变应性鼻炎红细胞和淋巴细胞免疫粘附功能和2种细胞因子的检测
作者：周斌 吕世静 陈向阳 何德 吕小华
单位：周斌 陈向阳(广东医学院附属医院耳鼻咽喉科 湛江 524001)；吕世静 何德 吕小华(广东医学院检验系临床免疫学教研室)
关键词：鼻炎；变应性；常年性；白细胞介素4；干扰素Ⅱ型
中华耳鼻咽喉科杂志000615 【摘要】 目的 探讨红、白细胞免疫功能及白细胞介素- 4(interleukin-4, IL-4)和干扰素γ(interferon-γ, IFN-γ)在变应性鼻炎发病中所起的作用。方法 采用红细胞、淋巴细胞的免疫吸附法和BA-ELISA法对外周血单核细胞分泌的IL-4和IFN-γ进行了测定。结果 43例常年性变应性鼻炎患者的红细胞、淋巴细胞免疫功能和IFN-γ水平均低于健康对照组(分别为P<0.05和P<0.01)，而IL-4的表达高于对照组(P<0.01)；结论 提示红细胞、淋巴细胞免疫功能、IL-4和IFN-γ的异常在变应性鼻炎的发生发展起重要作用。
, http://www.100md.com
Determination of the immune function of the erythrocyte and leucocyte and the activity of IL-4 and IFN-γ in patients with allergic rhinitis
ZHOU Bin, L
Shijing, CHEN Xiangyang, et al.
(Department of Otorhinolaryngology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Guangdong Zhanjang 524001, China)
【Abstract】 Objective To investigate the immune function of erythrocyte (RBC) and leucocyte (WBC), and variety of the interleukin-4 (IL-4) and interferon-γ (IFN-γ) among patients with allergic rhinitis. Methods IL-4 and IFN-γ secreted by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were measured and compared with immune adhesive and BA-ELISA method. Results Results showed the RBC and WBC immune adhesive function and IFN-γ were significantly decreased than of the control, and IL-4 activity were significantly higher than the controls (P<0.01) in patients with perennial allergic rhinitis. Conclusion These results suggest that RBC and WBC the immune function and IL-4 and IFN-γ may play an important role in allergic rhinitis.
, 百拇医药
【Key words】 Rhinitis，allergic, perennial; Interleukin-4; Interferon type Ⅱ
近年发现红细胞免疫与多种免疫性疾病有密切关系；并发现了红细胞具有调控某些细胞因子的作用、直接或间接影响某些免疫性疾病的发生发展。我们观察变应性鼻炎患者外周血红细胞、淋巴细胞的免疫粘附功能及白细胞介素- 4 (interleukin-4, IL-4)和干扰素γ(interferon-γ，IFN-γ)含量变化，旨在探讨其在变应性鼻炎发病中所起的作用，报道如下。
材料与方法
一、标本来源
常年性变应性鼻炎病例取自于我院耳鼻咽喉科门诊患者，按1997年海口会议诊断标准确诊[1]。共43例，男34例，女9例；年龄18～62岁，平均41岁；病程在1年以上。健康对照组 43例，男26例，女17例；年龄18～24岁，平均21岁；均为我学院健康学生，无变应性疾病史。所有检测对象受检前2周内未服用过皮质类固醇药物。
, 百拇医药
二、试剂
RPMI-1640培养液(Gibco，美国)；刀豆素A(concanavalin，conA， Sigma,美国)；IL-4试剂盒(GenZyme，美国)；IFN-γ试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)。
三、方法
