Kupffer 细胞对实验性肝癌中细胞凋亡相关基因表达的影响*
作者：朱海珍 阮幼冰 武忠弼
单位：同济医科大学实验医学研究中心超微病理研究室，武汉 430030
关键词：肝肿瘤，实验性；二乙基亚硝胺；凋亡；蛋白质bax；蛋白质P53；
同济医科大学学报000202 摘要：对单纯用二乙基亚硝胺(DENA)及氯化钆(GC )或酵母多糖(ZM)分别阻断或激活Kupffer 细胞后，同时给以DENA所引起的大鼠肝癌中的 增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、p53蛋白的表达和肝癌细胞的凋亡运用免疫组织化学和TUNE L法进行了对比研究，以探讨Kupffer 细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示 ：肝癌组织的增殖指数、凋亡指数在C组、A组、B组分别呈增高或降低趋势；bax、p53阳性 率在C组明显高于A组(P<0.05)，同时，bax、p53蛋白的表达与凋亡指数存在正相关。 结果提示，Kupffer细胞可能促进实验性肝癌细胞凋亡。
, 百拇医药
Kupffer 细胞
中图法分类号：R735.7， R329.2
The Influence of Kupffer Cells on the Ex pression of Apoptosis Related Genes in Experimental Hepatocellular Carcinoma
Zhu Haizhen，Ruan Youbing, Wu Zhongbi
Department of Ultrastructural Pathology, Experimental Medical Research Center,Tongji Medical University, Wuhan 430030
Abstract：To explore the influence of Kupffer cells on apoptosis in the expe rimental hepatocellular carcinoma (HCC), a comparative study on the expression o f proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bax, P53 and apoptosis of liver can cer cells was performed by using immunohistochemistry and terminal deoxynucleoty dil transferase (TdT) mediated dUTP digoxigenin nick end labeling (TUNEL) in die thylnitrosamine (DENA)-induced HCC in rats with and without pretreatment with D ENA (group A) or gadolinium chloride (GC, group B) or zymosan (ZM, group C) whic h might respectively block or enhance the activity of Kupffer cells. The results showed the proliferating index (PI) was increased and apoptosis index (AI) decr eased in group C, group A and group B. The positive rate of bax and P53 in group C was significantly higher than in group A (P<0.05). There was a positive c orrelation between the AI and expression of both bax and p53 protein. The result s suggested that Kupffer cells might promote apoptosis in the experimental HCC.
, 百拇医药
Key words：liver neoplasm, experimental; diethylnitrosam ine; apoptosis; protein bax; protein p53; Kupffer cell
我们以前的研究证实了Kupffer细胞对肝细胞的癌变过程具有抑制作用[1]，但对其 抑制机制尚需作进一步深入探讨。为此我们运用免疫组织化学技术对单纯用二乙基亚硝胺及 用氯化钆或酵母多糖分别阻断或激活Kupffer细胞后，同时以二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠 肝癌模型，并对3组动物肝癌模型中PCNA、bax、P53的表达进行了观察，借以了解Kupffer细 胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用，进而探讨Kupffer细胞抑制肝癌变过程的机制。
1 材料与方法
1.1 动物模型的建立及病理学检查
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正常雄性SD大鼠140只(同济医科大学实验动物学部提供)，随机分为6组：① A组，以 70 mg/kg剂量DENA灌胃，每周1次，连续用药15周后停药。②B组，以10 mg/kg剂量的氯化钆 静脉注射，每两周1次，以阻断Kupffer细胞，隔日再给以DENA，剂量及方法同A组。③C组 ，以20 mg/kg剂量的酵母多糖静脉注射，每两周1次，以激活Kupffer细胞，隔日再给以DENA ，剂量及方法同A组。④D组，以10 mg/kg剂量的氯化钆尾静脉注射，每两周1次，直至第15 周，以阻断Kupffer细胞。⑤E组，以20 mg/kg剂量的酵母多糖尾静脉注射，每两周1次，直 至第15周，以激活Kupffer细胞。⑥F组，大鼠以正常标准饲料及自由饮水。各组动物于诱 癌第21周全部处死，取肝组织，置入40 ml/L多聚甲醛固定液固定，常规石蜡包埋，切片厚5 μm, HE染色，光镜观察。
