川木通中齐墩果酸的含量测定
作者：唐声武 裴瑾 郭力
单位：成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075
关键词：川木通；齐墩果酸；薄层扫描
成都中医药大学学报000228摘 要：采用薄层扫描法测定了川木通的4种植物茎水解液中齐墩果酸的含量，结果为：小木通为0.0649%，粗齿铁线莲为0.0389%，钝萼铁线莲0.1063%，绣球藤0.0682%。首次从粗齿铁线莲、钝萼铁线莲的水解液中检出了齐墩果酸。
中图分类号：R284.1;R282.5 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)02-0053-02
作者简介：唐声武，男，1943年3月生；副教授，硕士生导师；研究方向：质量与中药品种和鉴别。
, 百拇医药 川木通为常用中药，《中国药典》1995年版收载为毛莨科铁线莲属植物小木通Clematis armandii Franch. 或锈球藤C. Montana buch-Ham干燥根茎，具有清热利尿，通经下乳等功能。临床用于水肿、淋病、小便不通、关节痹痛、经闭乳少等症。据报道，其含有三萜皂甙，经水解后生成齐墩果酸及葡萄糖等[1]。目前作川木通入药的铁线莲属植物有10余种。四川、重庆产川木通的主流品种为小木通C. armandii、粗齿铁线莲C. argentilucida和钝萼铁线莲C. peterae，而药典收载品种绣球藤C. montana的茎在商品药材中很难发现[2]。我们对上述 4种植物的茎进行了齐墩果酸的定性鉴别及含量测定，现报道如下。
1 材料
小木通、粗齿铁线莲、钝萼铁线莲和锈球藤分别采自都江堰市青城山、达州地区宣汉县、都江堰市青城山、四川省峨眉山。
, 百拇医药
2 薄层鉴别
分别取药材粉末2 g，加1 mol/L的盐酸20 mL和氯仿20 mL，加热回流，萃取氯仿层，浓缩点样，以环己烷-乙酸乙酯(7:3)为展开剂上行展开，用10%硫酸乙醇液喷雾，90℃加热8 min显色，在与齐墩果酸对照品相应位置上均有紫红色斑点(见图1)。
3 齐墩果酸含量测定
3.1 仪器与试药
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，所用试剂均为分析纯，齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检验所)。
图1 川木通水解液TLC图
3.2 实验条件
, 百拇医药
薄层层析吸附剂：硅胶G-CMCNa薄层板，105℃活化1 h；展开剂：环己烷-乙酸乙酯(7∶3)，上行展开，展距8 cm；显色剂：10%硫酸乙醇液；显色条件：喷雾后90℃加热8 min。
扫描条件：双波长反射法锯齿扫描，测定波长λS＝530 nm，参比波长λR＝680 nm，线性参数SX=3,背景调至ON，灵敏度×2，ΔY＝0.2，最小峰面积500。
在选定条件下，分别吸取齐墩果酸对照品(0.75 mg/μL)1.0、2.0、3.0、4.0、7.0 μL点于硅胶板上，间距1.5 cm，展开，显色，扫描，测定吸光积分值，以吸光度积分值为纵坐标，齐墩果酸点样量为横坐标，绘制标准曲线，齐墩果酸在0.75～5.25 mg范围内线性关系良好。作回归方程Y＝5987.168X-450.753,相关系数r=0.9971。由于不通过原点，所以选择两点外坐标法进行定量测定(见图2)。
, 百拇医药
3.3 实验样品溶液的制备
3.3.1 水解酸浓度的考察
取样品粉末约2 g，精密称定，分别加入0.5、1.0、1.5 mmol/L的盐酸约20 mL，加热回流3 h，萃取氯仿层，再用氯仿萃取2次，每次20 mL，合并氯仿 液，回收氯仿后，再用氯仿定容至5 mL，点样，依法显色扫描测定。结果表明，用0.5 mol/L的盐酸水解，齐墩果酸的测得量很低，而1.0 mol/L与1.5 mol/L的盐酸几乎无明显差异，故采用1.0 mol/L的盐酸水解样品。
图2 标准曲线
3.3.2 水解时间的考察
取样品粉末约2 g，精密称定，加入1.0的盐酸约20 mL和氯仿20 mL，分别加热回流1 h、2 h、3 h、4 h，依法萃取定容、点样、显色、扫描测定。结果表明，水解3 h、4 h时测得量较高且无明显差异，故选择水解时间为3 h。
, http://www.100md.com
3.4 稳定性试验
精密称取对照品溶液2 μL和供试品10 μL点于薄层板上，依法显色，每隔30 min扫描1次。结果表明，对照品的吸光度积分值在2 h内基本稳定，RSD为1.96%，供试品的吸光度积分值在2 h内亦基本稳定，RSD为2.81%。
3.5 精密度试验
(1)同板精密度试验：取对照品溶液和同一供试品溶液，相同点样量，点于同一薄层板上，依法显色扫描测定，对照品RSD为1.50%，供试品RSD为3.54%。
(2)异板精密度试验：对照品溶液和同一供试品溶液各取相同点样量，点于3块薄层板上，依法显色扫描测定，对照品RSD为3.27%，供试品RSD为3.32%。
3.6 加样回收试验
, 百拇医药
