨。
标准品胆红素在极高浓度下(830 μmol.L-1)对酶法测定血清肌酐无明显干扰；而苦味酸法测定血清肌酐，当标准品胆红素浓度达480 μmol.L-1时有明显干扰，且随着胆红素浓度的增加，干扰的程度越来越明显。而加入胆汁作为干扰物，结果则明显不同，当胆红素浓度达200 μmol.L-1时，苦味酸法就有明显干扰；当胆红素浓度大于或等于480 μmol.L-1时，对酶法也产生明显干扰，且干扰的程度随胆红素浓度的增加而上升。而对苦味酸法，干扰更加明显；在黄疸血清中，当胆红素浓度大于或等于224 μmol.L-1时产生显著的干扰，且与胆红素浓度成正比。提示标准品胆红素与胆汁胆红素及黄疸血清胆红素存在着一定的差异，这与Beyne等〔2〕的结论相一致。这可能由于标准品中的胆红素(元生公司未提供确切成分)多为游离(非结合)胆红素〔6〕，而胆汁胆红素与血清胆红素成分以结合胆红素为主，因受胆汁浓缩，肠肝循环及肝脏处理等诸多过程的影响，使其与标准品胆红素在结构和组成上有一定差别。关于这方面我们将做更深入的研究。
, 百拇医药
作者简介：杨九华，女，37岁，主管技师
参考文献
1 Harmoinen AP. Bilirubin and Metamizol do not Interfere with the Randox Enzymatic Creatinine Test. An Evaluation of A New Enzymatic Creatinine Determination Method. Eur J Clin Chem Clin Biochem, 1996;34(12):975～976
2 Beyne P, Letteron P, Herve C et al. Bilirubin Interference with Determination of Creatinine, Lactate, Phosphorus, and Uric Acid on Beckman Synchron CX7. Clin Chem, 1996;42(6):988～989
, http://www.100md.com
3 陈伟英，毛远丽，陈小倩等.胆红素氧化酶消除血清肌酐测定中胆红素的干扰.中华医学检验杂志，1995；18(3))：143～145
4 石凌波，林龙顺，刘书霞.速率-B法消除胆红素对血清肌酐的干扰.临床检验杂志，1997；15(3)：145～147
5 王忠诚，曾祝伦.用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学测定的影响.临床检验杂志，1995；13(1)：26～27
6 叶应妩，王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京：东南大学出版社出版发行，1997：248
1999-07-06收稿，1999-10-14修回, 百拇医药
单位：安徽医科大学第一附属医院检验科，合肥 230022
关键词：肌酸酐；血液；胆红素
安徽医科大学学报990627 中国图书资料分类法分类号 R914.4
关于血清肌酐测定的方法，长期以来一直沿用苦味酸法，近年用酶法测定逐渐普遍。苦味酸法测定黄疸血清肌酐时，受胆红素干扰很大，使肌酐测定结果偏低甚至出现负值。在消除胆红素对血清肌酐测定干扰的方法中，酶法被认为是较为理想的方法之一〔1，2〕。但在研究胆红素对肌酐测定的影响中，以往〔3，4〕多采用标准品胆红素作干扰物。资料表明〔2〕标准品胆红素在较高浓度下(200 μmol.L-1)对苦味酸法测定血清肌酐无明显干扰，而在日常工作中，当血清胆红素达到此浓度时实际干扰很大。提示不同来源及不同浓度胆红素对酶法及苦味酸法测定血清肌酐的影响不同，本研究旨在对此现象做初步探讨。
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1 材料与方法
1.1 试剂和仪器 酶法测定肌酐试剂盒：科华—东菱诊断用品有限公司提供。苦味酸法(Jaffe反应)测定肌酐试剂盒：长征医学有限公司提供。胆红素标准品(10 mg总胆红素干粉)及测定药盒：元生公司(台湾)提供。高胆红素血清、胆汁样品：来源于住院病人。仪器：岛津CL-7200型全自动生化分析仪(日本)。
1.2 测定方法 测定肌酐和胆红素的过程及参数均按试剂说明书操作，并根据本实验室条件略作改进。
1.2.1 留取不同浓度胆红素血清120份(正常血清20份，黄疸血清100份)，采用两种方法分别测定肌酐浓度，观察其相关性。
1.2.2 留取10份高肌酐正常胆红素血清，分别加入不同浓度的标准品胆红素(干粉以水溶解)或胆汁，使血清胆红素和肌酐(根据计算)达某一水平，再以两种方法分别测定肌酐浓度，观察其与理论值的差异。
, 百拇医药
2 结果
对100例总胆红素水平在35～540 μmol.L-1的血清，两法测定肌酐的均值分别为酶法76.27 μmol.L-1和苦味酸法64.36 μmol.L-1；相关系数r=0.93，P<0.01(见图1)，回归方程
=0.9X-5.2。结果显示，当胆红素浓度<100 μmol.L-1时，两法测定肌酐差异无显著性；当胆红素浓度>100 μmol.L-1时，两法测定结果差异有高度显著性。根据不同浓度胆红素水平进行分组处理，两法测定结果的差值及配对t检验见表1。表1 胆红素浓度对酶法与苦味酸法测定肌酐干扰的比较(
±s) 胆红素浓度(μmol.L-1), 百拇医药
n
肌酐浓度(μmol.L-1)
差值
t
酶法
苦味酸法
<21
20
60.4±18.9
61.5±16.1
-1.1±5.3
0.9172
, 百拇医药
35.1～98.8
46
86.6±490.4
80.9±42.6
1.2±5.7
1.4758
102.2～199.6
22
65.5±20.7
58.2±22.0
7.3±4.9
7.0361**
, 百拇医药
200.7～472.3
19
70.0±25.5
43.0±28.9
27.0±20.5
5.7541**
512.6～543.2
13
36.7±5.6
-5.9±19.8
42.63±11.7
, 百拇医药
13.1819**
两法比较：**P<0.01
图1 两种方法对不同浓度胆红素时血清肌酐测定的相关性