1.红细胞、淋巴细胞补体受体活性实验：红细胞、淋巴细胞免疫粘附花环试验参照文献[2],将0.05 ml淋巴细胞悬液(1×107/ml),小牛血清0.05 ml和0.1 ml自身红细胞悬液(1.25×107/ml)混匀，37℃水浴35 min然后再加入0.1 ml补体致敏酵母菌悬液(1×108/ml)混匀，置于37℃水浴35 min后，加入0.25%戊二醛固定，涂片、瑞氏染色。在高倍镜下观察，计数200个红细胞。以1个红细胞结上2个或以上酵母菌为1朵红细胞C3b受体花环；计数200个淋巴细胞。结上2个或以上酵母菌为1朵淋巴细胞补体受体花环，淋巴细胞结上2个红细胞为 1朵淋巴细胞LFA-3受体花环。算出红细胞和淋巴细胞各自花环率。为避免实验误差，取样本后均在3 h内开展试验；每次实验设正常对照，各标本均作3个样品，取其平均值。
, 百拇医药
2.诱导单个核细胞产生IL-4、IFN-γ及其测定：外周静脉血经肝素抗凝后按常规方法用Ficoll-Hypaque分离单个核细胞，用含 10 %小牛血清的RPMI-1640培养液，调整细胞至1×106/ml，然后加入conA 0.05 mg/ml，置于37℃ 5%CO2孵育箱中培养相应时间 ( IL- 4培养24 h，IFN-γ培养72 h)，收集培养上清液储存于-70℃，待测定 IL - 4及IFN-γ。
细胞因子测定采用BA-ELISA方法，严格按试剂盒说明书进行操作, 检测收集的单个核细胞培养上清液中的相关细胞因子。
3.统计学处理：组间比较采用t检验。
结果
红细胞、淋巴细胞免疫粘附混合花环试验：结果(表1)发现患者外周静脉血的红细胞-C3b受体花环率、淋巴细胞补体受体花环率及淋巴细胞-LFA-3受体花环率，均低于健康对照组(P<0.05)。
, 百拇医药
变应性鼻炎患者单个核细胞经conA刺激培养后，测定的结果(表2)显示IL-4含量表达水平明显高于对照组 (P<0.01)，IFN-γ的诱生表达水平则显著低于对照组(P<0.01)。
表1 变应性鼻炎患者红细胞、淋巴细胞免疫粘附混合
花环试验的花环率(
±s，%) 组别
例
数
红细胞-C3b
受体花环
淋巴细胞补体
受体花环
, 百拇医药
淋巴细胞-LFA
-3受体花环
变应性鼻炎组*
43
15.29±4.39
2.38±0.81
1.70±0.92
健康对照组
43
20.21±5.17
3.29±0.90
3.26±1.01
, 百拇医药
* 与对照组相比较，P<0.05表2 变应性鼻炎IL-4及IFN诱导水平(±s，ng/L) 组 别
例数
IL-4
IFN-γ
变应性鼻炎组
43
191.76±20.13
1274.06±405.27
健康对照组
43
, 百拇医药
106.32±18.47
1501.10±427.31
讨论
变应性鼻炎属I型变态反应性疾病。本病的发生发展与宿主的免疫紊乱有关,其发病机制复杂，参与鼻超敏反应的细胞不仅有CD4阳性T细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、B淋巴细胞及 CD1阳性郎罕细胞等；而且还涉及了多种细胞因子[3]。近10 多年来许多学者们已开始重视红细胞免疫和红细胞参与细胞因子的调控作用，并证实了红细胞参与自体多种细胞因子如IFN-γ、IL-2及IL- 4的直接或间接调控，还发现了红细胞膜上具有高密度的细胞因子受体对调控炎症的发展进程和转归有着重要作用[4]。Keys等观察外周血单个核细胞诱导干扰素-γ的实验中，加入自身红细胞可使IFN-γ产量增加4～20倍，并证实这种促进作用属红细胞浓度依赖性及免疫粘附性。因此：变应性鼻炎患者红细胞的数量及其免疫粘附功能的质量异常，影响了IFN-γ产生，直接或间接造成了变应性鼻炎患者IgE的产生增多，导致病情加重。本组43 例常年性变应性鼻炎患者红、淋巴细胞的免疫粘附功能下降，变应性鼻炎主要为局部炎症、水肿的病理表现，可能由于红细胞、淋巴细胞免疫粘附功能异常，造成病变局部免疫复合物积聚及消除受阻，从而促发了局部炎症反应。
, http://www.100md.com
本组43 例变应性鼻炎患者外周血单个核细胞经 conA 刺激诱导，IL-4的产生明显高于对照组，IFN-γ则低于对照组，这2种细胞因子的异常，反映了变应性鼻炎患者免疫调节功能的紊乱。IL-4是IgE产生必需的细胞因子，在变应性鼻炎患者中对IgE产生起促进作用[5]。IFN-γ是一种高活性、多功能的诱生蛋白质，能有效地抑制辅助性T细胞的形成、并抑制B淋巴细胞合成IgE，本检测显示、患者IL-4 增高，导致了患者IgE合成增加，IFN-γ的产生减低不能有效地抑制B 淋巴细胞合成IgE，因此IgE异常增多，导致了变应性鼻炎的发病。
红细胞不但具有粘附血浆循环免疫复合物的能力，而且还参与了自体多种细胞因子和炎症介质活性的调控[4] 。近年来对红细胞免疫功能的研究已深入到分子基因水平，并不断有新的发现，尤为突出的是：①红细胞的抗肿瘤作用；②参与自体多种细胞因子如IL-2、IL-3、IL-6、TNF和IFN-γ的调控。Kalechmen等[6]更进一步证实了红细胞促进自体外周血单个核细胞产生IFN-γ的免疫调节效应的作用。本检测显示红细胞、淋巴细胞免疫粘附功能与IL-4、IFN-γ在变应性鼻炎患者中的变化，但还比较肤浅，有待进一步研究探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
