阿魏酸钠和当归醇沉物对免疫性肝损伤的干预作用△
作者：李颖 彭仁
单位：湖北医科大学药理教研室武汉 430071
关键词：阿魏酸钠；当归醇沉物；免疫性肝损伤；谷胱甘肽还原酶
中草药000419摘 要 阿魏酸钠(SF)及当归醇沉物(ESA)对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤有保护作用，二者均降低肝损伤小鼠血清ALT和谷胱甘肽S-转移酶活性，并增加肝细胞浆中谷胱甘肽还原酶活性，同时ESA降低肝细胞浆中丙二醛含量，提示当归的护肝作用与抗脂质过氧化有关。ESA在护肝的同时尚能明显抑制小鼠脾脏指数的增加，提示ESA更广泛的护肝机制。
Protective Effects of Sodium Ferulate and Ethanol
Sediments from Danggui(Angelica sinensis)
, http://www.100md.com
on Immunological Liver Injury
Department of Pharmacology, Hubei University of Medical Sciences (Wuhan 430071) Li Ying and Peng Renxiu
Abstract Sodium ferulate (SF) and ethanol sediments from Angelica sinensis (Oliv.) Diels (ESA) showed their protective effects on the immunological liver injury induced by lipopolysaccharide (LPS) in bacillus calmette-guerin (BCG) primed mice. They both suppressed serum ALT and glutathione S-transferase activity, and increased glutathione-reductase activity in hepatic cytosol in liver damaged mice. ESA also reduced the level of malondialdehyde (MDA), a product of lipid peroxidation, in hepatic cytosol. All these effects reminded that antioxidation was an important mechanism for A. sinensis to antagonize immunological liver injury. That ESA decreased the spleen index in liver damaged mice also reminded that there may be some other protective mechanisms of A. sinensis.
, http://www.100md.com
Key words sodium ferulate (SF) ethanol sediments from Angelia sinensis (Oliv.) Diels (ESA) immunological liver injury glutathione-reductase
当归单体成分阿魏酸钠(SF)对多种化学性肝损伤有保护作用[1]，但未见当归作用于免疫性肝损伤报道，已知当归醇沉物(ESA)有免疫活性[2]，但未见对肝损伤作用报道，本文用卡介苗加脂多糖的方法制造小鼠免疫性肝损伤模型，观察SF及ESA的影响，以期更全面认识当归对肝损伤的干预作用。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂：卡介苗(BCG)由卫生部兰州生物制品所提供，细菌脂多糖(LPS)购自Sigma公司，血清型Salmonella Typhimurium.2、4-二硝基氯苯(CDNB)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)为Sigma公司产品。硫代巴比妥钠(TBA)、5，5′-二巯-2，2′-二硝基苯甲酸(DTNB)、阿魏酸钠(Sodium Ferulate, SF)片、地塞米松(DEX)注射液均为市售产品，当归Angelia sinensis Diels醇沉物(ESA)本实验室制备[2]。
