泡利芬对红细胞膜稳定性及红细胞寿命的影响
作者：姚林 王广增 马艳丽 赵伯阳
单位：华北煤炭医学院预防医学系，唐山 063000
关键词：泡利芬；茶多酚；红细胞渗透性脆性试验；整体、离体试验
中国老年学杂志000120摘 要 目的 研究泡利芬对红细胞膜稳定性及红细胞寿命的影响。方法 采用整体和离体水平相结合的红细胞渗透性脆性实验方法。结果 ①不同受试组小鼠红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血百分率存在明显差异(P<0.05)；②在四种不同受试剂的NH4Cl溶液中，兔红细胞数明显不同，差异具有显著性意义(P<0.05)，且随着泡利芬浓度的增高，离体兔红细胞被溶解的数量明显减少，红细胞数明显增加，表现出泡利芬对红细胞的保护性呈明显的浓度依赖性，同时，离体兔红细胞的溶血起、止时间也明显延长(P<0.01)。结论 泡利芬具有延长红细胞寿命，增强红细胞膜稳定性，延缓衰老的作用。
, http://www.100md.com
Effects of Paolifen on the stability of erythrocyte membrane and lifespan of RBC
Yao Lin,Wang Guangzeng,Ma Yanli et al
(North China Coal Medical College,Tangshan 063000)
Abstract：Objective To study the effects of Paolifen on the stability of erythrocyte membrane and lifespan of RBC.Methods Erythrocyte osmotic fragility test(EOF) were conducted in vivo and vitro.Results Compared with control groups,the high,mid-dose group had difference on dissolved blood's percentage in low osmotic NaCl solution(P<0.05); The counts of the rabbit's red blood cell were significant in difference NH4Cl solutions.Conclusions Paolifen can slightly strengthen erythrocyte membrane stability and prolong the lifespan of RBC.
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Key words Paolifen tea polyphenols EOF test
泡利芬(Paolifen)是以茶多酚为主，辅以川贝、半夏等中药，主要用于防治尘肺及其合并症，改善肺功能。茶多酚(tea polyphenols)是一类具有较强的还原能力的天然抗氧化剂〔1〕，具有清除自由基，提高细胞抗氧化能力，提高机体免疫能力等功效。有关报道〔2～3〕较多，而对红细胞膜稳定性及红细胞寿命影响的了解甚少。本文通过泡利芬对红细胞渗透性脆性(erythrocyte osmotic fragility，EOF)试验，拟阐明该药对肺疾患的预防及辅助治疗机理。现将报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 受试动物 健康的昆明种小鼠32只，雌雄各半，体重25～30 g，由华北煤炭医学院动物中心提供。
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1.1.2 受试样品 泡利芬胶囊：每粒500 mg，含茶多酚100 mg，川贝、半夏等400 mg，由华北煤炭医学院预防医学系提供。0.45%氯化钠溶液、复方氯化钠稀释液(1∶1)、0.17%氯化铵溶液，三种溶液均由实验室配制。0.2%兔红细胞(RRBC)悬液：取兔血，置于有玻璃珠的椎形瓶中，脱纤维后，用生理盐水洗涤3次，离心后配成0.2%RBC悬液。
1.1.3 实验仪器 显微镜、血细胞计数板、721型分光光度计、秒表。
1.2 方法
1.2.1 动物分组及服药方法 将小鼠随机分为高、中、低三个剂量和对照组，每组8只，雌雄各半。高、中、低三个剂量分别给以每日每公斤体重5.00 g、1.25 g、2.50 g的泡利芬剂量掺入饲料中喂养，连续给药7 w，对照组给以不加任何药物的普通软料，连续喂养7 w。
