病毒性肝炎患者HGV-RNA的检测及其临床意义
作者：徐芳芹1 汤 伟1 张冬雷2 王惠民2
单位：南通医学院附属医院 江苏省南通市 226001
关键词：肝炎，病毒性，人；肝硬化；RNA，病毒/分析；聚合酶链反应
华人消化杂志/980745
Subject headings hepatitis, viral, human; liver cirrhosis; RNA,viral/analysis; polymerase chain reaction; hepatitis G virus
自1996年美国的Linnen et al[1]正式报道庚型肝炎病毒(HGV)存在以来，国内外许多研究人员对此种新型肝炎病毒在引起人类肝炎—庚型肝炎(HG)中的作用进行了研究，但目前对HG的研究国外报道较多[2]，而国内对HGV感染的流行病学和临床特点还了解甚少. 为此，我们用RT-PCR法对75例病毒性肝炎患者进行了HGV-RNA的检测，并对其临床意义作一初探.
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1 对象和方法
1.1 对象 75例标本均系1997-08/11我院传染科门诊及病房收治的病毒性肝炎患者的血清. 其中男65例，女9例，年龄20岁～62岁，平均年龄39.2岁. 急性肝炎(AH)23例，慢性肝炎(CH)33例，肝炎后肝硬变(HLC)15例，重型肝炎(SH)4例. 诊断和分型依据1995年(北京)第5次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准.
1.2 试剂 HGV-RNA和HCV-RNA检测所用逆转录酶系Promega公司产品，异硫氰酸胍购自德国Serva公司，RNA酶抑制剂与Taq酶系华美公司产品，引物均由中科院上海细胞所合成. HBV-DNA检测所用试剂由我院酶学研究室自行配制. 抗HAV-IgM与抗HEV-IgM检测试剂分别由深圳月亮湾生物工程有限公司与3V生物工程有限公司提供. 检测肝功能仪器系美国TECHNICON公司生产的RA-XT型全自动生化分析仪.
, 百拇医药
1.3 方法 HGV-RNA与HCV-RNA检测均采用RT-PCR法，血清用量为50μl，用异硫氰酸胍裂解，酚-氯仿异戊醇抽提，经反转录和两次扩增后再经聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴乙锭染色观察结果. HGV与HCV扩增产物分别为609bp与257bp. HGV产物经测试显示与Linnen et al[1]用常锦红et al[3]报道的序列同源性分别为90.3%与92.6%，具体操作方法见王惠民et al[4]方法. HBV-DNA检测采用PCR方法. 抗HAV-IgM与抗HEV-IgM检测均采用ELISA技术. 肝功能由全自动生化分析仪检测.
2 结果
2.1 在75例病毒性肝炎患者中共检出HGV-RNA阳性10例，其临床资料表1.
表1 10例HGV-RNA(+)者临床资料
病例
, 百拇医药
编号
临床
诊断
性
别
年
龄
流行病学
资料
血清谷丙转
氨酶μ/L
HBV-
DNA
, 百拇医药 HCV-
RNA
抗HAV-
IgM
抗HEV-
IgM
1
CH
男
54
有受血史
693
+
, 百拇医药 +
-
-
2
HLC
男
59
有受血史
45
+
-
-
-
3
, 百拇医药
HLC
男
28
51
+
-
-
+
4
CH
男
43
108
+
, 百拇医药
-
-
-
5
AH
男
35
181
-
-
-
-
6
CH
, http://www.100md.com
男
26
269
-
+
-
-
7
CH
男
30
有受血史
60
-
, 百拇医药
-
-
-
8
AH
男
42
有受血史
263
+
-
-
-
9
, http://www.100md.com
AH
男
50
392
+
+
+
-
10
CH
男
42
有受血史
291
, 百拇医药
+
+
-
-
2.2 75例病毒性肝炎患者感染HAV，HBV，HCV，HEV及HGV的情况比较 表2.