1，中华医学会耳鼻咽喉科学分会，中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会.变应性鼻炎诊断标准及疗效评定标准(1997年修订,海口). 中华耳鼻咽喉科杂志,1998,33:134-135.
2，吕世静,黄槐莲,成俊芬.肝癌患者红、白细胞免疫粘附功能的研究. 广东医学杂志,1997, 18:124-125.
3，安云芳,赵长青.变应性鼻炎研究的新进展.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,1998,4:188-190.
4，王海滨.红细胞参与细胞因子调控的研究进展. 国外医学免疫学分册,1999,22:263-266.
5，Terada N, Konno A, Togawa K. Biochemical properties of eosinophil and their preferential accumulation mechanism in nasal allergy. J Allergy Clin Immunol, 1994, 94:629-642.
6，Kalechmen Y, Herman S, Gafter U, et al. Enhancing effects of autologous enythrocyres on human or mouse cytokine secretion and IL-2R expression. Cellular Immunol, 1993, 148:114-129.
(收稿日期:2000-05-22), 百拇医药
单位：周斌 陈向阳(广东医学院附属医院耳鼻咽喉科 湛江 524001)；吕世静 何德 吕小华(广东医学院检验系临床免疫学教研室)
关键词：鼻炎；变应性；常年性；白细胞介素4；干扰素Ⅱ型
中华耳鼻咽喉科杂志000615 【摘要】 目的 探讨红、白细胞免疫功能及白细胞介素- 4(interleukin-4, IL-4)和干扰素γ(interferon-γ, IFN-γ)在变应性鼻炎发病中所起的作用。方法 采用红细胞、淋巴细胞的免疫吸附法和BA-ELISA法对外周血单核细胞分泌的IL-4和IFN-γ进行了测定。结果 43例常年性变应性鼻炎患者的红细胞、淋巴细胞免疫功能和IFN-γ水平均低于健康对照组(分别为P<0.05和P<0.01)，而IL-4的表达高于对照组(P<0.01)；结论 提示红细胞、淋巴细胞免疫功能、IL-4和IFN-γ的异常在变应性鼻炎的发生发展起重要作用。
, http://www.100md.com
Determination of the immune function of the erythrocyte and leucocyte and the activity of IL-4 and IFN-γ in patients with allergic rhinitis
ZHOU Bin, L
Shijing, CHEN Xiangyang, et al.(Department of Otorhinolaryngology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Guangdong Zhanjang 524001, China)
【Abstract】 Objective To investigate the immune function of erythrocyte (RBC) and leucocyte (WBC), and variety of the interleukin-4 (IL-4) and interferon-γ (IFN-γ) among patients with allergic rhinitis. Methods IL-4 and IFN-γ secreted by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were measured and compared with immune adhesive and BA-ELISA method. Results Results showed the RBC and WBC immune adhesive function and IFN-γ were significantly decreased than of the control, and IL-4 activity were significantly higher than the controls (P<0.01) in patients with perennial allergic rhinitis. Conclusion These results suggest that RBC and WBC the immune function and IL-4 and IFN-γ may play an important role in allergic rhinitis.
