RP-HPLC法测定三通风湿康胶囊中天麻素的含量
作者：原文鹏 马双成
单位：原文鹏(深圳市人民医院 518020)；马双成(中国药品生物制品检定所)
关键词：三通风湿康胶囊；天麻素；RP-HPLC法；含量测定
中草药000110摘 要 利用RP-HPLC法，采用外标法测定了三通风湿康胶囊中天麻素的含量。对三通风湿康胶囊中天麻素的提取方法、测定条件进行了选择，实验结果显示用甲醇超声处理，过中性氧化铝柱方法提取较好。该方法的加样回收率为99.29%，RSD为0.33%。
Determination of Gastrodin in Santong Fengshikang Capsule by RP-HPLC
Yuan Wenpeng
, 百拇医药 Shenzhen People's Hospital (Shenzhen 518020)
Ma Shuangcheng
National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products
Abstract Contents of gastrodin in Santong Fengshikang Capsule was determined by RP-HPLC with the use of external standard. Conditions for the extraction and determination of Gastrodin from Santong Fengshikang Capsule were optimized. Results showed that the samples should be extracted with methanol under ultrasonic wave, then passed through Al2O3 column. The average recovery of this method was 99.29 % and RSD 0.33 %.
, 百拇医药
Key words Santong Fengshikang Capsule gastrodin RP-HPLC determination▲
三通风湿康胶囊主要由天麻、灵芝、桑椹等组成，具有清热祛湿之功，用于风湿性关节炎。关于天麻中天麻素含量测定方法报道较多，主要有分光光度法[1]、薄层扫描法[2]及HPLC法[3，4]等。1995年版中华人民共和国药典一部天麻项下也有HPLC法测定天麻素含量的规定，但经研究均不适用本品。我们经过研究建立了RP-HPLC法测定三通风湿康胶中天麻素的含量，分离效果好、简单快速、准确，为控制三通风湿康胶囊内在质量提供了实验数据。
1 仪器与药品
1.1 SP8800高效液相色谱仪(美国)，SP200紫外检测器，SP4400数据处理机，10 μL定量进样管，Instersil ODS-C18柱(4.6 mm×250 mm)。
, http://www.100md.com
1.2 药品：对照品天麻素由中国药品生物制品检定所提供；样品：三通风湿康胶囊由北京东方百信生物技术有限公司提供。
流动相用乙腈为色谱纯，提取、溶解用甲醇为分析纯；流动相用水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：流动相：乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)，柱温：40 ℃，流速：1 mL/min，测定波长：221 nm。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取80 ℃干燥至恒重的天麻素5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。从中吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL分别稀释至10 mL。吸取上述溶液，分别进样10 μL，以进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标作图，得回归方程为Y=2 822 785X-8 040，r=0.999 9。进样量在0.1～0.5 μg范围内线性关系良好。
, 百拇医药
2.3 样品测定：取本品内容物0.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加甲醇20 mL，称重，超声处理30 min(提取功率大于250 W，频率大于40 kHz)，放冷，用甲醇补足重量，滤过，弃去初滤液5 mL，精密量取续滤液1 mL置水浴上蒸干，残渣用少量水溶解，加在中性氧化铝柱(100～200 目，5 g，内径1.2 cm，干法装柱)上，用70 %甲醇30 mL洗脱。收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中，摇匀。吸取上述溶液进样分析，结果见表1，图1。
表1 天麻素的含量测定结果(n=3) 批号