表2 75例病毒性肝炎患者病原学检测的结果比较
临床诊
断型别
n
(抗HAV IgM阳性数(%)
(HBV-DNA)
(HCV-RNA)
, 百拇医药
(抗HEV IgM)
(HGV-RNA)
(HGV-RNA
阳性数(%))
阳性数(%)
阳性数(%)
阳性数(%)
阳性数(%)
AH
23
6 (2.6)
10(43.4)
, 百拇医药
3 (13.0)
9 (39.1)
3( 13.0)
CH
33
23 (69.7)
8 (24.2)
7 (21.2)
5 (15.2)
HLC
15
9(60.0)
, 百拇医药
4 (26.7)
2 (13.3)
2 (13.3)
SH
4
3 (75.0)
1 (25.0)
1 (25.0)
Total
75
6 (8.0)
45 (60.0)
, 百拇医药
16(21.3)
19(25.3)
10(13.3)
3 讨论
近几年来，人们注意到在急、慢性输血后肝炎、散发性肝炎及暴发性肝炎中，有部分患者其真正的病原学尚不明确，提示可能有新的肝炎病毒存在. 1995年Simons et al[5，6]在非甲-戊型肝炎患者血浆中分离和克隆了一种新的人类肝炎相关的黄热病病毒基因，暂称之为HGV/GBV-C. 随着对HGV的深入研究，目前对HGV感染的流行特征、临床意义及其致病性均有了进一步的认识，国内外研究资料初步表明HGV在人群中有较高的感染率，HGV的传播途径与HBV和HCV相似，但对其致病性尚有争议[7].
本文对75例病毒性肝炎患者的血清标本同时进行HGV-RNA与HAV，HBV，HCV和HEV 5种肝炎病毒标志物检测. 结果显示：75例病毒性肝炎患者中有10例检出HGV-RNA，阳性率为13.3%，从这10例HGV感染者的临床资料中可以看出，HGV感染对象主要为男性中青年，约有50%的感染者(5/10)曾有过受血史，而且与HBV和HCV合并感染者占多数(8/10)，但2例单独HGV感染者的ALT水平(平均峰值120.5)显著低于HGV与HBV，HCV合并感染者(ALT平均峰值264.0). 提示HGV感染可能与输血有密切关系，HGV与HBV和HCV可能有相似的传播途径，即主要经血或肠道外途径传播，此结果与文献报道一致. 虽然2例单独HGV感染者的肝功能损害较HGV合并其他病毒感染者轻，尚不能完全说明HGV致病性大小，但表2结果显示，4例SH患者中无一例感染HGV，似可说明HGV的致病性较小. 本研究结果对于HG的预防和临床诊断具有一定的指导意义.
, 百拇医药
从本文研究的75例病毒性肝炎患者病原学检测结果的构成比中可以看出，患者感染HAV，HBV，HCV，HEV，和HGV的阳性检出率分别为8%，60%，21.3%，25.3%和13.3%，按病原检出率高低顺序，HGV排在第4位，提示HGV是南通地区病毒性肝炎的病因之一，但不是主要病因. 此外，表2结果还显示：在急性肝炎患者中有3例感染HGV，阳性率为13%(3/23)，而在慢性肝炎患者中则有5例感染HGV，阳性率为15.2%(5/33)，两者相比无显著性差异，提示HGV感染既可引起急性肝炎，也可引起慢性肝炎. 但这一结果也不能完全排除HGV感染者中部分系HGV携带者，其肝脏病变主要由其他肝炎病毒所致的可能性，因此，对于HGV感染的流行病学及临床特点还有待于扩大样本检测数进一步加以研究.