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1.2 动物及处理：参照文献[3]选用5周龄的雄性小鼠(昆明种)，体重(12±0.5 g)，由湖北省医科院提供，分成6组，每组5～10只。每只小鼠尾iv BCG 1 mg，12 d后再尾iv LPS 4 μg以制造免疫性肝损伤模型。制造模型同时给药，阿魏酸钠(SF)组、小剂量当归醇沉物(ESA1)组和大剂量当归醇沉物(ESA2) 组分别ig SF 100 mg/kg、sc ESA 250和500 mg/kg共12 d，DEX组在注射LPS 30 min前ip DEX 3 mg/kg 1次，生理盐水(NS)为对照。注射LPS后6 h小鼠断头取血，并摘取肝脏、胸腺和脾脏。2～3个肝脏合为一个标本，在冰NS中剪碎、漂洗后经超速离心105 000 g×60 min(4 ℃)制备细胞浆(S105)。部分小鼠肝脏经10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。
1.3 指标及测定方法：改良金氏法[4]测定血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase, ALT)。按Habig等方法[5]以CDNB为底物测定血清谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)活性。TBA比色法[6]测定丙二醛(MDA)。按文献方法[7]以NADPH为底物，测定谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GSH-Re)活性。以H2O2为底物，用DTNB显色法[8]测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性。脏器指数为该脏器占动物体重的百分比。
, 百拇医药
1.4 统计方法：用Duncan's q检验进行多组数据间对比。
2 结果
2.1 对血清ALT (sALT)和GST (sGST)的影响：与NS组比，模型组的sALT升高255% (P<0.05)，表明肝损伤模型制造成功。SF、ESA1、ESA2组的sALT分别较模型组降低37%、46%和69%(均P<0.05)，表明SF和ESA均能有效对抗BCG+LPS小鼠免疫性肝损伤，其效应均不弱于免疫抑制剂DEX对模型组sALT 31%的降幅。上述3个给药组中，ESA2组的降sALT作用均强于另两个给药组(均P<0.05)，且将sALT降至NS组水平，提示ESA降sALT作用的剂量依赖趋势(表1)。
与此同时免疫性肝损伤使sGST升高321%(与NS组比P<0.05)，与文献报道sGST在化学性肝损伤中强烈的升高[4]一致，SF、ESA1、ESA2分别使模型的sGST降低72%、88%和84%(均P<0.05)，其效应均与DEX接近，且达到与NS组相似的水平(表1)。
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表1 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠血清ALT和GST活性的影响 分组
n
剂量
(mg/kg)
sALT
(U%)
sGST
(μmol/L/min)
NS
8
—
205.4±64.6
, http://www.100md.com
23.9±8.8
Model
10
—
730.0±373.0
100.5±81.7
SF
10
100
458.9±199.7△
28.1±26.8△
, http://www.100md.com
ESA1
10
250
397.4±103.6△
12.1±4.9△
ESA2
5
500
226.0±19.8▲
16.1±6.3△
DEX
, 百拇医药 9
3
501.2±172.0△
24.7±19.8△
与NS组比较：P<0.05；与Model组比较：△P<0.05；与Model或SF或ESA1或DEX组比较：▲P<0.05
2.2 对肝细胞浆谷胱甘肽相关酶和MDA的影响：模型组肝细胞浆MDA较NS组升高78%(P<0.05)，表明BCG+LPS肝损伤中严重的脂质过氧化作用。与模型组比SF、ESA1组肝细胞浆GSH-Re活性分别升高44%和45%(均P<0.05)，GSH-Px较模型组分别升高10.5%和33%，虽未出现统计学意义，但可提示SF和ESA均有增加抗氧化酶活性的作用，其中ESA尚能显著降低模型组引起的肝细胞浆中MDA的上升(P<0.05)，其作用强于SF(P<0.05)，这也与ESA升高上述两酶活性较SF更明显相对应。DEX虽可通过免疫抑制作用阻止肝损伤[3]，但并不影响肝细胞浆谷胱甘肽相关酶活性及MDA，表明其不通过抗氧化作用参与护肝(表2)。
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表2 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠肝细胞浆脂质过氧化产物MDA和GSH相关酶的影响 分组
n
MDA
(nmol/mg)
GSH-Re
(nmol/min/mg)
GSH-Px
(nmol/min/mg)
NS
9
0.29±0.03
, 百拇医药 48.2±4.4
35.9±5.2
