放烧复合伤小鼠骨髓细胞IL-3R与造血调控的研究
作者：黄定德 程绍钧 罗成基 粟永萍
单位：黄定德(重庆，第三军医大学医学检验系核医学教研室 400038)；程绍钧(重庆，第三军医大学医学检验系核医学教研室 400038)；罗成基(复合伤研究所)；粟永萍(复合伤研究所)
关键词：放射损伤；烧伤；放烧复合伤；造血调控；白细胞介素；3受体；骨髓有核细胞；小鼠
中华放射医学与防护杂志000110 【摘要】 目的 研究放烧复合伤小鼠骨髓有核细胞(BMNC)IL-3R的蛋白表达及功能的变化，探讨放烧复合伤后IL-3R在造血调控中的作用。方法 小鼠随机分为正常(N)、放射损伤(R)、烧伤(B)及放烧复合伤(C)共4组，分别于伤后1、3、7和14 d观察BMNC IL-3R α阳性率、平均含量及功能的变化，及其与BMNC计数的相关性。结果 ① R、C组IL-3R α阳性率及功能明显降低，伤后14 d无明显恢复。② R、C组IL-3R α的平均含量明显降低，伤后14 d开始回升，且与BMNC计数间存在明显正相关。③ B组IL-3R α阳性率、平均含量及功能无显著改变。结论 ① IL-3R α表达量在放烧复合伤小鼠造血损伤及造血恢复中起一定作用。② IL-3R 的功能在放烧复合伤小鼠造血损伤中起一定作用，但其恢复晚于表达量的恢复。③ 15% Ⅲ度烧伤对IL-3R的作用不明显；放烧复合伤基本上表现出放射损伤的特点。
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Relationship between IL-3R of BMNC and hematopoietic
regulation in combined irradiation-burn injury in mice
HUANG Dingde CHENG Shaojun LUO Chengji, et al
(The Third Military Medical University,Chongqing 400038,China)
【Abstract】 Objective To study the changes of expression and function of IL-3R of BMNC and explore the role of IL-3R in the hematopoietic regulation in combined irradiation-burn injury in mice. Methods Mice were randomized into normal (N),irradiation (R),burn (B) and combined irradiation-burn injury (C) groups. Changes of positive rate,mean contents and function of IL-3R α subunit were determined on the 1st,3rd,7th and 14th days post injury. Relationships between BMNC counts and positive rate,mean contents, function of IL-3R were also evaluated. Results ① Compared with Group N the positive rate and function of IL-3R α subunit of BMNC were significantly decreased in groups R,C,and maintained low during the first 14 days. ② The mean contents of IL-3R α subunit of BMNC were significantly lower in groups R,C than that in group N at first ,and then began to increase on the 14th day but did not reach the normal level. There was a significant positive correlation between mean contents of IL-3R α subunit and BMNC counts in all groups. ③ No significant changes in positive rate,mean contents and function of IL-3R were found in group B. Conclusions ① Expression of IL-3R α of BMNC plays an important role in the damage and recovery of hematopoiesis in combined irradiation-burn injury in mice. The funciton of IL-3R of BMNC is also important in the damage of hematopoiesis,but its functional recovery occurs later than that of its content in combined irradiation-burn injury in mice. ② There are no significant changes in IL-3R of BMNC after Ⅲ degree burn with 15% TBSA,so combined irradiation-burn injury might exert a similar effect on IL-3R as irradiation alone does.
