单细胞凝胶电泳法检测混苯作业工人遗传损伤
作者：李芳红 杨臻 林建东 张艳红 谢弋 张静 刘力 杨杏芬 庄志雄
单位：李芳红 杨臻 林建东 张艳红 谢弋 张静 刘力 杨杏芬 庄志雄 510089 广州 中山医科大学公共卫生学院
关键词：
单细胞凝胶电泳法检测混苯作业工人遗传损伤 单细胞凝胶电泳的方法(SCGE)是近年来刚建立起来的方法，以采血量少、操作简单、周期短、费用低见长[1]。我们用SCGE方法和外周血淋巴细胞微核(MN)方法检测了混苯作业工人的遗传损伤，并研究了工龄对SCGE结果的影响。
一、对象与方法
1.对象：选取广州某喷漆厂30名男性工人为接触组，选择不接触混苯的46名制衣厂男工为对照组。两组均排除有遗传病史、服药史及有感染史者，且年龄、工龄、吸烟、饮酒各条件均衡。
, 百拇医药
2.方法：(1)车间三苯浓度测定方法见文献[2]。(2)DNA损伤的测定及分级参照Singh等[3]的方法。(3)MN的检测方法参照文献[4]。
二、结果
1.车间空气中三苯浓度的个人监测结果见表1。
表1 三苯浓度个人监测结果(mg/m3)
样本数
±s
卫生标准
超标比例
, 百拇医药 苯
30
2.91±0.99
40
0/30
甲苯
20
229.08±200.02
100
9/20
二甲苯
30
77.78±60.85
, 百拇医药
100
9/30
2.生物效应指标的变化：暴露组SCGE尾长为5.25±2.12 μm,对照组为3.54±2.22 μm;暴露组MN率为(7.17±2.25)‰,对照组为(2.14±1.75)‰,两组相比差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)；SCGE尾长分级,两组差异亦有显著性(χ2=1?414.07,P<0.01)。
3.在不同人群中效应指标的变化：对照组SCGE和MN在按吸烟和不吸烟分层时，未表现出统计学上的差异；暴露组亦同。分别在吸烟和不吸烟人群中按暴露和非暴露分层，可见SCGE和MN的差异均表现出显著性。而无论在低工龄(≤2.5年)还是高工龄人群(>2.5年)，按非暴露和暴露分层，SCGE和MN的差异均有显著性；但在暴露组中只有MN在低、高工龄间表现出差异，SCGE却未见统计学上的不同，见表2。 表2 吸烟与暴露及工龄与暴露对生物效应指标的影响
, 百拇医药
组别
SCGE尾长(μm)
MN(‰)
吸烟组
不吸烟组
工龄≤2.5 a
工龄>2.5 a
吸烟组
不吸烟组
工龄≤2.5 a
工龄>2.5 a
暴露
5.52±2.28* (n=14)
, 百拇医药
5.00±2.04*
(n=15)
5.76±2.12*
(n=13)
4.84±2.05*
(n=16)
6.50±2.35*
(n=14)
6.87±2.20*
(n=15)
5.29±2.02*
, 百拇医药
(n=18)
8.19±1.94*#
(n=12)
对照
3.56±2.08
(n=12)
3.25±2.32
(n=29)
3.87±2.26
(n=26)
2.97±2.10
(n=15)
, 百拇医药
1.89±1.05
(n=9)
2.25±2.00
(n=20)
2.59±1.87
(n=13)
1.05±1.38
(n=17)
暴露组与对照组比较，*P<0.05，#:工龄≤2.5年与工龄>2.5年组比较，P<0.05
4.效应指标和暴露指标相关关系分析：SCGE和MN经双因素方差分析未发现有交互作用。SCGE和MN经相关分析，相关系数为0.249?6(P<0.05)。在典型相关分析中筛选出一对最优方程:
, 百拇医药
W1=-0.089×P-0.753×BEN-0.243×XYL-0.310×TOL
V1=-0.018×WBC-0.788×MN-0.379×SCGE
三、讨论
在本次调查中，各工作点苯浓度无超标，而甲苯、二甲苯分别有45%和27%超标。SCGE、MN检测，均发现混苯可造成暴露工人遗传损伤，且两指标存在良好的相关。在本实验中，用典型相关分析探讨SCGE尾长、MN、WBC与三苯浓度间的关系时，发现效应指标与三苯浓度间密切相关(见方程中各系数)，其中苯提供的信息量最大，提示：苯浓度的变化同遗传损伤的关系较大。
在本研究中，未发现吸烟对接触组SCGE结果有干扰作用。用双因素方差分析亦未发现吸烟和暴露对SCGE结果有交互作用。Cecilla[5]曾报道SCGE方法能够检测出吸烟者外周血DNA损伤。本调查例数可能太少，故其结果不一致。
, 百拇医药