含量(mg/粒)
RSD(%)
960306
3.49
, 百拇医药
1.07
960307
3.45
0.85
960308
3.51
1.14
图1 三通风湿康胶囊HPLC色谱图
2.4 重现性实验：依样品测定步骤对同一批号样品重复分析5次，测得每粒含量 (mg) 分别为3.48，3.46，3.51，3.52，3.49，RSD为0.80%，表明重现性较好。
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2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL,连续进样6次，RSD为0.88%，表明仪器精密度良好。
2.6 加样回收率实验：精密称取已知含量的三通风湿康胶囊内容物约0.25 g，加入天麻素对照品3.5 mg，按样品测定项下步骤进行分析。其结果平均回收率为99.29%，RSD为0.33%。
2.7 稳定性实验：取三通风湿康胶囊，依样品测定项步骤制备样品，每隔2 h进行分析，共7次。其RSD为0.88%。表明样品12 h内稳定。
3 讨论
3.1 检测波长的选择：经对天麻素的紫外吸收光谱的测定，其吸收峰波长为221 nm和268 nm。由于在268 nm处，样品峰很多，且很难分离，又由于在221 nm处的吸收度显著强于268 nm处，故选择221 nm为测定波长。
, http://www.100md.com
3.2 提取溶媒：根据天麻素和其他成分的理化性质及制备工艺条件，选择了70%乙醇、90%乙醇、无水乙醇、甲醇、甲醇-异丙醇(1∶1)为提取溶媒，均超声处理30 min，制备供试液，经测定比较，以甲醇为提取溶媒为佳。
3.3 除杂质方法：比较了硅胶柱和中性氧化铝柱，结果表明上中性氧化铝柱除杂质好，回收率高。
3.4 分离条件的比较：经过甲醇-水不同比例(3∶97，5∶95，6∶94，7∶93)、乙腈-水不同比例(3∶97，5∶95，6∶94，7∶93)、乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)的比较，确定为乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)，流速1 mL/min，柱温为40 ℃。■
原文鹏：Address: Yuan Wenpeng, Shenzhen People's Hospital, Shenzhen
原文鹏：男，1989年毕业于北京中医药大学中药学院，获医学学士学位。主管药师，现在深
, http://www.100md.com
圳市人民医院药学部工作。主要研究方向为中药、民族药的鉴定、整理，新制剂、新剂型开
发及质量控制，医院药房管理等。
参考文献
1，马公强，等.药物分析杂志，1981，1(3)：165
2，黄玉仙，等.中成药研究，1988，11(4)：58
3，程式之，等.药物分析杂志，1984，4(6)：344
4，程式之，等.贵州药讯，1985，(1)：1
(1999-03-18 收稿), http://www.100md.com
单位：原文鹏(深圳市人民医院 518020)；马双成(中国药品生物制品检定所)
关键词：三通风湿康胶囊；天麻素；RP-HPLC法；含量测定
中草药000110摘 要 利用RP-HPLC法，采用外标法测定了三通风湿康胶囊中天麻素的含量。对三通风湿康胶囊中天麻素的提取方法、测定条件进行了选择，实验结果显示用甲醇超声处理，过中性氧化铝柱方法提取较好。该方法的加样回收率为99.29%，RSD为0.33%。
Determination of Gastrodin in Santong Fengshikang Capsule by RP-HPLC
Yuan Wenpeng
, 百拇医药 Shenzhen People's Hospital (Shenzhen 518020)
Ma Shuangcheng
National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products
Abstract Contents of gastrodin in Santong Fengshikang Capsule was determined by RP-HPLC with the use of external standard. Conditions for the extraction and determination of Gastrodin from Santong Fengshikang Capsule were optimized. Results showed that the samples should be extracted with methanol under ultrasonic wave, then passed through Al2O3 column. The average recovery of this method was 99.29 % and RSD 0.33 %.