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【Key words】 Irradiation； Burn； Combined irradiation-burn injury； Hematopoietic regulation； Interleukin-3 receptor； Bone marrow； Nucleated cells； Mice▲
IL-3刺激造血的功能能否发挥及其强弱，在很大程度上取决于靶细胞膜上白细胞介素-3受体(IL-3R)的质和量的状况。国内对IL-3R的研究仅见一篇报道[1]。罗成基等发现：放烧复合伤能抑制小鼠IL-3基因的表达，IL-3治疗能明显刺激小鼠伤后骨髓造血[2，3]；国外对IL-3R的研究始于80年代。但放射损伤对IL-3R的影响及IL-3R在放射损伤后造血调控中的作用尚未见报道。本文作者观察了放射损伤、烧伤、放烧复合伤小鼠BMNC IL-3R α的表达及功能的变化，旨在探讨放烧复合伤后IL-3R在造血调控中的作用。
, http://www.100md.com 材料和方法
1.实验动物及致伤：昆明种健康小鼠150只，雌雄各半，体重20～30 g，由第三军医大学实验动物中心提供。随机分为以下4组：① 正常对照组(N，n=10)；② 单纯放射损伤组(R，n=40)：60Co γ射线6 Gy一次性全身照射，吸收剂量率为11.31～12.31 Gy*min-1；③ 单纯烧伤组(B，n=50)：动物背部剪毛，3%凝固汽油烧7 s，致15% Ⅲ度烧伤(病理切片证实)；④ 放射损伤复合烧伤组(C，n=50)：放射损伤后30 min内烧伤。除N组外均分为伤后1、3、7和14 d共4个时相点，每个时相点动物数10～13只。
所有动物伤后立即腹腔注射无菌生理盐水2 ml*d-1，连续3 d。
2.主要试剂：兔抗小鼠IL-3R α多抗：美国Santa Cruz公司产品；过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(Streptavidin/Peroxidase,SP试剂盒)：北京中山生物技术有限公司产品；RPMI 1640细胞培养基：GIBCO产品；健马血清：北京放射医学研究所产品；转染mIL-3 cDNA的NIH3T3细胞培养上清(简称含mIL-3的上清)：本校分子生物学教研室刘昕教授惠赠；3H-TdR：中国原子能研究院产品。
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3.骨髓有核细胞的初步分离：无菌条件下RPMI 1640冲洗小鼠股、胫骨骨髓于培养皿，置37℃体积分数为5%的CO2孵箱中2 h，小心吸取悬浮液并离心，沉淀用RPMI 1640稀释并计数，待用。
4.粒-单系祖细胞(CFU-GM)培养：参照文献方法进行[4]，刺激因子为含mIL-3的上清。第5天计数CFU-GM，以>50个细胞为一集落。
5.BMNC的3H-TdR掺入实验：细胞培养条件同上，总培养时间72 h，终止培养前8 h加入3H-TdR 37 kBq/孔。8 h后收集细胞，液闪仪测计数率，换算成衰变率(Bq)。
6.免疫组织化学法：BMNC涂片，参照SP试剂盒及文献方法[5]进行IL-3R α的免疫组化染色。分别计数阳性率、测定阳性细胞单位目标面积的平均光密度(简称平均光密度，可反映每个阳性细胞IL-3R α的平均含量，真彩色医学图像分析系统中进行)。用阳性率及平均光密度对IL-3R α的蛋白表达半定量。
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7.统计分析：数据以
±s表示。采用Microsoft excel 97软件中的单因素方差分析法进行统计学分析。
结 果
1.小鼠伤后IL-3R α阳性率的变化
R组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有显著性(P<0.05)，伤后14 d(n=7)仍未开始恢复；B组(n=7)差异无显著性；C组(n=7)明显降低(P<0.05)，3～7 天(n=7)顿挫上升，但伤后14 d(n=7)仍明显低于N组。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表1。
表1 小鼠伤后BMNC IL-3R α阳性率(%)
的变化(±s,n=7) 伤后时间(d)
, 百拇医药
BMNC IL-3R α阳性率
R组
B组
C组
1
39.3±12.6*
58.4±11.0＃
42.5±6.2*
3
42.0±"8.6*
57.0±"7.0＃
, 百拇医药
48.9±6.7
7