1.2.2 实验方法 简易法：用于动物整体水平实验。取试管64支，编号分8排。向第1、3、5、7排试管中各加入复方氯化钠稀释液4 ml，向第2、4、6、8排试管中各加入0.45%NaCl溶液4 ml；再向1.2、3.4、5.6、7.8排试管中分别各加入对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠全血20 μl，摇匀，2 min后，各管分别滴入血细胞记数板中，求出红细胞溶血百分率，计算方法分别为：
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氯化铵法：用于离体水平实验：取32个试管，编号分4排，各试管中分别加入0.17 mol/L NH4Cl溶液5 ml，再向第1、2、3、4排试管中依次分别加入0.5 ml的H2O、0.625%、1.25%、2.50%的泡利芬摇匀，2 min后，再向各试管中分别加入0.5 ml 0.20%的RBC，轻轻摇匀后，分别滴入血细胞记数板中，方法同上，同时用721型分光光度计波长540 nm，记录各管溶血的起、止时间(min)。
1.3 数据处理 采用单因素方差分析法，并用SAS软件进行分析。
2 结 果
2.1 不同受试组小鼠红细胞在复方NaCl稀释液和0.45%NaCl溶液中渗透性脆性试验 见表1。
表1 红细胞渗透性脆性试验简易法结果(万/mm3，
±s) 组别
, 百拇医药
复方NaCl稀
释液中RBC
0.45%NaCl溶
液中RBC
溶血百分率
(%)
对照组
56.8±25.1
30.6±16.2
47.2±10.1
低剂量组
75.5±24.6
, 百拇医药
57.1±17.2
22.7±12.21)
中剂量组
87.5±24.6
76.5±20.1
12.0±4.61)
高剂量组
88.9±13.4
77.9±7.2
11.4±9.71)
与对照组比较：1)P<0.01
, 百拇医药
由表1可知，高、中、低三个剂量组小鼠红细胞溶血百分率均低于对照组小鼠红细胞的溶血百分率(P<0.01)，表明泡利芬在降低红细胞溶血百分率，维持红细胞膜的稳定性，延缓红细胞衰老等方面具有一定的作用。表2 兔RBC在不同受试剂中的计数、起始和终止溶血时间(±s) 组别
次数
兔RBC(万/mm3)
起始时间(min)
终止时间(min)
NH4Cl+H2O
10
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29.6±12.2
0.567 8±0.180 3
7.53±0.93
NH4Cl+0.625%泡利芬
10
51.9±10.41)
0.925 0±0.304 7
14.10±1.022)
NH4Cl+1.250%泡利芬
10
, 百拇医药
62.9±16.81)
1.346 3±0.551 3
20.37±4.202)
NH4Cl+2.500%泡利芬
10
74.1±17.31)
1.510 0±0.520 92)
37.31±5.822)
与对照组比较：1)P<0.05，与对照组比较2)P<0.01
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2.2 兔红细胞在不同受试剂的NH4Cl溶液中的计数、起始和终止溶血时间 见表2。
由表2可知，兔红细胞数量随泡利芬浓度的不同而不同：加入的泡利芬的浓度愈高兔红细胞被溶解的就愈少，计数的兔红细胞数量就愈多(P<0.05)，说明泡利芬具有增强红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命的作用。
兔红细胞在不同受试制剂的NH4Cl溶液中的起始溶血时间存在明显差异(P<0.01)，这也说明了泡利芬对维持红细膜的稳定性，延长红细胞寿命有一定的积极作用。
在NH4Cl溶液中，加入不同浓度的泡利芬，兔红细胞终止溶血时间存在明显的差别， 统计学处理，差异可见非常显著意义(P<0.01)，这也进一步说明了泡利芬具有增强红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命。
3 讨 论
, 百拇医药
本试验通过完整的红细胞渗透性脆性试验，观察到泡利芬能有效地维持红细胞膜的稳定性，保持红细胞在低渗溶液中的完整性，延长红细胞寿命，这与丁克祥研究结果相一致〔4〕。