在非黄疸血清中加入标准品胆红素或胆汁胆红素，分别测得肌酐结果的均数与理论值比较的单侧t检验见表2。加标准品胆红素，当总胆红素浓度达480 μmol.L-1时，对苦味酸法有明显干扰，浓度达830 μmol.L-1时，对酶法仍无干扰；加胆汁胆红素，当总胆红素浓度达200 μmol.L-1时对苦味酸法有明显干扰，当总胆红素浓度达480 μmol.L-1时，对酶法也产生明显干扰。
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表2 血清中加入不同来源胆红素对肌酐测定的影响(
±s) 胆红素浓度(μmol.L-1)n
肌酐理
论均值
肌酐测定值(μmol.L-1)
加标准品
加胆汁
酶法
苦味酸法
酶法
, 百拇医药
苦味酸法
119
10
140
141±3.2
144±6.3
140±1.1
138±4.3
200
10
140
141±3.3
139±5.4
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138±4.3
120±19.5*
240
10
140
142±4.2
138±4.2
136.5±5.5
97±22.1**
480
10
140
138±4.2
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125.5±18.7*
131±11.3*
63.6±24.4**
830
10
140
143.6±6.1
112.9±28.5**
117.75±17.1*
11.15±21.1**
与理论均值比较：*P<0.05，**P<0.01
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胆红素对Jaffe反应的干扰，主要是由于胆红素的氧化产物减少了Jaffe反应的吸收率，从而对肌酐的测定产生负干扰；胆红素酶法测定血清肌酐的干扰原因还不清楚。我们对不同程度黄疸血清的肌酐测定发现：酶法与苦味酸法有较好的相关性，但从分组处理看，随总胆红素浓度增加，两法测定的肌酐浓度差异有显著性或高度显著性。据此可推论：当胆红素浓度在100 μmol.L-1以内时，对肌酐的测定几乎不产生影响；100～400 μmol.L-1时，对苦味酸法产生明显干扰，随总胆红素浓度的递增，负干扰增大，对酶法干扰较苦味酸法小；而在400 μmol.L-1以上时，对两者均产生明显干扰，但对酶法相对较轻。
文献认为在血清胆红素浓度<200 μmol.L-1时对其无明显干扰〔2〕，这与本研究的结果不相一致，但其实验中采用的是标准品胆红素作为肌酐测定的干扰物。本组实验采用胆汁作为肌酐测定的干扰物，发现当胆红素浓度<200 μmol.L-1时也有明显的干扰，这一点证实了上述推论。
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消除胆红素对肌酐测定干扰的方法学研究报道较多〔3～5〕，酶法被认为是较理想的方法。但有关胆红素对酶法测定血清肌酐的干扰方面的报道甚少。我们的研究结果显示，标准品胆红素对血清肌酐测定的干扰仅表现在苦味酸法中，对酶法无干扰；但当以胆汁胆红素作干扰时，对两者均有干扰，但对酶法干扰较轻。因而，消除胆红素对肌酐测定的干扰需进一步探讨。
标准品胆红素在极高浓度下(830 μmol.L-1)对酶法测定血清肌酐无明显干扰；而苦味酸法测定血清肌酐，当标准品胆红素浓度达480 μmol.L-1时有明显干扰，且随着胆红素浓度的增加，干扰的程度越来越明显。而加入胆汁作为干扰物，结果则明显不同，当胆红素浓度达200 μmol.L-1时，苦味酸法就有明显干扰；当胆红素浓度大于或等于480 μmol.L-1时，对酶法也产生明显干扰，且干扰的程度随胆红素浓度的增加而上升。而对苦味酸法，干扰更加明显；在黄疸血清中，当胆红素浓度大于或等于224 μmol.L-1时产生显著的干扰，且与胆红素浓度成正比。提示标准品胆红素与胆汁胆红素及黄疸血清胆红素存在着一定的差异，这与Beyne等〔2〕的结论相一致。这可能由于标准品中的胆红素(元生公司未提供确切成分)多为游离(非结合)胆红素〔6〕，而胆汁胆红素与血清胆红素成分以结合胆红素为主，因受胆汁浓缩，肠肝循环及肝脏处理等诸多过程的影响，使其与标准品胆红素在结构和组成上有一定差别。关于这方面我们将做更深入的研究。
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作者简介：杨九华，女，37岁，主管技师
参考文献
1 Harmoinen AP. Bilirubin and Metamizol do not Interfere with the Randox Enzymatic Creatinine Test. An Evaluation of A New Enzymatic Creatinine Determination Method. Eur J Clin Chem Clin Biochem, 1996;34(12):975～976
2 Beyne P, Letteron P, Herve C et al. Bilirubin Interference with Determination of Creatinine, Lactate, Phosphorus, and Uric Acid on Beckman Synchron CX7. Clin Chem, 1996;42(6):988～989
, http://www.100md.com
3 陈伟英，毛远丽，陈小倩等.胆红素氧化酶消除血清肌酐测定中胆红素的干扰.中华医学检验杂志，1995；18(3))：143～145
4 石凌波，林龙顺，刘书霞.速率-B法消除胆红素对血清肌酐的干扰.临床检验杂志，1997；15(3)：145～147
5 王忠诚，曾祝伦.用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学测定的影响.临床检验杂志，1995；13(1)：26～27
6 叶应妩，王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京：东南大学出版社出版发行，1997：248
1999-07-06收稿，1999-10-14修回, 百拇医药