1.2 免疫组织化学染色
石蜡切片采用常规0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液微波抗原修复及SP法进行免疫组化染色 。一抗采用Calbiochem公司鼠抗人PCNA单克隆抗体(工作滴度1∶50)、Santa Cruz公司兔 抗人bax(工作滴度1∶50)、Novocastra Laboratories P53单克隆抗体(工作滴度1∶50) 。SP试剂盒购自德国Boehringer Mannheim公司。以肿瘤细胞核内出现棕黄色颗粒为PCNA、P 53阳性细胞，而胞浆内出现棕黄色颗粒为bax阳性细胞。每次实验以PBS替代一抗作空白对照 。实验重复3次。
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1.3 原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL法)
采用德国Boehringer Mannheim公司试剂，具体流程：组织切片常规脱蜡与复水后，经0.2 mol/L HCl室温处理，用30 μg/ml蛋白酶K消化组织切片，PBS漂洗。TUNEL反应液37℃孵育 切片1 h。PBS漂洗后，滴加碱性磷酸酶，再以PBS漂洗。将切片置于碱性磷酸酶显色底物 (NBT/BCIP)液中避光显色30 min,蒸馏水终止显色。胞核蓝染可视为阳性细胞。同时做对 照实验，TUNEL反应液中不加TdT酶。
1.4 肝癌细胞增殖指数及凋亡指数
应用本室购置的德国Leiz ASM 68K图像分析仪计数。每张切片随机选5个视野进行细胞计数 ，累积5个视野(10×40)的凋亡细胞数、增殖细胞数及总的细胞数。增殖指标是以与细胞 增殖密切相关的PCNA抗原染色表示。增殖或凋亡指数是以明显的增殖或凋亡阳性染色细胞占 同一视野细胞总数的百分比表示：
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1.5 统计学处理
采用精确概率法、t检验、Spearman等级相关分析法。
2 结果
2.1 肉眼及病理组织学检查(诱癌第21周)
D组、E组、F组大鼠肉眼及镜检均未见异常。A组、B组大鼠肝表面布满灰白色结节，A组 最大结节约0.5 cm，B组可达2.0 cm左右，镜检为肝细胞肝癌。C组大鼠肝表面散在分布着 灰 白色结节，呈局灶性，直径一般在0.1～0.3 cm左右，镜检为肝细胞肝癌，并可观察到许 多凋亡细胞。
2.2 bax检测结果
肝癌bax阳性细胞棕黄色颗粒定位于癌细胞胞浆中(图1)。C组、A组、B组阳性率分别为8 4.6%(11/13)、28.6%(2/7)、27.3%(3/11)。C组阳性率高于A 组，χ2检验 结果P<0.05,差异有显著性。
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2.3 P53检测结果
肝癌p53阳性信号定位于癌细胞胞核(图2)。C组、A组、B组阳性率分别为76.9%(10/13)、 14.3%(1/7)、36.4%(4/11)。C组阳性率高于A 组，χ2检验结果，P<0.05,差 异有显著性。
2.4 PCNA检测结果
PCNA阳性信号定位于癌细胞胞核(图3)。在所有动物中均有表达。
bax、P53、PCNA在D组、E组及F组均呈阴性结果。
2.5 TUNEL法检测肝癌细胞凋亡
用TUNEL法在A组、B组、C组中均可检见数量不同的凋亡细胞，凋亡细胞阳性反应物为分 布均匀的深蓝色细颗粒。阳性着色位于胞核，体积等于或小于正常细胞核。凋亡细胞呈单个 、散在分布(图4)。
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2.6 增殖指数(PI)、凋亡指数(AI)
A组、B组、C组的PI、AI见表1。
表1 PI、AI在A组、B组及C组中的分布 (
±s) 组别
例数
PI(%)
AI(%)
PI/AI
C组
13
15.2214±2.172*
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7.5333±1.613*
2.20
A组
7
24.9655±2.530
4.3602±1.175
5.73
B组
11
38.6862±3.168*
2.5230±0.804*
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15.4
与A组相比 * P<0.01
2.7 bax、P53与凋亡指数的相关性分析
在A组、B 组、C组中，bax、P53与AI 均存在着正相关，见表2。
表2 AI与bax、P53的相关性分析 组别
bax阳性例数/
总例数
AI对bax
P53阳性例数/
总例数
AI对P53
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rs
P
rs
P
C组
11/13
0.6285
<0.05
10/13
0.7339
<0.01
A组
2/7
, 百拇医药
0.7905
<0.05
1/7
0.6124
B组
3/11
0.7377
<0.01
4/11
0.8180
<0.01
Spearman等级相关分析法
3 讨论