42.7±"7.7*
59.5±"8.7＃
46.2±6.2
14
43.4±"7.8*
57.1±"5.1＃
41.6±6.5*
注：N组为：52.3%±11.7%；与N组比*P<0.05；与R、C组比＃P<0.01 2.小鼠伤后IL-3R α平均光密度的变化
, 百拇医药
R、C组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有非常显著性(P<0.01)，伤后14 d(n=7)开始回升，但仍未达到正常水平(P<0.05)；B组(n=7)无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表2。
表2 小鼠伤后BMNC IL-3R α平均光密度
的变化(±s,×10-2，n=7) 伤后时间(d)
BMNC IL-3R α平均光密度
R组
B组
C组
, 百拇医药 1
2.86±1.22**
5.33±1.23△△
3.10±1.41**
3
2.71±1.50**
5.86±1.95△△
2.86±0.90**
7
3.14±0.90**
, 百拇医药
5.14±1.14△
3.29±1.70**
14
5.07±1.30*＃＃
6.59±1.57△
4.94±1.70*＃
注：N组为：0.0658±0.0151；与N组比，*P<0.05，**P<0.01；与同组1、3、7 d比，＃P<0.05，＃＃P<0.01；与R、C组比，△P<0.05，△△P<0.01
表3 小鼠伤后BMNC 3H-TdR掺入量及CFU-GM产率的变化(±s，n=7)
, 百拇医药
伤后时间
(d)
3H-TdR掺入量(Bq)
CFU-GM产率
R组
B组
C组
R组
B组
C组
1
167.3±"70.5*
, 百拇医药
659.8±116.2&
154.7±"56.6*
51.3±22.9*
151.5±34.7&
41.7±21.8*
3
127.5±"20.3*
703.8±217.5&
147.5±"67.0*
, 百拇医药
32.8±"8.6*
190.3±43.3&
41.5±"8.5*
7
123.0±"60.7*
585.3±"81.5&
192.0±"89.1*
68.8±17.8*
195.7±61.4&
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58.8±25.0*
14
284.7±137.1*#
756.5±189.2&
283.7±109.4*
100.2±23.1*#
222.8±78.6&
87.0±42.3*
注：N掺入量=700.5±168.5，NCFU-GM产率=200.8±87.7；与相应的N组比，*P<0.01；与同组1，3，7天比，＃P<0.05；与R，C组比，&P<0.05
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3.小鼠伤后BMNC CFU-GM产率及3H-TdR掺入量的变化
R、C组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有非常显著性(P<0.01)，R组伤后14 d(n=7)开始回升，但仍未达到正常水平(P<0.01)；B组(n=7)无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表3。
4.小鼠伤后IL-3R α功能的变化
R、C组BMNC的Bq/平均光密度的比值明显降低(P<0.01)，伤后14 d仍未开始恢复；B组无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表4。用CFU-GM产率/平均光密度的值表示受体功能所得结果与前基本一致，见图1。
图1 小鼠伤后CFU-GM产率/平均光密度的变化(n=7)
, 百拇医药
表4 小鼠伤后BMNC Bq/平均光密度
的变化(±s,×10-3，n=7) 伤后时间(d)
BMNC的Bq/平均光密度比值
R组
B组
C组
1
5.0±0.7*
12.2±3.1＃
4.7±0.8*
, 百拇医药
3
4.6±0.6*
13.8±2.9＃
4.9±1.3*
7
4.4±1.1*
11.3±1.8＃
5.2±0.9*
14
5.5±1.3*
11.9±1.4＃
, 百拇医药
5.3±1.1*
注：N组为：11.2±1.9，与N组比，*P<0.01；与R、C组比，＃P<0.01 5.伤后BMNC计数的变化及其与IL-3R α平均光密度的关系
伤后BMNC计数(以每10 g小鼠体重含BMNC计数表示，下同)的改变与IL-3R α平均光密度的改变一致(见图2)，且存在明显正相关。N、R、B、C组相关系数分别为0.894、0.550、0.737、0.513，P值均小于0.01。