红细胞耗尽ATP是引起红细胞衰老和被破坏的可能机制，由钠泵活动造成的红细胞内高K+，而ATP又是维持细胞膜上钠泵活动所必需的。当红细胞能量代谢发生障碍时，钠泵活动受限，离子代谢失常，导致红细胞膜变厚变硬，弹性降低〔5，6〕，使红细胞寿命缩短，产生渗透性溶血。同时，红细胞的变形能力也会下降，甚至丧失，导致其通过毛细血管的能力下降，使机体供氧不足。泡利芬的主要成分茶多酚能提供氢质子与机体内自由基结合来清除过量的自由基，避免生物大分子的损伤〔7〕。泡利芬通过维持红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命，达到降低红细胞溶血百分率，提高机体免疫力，延长机体寿命的目的，对防治尘肺及肺部感染也有一定的裨益。该药中的川贝、半夏等对肺疾患也有直接疗效。
, 百拇医药
原煤炭部安全司资助
作者简介：姚林，男，41岁，副教授，研究方向：茶多酚对肺疾患及肿瘤的作用
参考文献
1，张可钦.由中国茶叶中提取抗氧化剂的研究.食品与发酵工业，1991；12(1)：1
2，姚 林，王广增，赵伯阳.茶多酚的抗肿瘤研究.肿瘤防治研究，1995；22(2)：123
3，杨贤强，曹明富，沈生荣 et al.茶多酚生物学活性的研究.茶叶科学，1993；13(1)：91
4，丁克祥.丁氏抗衰老果茶对小鼠淋巴细胞体外存活率及免疫功能影响的实验研究.老年学杂志，1992；12(增刊)：35
5，冯 亚，林炳辉，吴作干 et al.行气祛痰化浊中药对血小板聚集性、红细胞变形性及血液粘度作用初探.福建中医学院学报，1998；8(1)：26
6，宋立川，马维原，吕智红 et al.红细胞衰老过程中微观流变学行为的研究.生物物理学学报，1997；13(1)：115
7，潘宏铭，郑 树，吴金民.茶叶和茶多酚与肿瘤的化学预防作用.肿瘤，1996；16(1)：46
收稿日期：1998-10-06
修回日期：1999-04-07, http://www.100md.com
单位：华北煤炭医学院预防医学系，唐山 063000
关键词：泡利芬；茶多酚；红细胞渗透性脆性试验；整体、离体试验
中国老年学杂志000120摘 要 目的 研究泡利芬对红细胞膜稳定性及红细胞寿命的影响。方法 采用整体和离体水平相结合的红细胞渗透性脆性实验方法。结果 ①不同受试组小鼠红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血百分率存在明显差异(P<0.05)；②在四种不同受试剂的NH4Cl溶液中，兔红细胞数明显不同，差异具有显著性意义(P<0.05)，且随着泡利芬浓度的增高，离体兔红细胞被溶解的数量明显减少，红细胞数明显增加，表现出泡利芬对红细胞的保护性呈明显的浓度依赖性，同时，离体兔红细胞的溶血起、止时间也明显延长(P<0.01)。结论 泡利芬具有延长红细胞寿命，增强红细胞膜稳定性，延缓衰老的作用。
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Effects of Paolifen on the stability of erythrocyte membrane and lifespan of RBC
Yao Lin,Wang Guangzeng,Ma Yanli et al
(North China Coal Medical College,Tangshan 063000)
Abstract：Objective To study the effects of Paolifen on the stability of erythrocyte membrane and lifespan of RBC.Methods Erythrocyte osmotic fragility test(EOF) were conducted in vivo and vitro.Results Compared with control groups,the high,mid-dose group had difference on dissolved blood's percentage in low osmotic NaCl solution(P<0.05); The counts of the rabbit's red blood cell were significant in difference NH4Cl solutions.Conclusions Paolifen can slightly strengthen erythrocyte membrane stability and prolong the lifespan of RBC.
