当前位置: 首页 > 中医药 > 中医专业 > 中医方剂 > 常用方剂 > 固涩剂 > 涩肠固脱 > 四神丸
编号:10281802
SFE-CGC法测定四神丸中主要成分的含量
http://www.100md.com 《海峡药学》 1999年第2期
     作者:陈 伟 陈 斌

    单位:陈 伟 福州医学高等专科学校;陈 斌 上海第二军医大学药学院

    关键词:超临界流体萃取;四神丸;补骨脂素;异补骨脂素;毛细管气相色谱

    海峡药学990225 摘要 目的建立超临界流体萃取(SFE)技术和毛细管气相色谱(CGC)非在线联用技术测定中成药四神丸中的主要成分。本文以SFE法样品前处理,采用含5%苯基硅氧烷交联毛细管柱,蒽作为内标进行定量试验。结果四神丸中的补骨脂素和异补骨脂素的含量分别为:补骨脂素0.89 mg/g,异补骨脂素1.03 mg/g,说明SFE-CGC法是四神丸质量控制的快速可靠、准确灵敏的方法。

    Determination of Major Components in Shishenwan Using SFE-CGC
, http://www.100md.com
    Chen Wei,Chen Bin

    (Research Lab of Pharmacology,Fuzhou Military Medical College)

    Abstract A method based on the off-line coupling of SFE and CGC has been established for quantitative analysis of major components in Shishenwan.Samples prepared by SFE were analyzed upon follow condition:crosslinked 5% Ph Me Silicone as stationary phase;FID detector,anthracene as internal standard.The content of psoralen and isopsoralen are 0.89 mg/g and 1.03mg/g respectly in Shishenwan.SFE-CGC method can be used in the quality control of Chinese patent medicinals.
, 百拇医药
    Key words Supercritical fluid extraction Shishenwan Psoralen Isopsoralen CGC

    中成药成分复杂,用现代分析技术进行质量控制的研究,必须先经提取分离。而传统的萃取方法,萃取时间长,不完全,后分析复杂,且环境污染重,越来越不适应当今药学的发展。超临界流体萃取(SFE)是近代分离领域内的先进的样品制备技术,具有传质速度快、萃取效率高、无毒、经济、操作简便、选择性好等优于传统溶剂萃取法的特点[1]。四神丸是由补骨脂、肉豆蔻、五味子、吴茱萸和大枣加工而成的中成药,具有温肾暖脾、涩肠止泻作用。用于命门火衰,脾肾虚寒,五更泄泻或便溏腹痛,腰酸肢冷。已有作者报道采用高效液相色谱法进行含量测定[2],本文以药中主要成分补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素为定量指标,系统地考察了影响超临界流体萃取的诸因素,筛选出压力、温度、改性剂加入量、CO2动态萃取量和静态萃取时间等5个变量的最佳条件。用毛细管气相色谱进行定量,结果快速、准确、灵敏、分辨率好。
, http://www.100md.com
    1 仪器与试药

    1.1 仪器 DM 100 注射泵,SFX2-10萃取器(美国ISCO公司),气相色谱仪HP-5890 Series Ⅱ,FID检测器,HP-5柱(Crosslinked 5% Ph Me Silicone,25 m×0.32 mm×0.52 μm)。HP-3365化学工作站(美国Hewlett-Packard公司),HM-202十万分之一电子天平(日本A&G有限公司)。