, 百拇医药
Key words Santong Fengshikang Capsule gastrodin RP-HPLC determination▲
三通风湿康胶囊主要由天麻、灵芝、桑椹等组成，具有清热祛湿之功，用于风湿性关节炎。关于天麻中天麻素含量测定方法报道较多，主要有分光光度法[1]、薄层扫描法[2]及HPLC法[3，4]等。1995年版中华人民共和国药典一部天麻项下也有HPLC法测定天麻素含量的规定，但经研究均不适用本品。我们经过研究建立了RP-HPLC法测定三通风湿康胶中天麻素的含量，分离效果好、简单快速、准确，为控制三通风湿康胶囊内在质量提供了实验数据。
1 仪器与药品
1.1 SP8800高效液相色谱仪(美国)，SP200紫外检测器，SP4400数据处理机，10 μL定量进样管，Instersil ODS-C18柱(4.6 mm×250 mm)。
, http://www.100md.com
1.2 药品：对照品天麻素由中国药品生物制品检定所提供；样品：三通风湿康胶囊由北京东方百信生物技术有限公司提供。
流动相用乙腈为色谱纯，提取、溶解用甲醇为分析纯；流动相用水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：流动相：乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)，柱温：40 ℃，流速：1 mL/min，测定波长：221 nm。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取80 ℃干燥至恒重的天麻素5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。从中吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL分别稀释至10 mL。吸取上述溶液，分别进样10 μL，以进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标作图，得回归方程为Y=2 822 785X-8 040，r=0.999 9。进样量在0.1～0.5 μg范围内线性关系良好。
, 百拇医药
2.3 样品测定：取本品内容物0.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加甲醇20 mL，称重，超声处理30 min(提取功率大于250 W，频率大于40 kHz)，放冷，用甲醇补足重量，滤过，弃去初滤液5 mL，精密量取续滤液1 mL置水浴上蒸干，残渣用少量水溶解，加在中性氧化铝柱(100～200 目，5 g，内径1.2 cm，干法装柱)上，用70 %甲醇30 mL洗脱。收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中，摇匀。吸取上述溶液进样分析，结果见表1，图1。
表1 天麻素的含量测定结果(n=3) 批号
含量(mg/粒)
RSD(%)
960306
3.49
, 百拇医药
1.07
960307
3.45
0.85
960308
3.51
1.14
图1 三通风湿康胶囊HPLC色谱图
2.4 重现性实验：依样品测定步骤对同一批号样品重复分析5次，测得每粒含量 (mg) 分别为3.48，3.46，3.51，3.52，3.49，RSD为0.80%，表明重现性较好。
, http://www.100md.com
2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL,连续进样6次，RSD为0.88%，表明仪器精密度良好。
2.6 加样回收率实验：精密称取已知含量的三通风湿康胶囊内容物约0.25 g，加入天麻素对照品3.5 mg，按样品测定项下步骤进行分析。其结果平均回收率为99.29%，RSD为0.33%。
2.7 稳定性实验：取三通风湿康胶囊，依样品测定项步骤制备样品，每隔2 h进行分析，共7次。其RSD为0.88%。表明样品12 h内稳定。
3 讨论
3.1 检测波长的选择：经对天麻素的紫外吸收光谱的测定，其吸收峰波长为221 nm和268 nm。由于在268 nm处，样品峰很多，且很难分离，又由于在221 nm处的吸收度显著强于268 nm处，故选择221 nm为测定波长。
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3.2 提取溶媒：根据天麻素和其他成分的理化性质及制备工艺条件，选择了70%乙醇、90%乙醇、无水乙醇、甲醇、甲醇-异丙醇(1∶1)为提取溶媒，均超声处理30 min，制备供试液，经测定比较，以甲醇为提取溶媒为佳。
3.3 除杂质方法：比较了硅胶柱和中性氧化铝柱，结果表明上中性氧化铝柱除杂质好，回收率高。
3.4 分离条件的比较：经过甲醇-水不同比例(3∶97，5∶95，6∶94，7∶93)、乙腈-水不同比例(3∶97，5∶95，6∶94，7∶93)、乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)的比较，确定为乙腈-水-磷酸(3∶97∶0.2)，流速1 mL/min，柱温为40 ℃。■
原文鹏：Address: Yuan Wenpeng, Shenzhen People's Hospital, Shenzhen
原文鹏：男，1989年毕业于北京中医药大学中药学院，获医学学士学位。主管药师，现在深
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圳市人民医院药学部工作。主要研究方向为中药、民族药的鉴定、整理，新制剂、新剂型开
发及质量控制，医院药房管理等。
参考文献
1，马公强，等.药物分析杂志，1981，1(3)：165
2，黄玉仙，等.中成药研究，1988，11(4)：58
3，程式之，等.药物分析杂志，1984，4(6)：344
4，程式之，等.贵州药讯，1985，(1)：1
(1999-03-18 收稿), http://www.100md.com