取含量已知的钝萼铁线莲水解液6份，加入一定量的齐墩果酸(3种水平，各2份，见表1)，氯仿萃取3次，合并萃取液，浓缩定容至10 mL，点样，显色，测定，计算回收率(回收率=(测定量-药材中含量)(mg)/添加对照品量(mg)×100%)，结果见表1。
表1 回收率试验结果 测定次数
1
2
3
4
5
6
药材中OLA量(mg)
0.2142
, 百拇医药
0.1922
0.2298
0.2454
0.2032
0.1906
加入OLA量(mg)
0.1504
0.1528
0.1996
0.1973
0.2307
0.2321
, 百拇医药
测得量(mg)
0.3587
0.3469
0.4183
0.4376
0.4392
0.4137
回收率(%)
96.1
97.9
94.1
97.4
102.2
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96.1
平均回收率
97.3
RSD
2.81
3.7样品含量测定
精密吸取供试品溶液10 μL，对照品2μL、4μL，分别交叉点样于薄层板上，依法显色测定。结果见表2。表2 齐墩果酸含量测定结果(n=3)
品 种
含量(%)
RSD(%)
小木通
, 百拇医药
0.0649
2.68
粗齿铁线莲
0.0389
3.08
钝萼铁线莲
0.1063
3.26
乡球藤
0.0682
1.97
4 讨论
我们通过TLC证实了小木通和绣球藤中齐墩果酸已结合成甙，经酸水解后能得到游离甙元。液，并且在粗齿铁线莲和钝萼铁线莲水解液中首次检出了齐墩果酸。
, 百拇医药
采用薄层扫描法测定4种川木通水解液中剂墩果酸的含量，通过方法学考察认为最佳水解的条件为：1mol/L盐酸加热回流3小时。其含量高低依次为钝萼铁线莲、绣球藤、小木通、粗齿铁线莲。钝萼铁线莲的含量明显高于其它3种。值得进一步进行药效学研究，为扩大药源奠定基础。
5 致谢
薄层扫描测定由本校万丽老师指导，特此致谢。
参考文献
1 楼之岑.常用中药材品种整理和质量研究(2)[M]北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1996.48
2 唐声武，李仿尧.川木通的原植物和药材性状鉴定[J]中药材料 ：1989，12(1)：26
3 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志第28卷[M].科学出版社，1980.75-196
(收稿日期：2000-01-16), 百拇医药
单位：成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075
关键词：川木通；齐墩果酸；薄层扫描
成都中医药大学学报000228摘 要：采用薄层扫描法测定了川木通的4种植物茎水解液中齐墩果酸的含量，结果为：小木通为0.0649%，粗齿铁线莲为0.0389%，钝萼铁线莲0.1063%，绣球藤0.0682%。首次从粗齿铁线莲、钝萼铁线莲的水解液中检出了齐墩果酸。
中图分类号：R284.1;R282.5 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)02-0053-02
作者简介：唐声武，男，1943年3月生；副教授，硕士生导师；研究方向：质量与中药品种和鉴别。
, 百拇医药 川木通为常用中药，《中国药典》1995年版收载为毛莨科铁线莲属植物小木通Clematis armandii Franch. 或锈球藤C. Montana buch-Ham干燥根茎，具有清热利尿，通经下乳等功能。临床用于水肿、淋病、小便不通、关节痹痛、经闭乳少等症。据报道，其含有三萜皂甙，经水解后生成齐墩果酸及葡萄糖等[1]。目前作川木通入药的铁线莲属植物有10余种。四川、重庆产川木通的主流品种为小木通C. armandii、粗齿铁线莲C. argentilucida和钝萼铁线莲C. peterae，而药典收载品种绣球藤C. montana的茎在商品药材中很难发现[2]。我们对上述 4种植物的茎进行了齐墩果酸的定性鉴别及含量测定，现报道如下。
1 材料
小木通、粗齿铁线莲、钝萼铁线莲和锈球藤分别采自都江堰市青城山、达州地区宣汉县、都江堰市青城山、四川省峨眉山。
, 百拇医药
2 薄层鉴别
分别取药材粉末2 g，加1 mol/L的盐酸20 mL和氯仿20 mL，加热回流，萃取氯仿层，浓缩点样，以环己烷-乙酸乙酯(7:3)为展开剂上行展开，用10%硫酸乙醇液喷雾，90℃加热8 min显色，在与齐墩果酸对照品相应位置上均有紫红色斑点(见图1)。
3 齐墩果酸含量测定
3.1 仪器与试药
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，所用试剂均为分析纯，齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检验所)。
图1 川木通水解液TLC图
3.2 实验条件
, 百拇医药