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氯化钆是一种特异的Kupffer 细胞填塞剂[1]。酵母多糖是一种免疫增强剂，可用 于激活Kupffer细胞[2] 。本实验经大鼠尾静脉注入氯化钆或酵母多糖以阻断或激 活Kupffer细胞的正常功能, 并再给予DENA诱发大鼠肝癌, 以观察Kupffer细胞在实验性肝癌 细胞凋亡中的作用。
PCNA是DNA多聚酶的一种辅助蛋白，它协调DNA前导链和后随链的合成。在静止期细胞中，含 量很少，于G1晚期、S期达高峰，G2、M期又呈明显下降，它的出现与细胞增殖有关，是 反映细胞增殖的主要生物学指标[3]。bax蛋白是分子量为21 kD并与bcl-2具有氨 基酸同源序列的一种蛋白质。它与抗凋亡蛋白bcl-2形成异源二聚体，具有抑制bcl-2的功 能，故有促进细胞凋亡的作用[4]。当DNA受到基因毒剂损伤时，野生型P53诱导细 胞进入G1期，抑制细胞增殖，直至DNA修复。如果损伤不能被修复，P53就诱化那些诱导凋 亡的基因转录，使其进入凋亡状态[5]。有资料报道P53的异常表达与细胞凋亡有关 [6]。Zhao[7]等发现在人类原发性肝癌，凋亡指数与P53蛋白表达存在着 正相关，并认为P53具有调节肝癌细胞凋亡的作用。我们的实验也证实了这一点。TUNEL法是 一种新近发现的原位检测细胞凋亡的方法[8]，并被用于人类原发性肝癌及其它肿 瘤细胞凋亡的检测[9]。
, 百拇医药
我们的实验结果显示：bax、P53蛋白阳性表达率C组高于A组。肝癌组织的增殖指数、凋亡指 数在C组、A组、B组呈相应的增高或降低趋势。说明氯化钆阻断Kupffer细胞后导致肝癌组织 凋亡减少，酵母多糖激活Kupffer细胞后则促进肝癌细胞的凋亡，提示具有正常功能的Kupff er细胞可促进肝癌组织中癌细胞的凋亡。
肿瘤的无限制生长是肿瘤的特征之一，肿瘤的生长速度取决于肿瘤细胞增殖与凋亡的比例 [10,11]。在正常组织中，机体通过凋亡机制清除体内的转化细胞。凋亡的自发性丧 失通过积聚分裂的癌细胞和具有潜在恶性的突变体而加速肿瘤的发生发展[10，11] 。本文提示Kupffer细胞通过促进肝癌细胞凋亡，从而参与抑制肝细胞的癌变过程。
(本文图1～4见封4)
国家自然科学基金资助项目(No.39170338)
, 百拇医药
朱海珍，男，1969年生，博士研究生
参考文献
1，朱海轸，阮幼冰，武忠弼等. Kupffer细胞在实验性肝癌形成中的作用. 中 华病理学杂志，1998,27(2):102
2，Decker K. Biologically active products of stimulated liver macropha ges (Kupffer Cells). Eur J Biochem, 1990,192:245
3，Celis J E, Celis A. Cell cycle-dependent variations in the distr ibution of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear antigen in cult ured cells: Subdivision of S phase. Proc Natl Acad Sci USA, 1985,82:3262
, 百拇医药
4，Hung W C, Chuang L Y. Induction of apoptosis by sphingosine-1-ph osphate in human hepatoma cells is associated with enhanced expression of bax g ene product. Biochem Biophys Res Commu, 1996,229:11
5，Oren M. Relationship of p53 to the control of apoptotic cell death. Sem Cancer Bio, 1994,5:221
6，Gottlieb T M, Oren M. p53 in growth control and neoplasia. Biochim Biophys Acta, 1996,1287:77
7，Zhao M, Zimmermann. Apoptosis in human hepatocellular carcinoma a nd in the liver cell dysplasia is associated with p53 protein immunoreactivity. J Clin Pathol, 1997,50:394
, 百拇医药
8，Gavrieli Y, Sherman Y, Ben-Sasson A S. Identification of programme d cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragment. J Cell Biol, 1992,119:493
9，Hino N, Higashi T, Nouso K et al. Apoptosis and proliferation of human hepatocellular carcinoma. Liver, 1996,16:123
10，Carson D A, Ribeiro L M. Apoptosis and disease. Lancet, 1993,341:1 251
11，Willams G T. Programmed cell death: apoptosis and oncogenesis. Cell, 1991, 65:1097
(收稿：1999-10-25), http://www.100md.com
单位：同济医科大学实验医学研究中心超微病理研究室，武汉 430030
关键词：肝肿瘤，实验性；二乙基亚硝胺；凋亡；蛋白质bax；蛋白质P53；
