多病毒感染时T细胞亚群、NK与LAK细胞活性的变化及其意义
作者：欧阳建华 方凤 汪隽瑛 沈茜
单位：
关键词：多病毒感染；T细胞亚群；杀伤细胞，天然杀伤细胞,淋巴因子激活
第二军医大学学报000412 【摘要】目的：探讨多病毒感染时细胞免疫和NK,LAK细胞活性的变化及其意义。方法：以1种或多种病毒抗原，或IgM抗体阳性的住院患儿61例为观察对象，其中单病毒组38例，多病毒组23例。另设对照组30例。采用ELISA法测定柯萨奇病毒(CVB)抗原和IgM抗体、 EB病毒(EBV)IgM、巨细胞病毒(CMV)IgM、乙肝病毒(HBV)血清标志物5项；单克隆抗体标记的间接ABC免疫组化法测定T细胞亚群；3H-TdR标记法测定NK,LAK细胞活性。结果：(1)病毒感染早期CD4/CD8比值,NK,LAK细胞活性明显降低，CD8明显增高 (P<0.01)。(2) 单病毒感染恢复期LAK细胞活性增强(P<0.01)，CD4/CD8比值升高(P<0.05)。(3) 多病毒感染恢复期 NK,LAK细胞活性较感染早期更为低下(P<0.05,P<0.01)。结论：单病毒感染随着病毒抗原抗体的清除，机体免疫系统能完成自身修复；多病毒感染对机体免疫系统的损害作用较为持久,应引起临床高度重视。
, http://www.100md.com
【中图分类号】R 446.62; R 725 【文献标识码】A
【文章编号】0258-879X(2000)04-0340-03
Changes of T lymphocyte subpopulation，NK and LAK cell activities in multiviral infection
OUYANG Jian-Hua，FANG Feng，WANG Jun-Ying
(Department of Pediatrics,Changhai Hospital，Second Military Medical University，Shanghai 200433，China)
SHEN Qian
, 百拇医药
(Department of Laboratory Diagnosis)
【ABSTRACT】Objective：To investigate the changes of T cell immunity，NK and LAK cell activities and their significance in multiviral infection.Methods:Sixty-one cases with positive virus antigen or IgM antibody of single or several virus (38 single virus，23 several virus ) and 30 controls were enrolled in the study.We detected CVB-Ag,CVB-IgM,EBV-IgM,CMV-IgM and HBV serumal markers using ELISA method,T lymphocyte subpopulation using OKT method,NK and LAK cell activities using H-TdR method.Results:(1) CD4/CD8 ratio,NK cell activity and LAK cell activity were obviously decreased in early viral infection stage and the level of CD8 obviously increased (P<0.01); (2) Both LAK cell activity and the CD4/CD8 ratio improved in convalesence of single viral infection (P<0.01,P<0.05);(3) In convalescence of multiviral infection,NK and LAK cell activities decreased more markedly than the activities in early viral infection stage (P<0.05,P<0.01).Conclusion：In single viral infection the body immune system can self-regulate against viral infection,but the immune system is damaged very much in multiviral infection,so more attention should be paid to it in clinical.