图2 小鼠伤后每10 g体重BMNC计数的变化
讨 论
IL-3R 位于髓系细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞等胞膜上，含α、β 2个亚单位。α为IL-3R 特有，能与IL-3特异结合。β为IL-3、GM-CSF和IL-5共用，参与受体后信号转导[6，7]。免疫组化证实IL-3R α的阳性染色主要位于胞膜。在射线作用下，富含IL-3R且对射线敏感的造血干细胞及祖细胞的大量死亡，及IL-3R蛋白表达的受抑是放射损伤及放烧复合伤后IL-3R α阳性率及平均含量下降的主要原因。同时IL-3R α阳性率及平均含量的下降也进一步加重造血损伤。
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单放组、复合伤组IL-3R α平均含量与BMNC计数间存在明显的正相关，表明放射损伤及放烧复合伤后小鼠IL-3R α平均含量的下降及回升可能在造血损伤及恢复过程中起一定作用；小鼠致伤后，激活或抑制了诸多相关因子掺入造血调控，部分抵消了造血细胞的增殖分化对IL-3R α含量的依赖，表现为单放、单烧及复合伤各组中，BMNC计数与IL-3R α平均含量的相关系数均较正常组下降，即造血调控的网络化决定了IL-3R α含量在伤后小鼠骨髓造血功能损伤和恢复中只起部分作用；伤后14 d IL-3R阳性率的变化在骨髓造血恢复中所起作用不明显，关键在于每个阳性细胞表面IL-3受体的平均含量。
在定量mIL-3的作用下，CFU-GM产率或3H-TdR掺入量与IL-3R平均含量的比值(CFU-GM产率/平均光密度或Bq/平均光密度)可间接反映IL-3R 的功能。本研究表明伤后14 d，单放组及复合伤组动物BMNC计数的开始恢复主要取决于IL-3R 平均含量的恢复，即伤后IL-3R 功能在造血损伤中起一定作用，但其功能的恢复可能晚于表达量的恢复(功能的变化可能也是造成IL-3R 平均含量与BMNC计数间相关系数降低的原因之一)；烧伤后细菌毒素可致IL-3基因的表达增强[8]，但15% Ⅲ度烧伤对小鼠BMNC IL-3R的表达及功能无明显影响。
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综上所述，IL-3R α表达量及功能在放射损伤、放烧复合伤小鼠造血损伤及恢复中起一定作用，其功能的恢复可能晚于表达量的恢复，放烧复合伤对IL-3R α的影响表现出明显的放射损伤特点。但受体后信号转导如何变化尚有待进一步研究。■
基金项目：军队医药卫生“九五”指令性攻关项目(96L045)
参考文献
[1]梁旭阳，李树浓，陈俊.免疫介导小鼠再生障碍性贫血与白细胞介素-3及其受体的关系.中华血液学杂志，1993，14：174-175.
[2]叶治家，董燕麟，罗成基，等.放烧复合伤后白细胞介素-3基因的表达.中华放射医学与防护杂志，1997，17：230-232.
[3]罗成基，郭朝华，周燕虹，等.白细胞介素-3对放烧复合伤小鼠造血功能的影响.中华放射医学与防护杂志，1996，16：28-31.
, 百拇医药
[4]葛忠良.造血细胞的培养和测定技术.见：杨景山主编.医学细胞化学与细胞生物学技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1990.282-317.
[5]蔡文琴，王伯云主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.成都：四川科学技术出版社，1994.8-144.
[6]Kitamura T,Sato N,Arai KI,et al. Expression cloning of the human IL-3 receptor cDNA reveals a share β subunit for the human IL-3 and GM-CSF receptors. Cell,1991,66:1165-1174.
[7]Kitamura T,Miyajima A. Functional reconstitution of the human interleukin 3 receptor. Blood,1992,80:84-90.
[8]Gallelli A,Aderson S,Charlot B,et al. Induction of murine hemapoietic growth factors by toxic shock syndrome toxin-1. J Immunnol,1989,142:2855-2863.
