RP-HPLC法测定拉莫三嗪的血药浓度及应用
作者：钱方 王玉亮 刘皋林 邓渝林 包军
单位：钱方(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；王玉亮(药学院1996级实习生)；刘皋林(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；邓渝林(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；包军(长征医院小儿科)
关键词：拉莫三嗪；色谱法，高效液相；血浆样品
第二军医大学学报001038
[中图分类号] R 969.1 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0998-02
拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)为一种苯三嗪类的广谱抗癫药，在1998年被美国FDA批准 用于癫局限性发作的辅助治疗。由于其半衰期较长(24～30 h)，可以2次/d给药。有许多 研究报道该药安全、有效，有效治疗浓度为1～4 μg/ml，临床应用不断增加[1,2 ]。由于该药与当前所用的抗癫药如丙戊酸、卡马西平在药代动力学上的相互作用，导 致个体间血药浓度差异较大。因此，我们建立了一种高效、灵敏的RP-HPLC法测定人体内的 LTG血药浓度，为临床合理用药提供依据[3,4]。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器和试药 Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司)：包括Waters 510 泵，Waters 486紫外检测器，Millipore 2010色谱工作站，Rheodyne 7725型六通进样阀， 配以20 μl定量管；Beckman低温冷冻离心机(德国Beckman公司)；XW-80型涡旋混合器( 上海医科大学仪器厂)。LTG片(英国Wellcome公司生产， 50 mg/片，批号B739A)；LTG对照 品 (英国Wellcome公司提供，批号1556)；辛烷基磺酸钠(SOS，光谱纯，日本Tokyo Kasei Kogyo 公司生产)；乙腈、甲醇为国产光谱纯；乙酰苯胺及其他试剂均为分析纯；水为重蒸 馏水。
1.2 色谱分离条件 分析柱为Sino Chrom C18(250 mm×4.6 mm，5 μm )色谱柱；流动相为乙腈∶0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 3.5，内含SOS 0.005 mol/L )(28∶72)，流速为1.0 ml/min；检测波长265 nm；0.005 AUFS；室温。
, 百拇医药
1.3 患者 59例癫患者按其治疗状况分成4组：LTG治疗组4例、LTG+丙戊酸治疗 组32例、LTG+卡马西平治疗组12例和LTG+丙戊酸+卡马西平治疗组11例。LTG口服给药剂量分 别为(1.89±1.56),(2.03±1.02),(2.17±0.61)和(2.07±0.64) mg/(d*kg)，于开始 治疗后8 d(LTG+丙戊酸组在治疗后20 d)清晨服药前空腹抽血2 ml，测定LTG的血药浓度。
1.4 血样预处理 精密吸取血样0.5 ml，加入0.5 ml冷乙腈，涡旋混合10 s，冰 水中放置10 min，离心2 000 g×15 min(4℃)，移取上清液再次离心2 000 g×1 5 min(4℃)，取20 μl上清液进样。LTG、乙酰苯胺保留时间分别为13.3和8.6 min，分离 效果良好。色谱分离结果见图1。
图 1 LTG的HPLC图谱
, http://www.100md.com
A: 空白血清； B： 样品
2 结 果
2.1 标准曲线 取450 μl人空白血浆，加入25 μl 60 μg/ml乙酰苯胺内标液 ，分别加入适量的LTG对照品液，配制质量浓度为0.5，1.0，1.5，2.0，5.0，1 0.0 μg/ml的血浆样品。 按1.4项下操作，以LTG浓度(c)与LTG/内标峰面积比(A)作线性回归，得回归方 程：A=-4.601 3×10-3+0.051 25 c， r=0.999 2(n=5)。说 明血药浓度在0.5～10.0 μg/ml范围内线性关系良好。
2.2 最低检测限 按S/N=3计算，血浆中LTG最低检测浓度为0.2 μg/ml。
2.3 回收率和精密度 取450 μl人空白血浆，加入25 μl 60 μg/ml乙酰苯胺内 标溶液，分别加入LTG对照品液，配成质量浓度为1.0，2.0，10.0 μg/ml的标准血样。按1. 4项下操作,计算。回收率分别为(102.0±13.7)%；(90.2±14.0)%和(100.9±2.7)%( n=5)。日内RSD分别为5.0 %，1.1 %和0.7 %(n=5)；日间RSD分别为6.4 %，2.2 %和1.2 % (n=5)。
, 百拇医药
2.4 干扰实验 取临床常与LTG合用的抗癫药物卡马西平、丙戊酸，配制成质量 浓度均为10.0 μg/ml，各取20 μl进样。实验表明，这两种药物对LTG和乙酰苯胺测定均无 干扰。