, http://www.100md.com
【KEY WORDS】multiviral infection; T lympholyte subpopulation; killer cells,natural; killer cells,lymphokineactirated
病毒感染与儿科疾病密切相关，在临床检测病毒学过程中，发现患儿有多种病毒同时感染的现象，为此,我们探讨多病毒感染患儿细胞免疫和自然杀伤细胞(NK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)细胞活性的变化及其意义。
1 对象和方法
1.1 对象 以1种或多种病毒抗原,或IgM抗体阳性的住院患儿61例为观察对象。其中，男29例、女32例。年龄：7个月至3岁14例(23%)，～7岁20例(33%)，～12岁27例(44% )。患儿的病毒性疾病分布：诊断为病毒性心肌炎19例、病毒性肺炎30例、上呼吸道感染11例、病毒性脑炎1例。分为单病毒(单种病毒抗原或抗体阳性)组38例;多病毒 (两种或两种以上病毒抗原或抗体阳性)组23例。另设健康对照组30例，男16例，女14例，年龄3～12岁。
, 百拇医药
1.2 方法与指标
1.2.1 病毒学检测 ELISA法测定柯萨奇病毒(CVB)抗原和特异性IgM抗体，EB病毒(EBV)IgM抗体，巨细胞病毒(CMV)IgM 抗体，乙肝病毒(HBV) 血清标志物5项。
1.2.2 外周血T细胞亚群检测 单克隆抗体标记的间接ABC 免疫法。
1.2.3 NK，LAK细胞活性测定 3H-TdR标记法。
1.3 采血时间 患儿血清在入院1周内采集(称早期感染标本 )，自身对照的各免疫参数第2次测定时间在治疗后2周至3个月。
1.4 统计学处理 统计资料采用组间和配对t检验。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 各病毒检测结果 CVB阳性56例(92%)，EBV阳性15例(25%)，CMV阳性6例(10%)，HBV三项阳性1例(2%)。其中单CVB阳性36例(59%)，单EBV，单CMV阳性各1例(3%)，CVB+EBV阳性13例(21%)，CVB+CMV阳性5例(8%)，CVB+EBV+CMV阳性4例(7%)，CVB+EBV+HBV阳性1例 (2%)。提示单病毒组以CVB为主，多病毒组以CVB+EBV或CVB+CMV为主。
2.2 早期感染NK与LAK细胞活性 入院1周内采血检测外周血T细胞亚群和NK，LAK细胞活性的变化，见单病毒组和多病毒组NK，LAK细胞活性及CD3，CD4/CD8比值均比对照组明显降低(P<0.01)，而 CD8 较对照组明显增高(P<0.01，表1)。以上6项指标在单病毒组和多病毒组之间比较无显著差异。
2.3 恢复期NK与LAK细胞活性 治疗后2周至3个月采取血标本检测T细胞亚群 ，NK，LAK 细胞活性变化。单病毒组：LAK细胞活性明显增强(P<0.01)，CD4/CD8比值增高(P<0.05)。多病毒组：NK，LAK细胞活性继续降低 (P<0.05，P<0.01，表2)。
, http://www.100md.com
表 1 感染早期T细胞亚群NK和LAK细胞活性测定结果
Tab 1 Results of T lymphocyte subpopulation，NK and LAK cell activities in early stage of infection
(
±s) Group
n
NK(%)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
, 百拇医药
LAK(%)
Control
30
51.92±5.24
67.20±4.43
41.38±2.83
24.10±4.61
1.80±0.25
35.80±3.29
Single
38
33.89±12.60**
, http://www.100md.com
62.93±5.40**
44.91±5.42**
28.32±2.91**
1.61±0.27**
29.26+12.63**
Several
23
36.23±13.23**
62.04±5.30**
42.60±4.31
, 百拇医药
28.16±6.09**
1.61±0.43**
25.29±14.36**
** P<0.01 vs control group 表 2 恢复期两组各免疫参数变化
Tab 2 Immune indices change in recovery stage of infection in two groups
(±s) Group
n
, 百拇医药
Terms
NK(%)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
LAK(%)
Single
12
EarlyRecovery
41.78±14.55
42.98±9.90
, 百拇医药
61.96±8.13
63.54±8.84
39.15±11.89
44.35±6.41
30.52±9.33
26.65±5.48
1.40±0.54
1.71±0.34*
24.32±8.53
39.22±17.95**
Several
, http://www.100md.com
13
Early
Recovery
40.39±12.04
32.40±14.72*
62.28±4.64
60.50±4.66
43.95±4.03
41.17±5.43
38.22±3.94
28.58±5.05
, 百拇医药
1.59±0.30
1.51±0.29
31.20±12.89
22.36±8.65**
* P<0.05，** P<0.01 vs early stage of infection
3 讨 论