收稿日期:1999-03-05, 百拇医药
单位：黄定德(重庆，第三军医大学医学检验系核医学教研室 400038)；程绍钧(重庆，第三军医大学医学检验系核医学教研室 400038)；罗成基(复合伤研究所)；粟永萍(复合伤研究所)
关键词：放射损伤；烧伤；放烧复合伤；造血调控；白细胞介素；3受体；骨髓有核细胞；小鼠
中华放射医学与防护杂志000110 【摘要】 目的 研究放烧复合伤小鼠骨髓有核细胞(BMNC)IL-3R的蛋白表达及功能的变化，探讨放烧复合伤后IL-3R在造血调控中的作用。方法 小鼠随机分为正常(N)、放射损伤(R)、烧伤(B)及放烧复合伤(C)共4组，分别于伤后1、3、7和14 d观察BMNC IL-3R α阳性率、平均含量及功能的变化，及其与BMNC计数的相关性。结果 ① R、C组IL-3R α阳性率及功能明显降低，伤后14 d无明显恢复。② R、C组IL-3R α的平均含量明显降低，伤后14 d开始回升，且与BMNC计数间存在明显正相关。③ B组IL-3R α阳性率、平均含量及功能无显著改变。结论 ① IL-3R α表达量在放烧复合伤小鼠造血损伤及造血恢复中起一定作用。② IL-3R 的功能在放烧复合伤小鼠造血损伤中起一定作用，但其恢复晚于表达量的恢复。③ 15% Ⅲ度烧伤对IL-3R的作用不明显；放烧复合伤基本上表现出放射损伤的特点。
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Relationship between IL-3R of BMNC and hematopoietic
regulation in combined irradiation-burn injury in mice
HUANG Dingde CHENG Shaojun LUO Chengji, et al
(The Third Military Medical University,Chongqing 400038,China)
【Abstract】 Objective To study the changes of expression and function of IL-3R of BMNC and explore the role of IL-3R in the hematopoietic regulation in combined irradiation-burn injury in mice. Methods Mice were randomized into normal (N),irradiation (R),burn (B) and combined irradiation-burn injury (C) groups. Changes of positive rate,mean contents and function of IL-3R α subunit were determined on the 1st,3rd,7th and 14th days post injury. Relationships between BMNC counts and positive rate,mean contents, function of IL-3R were also evaluated. Results ① Compared with Group N the positive rate and function of IL-3R α subunit of BMNC were significantly decreased in groups R,C,and maintained low during the first 14 days. ② The mean contents of IL-3R α subunit of BMNC were significantly lower in groups R,C than that in group N at first ,and then began to increase on the 14th day but did not reach the normal level. There was a significant positive correlation between mean contents of IL-3R α subunit and BMNC counts in all groups. ③ No significant changes in positive rate,mean contents and function of IL-3R were found in group B. Conclusions ① Expression of IL-3R α of BMNC plays an important role in the damage and recovery of hematopoiesis in combined irradiation-burn injury in mice. The funciton of IL-3R of BMNC is also important in the damage of hematopoiesis,but its functional recovery occurs later than that of its content in combined irradiation-burn injury in mice. ② There are no significant changes in IL-3R of BMNC after Ⅲ degree burn with 15% TBSA,so combined irradiation-burn injury might exert a similar effect on IL-3R as irradiation alone does.