薄层层析吸附剂：硅胶G-CMCNa薄层板，105℃活化1 h；展开剂：环己烷-乙酸乙酯(7∶3)，上行展开，展距8 cm；显色剂：10%硫酸乙醇液；显色条件：喷雾后90℃加热8 min。
扫描条件：双波长反射法锯齿扫描，测定波长λS＝530 nm，参比波长λR＝680 nm，线性参数SX=3,背景调至ON，灵敏度×2，ΔY＝0.2，最小峰面积500。
在选定条件下，分别吸取齐墩果酸对照品(0.75 mg/μL)1.0、2.0、3.0、4.0、7.0 μL点于硅胶板上，间距1.5 cm，展开，显色，扫描，测定吸光积分值，以吸光度积分值为纵坐标，齐墩果酸点样量为横坐标，绘制标准曲线，齐墩果酸在0.75～5.25 mg范围内线性关系良好。作回归方程Y＝5987.168X-450.753,相关系数r=0.9971。由于不通过原点，所以选择两点外坐标法进行定量测定(见图2)。
, 百拇医药
3.3 实验样品溶液的制备
3.3.1 水解酸浓度的考察
取样品粉末约2 g，精密称定，分别加入0.5、1.0、1.5 mmol/L的盐酸约20 mL，加热回流3 h，萃取氯仿层，再用氯仿萃取2次，每次20 mL，合并氯仿 液，回收氯仿后，再用氯仿定容至5 mL，点样，依法显色扫描测定。结果表明，用0.5 mol/L的盐酸水解，齐墩果酸的测得量很低，而1.0 mol/L与1.5 mol/L的盐酸几乎无明显差异，故采用1.0 mol/L的盐酸水解样品。
图2 标准曲线
3.3.2 水解时间的考察
取样品粉末约2 g，精密称定，加入1.0的盐酸约20 mL和氯仿20 mL，分别加热回流1 h、2 h、3 h、4 h，依法萃取定容、点样、显色、扫描测定。结果表明，水解3 h、4 h时测得量较高且无明显差异，故选择水解时间为3 h。
, http://www.100md.com
3.4 稳定性试验
精密称取对照品溶液2 μL和供试品10 μL点于薄层板上，依法显色，每隔30 min扫描1次。结果表明，对照品的吸光度积分值在2 h内基本稳定，RSD为1.96%，供试品的吸光度积分值在2 h内亦基本稳定，RSD为2.81%。
3.5 精密度试验
(1)同板精密度试验：取对照品溶液和同一供试品溶液，相同点样量，点于同一薄层板上，依法显色扫描测定，对照品RSD为1.50%，供试品RSD为3.54%。
(2)异板精密度试验：对照品溶液和同一供试品溶液各取相同点样量，点于3块薄层板上，依法显色扫描测定，对照品RSD为3.27%，供试品RSD为3.32%。
3.6 加样回收试验
, 百拇医药
取含量已知的钝萼铁线莲水解液6份，加入一定量的齐墩果酸(3种水平，各2份，见表1)，氯仿萃取3次，合并萃取液，浓缩定容至10 mL，点样，显色，测定，计算回收率(回收率=(测定量-药材中含量)(mg)/添加对照品量(mg)×100%)，结果见表1。
表1 回收率试验结果 测定次数
1
2
3
4
5
6
药材中OLA量(mg)
0.2142
, 百拇医药
0.1922
0.2298
0.2454
0.2032
0.1906
加入OLA量(mg)
0.1504
0.1528
0.1996
0.1973
0.2307
0.2321
, 百拇医药
测得量(mg)
0.3587
0.3469
0.4183
0.4376
0.4392
0.4137
回收率(%)
96.1
97.9
94.1
97.4
102.2
, http://www.100md.com
96.1
平均回收率
97.3
RSD
2.81
3.7样品含量测定
精密吸取供试品溶液10 μL，对照品2μL、4μL，分别交叉点样于薄层板上，依法显色测定。结果见表2。表2 齐墩果酸含量测定结果(n=3)
品 种
含量(%)
RSD(%)
小木通
, 百拇医药
0.0649
2.68
粗齿铁线莲
0.0389
3.08
钝萼铁线莲
0.1063
3.26
乡球藤
0.0682
1.97
4 讨论
我们通过TLC证实了小木通和绣球藤中齐墩果酸已结合成甙，经酸水解后能得到游离甙元。液，并且在粗齿铁线莲和钝萼铁线莲水解液中首次检出了齐墩果酸。
, 百拇医药
采用薄层扫描法测定4种川木通水解液中剂墩果酸的含量，通过方法学考察认为最佳水解的条件为：1mol/L盐酸加热回流3小时。其含量高低依次为钝萼铁线莲、绣球藤、小木通、粗齿铁线莲。钝萼铁线莲的含量明显高于其它3种。值得进一步进行药效学研究，为扩大药源奠定基础。
5 致谢
薄层扫描测定由本校万丽老师指导，特此致谢。
参考文献
1 楼之岑.常用中药材品种整理和质量研究(2)[M]北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1996.48
2 唐声武，李仿尧.川木通的原植物和药材性状鉴定[J]中药材料 ：1989，12(1)：26
3 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志第28卷[M].科学出版社，1980.75-196
(收稿日期：2000-01-16), 百拇医药
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