随着病毒学研究的深入，发现引起小儿呼吸道感染的病毒种类逐渐增多，单种病毒或多种病毒感染十分常见，且病毒种类已超出呼吸道病毒范围。从本组资料可见:属于肠道 病毒的CVB，是 单病毒感染的主要病原微生物，又是双或多病毒感染的主要病原微生物，在病毒性心肌炎和呼吸道感染中均有较高的检出率。NK细胞具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节作用，感染 后NK细胞首先反应，可直接杀伤 病毒感染细胞，清除病毒，并通过释放淋巴因子(如IFN-α，IFN-γ ，IL-2)对机体 免疫功能进行调节，如在IL-2的诱导下产生新的杀伤细胞LAK细胞。LAK细胞是机体非特异 性免疫应答的重要组成部分，其突出特征是具有广谱抗肿瘤作用[1]。病毒感染后，无论 是单病毒还是多病毒均会影响T细胞亚群和天然免疫细胞的功能变化。本组病例感染早期便有T细胞亚群平衡紊乱，NK，LAK细胞活性下降，表明感染与细胞免疫功能低下，NK，LAK细胞活性降低相关。单病毒感染和多病毒感染早期对细胞免疫的影响是一致的，但将两组感染早期和恢复期各免疫参数作自身对照，则显示明显不同，单病毒组恢复期LAK细胞活性明显增强，CD4/CD8比值增高，提示单病毒感染随着病毒抗原抗体的清除，机体免疫系统能 完成自身修复[3]。多病毒组恢复期NK，LAK细胞活性较感染早期更为低下。多病毒组以CVB+EBV/CMV为主，EBV和CMV除原发感染外均有感染后长期潜伏的特点，并在各种因素使机体细胞免疫功能低下时被激活[3.4]。通常认为在接受激素治疗的器官移植者或其他免疫抑制患者，潜伏感染极易被激活[5]。本组资料显示病毒感染造成免疫功能抑制，亦是导致EBV，CMV活动性感染的原因之一。多病毒组恢复期NK，LAK细胞活性持续下降可能与EBV，CMV复 合感染加剧了免疫损伤，IL-2 活性降低，LAK细胞活化和增殖降低有关。多病毒感染NK，LAK细胞活性持续低下应引起临床高度重视。
, 百拇医药
【参考文献】
[1]毕爱华，龚菲力主编.医学免疫学[M].北京:人民军医出版社，1995.16-17 .
[2]方 凤，沈 茜，欧阳建华，等.柯萨奇B组病毒感染患儿细胞免疫状态及对干扰素疗效的影响[J].第二军医大学学报，1997，18(2):170-172.
[3]董永绥，方 峰，张 明.巨细胞病毒诊断试行标准[J].中华儿科杂志，1995，133(1):8-9.
[4]吴瑞萍，胡亚美，江载芳主编.实用儿科学[M].北京：人民卫生出版社，1996.813-819.
[5]史金阳，刘兰青，吕绳敏.巨细胞病毒活动性感染的分子生物学特点[J].国外医学.儿科学分册，1997，34(5):231-233.
【收稿日期】1999-11-08
【修回日期】2000-02-15, 百拇医药
单位：
关键词：多病毒感染；T细胞亚群；杀伤细胞，天然杀伤细胞,淋巴因子激活
第二军医大学学报000412 【摘要】目的：探讨多病毒感染时细胞免疫和NK,LAK细胞活性的变化及其意义。方法：以1种或多种病毒抗原，或IgM抗体阳性的住院患儿61例为观察对象，其中单病毒组38例，多病毒组23例。另设对照组30例。采用ELISA法测定柯萨奇病毒(CVB)抗原和IgM抗体、 EB病毒(EBV)IgM、巨细胞病毒(CMV)IgM、乙肝病毒(HBV)血清标志物5项；单克隆抗体标记的间接ABC免疫组化法测定T细胞亚群；3H-TdR标记法测定NK,LAK细胞活性。结果：(1)病毒感染早期CD4/CD8比值,NK,LAK细胞活性明显降低，CD8明显增高 (P<0.01)。(2) 单病毒感染恢复期LAK细胞活性增强(P<0.01)，CD4/CD8比值升高(P<0.05)。(3) 多病毒感染恢复期 NK,LAK细胞活性较感染早期更为低下(P<0.05,P<0.01)。结论：单病毒感染随着病毒抗原抗体的清除，机体免疫系统能完成自身修复；多病毒感染对机体免疫系统的损害作用较为持久,应引起临床高度重视。
, http://www.100md.com
【中图分类号】R 446.62; R 725 【文献标识码】A
【文章编号】0258-879X(2000)04-0340-03
Changes of T lymphocyte subpopulation，NK and LAK cell activities in multiviral infection
OUYANG Jian-Hua，FANG Feng，WANG Jun-Ying
(Department of Pediatrics,Changhai Hospital，Second Military Medical University，Shanghai 200433，China)
SHEN Qian
, 百拇医药
(Department of Laboratory Diagnosis)
【ABSTRACT】Objective：To investigate the changes of T cell immunity，NK and LAK cell activities and their significance in multiviral infection.Methods:Sixty-one cases with positive virus antigen or IgM antibody of single or several virus (38 single virus，23 several virus ) and 30 controls were enrolled in the study.We detected CVB-Ag,CVB-IgM,EBV-IgM,CMV-IgM and HBV serumal markers using ELISA method,T lymphocyte subpopulation using OKT method,NK and LAK cell activities using H-TdR method.Results:(1) CD4/CD8 ratio,NK cell activity and LAK cell activity were obviously decreased in early viral infection stage and the level of CD8 obviously increased (P<0.01); (2) Both LAK cell activity and the CD4/CD8 ratio improved in convalesence of single viral infection (P<0.01,P<0.05);(3) In convalescence of multiviral infection,NK and LAK cell activities decreased more markedly than the activities in early viral infection stage (P<0.05,P<0.01).Conclusion：In single viral infection the body immune system can self-regulate against viral infection,but the immune system is damaged very much in multiviral infection,so more attention should be paid to it in clinical.