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【Key words】 Irradiation； Burn； Combined irradiation-burn injury； Hematopoietic regulation； Interleukin-3 receptor； Bone marrow； Nucleated cells； Mice▲
IL-3刺激造血的功能能否发挥及其强弱，在很大程度上取决于靶细胞膜上白细胞介素-3受体(IL-3R)的质和量的状况。国内对IL-3R的研究仅见一篇报道[1]。罗成基等发现：放烧复合伤能抑制小鼠IL-3基因的表达，IL-3治疗能明显刺激小鼠伤后骨髓造血[2，3]；国外对IL-3R的研究始于80年代。但放射损伤对IL-3R的影响及IL-3R在放射损伤后造血调控中的作用尚未见报道。本文作者观察了放射损伤、烧伤、放烧复合伤小鼠BMNC IL-3R α的表达及功能的变化，旨在探讨放烧复合伤后IL-3R在造血调控中的作用。
, http://www.100md.com 材料和方法
1.实验动物及致伤：昆明种健康小鼠150只，雌雄各半，体重20～30 g，由第三军医大学实验动物中心提供。随机分为以下4组：① 正常对照组(N，n=10)；② 单纯放射损伤组(R，n=40)：60Co γ射线6 Gy一次性全身照射，吸收剂量率为11.31～12.31 Gy*min-1；③ 单纯烧伤组(B，n=50)：动物背部剪毛，3%凝固汽油烧7 s，致15% Ⅲ度烧伤(病理切片证实)；④ 放射损伤复合烧伤组(C，n=50)：放射损伤后30 min内烧伤。除N组外均分为伤后1、3、7和14 d共4个时相点，每个时相点动物数10～13只。
所有动物伤后立即腹腔注射无菌生理盐水2 ml*d-1，连续3 d。
2.主要试剂：兔抗小鼠IL-3R α多抗：美国Santa Cruz公司产品；过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(Streptavidin/Peroxidase,SP试剂盒)：北京中山生物技术有限公司产品；RPMI 1640细胞培养基：GIBCO产品；健马血清：北京放射医学研究所产品；转染mIL-3 cDNA的NIH3T3细胞培养上清(简称含mIL-3的上清)：本校分子生物学教研室刘昕教授惠赠；3H-TdR：中国原子能研究院产品。
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3.骨髓有核细胞的初步分离：无菌条件下RPMI 1640冲洗小鼠股、胫骨骨髓于培养皿，置37℃体积分数为5%的CO2孵箱中2 h，小心吸取悬浮液并离心，沉淀用RPMI 1640稀释并计数，待用。
4.粒-单系祖细胞(CFU-GM)培养：参照文献方法进行[4]，刺激因子为含mIL-3的上清。第5天计数CFU-GM，以>50个细胞为一集落。
5.BMNC的3H-TdR掺入实验：细胞培养条件同上，总培养时间72 h，终止培养前8 h加入3H-TdR 37 kBq/孔。8 h后收集细胞，液闪仪测计数率，换算成衰变率(Bq)。
6.免疫组织化学法：BMNC涂片，参照SP试剂盒及文献方法[5]进行IL-3R α的免疫组化染色。分别计数阳性率、测定阳性细胞单位目标面积的平均光密度(简称平均光密度，可反映每个阳性细胞IL-3R α的平均含量，真彩色医学图像分析系统中进行)。用阳性率及平均光密度对IL-3R α的蛋白表达半定量。
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7.统计分析：数据以
±s表示。采用Microsoft excel 97软件中的单因素方差分析法进行统计学分析。结 果
1.小鼠伤后IL-3R α阳性率的变化
R组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有显著性(P<0.05)，伤后14 d(n=7)仍未开始恢复；B组(n=7)差异无显著性；C组(n=7)明显降低(P<0.05)，3～7 天(n=7)顿挫上升，但伤后14 d(n=7)仍明显低于N组。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表1。
表1 小鼠伤后BMNC IL-3R α阳性率(%)
的变化(
±s,n=7) 伤后时间(d), 百拇医药
BMNC IL-3R α阳性率
R组
B组
C组
1
39.3±12.6*
58.4±11.0＃
42.5±6.2*
3
42.0±"8.6*
57.0±"7.0＃
, 百拇医药
48.9±6.7
7
42.7±"7.7*
59.5±"8.7＃
46.2±6.2
14
43.4±"7.8*
57.1±"5.1＃