Model
10
0.53±0.17
43.0±3.6
30.6±7.5
SF
10
0.59±0.35
62.1±5.1△
33.8±12.3
, 百拇医药
ESA1
10
0.22±0.16▲
62.2±11.7△
40.7±7.6
DEX
9
0.75±0.33
47.8±9.0
41.5±18.4
与NS组比较：P<0.05
, 百拇医药
与NS或Model组或DEX组比较：△P<0.05
与Model或SF或DEX组比较：▲p<0.05
n为动物例数，每2～3例合一个超速离心标本
2.3 脏器指数变化及组织学改变：免疫性肝损伤引起脾脂数显著增大(P<0.05)的结果与文献一致[3，9]。ESA显著阻止肝损伤小鼠脾指数的增大(P<0.05)与DEX相似。SF则对脾指数的增加无显著影响，与此同时胸腺指数皆无显著变化，表明BCG+LPS肝损伤与胸腺关系不大(表3)。
病理切片见模型组肝细胞普遍肿大，有片状的变性坏死，中央小静脉充血，肝窦内见大量的红细胞瘀积。ESA与SF组的损伤都有不同程度减轻，仅见局部细胞肿胀，小面积变性，尤其未见到大量红细胞瘀积于肝窦。
, 百拇医药
表3 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠免疫脏器指数的影响 分组
n
脾脏指数
胸腺指数
NS
9
0.420±0.173
0.231±0.087
Model
10
0.617±0.147
0.191±0.082
, 百拇医药
SF
10
0.540±0.190
0.244±0.081
ESA1
10
0.504±0.064△
0.179±0.046
DEX
9
0.453±0.102△
0.183±0.059
, 百拇医药
与NS组比较：P<0.05；与Model组比较：△P<0.05
3 讨论
当归的成分SF和ESA均显著降低BCG+LPS免疫性肝损伤小鼠血清ALT，表明其良好的抗肝损伤效应。有报道血清GST作为化学性肝损伤敏感指标与血清ALT改变有良好的平行关系[4]，实验发现在免疫性肝 损伤中血清GST同步升高，且上升比例更大，说明血清GST也是免疫性肝损伤的敏感指标，SF和ESA降低血清ALT的同时抑制了血清GST的上升，进一步证实它们对BCG+LPS免疫性肝损伤的保护作用。
已知BCG+LPS所致肝损伤的机制为巨噬细胞(Mφ)介导的免疫性肝损伤，激活的Mφ释放多种免疫效应分子如活性氮 、活性氧和细胞因子等[3，10]，最终都导致组织严重的过氧化损伤，本实验显示该模型肝细胞浆脂质过氧化产物MDA明显升高，证明肝细胞内脂质过氧化是本模型的重要终末肝损伤机制。谷胱甘肽相关酶在机体清除过氧化产物的过程中起重要作用，如下所示：
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SF和ESA均升高肝损伤小鼠肝细胞浆内GSH-Re和GSH-Px活性，提示SF和ESA通过抗氧化实现其抗肝损伤效应。ESA在提高抗氧化相关酶活性时降低了肝细胞浆MDA，从而进一步证实其抗脂质过氧化机制。而已证明对化学性肝损伤有较好抗脂质过氧化作用的SF[1]则未能降低免疫性肝损伤肝细胞浆中MDA，提示SF的作用弱于ESA。BCG+LPS肝损伤小鼠脾脏指数增大，有认为此时脾脏中活化的巨噬细胞亦通过分泼细胞因子参与肝损伤[3]，ESA抗肝损伤同时有与免疫抑制剂DEX相似的减小脾脏指数的作用，结合ESA中的主要成分当归多糖[2]有多种免疫学活性[11]，提示ESA尚通过免疫机制在发生终末脂质过氧化损伤之前阻断了肝损伤的发生。由于多重有效机制，ESA抗免疫性肝损伤作用既优于单纯的免疫抑制剂DEX，也优于主要起抗氧化作用的SF。本结果提示在当归中可能找到更为有效的对抗免疫性肝损伤的成分，尤其是作为制备当归注射液废弃部分的ESA仍具有不可忽视的药理活性。
, 百拇医药
李颖(男，29岁，湖北医科大学药理教研室讲师，药理学硕士学位)
参考文献
1，汪 晖，等.中国药理学报，1994，15：81
2，夏雪雁，等.中草药，1999，30(2)：112
3，Nagakawa J, et al. Gastroenterology, 1990, 99:758
4，汪 晖，等.中国药理学报，1993，14(5)：41
5，Habig W H, et al. J Biol Chem, 1974, 249:7130
6，Uchiyama M, et al. Analyt Biochemistry, 1978, 86:271
, 百拇医药
7，Carlberg I, et al. J Biol Chem, 1975, 250:5475
8，夏亦明，等.卫生研究，1987，16(4)：29
9，许建明，等.中国药理学通报，1997，13(2)：186
10，Wang G S, et al. Biochem Pharmacol, 1995, 49(8):1277
11，王亚平，等.中西医结合杂志，1990，11(1)：60