本研究在按工龄分层后发现：SCGE方法在低工龄组即显示非暴露与暴露组间有明显差异，说明SCGE方法可以作为暴露工人遗传损伤的早期检测指标。但本研究未发现工龄的长短对SCGE的结果有影响，即时间-效应关系。但因样本量较小故要得到更明确的结论,尚需进一步扩大样本量,选取不同混苯浓度的场所,寻找暴露年限较长的工人等。本实验中MN能反映出时间效应关系而SCGE不能，这可能与二者的形成机制不同有关，MN可以在损伤细胞中累积[6]，而DNA断裂可使细胞死亡或被快速修复而无法累积。这提示有必要进一步探讨混苯暴露工人外周血细胞DNA损伤与修复的关系。
在典型相关分析中，可见MN提供的信息量最大，可能对反映混苯的遗传损伤更有意义。但SCGE方法比MN方法简便，用血量少，故也不失为一种在现场中检测遗传损伤的较好的指标。 参考文献
1.Mckelvey VJ, Green MHL,Schmezer P,et al. The single cell gel electrophoresis assay:A European review.Mutat Res,1993,288:47～63.
, http://www.100md.com
2.王筑 移兰主编.劳动卫生学.第3版.北京:人民卫生出版社,1993.245～248.
3.Singh N,Mccoy R,Tice M,et al. A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells.Exptl Cell Res,1988,175:184～191.
4.李来玉,梁丽燕,郑巧玲,等.用培养法测定广州地区120例健康成人外周血的微核正常值.职业医学,1992,19:219～220.
5.Cecilla B,Tania D,Liliana G,et al.Microgel electrophoresis assay(Comet test)and SCE analysis in human lymphocytes from 100 normal subjects. Mutat Res,1994,307:323～333.
6.张棋棋,周仲衡.苯接触工外周淋巴细胞微核率变化的观察.职业医学,1994,21(6):49～50.
收稿：1997-06-23
修回：1997-10-22, 百拇医药
单位：李芳红 杨臻 林建东 张艳红 谢弋 张静 刘力 杨杏芬 庄志雄 510089 广州 中山医科大学公共卫生学院
关键词：
单细胞凝胶电泳法检测混苯作业工人遗传损伤 单细胞凝胶电泳的方法(SCGE)是近年来刚建立起来的方法，以采血量少、操作简单、周期短、费用低见长[1]。我们用SCGE方法和外周血淋巴细胞微核(MN)方法检测了混苯作业工人的遗传损伤，并研究了工龄对SCGE结果的影响。
一、对象与方法
1.对象：选取广州某喷漆厂30名男性工人为接触组，选择不接触混苯的46名制衣厂男工为对照组。两组均排除有遗传病史、服药史及有感染史者，且年龄、工龄、吸烟、饮酒各条件均衡。
, 百拇医药
2.方法：(1)车间三苯浓度测定方法见文献[2]。(2)DNA损伤的测定及分级参照Singh等[3]的方法。(3)MN的检测方法参照文献[4]。
二、结果
1.车间空气中三苯浓度的个人监测结果见表1。
表1 三苯浓度个人监测结果(mg/m3)
样本数
±s卫生标准
超标比例
, 百拇医药 苯
30
2.91±0.99
40
0/30
甲苯
20
229.08±200.02
100
9/20
二甲苯
30
77.78±60.85
, 百拇医药
100
9/30
2.生物效应指标的变化：暴露组SCGE尾长为5.25±2.12 μm,对照组为3.54±2.22 μm;暴露组MN率为(7.17±2.25)‰,对照组为(2.14±1.75)‰,两组相比差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)；SCGE尾长分级,两组差异亦有显著性(χ2=1?414.07,P<0.01)。
3.在不同人群中效应指标的变化：对照组SCGE和MN在按吸烟和不吸烟分层时，未表现出统计学上的差异；暴露组亦同。分别在吸烟和不吸烟人群中按暴露和非暴露分层，可见SCGE和MN的差异均表现出显著性。而无论在低工龄(≤2.5年)还是高工龄人群(>2.5年)，按非暴露和暴露分层，SCGE和MN的差异均有显著性；但在暴露组中只有MN在低、高工龄间表现出差异，SCGE却未见统计学上的不同，见表2。 表2 吸烟与暴露及工龄与暴露对生物效应指标的影响