41.6±6.5*
注：N组为：52.3%±11.7%；与N组比*P<0.05；与R、C组比＃P<0.01 2.小鼠伤后IL-3R α平均光密度的变化
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R、C组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有非常显著性(P<0.01)，伤后14 d(n=7)开始回升，但仍未达到正常水平(P<0.05)；B组(n=7)无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表2。
表2 小鼠伤后BMNC IL-3R α平均光密度
的变化(
±s,×10-2，n=7) 伤后时间(d)BMNC IL-3R α平均光密度
R组
B组
C组
, 百拇医药 1
2.86±1.22**
5.33±1.23△△
3.10±1.41**
3
2.71±1.50**
5.86±1.95△△
2.86±0.90**
7
3.14±0.90**
, 百拇医药
5.14±1.14△
3.29±1.70**
14
5.07±1.30*＃＃
6.59±1.57△
4.94±1.70*＃
注：N组为：0.0658±0.0151；与N组比，*P<0.05，**P<0.01；与同组1、3、7 d比，＃P<0.05，＃＃P<0.01；与R、C组比，△P<0.05，△△P<0.01
表3 小鼠伤后BMNC 3H-TdR掺入量及CFU-GM产率的变化(
±s，n=7), 百拇医药
伤后时间
(d)
3H-TdR掺入量(Bq)
CFU-GM产率
R组
B组
C组
R组
B组
C组
1
167.3±"70.5*
, 百拇医药
659.8±116.2&
154.7±"56.6*
51.3±22.9*
151.5±34.7&
41.7±21.8*
3
127.5±"20.3*
703.8±217.5&
147.5±"67.0*
, 百拇医药
32.8±"8.6*
190.3±43.3&
41.5±"8.5*
7
123.0±"60.7*
585.3±"81.5&
192.0±"89.1*
68.8±17.8*
195.7±61.4&
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58.8±25.0*
14
284.7±137.1*#
756.5±189.2&
283.7±109.4*
100.2±23.1*#
222.8±78.6&
87.0±42.3*
注：N掺入量=700.5±168.5，NCFU-GM产率=200.8±87.7；与相应的N组比，*P<0.01；与同组1，3，7天比，＃P<0.05；与R，C组比，&P<0.05
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3.小鼠伤后BMNC CFU-GM产率及3H-TdR掺入量的变化
R、C组(n=7)受照射后立即降低，与对照组比，差异有非常显著性(P<0.01)，R组伤后14 d(n=7)开始回升，但仍未达到正常水平(P<0.01)；B组(n=7)无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表3。
4.小鼠伤后IL-3R α功能的变化
R、C组BMNC的Bq/平均光密度的比值明显降低(P<0.01)，伤后14 d仍未开始恢复；B组无明显变化。组间比较：R、C组间差异无显著性，但均明显低于B、N组，见表4。用CFU-GM产率/平均光密度的值表示受体功能所得结果与前基本一致，见图1。
图1 小鼠伤后CFU-GM产率/平均光密度的变化(n=7)
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表4 小鼠伤后BMNC Bq/平均光密度
的变化(
±s,×10-3，n=7) 伤后时间(d)BMNC的Bq/平均光密度比值
R组
B组
C组
1
5.0±0.7*
12.2±3.1＃
4.7±0.8*
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3
4.6±0.6*
13.8±2.9＃
4.9±1.3*
7
4.4±1.1*
11.3±1.8＃
5.2±0.9*
14
5.5±1.3*
11.9±1.4＃
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5.3±1.1*
注：N组为：11.2±1.9，与N组比，*P<0.01；与R、C组比，＃P<0.01 5.伤后BMNC计数的变化及其与IL-3R α平均光密度的关系