, http://www.100md.com
【KEY WORDS】multiviral infection; T lympholyte subpopulation; killer cells,natural; killer cells,lymphokineactirated
病毒感染与儿科疾病密切相关，在临床检测病毒学过程中，发现患儿有多种病毒同时感染的现象，为此,我们探讨多病毒感染患儿细胞免疫和自然杀伤细胞(NK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)细胞活性的变化及其意义。
1 对象和方法
1.1 对象 以1种或多种病毒抗原,或IgM抗体阳性的住院患儿61例为观察对象。其中，男29例、女32例。年龄：7个月至3岁14例(23%)，～7岁20例(33%)，～12岁27例(44% )。患儿的病毒性疾病分布：诊断为病毒性心肌炎19例、病毒性肺炎30例、上呼吸道感染11例、病毒性脑炎1例。分为单病毒(单种病毒抗原或抗体阳性)组38例;多病毒 (两种或两种以上病毒抗原或抗体阳性)组23例。另设健康对照组30例，男16例，女14例，年龄3～12岁。
, 百拇医药
1.2 方法与指标
1.2.1 病毒学检测 ELISA法测定柯萨奇病毒(CVB)抗原和特异性IgM抗体，EB病毒(EBV)IgM抗体，巨细胞病毒(CMV)IgM 抗体，乙肝病毒(HBV) 血清标志物5项。
1.2.2 外周血T细胞亚群检测 单克隆抗体标记的间接ABC 免疫法。
1.2.3 NK，LAK细胞活性测定 3H-TdR标记法。
1.3 采血时间 患儿血清在入院1周内采集(称早期感染标本 )，自身对照的各免疫参数第2次测定时间在治疗后2周至3个月。
1.4 统计学处理 统计资料采用组间和配对t检验。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 各病毒检测结果 CVB阳性56例(92%)，EBV阳性15例(25%)，CMV阳性6例(10%)，HBV三项阳性1例(2%)。其中单CVB阳性36例(59%)，单EBV，单CMV阳性各1例(3%)，CVB+EBV阳性13例(21%)，CVB+CMV阳性5例(8%)，CVB+EBV+CMV阳性4例(7%)，CVB+EBV+HBV阳性1例 (2%)。提示单病毒组以CVB为主，多病毒组以CVB+EBV或CVB+CMV为主。
2.2 早期感染NK与LAK细胞活性 入院1周内采血检测外周血T细胞亚群和NK，LAK细胞活性的变化，见单病毒组和多病毒组NK，LAK细胞活性及CD3，CD4/CD8比值均比对照组明显降低(P<0.01)，而 CD8 较对照组明显增高(P<0.01，表1)。以上6项指标在单病毒组和多病毒组之间比较无显著差异。
2.3 恢复期NK与LAK细胞活性 治疗后2周至3个月采取血标本检测T细胞亚群 ，NK，LAK 细胞活性变化。单病毒组：LAK细胞活性明显增强(P<0.01)，CD4/CD8比值增高(P<0.05)。多病毒组：NK，LAK细胞活性继续降低 (P<0.05，P<0.01，表2)。
, http://www.100md.com
表 1 感染早期T细胞亚群NK和LAK细胞活性测定结果
Tab 1 Results of T lymphocyte subpopulation，NK and LAK cell activities in early stage of infection
(
±s) Groupn
NK(%)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
, 百拇医药
LAK(%)
Control
30
51.92±5.24
67.20±4.43
41.38±2.83
24.10±4.61
1.80±0.25
35.80±3.29
Single
38
33.89±12.60**
, http://www.100md.com
62.93±5.40**
44.91±5.42**
28.32±2.91**
1.61±0.27**
29.26+12.63**
Several
23
36.23±13.23**
62.04±5.30**
42.60±4.31
, 百拇医药
28.16±6.09**
1.61±0.43**