4 参考文献
1 Linnen J, Wages J, Zhang ZY, Fry KE, Krawczynski KE, Alter H et al. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusiontransmissible agent. Science, 1996;271(5248):505-508
, 百拇医药
2 彭宜红，庄辉. 庚型肝炎研究进展. 国外医学：流行病学传染病分册，1996；23(2)：72-75
3 常锦红，魏来，陶其敏. 庚型肝炎病毒非结构基因(NS)5区部分序列的一级结构及其变异. 中华医学杂志，1997；77(3)：178-182
4 王惠民，张冬雷，马达，郭乃洲. 二重RT-PCR同时检测HGV与HCV RNA. 临床检验杂志，1998；16(1)：14-16
5 Simons JN, Pilot MTJ, Leary TP, Dawson GJ, Desai SM, Schlauder GG et al. Identification of two flavivirus-like genomes in the GB hepatitis agent. Proc Natl Acad Sci USA, 1995;92(8):3401-3405
, 百拇医药
6 Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, Pilot MTJ, Muerhoff AS, Schlauder GG et al. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nature Medicine, 1995;1(6):564-569
7 朱永红，胡大荣. HGV/GBV-C感染的临床意义研究进展. 国外医学：流行病学传染病学分册，1997；24(5)：211-215
通讯作者 徐芳芹
收稿日期 1997-12-10 修回日期 1998-02-21, 百拇医药
单位：南通医学院附属医院 江苏省南通市 226001
关键词：肝炎，病毒性，人；肝硬化；RNA，病毒/分析；聚合酶链反应
华人消化杂志/980745
Subject headings hepatitis, viral, human; liver cirrhosis; RNA,viral/analysis; polymerase chain reaction; hepatitis G virus
自1996年美国的Linnen et al[1]正式报道庚型肝炎病毒(HGV)存在以来，国内外许多研究人员对此种新型肝炎病毒在引起人类肝炎—庚型肝炎(HG)中的作用进行了研究，但目前对HG的研究国外报道较多[2]，而国内对HGV感染的流行病学和临床特点还了解甚少. 为此，我们用RT-PCR法对75例病毒性肝炎患者进行了HGV-RNA的检测，并对其临床意义作一初探.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 75例标本均系1997-08/11我院传染科门诊及病房收治的病毒性肝炎患者的血清. 其中男65例，女9例，年龄20岁～62岁，平均年龄39.2岁. 急性肝炎(AH)23例，慢性肝炎(CH)33例，肝炎后肝硬变(HLC)15例，重型肝炎(SH)4例. 诊断和分型依据1995年(北京)第5次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准.
1.2 试剂 HGV-RNA和HCV-RNA检测所用逆转录酶系Promega公司产品，异硫氰酸胍购自德国Serva公司，RNA酶抑制剂与Taq酶系华美公司产品，引物均由中科院上海细胞所合成. HBV-DNA检测所用试剂由我院酶学研究室自行配制. 抗HAV-IgM与抗HEV-IgM检测试剂分别由深圳月亮湾生物工程有限公司与3V生物工程有限公司提供. 检测肝功能仪器系美国TECHNICON公司生产的RA-XT型全自动生化分析仪.
, 百拇医药
1.3 方法 HGV-RNA与HCV-RNA检测均采用RT-PCR法，血清用量为50μl，用异硫氰酸胍裂解，酚-氯仿异戊醇抽提，经反转录和两次扩增后再经聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴乙锭染色观察结果. HGV与HCV扩增产物分别为609bp与257bp. HGV产物经测试显示与Linnen et al[1]用常锦红et al[3]报道的序列同源性分别为90.3%与92.6%，具体操作方法见王惠民et al[4]方法. HBV-DNA检测采用PCR方法. 抗HAV-IgM与抗HEV-IgM检测均采用ELISA技术. 肝功能由全自动生化分析仪检测.
2 结果
2.1 在75例病毒性肝炎患者中共检出HGV-RNA阳性10例，其临床资料表1.
表1 10例HGV-RNA(+)者临床资料
病例
, 百拇医药
编号
临床
诊断
性
别
年
龄
流行病学
资料
血清谷丙转
氨酶μ/L
HBV-
DNA
, 百拇医药 HCV-
RNA
抗HAV-
IgM
抗HEV-
IgM
1
CH
男
54
有受血史
693
+
, 百拇医药 +
-
-
2
HLC
男
59
有受血史
45
+
-
-
-
3
, 百拇医药
HLC
男
28
51
+
-
-
+
4
CH
男
43
108
+
, 百拇医药
-
-
-
5
AH
男
35
181
-
-
-
-
6
CH
, http://www.100md.com
男
26
269
-
+
-
-
7
CH
男
30
有受血史
60
-
, 百拇医药
-
-
-
8
AH
男
42
有受血史
263
+
-
-
-
9
, http://www.100md.com
AH
男
50
392
+
+
+
-
10
CH
男
42
有受血史
291
, 百拇医药
+
+
-
-
2.2 75例病毒性肝炎患者感染HAV，HBV，HCV，HEV及HGV的情况比较 表2.