, 百拇医药
【Key words】 Rhinitis，allergic, perennial; Interleukin-4; Interferon type Ⅱ
近年发现红细胞免疫与多种免疫性疾病有密切关系；并发现了红细胞具有调控某些细胞因子的作用、直接或间接影响某些免疫性疾病的发生发展。我们观察变应性鼻炎患者外周血红细胞、淋巴细胞的免疫粘附功能及白细胞介素- 4 (interleukin-4, IL-4)和干扰素γ(interferon-γ，IFN-γ)含量变化，旨在探讨其在变应性鼻炎发病中所起的作用，报道如下。
材料与方法
一、标本来源
常年性变应性鼻炎病例取自于我院耳鼻咽喉科门诊患者，按1997年海口会议诊断标准确诊[1]。共43例，男34例，女9例；年龄18～62岁，平均41岁；病程在1年以上。健康对照组 43例，男26例，女17例；年龄18～24岁，平均21岁；均为我学院健康学生，无变应性疾病史。所有检测对象受检前2周内未服用过皮质类固醇药物。
, 百拇医药
二、试剂
RPMI-1640培养液(Gibco，美国)；刀豆素A(concanavalin，conA， Sigma,美国)；IL-4试剂盒(GenZyme，美国)；IFN-γ试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)。
三、方法
1.红细胞、淋巴细胞补体受体活性实验：红细胞、淋巴细胞免疫粘附花环试验参照文献[2],将0.05 ml淋巴细胞悬液(1×107/ml),小牛血清0.05 ml和0.1 ml自身红细胞悬液(1.25×107/ml)混匀，37℃水浴35 min然后再加入0.1 ml补体致敏酵母菌悬液(1×108/ml)混匀，置于37℃水浴35 min后，加入0.25%戊二醛固定，涂片、瑞氏染色。在高倍镜下观察，计数200个红细胞。以1个红细胞结上2个或以上酵母菌为1朵红细胞C3b受体花环；计数200个淋巴细胞。结上2个或以上酵母菌为1朵淋巴细胞补体受体花环，淋巴细胞结上2个红细胞为 1朵淋巴细胞LFA-3受体花环。算出红细胞和淋巴细胞各自花环率。为避免实验误差，取样本后均在3 h内开展试验；每次实验设正常对照，各标本均作3个样品，取其平均值。
, 百拇医药
2.诱导单个核细胞产生IL-4、IFN-γ及其测定：外周静脉血经肝素抗凝后按常规方法用Ficoll-Hypaque分离单个核细胞，用含 10 %小牛血清的RPMI-1640培养液，调整细胞至1×106/ml，然后加入conA 0.05 mg/ml，置于37℃ 5%CO2孵育箱中培养相应时间 ( IL- 4培养24 h，IFN-γ培养72 h)，收集培养上清液储存于-70℃，待测定 IL - 4及IFN-γ。
细胞因子测定采用BA-ELISA方法，严格按试剂盒说明书进行操作, 检测收集的单个核细胞培养上清液中的相关细胞因子。
3.统计学处理：组间比较采用t检验。
结果
红细胞、淋巴细胞免疫粘附混合花环试验：结果(表1)发现患者外周静脉血的红细胞-C3b受体花环率、淋巴细胞补体受体花环率及淋巴细胞-LFA-3受体花环率，均低于健康对照组(P<0.05)。
, 百拇医药
变应性鼻炎患者单个核细胞经conA刺激培养后，测定的结果(表2)显示IL-4含量表达水平明显高于对照组 (P<0.01)，IFN-γ的诱生表达水平则显著低于对照组(P<0.01)。
表1 变应性鼻炎患者红细胞、淋巴细胞免疫粘附混合
花环试验的花环率(
±s，%) 组别例
数
红细胞-C3b
受体花环
淋巴细胞补体
受体花环
, 百拇医药
淋巴细胞-LFA
-3受体花环
变应性鼻炎组*
43
15.29±4.39
2.38±0.81
1.70±0.92
健康对照组
43
20.21±5.17
3.29±0.90
3.26±1.01
, 百拇医药
* 与对照组相比较，P<0.05表2 变应性鼻炎IL-4及IFN诱导水平(
±s，ng/L) 组 别例数
IL-4
IFN-γ
变应性鼻炎组
43
191.76±20.13
1274.06±405.27
健康对照组
43
, 百拇医药
106.32±18.47
1501.10±427.31
讨论