25.29±14.36**
** P<0.01 vs control group 表 2 恢复期两组各免疫参数变化
Tab 2 Immune indices change in recovery stage of infection in two groups
(
±s) Groupn
, 百拇医药
Terms
NK(%)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
LAK(%)
Single
12
EarlyRecovery
41.78±14.55
42.98±9.90
, 百拇医药
61.96±8.13
63.54±8.84
39.15±11.89
44.35±6.41
30.52±9.33
26.65±5.48
1.40±0.54
1.71±0.34*
24.32±8.53
39.22±17.95**
Several
, http://www.100md.com
13
Early
Recovery
40.39±12.04
32.40±14.72*
62.28±4.64
60.50±4.66
43.95±4.03
41.17±5.43
38.22±3.94
28.58±5.05
, 百拇医药
1.59±0.30
1.51±0.29
31.20±12.89
22.36±8.65**
* P<0.05，** P<0.01 vs early stage of infection
3 讨 论
随着病毒学研究的深入，发现引起小儿呼吸道感染的病毒种类逐渐增多，单种病毒或多种病毒感染十分常见，且病毒种类已超出呼吸道病毒范围。从本组资料可见:属于肠道 病毒的CVB，是 单病毒感染的主要病原微生物，又是双或多病毒感染的主要病原微生物，在病毒性心肌炎和呼吸道感染中均有较高的检出率。NK细胞具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节作用，感染 后NK细胞首先反应，可直接杀伤 病毒感染细胞，清除病毒，并通过释放淋巴因子(如IFN-α，IFN-γ ，IL-2)对机体 免疫功能进行调节，如在IL-2的诱导下产生新的杀伤细胞LAK细胞。LAK细胞是机体非特异 性免疫应答的重要组成部分，其突出特征是具有广谱抗肿瘤作用[1]。病毒感染后，无论 是单病毒还是多病毒均会影响T细胞亚群和天然免疫细胞的功能变化。本组病例感染早期便有T细胞亚群平衡紊乱，NK，LAK细胞活性下降，表明感染与细胞免疫功能低下，NK，LAK细胞活性降低相关。单病毒感染和多病毒感染早期对细胞免疫的影响是一致的，但将两组感染早期和恢复期各免疫参数作自身对照，则显示明显不同，单病毒组恢复期LAK细胞活性明显增强，CD4/CD8比值增高，提示单病毒感染随着病毒抗原抗体的清除，机体免疫系统能 完成自身修复[3]。多病毒组恢复期NK，LAK细胞活性较感染早期更为低下。多病毒组以CVB+EBV/CMV为主，EBV和CMV除原发感染外均有感染后长期潜伏的特点，并在各种因素使机体细胞免疫功能低下时被激活[3.4]。通常认为在接受激素治疗的器官移植者或其他免疫抑制患者，潜伏感染极易被激活[5]。本组资料显示病毒感染造成免疫功能抑制，亦是导致EBV，CMV活动性感染的原因之一。多病毒组恢复期NK，LAK细胞活性持续下降可能与EBV，CMV复 合感染加剧了免疫损伤，IL-2 活性降低，LAK细胞活化和增殖降低有关。多病毒感染NK，LAK细胞活性持续低下应引起临床高度重视。
, 百拇医药
【参考文献】
[1]毕爱华，龚菲力主编.医学免疫学[M].北京:人民军医出版社，1995.16-17 .
[2]方 凤，沈 茜，欧阳建华，等.柯萨奇B组病毒感染患儿细胞免疫状态及对干扰素疗效的影响[J].第二军医大学学报，1997，18(2):170-172.
[3]董永绥，方 峰，张 明.巨细胞病毒诊断试行标准[J].中华儿科杂志，1995，133(1):8-9.
[4]吴瑞萍，胡亚美，江载芳主编.实用儿科学[M].北京：人民卫生出版社，1996.813-819.
[5]史金阳，刘兰青，吕绳敏.巨细胞病毒活动性感染的分子生物学特点[J].国外医学.儿科学分册，1997，34(5):231-233.
【收稿日期】1999-11-08
【修回日期】2000-02-15, 百拇医药