同济医科大学学报000202 摘要：对单纯用二乙基亚硝胺(DENA)及氯化钆(GC )或酵母多糖(ZM)分别阻断或激活Kupffer 细胞后，同时给以DENA所引起的大鼠肝癌中的 增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、p53蛋白的表达和肝癌细胞的凋亡运用免疫组织化学和TUNE L法进行了对比研究，以探讨Kupffer 细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示 ：肝癌组织的增殖指数、凋亡指数在C组、A组、B组分别呈增高或降低趋势；bax、p53阳性 率在C组明显高于A组(P<0.05)，同时，bax、p53蛋白的表达与凋亡指数存在正相关。 结果提示，Kupffer细胞可能促进实验性肝癌细胞凋亡。
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Kupffer 细胞
中图法分类号：R735.7， R329.2
The Influence of Kupffer Cells on the Ex pression of Apoptosis Related Genes in Experimental Hepatocellular Carcinoma
Zhu Haizhen，Ruan Youbing, Wu Zhongbi
Department of Ultrastructural Pathology, Experimental Medical Research Center,Tongji Medical University, Wuhan 430030
Abstract：To explore the influence of Kupffer cells on apoptosis in the expe rimental hepatocellular carcinoma (HCC), a comparative study on the expression o f proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bax, P53 and apoptosis of liver can cer cells was performed by using immunohistochemistry and terminal deoxynucleoty dil transferase (TdT) mediated dUTP digoxigenin nick end labeling (TUNEL) in die thylnitrosamine (DENA)-induced HCC in rats with and without pretreatment with D ENA (group A) or gadolinium chloride (GC, group B) or zymosan (ZM, group C) whic h might respectively block or enhance the activity of Kupffer cells. The results showed the proliferating index (PI) was increased and apoptosis index (AI) decr eased in group C, group A and group B. The positive rate of bax and P53 in group C was significantly higher than in group A (P<0.05). There was a positive c orrelation between the AI and expression of both bax and p53 protein. The result s suggested that Kupffer cells might promote apoptosis in the experimental HCC.
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Key words：liver neoplasm, experimental; diethylnitrosam ine; apoptosis; protein bax; protein p53; Kupffer cell
我们以前的研究证实了Kupffer细胞对肝细胞的癌变过程具有抑制作用[1]，但对其 抑制机制尚需作进一步深入探讨。为此我们运用免疫组织化学技术对单纯用二乙基亚硝胺及 用氯化钆或酵母多糖分别阻断或激活Kupffer细胞后，同时以二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠 肝癌模型，并对3组动物肝癌模型中PCNA、bax、P53的表达进行了观察，借以了解Kupffer细 胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用，进而探讨Kupffer细胞抑制肝癌变过程的机制。
1 材料与方法
1.1 动物模型的建立及病理学检查
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正常雄性SD大鼠140只(同济医科大学实验动物学部提供)，随机分为6组：① A组，以 70 mg/kg剂量DENA灌胃，每周1次，连续用药15周后停药。②B组，以10 mg/kg剂量的氯化钆 静脉注射，每两周1次，以阻断Kupffer细胞，隔日再给以DENA，剂量及方法同A组。③C组 ，以20 mg/kg剂量的酵母多糖静脉注射，每两周1次，以激活Kupffer细胞，隔日再给以DENA ，剂量及方法同A组。④D组，以10 mg/kg剂量的氯化钆尾静脉注射，每两周1次，直至第15 周，以阻断Kupffer细胞。⑤E组，以20 mg/kg剂量的酵母多糖尾静脉注射，每两周1次，直 至第15周，以激活Kupffer细胞。⑥F组，大鼠以正常标准饲料及自由饮水。各组动物于诱 癌第21周全部处死，取肝组织，置入40 ml/L多聚甲醛固定液固定，常规石蜡包埋，切片厚5 μm, HE染色，光镜观察。