变应性鼻炎属I型变态反应性疾病。本病的发生发展与宿主的免疫紊乱有关,其发病机制复杂，参与鼻超敏反应的细胞不仅有CD4阳性T细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、B淋巴细胞及 CD1阳性郎罕细胞等；而且还涉及了多种细胞因子[3]。近10 多年来许多学者们已开始重视红细胞免疫和红细胞参与细胞因子的调控作用，并证实了红细胞参与自体多种细胞因子如IFN-γ、IL-2及IL- 4的直接或间接调控，还发现了红细胞膜上具有高密度的细胞因子受体对调控炎症的发展进程和转归有着重要作用[4]。Keys等观察外周血单个核细胞诱导干扰素-γ的实验中，加入自身红细胞可使IFN-γ产量增加4～20倍，并证实这种促进作用属红细胞浓度依赖性及免疫粘附性。因此：变应性鼻炎患者红细胞的数量及其免疫粘附功能的质量异常，影响了IFN-γ产生，直接或间接造成了变应性鼻炎患者IgE的产生增多，导致病情加重。本组43 例常年性变应性鼻炎患者红、淋巴细胞的免疫粘附功能下降，变应性鼻炎主要为局部炎症、水肿的病理表现，可能由于红细胞、淋巴细胞免疫粘附功能异常，造成病变局部免疫复合物积聚及消除受阻，从而促发了局部炎症反应。
, http://www.100md.com
本组43 例变应性鼻炎患者外周血单个核细胞经 conA 刺激诱导，IL-4的产生明显高于对照组，IFN-γ则低于对照组，这2种细胞因子的异常，反映了变应性鼻炎患者免疫调节功能的紊乱。IL-4是IgE产生必需的细胞因子，在变应性鼻炎患者中对IgE产生起促进作用[5]。IFN-γ是一种高活性、多功能的诱生蛋白质，能有效地抑制辅助性T细胞的形成、并抑制B淋巴细胞合成IgE，本检测显示、患者IL-4 增高，导致了患者IgE合成增加，IFN-γ的产生减低不能有效地抑制B 淋巴细胞合成IgE，因此IgE异常增多，导致了变应性鼻炎的发病。
红细胞不但具有粘附血浆循环免疫复合物的能力，而且还参与了自体多种细胞因子和炎症介质活性的调控[4] 。近年来对红细胞免疫功能的研究已深入到分子基因水平，并不断有新的发现，尤为突出的是：①红细胞的抗肿瘤作用；②参与自体多种细胞因子如IL-2、IL-3、IL-6、TNF和IFN-γ的调控。Kalechmen等[6]更进一步证实了红细胞促进自体外周血单个核细胞产生IFN-γ的免疫调节效应的作用。本检测显示红细胞、淋巴细胞免疫粘附功能与IL-4、IFN-γ在变应性鼻炎患者中的变化，但还比较肤浅，有待进一步研究探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
1，中华医学会耳鼻咽喉科学分会，中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会.变应性鼻炎诊断标准及疗效评定标准(1997年修订,海口). 中华耳鼻咽喉科杂志,1998,33:134-135.
2，吕世静,黄槐莲,成俊芬.肝癌患者红、白细胞免疫粘附功能的研究. 广东医学杂志,1997, 18:124-125.
3，安云芳,赵长青.变应性鼻炎研究的新进展.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,1998,4:188-190.
4，王海滨.红细胞参与细胞因子调控的研究进展. 国外医学免疫学分册,1999,22:263-266.
5，Terada N, Konno A, Togawa K. Biochemical properties of eosinophil and their preferential accumulation mechanism in nasal allergy. J Allergy Clin Immunol, 1994, 94:629-642.
6，Kalechmen Y, Herman S, Gafter U, et al. Enhancing effects of autologous enythrocyres on human or mouse cytokine secretion and IL-2R expression. Cellular Immunol, 1993, 148:114-129.
(收稿日期:2000-05-22), 百拇医药