伤后BMNC计数(以每10 g小鼠体重含BMNC计数表示，下同)的改变与IL-3R α平均光密度的改变一致(见图2)，且存在明显正相关。N、R、B、C组相关系数分别为0.894、0.550、0.737、0.513，P值均小于0.01。
图2 小鼠伤后每10 g体重BMNC计数的变化
讨 论
IL-3R 位于髓系细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞等胞膜上，含α、β 2个亚单位。α为IL-3R 特有，能与IL-3特异结合。β为IL-3、GM-CSF和IL-5共用，参与受体后信号转导[6，7]。免疫组化证实IL-3R α的阳性染色主要位于胞膜。在射线作用下，富含IL-3R且对射线敏感的造血干细胞及祖细胞的大量死亡，及IL-3R蛋白表达的受抑是放射损伤及放烧复合伤后IL-3R α阳性率及平均含量下降的主要原因。同时IL-3R α阳性率及平均含量的下降也进一步加重造血损伤。
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单放组、复合伤组IL-3R α平均含量与BMNC计数间存在明显的正相关，表明放射损伤及放烧复合伤后小鼠IL-3R α平均含量的下降及回升可能在造血损伤及恢复过程中起一定作用；小鼠致伤后，激活或抑制了诸多相关因子掺入造血调控，部分抵消了造血细胞的增殖分化对IL-3R α含量的依赖，表现为单放、单烧及复合伤各组中，BMNC计数与IL-3R α平均含量的相关系数均较正常组下降，即造血调控的网络化决定了IL-3R α含量在伤后小鼠骨髓造血功能损伤和恢复中只起部分作用；伤后14 d IL-3R阳性率的变化在骨髓造血恢复中所起作用不明显，关键在于每个阳性细胞表面IL-3受体的平均含量。
在定量mIL-3的作用下，CFU-GM产率或3H-TdR掺入量与IL-3R平均含量的比值(CFU-GM产率/平均光密度或Bq/平均光密度)可间接反映IL-3R 的功能。本研究表明伤后14 d，单放组及复合伤组动物BMNC计数的开始恢复主要取决于IL-3R 平均含量的恢复，即伤后IL-3R 功能在造血损伤中起一定作用，但其功能的恢复可能晚于表达量的恢复(功能的变化可能也是造成IL-3R 平均含量与BMNC计数间相关系数降低的原因之一)；烧伤后细菌毒素可致IL-3基因的表达增强[8]，但15% Ⅲ度烧伤对小鼠BMNC IL-3R的表达及功能无明显影响。
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综上所述，IL-3R α表达量及功能在放射损伤、放烧复合伤小鼠造血损伤及恢复中起一定作用，其功能的恢复可能晚于表达量的恢复，放烧复合伤对IL-3R α的影响表现出明显的放射损伤特点。但受体后信号转导如何变化尚有待进一步研究。■
基金项目：军队医药卫生“九五”指令性攻关项目(96L045)
参考文献
[1]梁旭阳，李树浓，陈俊.免疫介导小鼠再生障碍性贫血与白细胞介素-3及其受体的关系.中华血液学杂志，1993，14：174-175.
[2]叶治家，董燕麟，罗成基，等.放烧复合伤后白细胞介素-3基因的表达.中华放射医学与防护杂志，1997，17：230-232.
[3]罗成基，郭朝华，周燕虹，等.白细胞介素-3对放烧复合伤小鼠造血功能的影响.中华放射医学与防护杂志，1996，16：28-31.
, 百拇医药
[4]葛忠良.造血细胞的培养和测定技术.见：杨景山主编.医学细胞化学与细胞生物学技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1990.282-317.
[5]蔡文琴，王伯云主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.成都：四川科学技术出版社，1994.8-144.
[6]Kitamura T,Sato N,Arai KI,et al. Expression cloning of the human IL-3 receptor cDNA reveals a share β subunit for the human IL-3 and GM-CSF receptors. Cell,1991,66:1165-1174.
[7]Kitamura T,Miyajima A. Functional reconstitution of the human interleukin 3 receptor. Blood,1992,80:84-90.
[8]Gallelli A,Aderson S,Charlot B,et al. Induction of murine hemapoietic growth factors by toxic shock syndrome toxin-1. J Immunnol,1989,142:2855-2863.
收稿日期:1999-03-05, 百拇医药