1.2 免疫组织化学染色
石蜡切片采用常规0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液微波抗原修复及SP法进行免疫组化染色 。一抗采用Calbiochem公司鼠抗人PCNA单克隆抗体(工作滴度1∶50)、Santa Cruz公司兔 抗人bax(工作滴度1∶50)、Novocastra Laboratories P53单克隆抗体(工作滴度1∶50) 。SP试剂盒购自德国Boehringer Mannheim公司。以肿瘤细胞核内出现棕黄色颗粒为PCNA、P 53阳性细胞，而胞浆内出现棕黄色颗粒为bax阳性细胞。每次实验以PBS替代一抗作空白对照 。实验重复3次。
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1.3 原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL法)
采用德国Boehringer Mannheim公司试剂，具体流程：组织切片常规脱蜡与复水后，经0.2 mol/L HCl室温处理，用30 μg/ml蛋白酶K消化组织切片，PBS漂洗。TUNEL反应液37℃孵育 切片1 h。PBS漂洗后，滴加碱性磷酸酶，再以PBS漂洗。将切片置于碱性磷酸酶显色底物 (NBT/BCIP)液中避光显色30 min,蒸馏水终止显色。胞核蓝染可视为阳性细胞。同时做对 照实验，TUNEL反应液中不加TdT酶。
1.4 肝癌细胞增殖指数及凋亡指数
应用本室购置的德国Leiz ASM 68K图像分析仪计数。每张切片随机选5个视野进行细胞计数 ，累积5个视野(10×40)的凋亡细胞数、增殖细胞数及总的细胞数。增殖指标是以与细胞 增殖密切相关的PCNA抗原染色表示。增殖或凋亡指数是以明显的增殖或凋亡阳性染色细胞占 同一视野细胞总数的百分比表示：
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1.5 统计学处理
采用精确概率法、t检验、Spearman等级相关分析法。
2 结果
2.1 肉眼及病理组织学检查(诱癌第21周)
D组、E组、F组大鼠肉眼及镜检均未见异常。A组、B组大鼠肝表面布满灰白色结节，A组 最大结节约0.5 cm，B组可达2.0 cm左右，镜检为肝细胞肝癌。C组大鼠肝表面散在分布着 灰 白色结节，呈局灶性，直径一般在0.1～0.3 cm左右，镜检为肝细胞肝癌，并可观察到许 多凋亡细胞。
2.2 bax检测结果
肝癌bax阳性细胞棕黄色颗粒定位于癌细胞胞浆中(图1)。C组、A组、B组阳性率分别为8 4.6%(11/13)、28.6%(2/7)、27.3%(3/11)。C组阳性率高于A 组，χ2检验 结果P<0.05,差异有显著性。
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2.3 P53检测结果
肝癌p53阳性信号定位于癌细胞胞核(图2)。C组、A组、B组阳性率分别为76.9%(10/13)、 14.3%(1/7)、36.4%(4/11)。C组阳性率高于A 组，χ2检验结果，P<0.05,差 异有显著性。
2.4 PCNA检测结果
PCNA阳性信号定位于癌细胞胞核(图3)。在所有动物中均有表达。
bax、P53、PCNA在D组、E组及F组均呈阴性结果。
2.5 TUNEL法检测肝癌细胞凋亡
用TUNEL法在A组、B组、C组中均可检见数量不同的凋亡细胞，凋亡细胞阳性反应物为分 布均匀的深蓝色细颗粒。阳性着色位于胞核，体积等于或小于正常细胞核。凋亡细胞呈单个 、散在分布(图4)。
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2.6 增殖指数(PI)、凋亡指数(AI)
A组、B组、C组的PI、AI见表1。
表1 PI、AI在A组、B组及C组中的分布 (
±s) 组别例数
PI(%)
AI(%)
PI/AI
C组
13
15.2214±2.172*
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7.5333±1.613*
2.20
A组
7
24.9655±2.530
4.3602±1.175
5.73
B组
11
38.6862±3.168*
2.5230±0.804*
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15.4
与A组相比 * P<0.01
2.7 bax、P53与凋亡指数的相关性分析
在A组、B 组、C组中，bax、P53与AI 均存在着正相关，见表2。
表2 AI与bax、P53的相关性分析 组别
bax阳性例数/
总例数
AI对bax
P53阳性例数/
总例数
AI对P53
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rs
P
rs
P
C组
11/13
0.6285
<0.05
10/13
0.7339
<0.01
A组
2/7
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0.7905
<0.05
1/7
0.6124
B组
3/11
0.7377
<0.01
4/11
0.8180
<0.01
Spearman等级相关分析法
3 讨论