(1999-05-20 收稿), http://www.100md.com
单位：湖北医科大学药理教研室武汉 430071
关键词：阿魏酸钠；当归醇沉物；免疫性肝损伤；谷胱甘肽还原酶
中草药000419摘 要 阿魏酸钠(SF)及当归醇沉物(ESA)对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤有保护作用，二者均降低肝损伤小鼠血清ALT和谷胱甘肽S-转移酶活性，并增加肝细胞浆中谷胱甘肽还原酶活性，同时ESA降低肝细胞浆中丙二醛含量，提示当归的护肝作用与抗脂质过氧化有关。ESA在护肝的同时尚能明显抑制小鼠脾脏指数的增加，提示ESA更广泛的护肝机制。
Protective Effects of Sodium Ferulate and Ethanol
Sediments from Danggui(Angelica sinensis)
, http://www.100md.com
on Immunological Liver Injury
Department of Pharmacology, Hubei University of Medical Sciences (Wuhan 430071) Li Ying and Peng Renxiu
Abstract Sodium ferulate (SF) and ethanol sediments from Angelica sinensis (Oliv.) Diels (ESA) showed their protective effects on the immunological liver injury induced by lipopolysaccharide (LPS) in bacillus calmette-guerin (BCG) primed mice. They both suppressed serum ALT and glutathione S-transferase activity, and increased glutathione-reductase activity in hepatic cytosol in liver damaged mice. ESA also reduced the level of malondialdehyde (MDA), a product of lipid peroxidation, in hepatic cytosol. All these effects reminded that antioxidation was an important mechanism for A. sinensis to antagonize immunological liver injury. That ESA decreased the spleen index in liver damaged mice also reminded that there may be some other protective mechanisms of A. sinensis.
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Key words sodium ferulate (SF) ethanol sediments from Angelia sinensis (Oliv.) Diels (ESA) immunological liver injury glutathione-reductase
当归单体成分阿魏酸钠(SF)对多种化学性肝损伤有保护作用[1]，但未见当归作用于免疫性肝损伤报道，已知当归醇沉物(ESA)有免疫活性[2]，但未见对肝损伤作用报道，本文用卡介苗加脂多糖的方法制造小鼠免疫性肝损伤模型，观察SF及ESA的影响，以期更全面认识当归对肝损伤的干预作用。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂：卡介苗(BCG)由卫生部兰州生物制品所提供，细菌脂多糖(LPS)购自Sigma公司，血清型Salmonella Typhimurium.2、4-二硝基氯苯(CDNB)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)为Sigma公司产品。硫代巴比妥钠(TBA)、5，5′-二巯-2，2′-二硝基苯甲酸(DTNB)、阿魏酸钠(Sodium Ferulate, SF)片、地塞米松(DEX)注射液均为市售产品，当归Angelia sinensis Diels醇沉物(ESA)本实验室制备[2]。