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Key words Paolifen tea polyphenols EOF test
泡利芬(Paolifen)是以茶多酚为主，辅以川贝、半夏等中药，主要用于防治尘肺及其合并症，改善肺功能。茶多酚(tea polyphenols)是一类具有较强的还原能力的天然抗氧化剂〔1〕，具有清除自由基，提高细胞抗氧化能力，提高机体免疫能力等功效。有关报道〔2～3〕较多，而对红细胞膜稳定性及红细胞寿命影响的了解甚少。本文通过泡利芬对红细胞渗透性脆性(erythrocyte osmotic fragility，EOF)试验，拟阐明该药对肺疾患的预防及辅助治疗机理。现将报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 受试动物 健康的昆明种小鼠32只，雌雄各半，体重25～30 g，由华北煤炭医学院动物中心提供。
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1.1.2 受试样品 泡利芬胶囊：每粒500 mg，含茶多酚100 mg，川贝、半夏等400 mg，由华北煤炭医学院预防医学系提供。0.45%氯化钠溶液、复方氯化钠稀释液(1∶1)、0.17%氯化铵溶液，三种溶液均由实验室配制。0.2%兔红细胞(RRBC)悬液：取兔血，置于有玻璃珠的椎形瓶中，脱纤维后，用生理盐水洗涤3次，离心后配成0.2%RBC悬液。
1.1.3 实验仪器 显微镜、血细胞计数板、721型分光光度计、秒表。
1.2 方法
1.2.1 动物分组及服药方法 将小鼠随机分为高、中、低三个剂量和对照组，每组8只，雌雄各半。高、中、低三个剂量分别给以每日每公斤体重5.00 g、1.25 g、2.50 g的泡利芬剂量掺入饲料中喂养，连续给药7 w，对照组给以不加任何药物的普通软料，连续喂养7 w。
1.2.2 实验方法 简易法：用于动物整体水平实验。取试管64支，编号分8排。向第1、3、5、7排试管中各加入复方氯化钠稀释液4 ml，向第2、4、6、8排试管中各加入0.45%NaCl溶液4 ml；再向1.2、3.4、5.6、7.8排试管中分别各加入对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠全血20 μl，摇匀，2 min后，各管分别滴入血细胞记数板中，求出红细胞溶血百分率，计算方法分别为：
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氯化铵法：用于离体水平实验：取32个试管，编号分4排，各试管中分别加入0.17 mol/L NH4Cl溶液5 ml，再向第1、2、3、4排试管中依次分别加入0.5 ml的H2O、0.625%、1.25%、2.50%的泡利芬摇匀，2 min后，再向各试管中分别加入0.5 ml 0.20%的RBC，轻轻摇匀后，分别滴入血细胞记数板中，方法同上，同时用721型分光光度计波长540 nm，记录各管溶血的起、止时间(min)。
1.3 数据处理 采用单因素方差分析法，并用SAS软件进行分析。
2 结 果
2.1 不同受试组小鼠红细胞在复方NaCl稀释液和0.45%NaCl溶液中渗透性脆性试验 见表1。
表1 红细胞渗透性脆性试验简易法结果(万/mm3，
±s) 组别, 百拇医药
复方NaCl稀
释液中RBC
0.45%NaCl溶
液中RBC
溶血百分率
(%)
对照组
56.8±25.1
30.6±16.2
47.2±10.1
低剂量组
75.5±24.6
, 百拇医药
57.1±17.2
22.7±12.21)
中剂量组
87.5±24.6
76.5±20.1
12.0±4.61)
高剂量组
88.9±13.4
77.9±7.2
11.4±9.71)
与对照组比较：1)P<0.01
, 百拇医药
由表1可知，高、中、低三个剂量组小鼠红细胞溶血百分率均低于对照组小鼠红细胞的溶血百分率(P<0.01)，表明泡利芬在降低红细胞溶血百分率，维持红细胞膜的稳定性，延缓红细胞衰老等方面具有一定的作用。表2 兔RBC在不同受试剂中的计数、起始和终止溶血时间(