    1.2 试药 补骨脂素和异补骨脂素(中国药品生物制品检定所);蒽(光谱纯),上海试剂一厂;四神丸(上海中药一厂)。

    1.3 标准溶液 精密称取105℃干燥至恒重的补骨脂素和异补骨脂素适量,分别用乙酸乙酯配成0.548 mg/ml和0.534 mg/ml溶液,置4℃冰箱放置。

    1.4 内标液配制 精密称取蒽适量,用乙酸乙酯配成1.035 mg/ml溶液,置4℃冰箱放置。
, 百拇医药
    2 方法与结果

    2.1 色谱条件 气化温度250℃,检测器温度280℃,柱温210℃,载气N2,柱头压55 kPa,分流比50∶1,内标为蒽,进样量:1 μl。

    2.2 标准曲线制备 分取标准液20、40、80、160、500 μl于10 ml量瓶中,注入内标溶液100 μl,稀释至刻度,进行气相色谱分析。以峰面积比(Y)对含量(X)作回归计算,得回归方程:补骨脂素Y=32.53X-1.840×10-2,r=0.9999;异补骨脂素Y=34.53X+6.832×10-3,r=0.9998,线性范围为1.096~27.40 ng和1.068~26.70 ng。

    2.3 萃取条件的选择 固定萃取条件,分别以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇为改性剂,以氯仿所得效率最高,本实验选择氯仿。固定其它参数,压力从24.5~45.5 mPa,每隔7 mPa萃取测定1个点;温度从50~80℃,每隔10℃萃取测定1个点;改性剂加入量从0~150 μl,每隔50 μl萃取测定1个点;动态萃取量从2~8 ml,每隔2 ml萃取测定1个点;静态萃取时间从0~9 min,每隔3 min萃取测定1个点,结果(见图2)。
, http://www.100md.com
    通过以上试验,可确定最佳萃取条件为:压力38.5 mPa,温度70℃,改性剂加入量50 μl,动态萃取体积6 ml,静态萃取时间2 min。

    2.4 SFE萃取 分别精称3份碾碎后过100目筛的腰痛片干燥药粉约100 mg置萃取池中,按最佳萃取条件操作,用适量乙酸乙酯吸收,精取内标100 μl,定容至10 ml。

    2.5 含量测定 萃取液进样1 μl,色谱图(见图1),计算补骨脂和异补骨脂的含量,结果为补骨脂素:0.89 mg/g(RSD=3.32%,n=3),异补骨脂素:1.03 mg/g(RSD=2.53%,n=3)。

    图1 对照品(A)和腰痛片(B)的气相色谱图

    1.异补骨脂素 2.补骨脂素 3.蒽
, http://www.100md.com
    2.6 加样回收试验 在药粉中定量加入标准液0.4 ml,吹干,测定方法相同,测得加样回收率,补骨脂素97.56%(RSD=2.31%,n=3),异补骨脂素108.79%(RSD=3.28%,n=3)。

    2.7 精密度试验 按样品测定方法分别对标准品补骨脂素和异补骨脂素重复进样5次,每次1 μl,测得峰面积比的RSD分别为1.21%和1.36%。

    图2 SFE影响因素系统法最优化的结果

    (A:压力;B:温度;C:改性剂量;D:动态萃取体;E:静态萃取时间)

    3 讨论

    从图2中可以看出,改性剂加入量的斜率最大,因此其影响最大,但改性剂量不宜加得太多,否则杂质也增加,易污染毛细管柱,此外还易造成萃取仪中限流管的堵塞;压力影响其次,温度和静态萃取时间的影响较小。
, http://www.100md.com
    该方法操作简便,快速,整个过程20 min内即可完成;CO2价格低廉、无毒、不可燃、化学惰性及易挥发;此外,SFE具有良好的选择性,样品萃取后无须预处理可直接进样,节约了大量时间和精力;CGC对补骨脂素和异补骨脂素的分离效果非常好,在完全分离的情况下还能在两峰之间插入内标蒽,测量结果准确可靠、重现性好。因此SFE和CGC联用技术在该类药物的质量控制方面有着重要意义。

    参考文献

    1.缪海均等:超临界流体萃取法-毛细管色相色谱法分析厚朴酚、和厚朴酚的含量 药物分析杂志,1998;18(3):182

    2.谭生建等:高效液相色谱法测定补骨脂和四神丸中两种有效成分色谱1993;11(6):354, 百拇医药


    参见:首页 > 中医药 > 中医专业 > 中医方剂 > 常用方剂 > 固涩剂 > 涩肠固脱 > 四神丸