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1.2 动物及处理：参照文献[3]选用5周龄的雄性小鼠(昆明种)，体重(12±0.5 g)，由湖北省医科院提供，分成6组，每组5～10只。每只小鼠尾iv BCG 1 mg，12 d后再尾iv LPS 4 μg以制造免疫性肝损伤模型。制造模型同时给药，阿魏酸钠(SF)组、小剂量当归醇沉物(ESA1)组和大剂量当归醇沉物(ESA2) 组分别ig SF 100 mg/kg、sc ESA 250和500 mg/kg共12 d，DEX组在注射LPS 30 min前ip DEX 3 mg/kg 1次，生理盐水(NS)为对照。注射LPS后6 h小鼠断头取血，并摘取肝脏、胸腺和脾脏。2～3个肝脏合为一个标本，在冰NS中剪碎、漂洗后经超速离心105 000 g×60 min(4 ℃)制备细胞浆(S105)。部分小鼠肝脏经10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。
1.3 指标及测定方法：改良金氏法[4]测定血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase, ALT)。按Habig等方法[5]以CDNB为底物测定血清谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)活性。TBA比色法[6]测定丙二醛(MDA)。按文献方法[7]以NADPH为底物，测定谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GSH-Re)活性。以H2O2为底物，用DTNB显色法[8]测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性。脏器指数为该脏器占动物体重的百分比。
, 百拇医药
1.4 统计方法：用Duncan's q检验进行多组数据间对比。
2 结果
2.1 对血清ALT (sALT)和GST (sGST)的影响：与NS组比，模型组的sALT升高255% (P<0.05)，表明肝损伤模型制造成功。SF、ESA1、ESA2组的sALT分别较模型组降低37%、46%和69%(均P<0.05)，表明SF和ESA均能有效对抗BCG+LPS小鼠免疫性肝损伤，其效应均不弱于免疫抑制剂DEX对模型组sALT 31%的降幅。上述3个给药组中，ESA2组的降sALT作用均强于另两个给药组(均P<0.05)，且将sALT降至NS组水平，提示ESA降sALT作用的剂量依赖趋势(表1)。
与此同时免疫性肝损伤使sGST升高321%(与NS组比P<0.05)，与文献报道sGST在化学性肝损伤中强烈的升高[4]一致，SF、ESA1、ESA2分别使模型的sGST降低72%、88%和84%(均P<0.05)，其效应均与DEX接近，且达到与NS组相似的水平(表1)。
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表1 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠血清ALT和GST活性的影响 分组
n
剂量
(mg/kg)
sALT
(U%)
sGST
(μmol/L/min)
NS
8
—
205.4±64.6
, http://www.100md.com
23.9±8.8
Model
10
—
730.0±373.0
100.5±81.7
SF
10
100
458.9±199.7△
28.1±26.8△
, http://www.100md.com
ESA1
10
250
397.4±103.6△
12.1±4.9△
ESA2
5
500
226.0±19.8▲
16.1±6.3△
DEX
, 百拇医药 9
3
501.2±172.0△
24.7±19.8△
与NS组比较：P<0.05；与Model组比较：△P<0.05；与Model或SF或ESA1或DEX组比较：▲P<0.05
2.2 对肝细胞浆谷胱甘肽相关酶和MDA的影响：模型组肝细胞浆MDA较NS组升高78%(P<0.05)，表明BCG+LPS肝损伤中严重的脂质过氧化作用。与模型组比SF、ESA1组肝细胞浆GSH-Re活性分别升高44%和45%(均P<0.05)，GSH-Px较模型组分别升高10.5%和33%，虽未出现统计学意义，但可提示SF和ESA均有增加抗氧化酶活性的作用，其中ESA尚能显著降低模型组引起的肝细胞浆中MDA的上升(P<0.05)，其作用强于SF(P<0.05)，这也与ESA升高上述两酶活性较SF更明显相对应。DEX虽可通过免疫抑制作用阻止肝损伤[3]，但并不影响肝细胞浆谷胱甘肽相关酶活性及MDA，表明其不通过抗氧化作用参与护肝(表2)。
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表2 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠肝细胞浆脂质过氧化产物MDA和GSH相关酶的影响 分组
n
MDA
(nmol/mg)
GSH-Re
(nmol/min/mg)
GSH-Px
(nmol/min/mg)
NS
9
0.29±0.03