表2 75例病毒性肝炎患者病原学检测的结果比较
临床诊
断型别
n
(抗HAV IgM阳性数(%)
(HBV-DNA)
(HCV-RNA)
, 百拇医药
(抗HEV IgM)
(HGV-RNA)
(HGV-RNA
阳性数(%))
阳性数(%)
阳性数(%)
阳性数(%)
阳性数(%)
AH
23
6 (2.6)
10(43.4)
, 百拇医药
3 (13.0)
9 (39.1)
3( 13.0)
CH
33
23 (69.7)
8 (24.2)
7 (21.2)
5 (15.2)
HLC
15
9(60.0)
, 百拇医药
4 (26.7)
2 (13.3)
2 (13.3)
SH
4
3 (75.0)
1 (25.0)
1 (25.0)
Total
75
6 (8.0)
45 (60.0)
, 百拇医药
16(21.3)
19(25.3)
10(13.3)
3 讨论
近几年来，人们注意到在急、慢性输血后肝炎、散发性肝炎及暴发性肝炎中，有部分患者其真正的病原学尚不明确，提示可能有新的肝炎病毒存在. 1995年Simons et al[5，6]在非甲-戊型肝炎患者血浆中分离和克隆了一种新的人类肝炎相关的黄热病病毒基因，暂称之为HGV/GBV-C. 随着对HGV的深入研究，目前对HGV感染的流行特征、临床意义及其致病性均有了进一步的认识，国内外研究资料初步表明HGV在人群中有较高的感染率，HGV的传播途径与HBV和HCV相似，但对其致病性尚有争议[7].
本文对75例病毒性肝炎患者的血清标本同时进行HGV-RNA与HAV，HBV，HCV和HEV 5种肝炎病毒标志物检测. 结果显示：75例病毒性肝炎患者中有10例检出HGV-RNA，阳性率为13.3%，从这10例HGV感染者的临床资料中可以看出，HGV感染对象主要为男性中青年，约有50%的感染者(5/10)曾有过受血史，而且与HBV和HCV合并感染者占多数(8/10)，但2例单独HGV感染者的ALT水平(平均峰值120.5)显著低于HGV与HBV，HCV合并感染者(ALT平均峰值264.0). 提示HGV感染可能与输血有密切关系，HGV与HBV和HCV可能有相似的传播途径，即主要经血或肠道外途径传播，此结果与文献报道一致. 虽然2例单独HGV感染者的肝功能损害较HGV合并其他病毒感染者轻，尚不能完全说明HGV致病性大小，但表2结果显示，4例SH患者中无一例感染HGV，似可说明HGV的致病性较小. 本研究结果对于HG的预防和临床诊断具有一定的指导意义.
, 百拇医药
从本文研究的75例病毒性肝炎患者病原学检测结果的构成比中可以看出，患者感染HAV，HBV，HCV，HEV，和HGV的阳性检出率分别为8%，60%，21.3%，25.3%和13.3%，按病原检出率高低顺序，HGV排在第4位，提示HGV是南通地区病毒性肝炎的病因之一，但不是主要病因. 此外，表2结果还显示：在急性肝炎患者中有3例感染HGV，阳性率为13%(3/23)，而在慢性肝炎患者中则有5例感染HGV，阳性率为15.2%(5/33)，两者相比无显著性差异，提示HGV感染既可引起急性肝炎，也可引起慢性肝炎. 但这一结果也不能完全排除HGV感染者中部分系HGV携带者，其肝脏病变主要由其他肝炎病毒所致的可能性，因此，对于HGV感染的流行病学及临床特点还有待于扩大样本检测数进一步加以研究.
4 参考文献
1 Linnen J, Wages J, Zhang ZY, Fry KE, Krawczynski KE, Alter H et al. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusiontransmissible agent. Science, 1996;271(5248):505-508
, 百拇医药
2 彭宜红，庄辉. 庚型肝炎研究进展. 国外医学：流行病学传染病分册，1996；23(2)：72-75
3 常锦红，魏来，陶其敏. 庚型肝炎病毒非结构基因(NS)5区部分序列的一级结构及其变异. 中华医学杂志，1997；77(3)：178-182
4 王惠民，张冬雷，马达，郭乃洲. 二重RT-PCR同时检测HGV与HCV RNA. 临床检验杂志，1998；16(1)：14-16
5 Simons JN, Pilot MTJ, Leary TP, Dawson GJ, Desai SM, Schlauder GG et al. Identification of two flavivirus-like genomes in the GB hepatitis agent. Proc Natl Acad Sci USA, 1995;92(8):3401-3405
, 百拇医药
6 Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, Pilot MTJ, Muerhoff AS, Schlauder GG et al. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nature Medicine, 1995;1(6):564-569
7 朱永红，胡大荣. HGV/GBV-C感染的临床意义研究进展. 国外医学：流行病学传染病学分册，1997；24(5)：211-215
通讯作者 徐芳芹
收稿日期 1997-12-10 修回日期 1998-02-21, 百拇医药