±s) 组别次数
兔RBC(万/mm3)
起始时间(min)
终止时间(min)
NH4Cl+H2O
10
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29.6±12.2
0.567 8±0.180 3
7.53±0.93
NH4Cl+0.625%泡利芬
10
51.9±10.41)
0.925 0±0.304 7
14.10±1.022)
NH4Cl+1.250%泡利芬
10
, 百拇医药
62.9±16.81)
1.346 3±0.551 3
20.37±4.202)
NH4Cl+2.500%泡利芬
10
74.1±17.31)
1.510 0±0.520 92)
37.31±5.822)
与对照组比较：1)P<0.05，与对照组比较2)P<0.01
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2.2 兔红细胞在不同受试剂的NH4Cl溶液中的计数、起始和终止溶血时间 见表2。
由表2可知，兔红细胞数量随泡利芬浓度的不同而不同：加入的泡利芬的浓度愈高兔红细胞被溶解的就愈少，计数的兔红细胞数量就愈多(P<0.05)，说明泡利芬具有增强红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命的作用。
兔红细胞在不同受试制剂的NH4Cl溶液中的起始溶血时间存在明显差异(P<0.01)，这也说明了泡利芬对维持红细膜的稳定性，延长红细胞寿命有一定的积极作用。
在NH4Cl溶液中，加入不同浓度的泡利芬，兔红细胞终止溶血时间存在明显的差别， 统计学处理，差异可见非常显著意义(P<0.01)，这也进一步说明了泡利芬具有增强红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命。
3 讨 论
, 百拇医药
本试验通过完整的红细胞渗透性脆性试验，观察到泡利芬能有效地维持红细胞膜的稳定性，保持红细胞在低渗溶液中的完整性，延长红细胞寿命，这与丁克祥研究结果相一致〔4〕。
红细胞耗尽ATP是引起红细胞衰老和被破坏的可能机制，由钠泵活动造成的红细胞内高K+，而ATP又是维持细胞膜上钠泵活动所必需的。当红细胞能量代谢发生障碍时，钠泵活动受限，离子代谢失常，导致红细胞膜变厚变硬，弹性降低〔5，6〕，使红细胞寿命缩短，产生渗透性溶血。同时，红细胞的变形能力也会下降，甚至丧失，导致其通过毛细血管的能力下降，使机体供氧不足。泡利芬的主要成分茶多酚能提供氢质子与机体内自由基结合来清除过量的自由基，避免生物大分子的损伤〔7〕。泡利芬通过维持红细胞膜稳定性，延长红细胞寿命，达到降低红细胞溶血百分率，提高机体免疫力，延长机体寿命的目的，对防治尘肺及肺部感染也有一定的裨益。该药中的川贝、半夏等对肺疾患也有直接疗效。
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原煤炭部安全司资助
作者简介：姚林，男，41岁，副教授，研究方向：茶多酚对肺疾患及肿瘤的作用
参考文献
1，张可钦.由中国茶叶中提取抗氧化剂的研究.食品与发酵工业，1991；12(1)：1
2，姚 林，王广增，赵伯阳.茶多酚的抗肿瘤研究.肿瘤防治研究，1995；22(2)：123
3，杨贤强，曹明富，沈生荣 et al.茶多酚生物学活性的研究.茶叶科学，1993；13(1)：91
4，丁克祥.丁氏抗衰老果茶对小鼠淋巴细胞体外存活率及免疫功能影响的实验研究.老年学杂志，1992；12(增刊)：35
5，冯 亚，林炳辉，吴作干 et al.行气祛痰化浊中药对血小板聚集性、红细胞变形性及血液粘度作用初探.福建中医学院学报，1998；8(1)：26
6，宋立川，马维原，吕智红 et al.红细胞衰老过程中微观流变学行为的研究.生物物理学学报，1997；13(1)：115
7，潘宏铭，郑 树，吴金民.茶叶和茶多酚与肿瘤的化学预防作用.肿瘤，1996；16(1)：46
收稿日期：1998-10-06
修回日期：1999-04-07, http://www.100md.com