, 百拇医药 48.2±4.4
35.9±5.2
Model
10
0.53±0.17
43.0±3.6
30.6±7.5
SF
10
0.59±0.35
62.1±5.1△
33.8±12.3
, 百拇医药
ESA1
10
0.22±0.16▲
62.2±11.7△
40.7±7.6
DEX
9
0.75±0.33
47.8±9.0
41.5±18.4
与NS组比较：P<0.05
, 百拇医药
与NS或Model组或DEX组比较：△P<0.05
与Model或SF或DEX组比较：▲p<0.05
n为动物例数，每2～3例合一个超速离心标本
2.3 脏器指数变化及组织学改变：免疫性肝损伤引起脾脂数显著增大(P<0.05)的结果与文献一致[3，9]。ESA显著阻止肝损伤小鼠脾指数的增大(P<0.05)与DEX相似。SF则对脾指数的增加无显著影响，与此同时胸腺指数皆无显著变化，表明BCG+LPS肝损伤与胸腺关系不大(表3)。
病理切片见模型组肝细胞普遍肿大，有片状的变性坏死，中央小静脉充血，肝窦内见大量的红细胞瘀积。ESA与SF组的损伤都有不同程度减轻，仅见局部细胞肿胀，小面积变性，尤其未见到大量红细胞瘀积于肝窦。
, 百拇医药
表3 SF和ESA对免疫性肝损伤小鼠免疫脏器指数的影响 分组
n
脾脏指数
胸腺指数
NS
9
0.420±0.173
0.231±0.087
Model
10
0.617±0.147
0.191±0.082
, 百拇医药
SF
10
0.540±0.190
0.244±0.081
ESA1
10
0.504±0.064△
0.179±0.046
DEX
9
0.453±0.102△
0.183±0.059
, 百拇医药
与NS组比较：P<0.05；与Model组比较：△P<0.05
3 讨论
当归的成分SF和ESA均显著降低BCG+LPS免疫性肝损伤小鼠血清ALT，表明其良好的抗肝损伤效应。有报道血清GST作为化学性肝损伤敏感指标与血清ALT改变有良好的平行关系[4]，实验发现在免疫性肝 损伤中血清GST同步升高，且上升比例更大，说明血清GST也是免疫性肝损伤的敏感指标，SF和ESA降低血清ALT的同时抑制了血清GST的上升，进一步证实它们对BCG+LPS免疫性肝损伤的保护作用。
已知BCG+LPS所致肝损伤的机制为巨噬细胞(Mφ)介导的免疫性肝损伤，激活的Mφ释放多种免疫效应分子如活性氮 、活性氧和细胞因子等[3，10]，最终都导致组织严重的过氧化损伤，本实验显示该模型肝细胞浆脂质过氧化产物MDA明显升高，证明肝细胞内脂质过氧化是本模型的重要终末肝损伤机制。谷胱甘肽相关酶在机体清除过氧化产物的过程中起重要作用，如下所示：
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SF和ESA均升高肝损伤小鼠肝细胞浆内GSH-Re和GSH-Px活性，提示SF和ESA通过抗氧化实现其抗肝损伤效应。ESA在提高抗氧化相关酶活性时降低了肝细胞浆MDA，从而进一步证实其抗脂质过氧化机制。而已证明对化学性肝损伤有较好抗脂质过氧化作用的SF[1]则未能降低免疫性肝损伤肝细胞浆中MDA，提示SF的作用弱于ESA。BCG+LPS肝损伤小鼠脾脏指数增大，有认为此时脾脏中活化的巨噬细胞亦通过分泼细胞因子参与肝损伤[3]，ESA抗肝损伤同时有与免疫抑制剂DEX相似的减小脾脏指数的作用，结合ESA中的主要成分当归多糖[2]有多种免疫学活性[11]，提示ESA尚通过免疫机制在发生终末脂质过氧化损伤之前阻断了肝损伤的发生。由于多重有效机制，ESA抗免疫性肝损伤作用既优于单纯的免疫抑制剂DEX，也优于主要起抗氧化作用的SF。本结果提示在当归中可能找到更为有效的对抗免疫性肝损伤的成分，尤其是作为制备当归注射液废弃部分的ESA仍具有不可忽视的药理活性。
, 百拇医药
李颖(男，29岁，湖北医科大学药理教研室讲师，药理学硕士学位)
参考文献
1，汪 晖，等.中国药理学报，1994，15：81
2，夏雪雁，等.中草药，1999，30(2)：112
3，Nagakawa J, et al. Gastroenterology, 1990, 99:758
4，汪 晖，等.中国药理学报，1993，14(5)：41
5，Habig W H, et al. J Biol Chem, 1974, 249:7130
6，Uchiyama M, et al. Analyt Biochemistry, 1978, 86:271
, 百拇医药
7，Carlberg I, et al. J Biol Chem, 1975, 250:5475
8，夏亦明，等.卫生研究，1987，16(4)：29
9，许建明，等.中国药理学通报，1997，13(2)：186
10，Wang G S, et al. Biochem Pharmacol, 1995, 49(8):1277
11，王亚平，等.中西医结合杂志，1990，11(1)：60
(1999-05-20 收稿), http://www.100md.com