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氯化钆是一种特异的Kupffer 细胞填塞剂[1]。酵母多糖是一种免疫增强剂，可用 于激活Kupffer细胞[2] 。本实验经大鼠尾静脉注入氯化钆或酵母多糖以阻断或激 活Kupffer细胞的正常功能, 并再给予DENA诱发大鼠肝癌, 以观察Kupffer细胞在实验性肝癌 细胞凋亡中的作用。
PCNA是DNA多聚酶的一种辅助蛋白，它协调DNA前导链和后随链的合成。在静止期细胞中，含 量很少，于G1晚期、S期达高峰，G2、M期又呈明显下降，它的出现与细胞增殖有关，是 反映细胞增殖的主要生物学指标[3]。bax蛋白是分子量为21 kD并与bcl-2具有氨 基酸同源序列的一种蛋白质。它与抗凋亡蛋白bcl-2形成异源二聚体，具有抑制bcl-2的功 能，故有促进细胞凋亡的作用[4]。当DNA受到基因毒剂损伤时，野生型P53诱导细 胞进入G1期，抑制细胞增殖，直至DNA修复。如果损伤不能被修复，P53就诱化那些诱导凋 亡的基因转录，使其进入凋亡状态[5]。有资料报道P53的异常表达与细胞凋亡有关 [6]。Zhao[7]等发现在人类原发性肝癌，凋亡指数与P53蛋白表达存在着 正相关，并认为P53具有调节肝癌细胞凋亡的作用。我们的实验也证实了这一点。TUNEL法是 一种新近发现的原位检测细胞凋亡的方法[8]，并被用于人类原发性肝癌及其它肿 瘤细胞凋亡的检测[9]。
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我们的实验结果显示：bax、P53蛋白阳性表达率C组高于A组。肝癌组织的增殖指数、凋亡指 数在C组、A组、B组呈相应的增高或降低趋势。说明氯化钆阻断Kupffer细胞后导致肝癌组织 凋亡减少，酵母多糖激活Kupffer细胞后则促进肝癌细胞的凋亡，提示具有正常功能的Kupff er细胞可促进肝癌组织中癌细胞的凋亡。
肿瘤的无限制生长是肿瘤的特征之一，肿瘤的生长速度取决于肿瘤细胞增殖与凋亡的比例 [10,11]。在正常组织中，机体通过凋亡机制清除体内的转化细胞。凋亡的自发性丧 失通过积聚分裂的癌细胞和具有潜在恶性的突变体而加速肿瘤的发生发展[10，11] 。本文提示Kupffer细胞通过促进肝癌细胞凋亡，从而参与抑制肝细胞的癌变过程。
(本文图1～4见封4)
国家自然科学基金资助项目(No.39170338)
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朱海珍，男，1969年生，博士研究生
参考文献
1，朱海轸，阮幼冰，武忠弼等. Kupffer细胞在实验性肝癌形成中的作用. 中 华病理学杂志，1998,27(2):102
2，Decker K. Biologically active products of stimulated liver macropha ges (Kupffer Cells). Eur J Biochem, 1990,192:245
3，Celis J E, Celis A. Cell cycle-dependent variations in the distr ibution of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear antigen in cult ured cells: Subdivision of S phase. Proc Natl Acad Sci USA, 1985,82:3262
, 百拇医药
4，Hung W C, Chuang L Y. Induction of apoptosis by sphingosine-1-ph osphate in human hepatoma cells is associated with enhanced expression of bax g ene product. Biochem Biophys Res Commu, 1996,229:11
5，Oren M. Relationship of p53 to the control of apoptotic cell death. Sem Cancer Bio, 1994,5:221
6，Gottlieb T M, Oren M. p53 in growth control and neoplasia. Biochim Biophys Acta, 1996,1287:77
7，Zhao M, Zimmermann. Apoptosis in human hepatocellular carcinoma a nd in the liver cell dysplasia is associated with p53 protein immunoreactivity. J Clin Pathol, 1997,50:394
, 百拇医药
8，Gavrieli Y, Sherman Y, Ben-Sasson A S. Identification of programme d cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragment. J Cell Biol, 1992,119:493
9，Hino N, Higashi T, Nouso K et al. Apoptosis and proliferation of human hepatocellular carcinoma. Liver, 1996,16:123
10，Carson D A, Ribeiro L M. Apoptosis and disease. Lancet, 1993,341:1 251
11，Willams G T. Programmed cell death: apoptosis and oncogenesis. Cell, 1991, 65:1097
(收稿：1999-10-25), http://www.100md.com