, 百拇医药
组别
SCGE尾长(μm)
MN(‰)
吸烟组
不吸烟组
工龄≤2.5 a
工龄>2.5 a
吸烟组
不吸烟组
工龄≤2.5 a
工龄>2.5 a
暴露
5.52±2.28* (n=14)
, 百拇医药
5.00±2.04*
(n=15)
5.76±2.12*
(n=13)
4.84±2.05*
(n=16)
6.50±2.35*
(n=14)
6.87±2.20*
(n=15)
5.29±2.02*
, 百拇医药
(n=18)
8.19±1.94*#
(n=12)
对照
3.56±2.08
(n=12)
3.25±2.32
(n=29)
3.87±2.26
(n=26)
2.97±2.10
(n=15)
, 百拇医药
1.89±1.05
(n=9)
2.25±2.00
(n=20)
2.59±1.87
(n=13)
1.05±1.38
(n=17)
暴露组与对照组比较，*P<0.05，#:工龄≤2.5年与工龄>2.5年组比较，P<0.05
4.效应指标和暴露指标相关关系分析：SCGE和MN经双因素方差分析未发现有交互作用。SCGE和MN经相关分析，相关系数为0.249?6(P<0.05)。在典型相关分析中筛选出一对最优方程:
, 百拇医药
W1=-0.089×P-0.753×BEN-0.243×XYL-0.310×TOL
V1=-0.018×WBC-0.788×MN-0.379×SCGE
三、讨论
在本次调查中，各工作点苯浓度无超标，而甲苯、二甲苯分别有45%和27%超标。SCGE、MN检测，均发现混苯可造成暴露工人遗传损伤，且两指标存在良好的相关。在本实验中，用典型相关分析探讨SCGE尾长、MN、WBC与三苯浓度间的关系时，发现效应指标与三苯浓度间密切相关(见方程中各系数)，其中苯提供的信息量最大，提示：苯浓度的变化同遗传损伤的关系较大。
在本研究中，未发现吸烟对接触组SCGE结果有干扰作用。用双因素方差分析亦未发现吸烟和暴露对SCGE结果有交互作用。Cecilla[5]曾报道SCGE方法能够检测出吸烟者外周血DNA损伤。本调查例数可能太少，故其结果不一致。
, 百拇医药
本研究在按工龄分层后发现：SCGE方法在低工龄组即显示非暴露与暴露组间有明显差异，说明SCGE方法可以作为暴露工人遗传损伤的早期检测指标。但本研究未发现工龄的长短对SCGE的结果有影响，即时间-效应关系。但因样本量较小故要得到更明确的结论,尚需进一步扩大样本量,选取不同混苯浓度的场所,寻找暴露年限较长的工人等。本实验中MN能反映出时间效应关系而SCGE不能，这可能与二者的形成机制不同有关，MN可以在损伤细胞中累积[6]，而DNA断裂可使细胞死亡或被快速修复而无法累积。这提示有必要进一步探讨混苯暴露工人外周血细胞DNA损伤与修复的关系。
在典型相关分析中，可见MN提供的信息量最大，可能对反映混苯的遗传损伤更有意义。但SCGE方法比MN方法简便，用血量少，故也不失为一种在现场中检测遗传损伤的较好的指标。 参考文献
1.Mckelvey VJ, Green MHL,Schmezer P,et al. The single cell gel electrophoresis assay:A European review.Mutat Res,1993,288:47～63.
, http://www.100md.com
2.王筑 移兰主编.劳动卫生学.第3版.北京:人民卫生出版社,1993.245～248.
3.Singh N,Mccoy R,Tice M,et al. A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells.Exptl Cell Res,1988,175:184～191.
4.李来玉,梁丽燕,郑巧玲,等.用培养法测定广州地区120例健康成人外周血的微核正常值.职业医学,1992,19:219～220.
5.Cecilla B,Tania D,Liliana G,et al.Microgel electrophoresis assay(Comet test)and SCE analysis in human lymphocytes from 100 normal subjects. Mutat Res,1994,307:323～333.
6.张棋棋,周仲衡.苯接触工外周淋巴细胞微核率变化的观察.职业医学,1994,21(6):49～50.
收稿：1997-06-23
修回：1997-10-22, 百拇医药