2.5 LTG血药浓度测定结果 结果表明，LTG治疗组的血药浓度为(3.08±2.53) μ g/ml，LTG+丙戊酸治疗组的血药浓度为(4.86±2.85) μg/ml，LTG+卡马西平治疗组的血药 浓度为(0.82±0.92) μg/ml，三药合用治疗组的血药浓度为(2.84±1.62) μg/ml。
3 讨 论
本法采用乙腈沉淀法测定血浆中LTG的浓度，简化了样品预处理的过程，可在短时间 内处理大批样品。该方法快速、简便、准确，适用于临床LTG的血药浓度监测，为LTG的合理 用药提供依据。
各治疗组中，经方差分析比较三组联合治疗组的给药剂量无显著差异。而方差分析 比较三组联合治疗组的血药浓度存在非常显著的差异(P<0.01)。据文献报道，LTG的 t1/2为 24.1～37.4 h,合并应用丙戊酸时t1/2 延长为44.2～92 h，合并应用卡马西平时其t1/2 缩短为7.7～10.6 h，而半衰期的延长和缩短均 可影响药物的血药浓度和疗效持续时间[5]。
, 百拇医药
通过本实验可以发现，LTG在临床应用过程中，包括在与卡马西平、丙戊酸的联合用药 中，血药浓度个体差异较大。联合应用丙戊酸可显著提高LTG的血药浓度，联合应用卡马西 平则会明显降低LTG的血药浓度，此结果与国外报道一致[5]。因此，开展LTG的血 药浓度监测有助于进一步完善抗癫治疗，使治疗方案更具个体化，以产生最佳的治疗效果 ，并减少不良反应的发生。
[作者简介] 钱方(1965-)，女(汉族)，硕士，主管药师.
[参 考 文 献]
[1] Pellock JM. The clinical efficacy of lamotrigine as an antiep ileptic drug[J]. Neurology， 1994，44(11， Suppl 8)： 29-35.
[2] Brodie MJ，Richens A，Yuen AW. Double-blind comparison of lamotrigi ne and carbamazepine in newly diagnosed epilepsy[J].Lancet，1995，345(8948) ：476-479.
, 百拇医药
[3] Ren S, Scheuer ML, Zheng W. Determination of lamotrigine in biologic materials by a simple and rapid liquid chromatographic method[J].Ther Drug Mon it,1998,20(2)：209-214.
[4] Yamashita S， Furuno K， Kawasaki H, et al. Simple and rapid anal ysis of lamotrigine,a novel antiepileptic in human serum by high-performance li quid chromatography using a solid-phase extraction technique[J]. J Chromatogr B Biomed Appl, 1995，670(2)：354-357.
[5] Rambeck B, Wolf P. Lamotrigine clinical pharmacokinetics[J].Clin Ph armacokinet,1993,25(6):433-443.
[收稿日期] 2000-06-09
[修回日期] 2000-08-08, http://www.100md.com
单位：钱方(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；王玉亮(药学院1996级实习生)；刘皋林(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；邓渝林(第二军医大学长征医院药学部，上海 200003)；包军(长征医院小儿科)
关键词：拉莫三嗪；色谱法，高效液相；血浆样品
第二军医大学学报001038
[中图分类号] R 969.1 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0998-02
拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)为一种苯三嗪类的广谱抗癫药，在1998年被美国FDA批准 用于癫局限性发作的辅助治疗。由于其半衰期较长(24～30 h)，可以2次/d给药。有许多 研究报道该药安全、有效，有效治疗浓度为1～4 μg/ml，临床应用不断增加[1,2 ]。由于该药与当前所用的抗癫药如丙戊酸、卡马西平在药代动力学上的相互作用，导 致个体间血药浓度差异较大。因此，我们建立了一种高效、灵敏的RP-HPLC法测定人体内的 LTG血药浓度，为临床合理用药提供依据[3,4]。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器和试药 Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司)：包括Waters 510 泵，Waters 486紫外检测器，Millipore 2010色谱工作站，Rheodyne 7725型六通进样阀， 配以20 μl定量管；Beckman低温冷冻离心机(德国Beckman公司)；XW-80型涡旋混合器( 上海医科大学仪器厂)。LTG片(英国Wellcome公司生产， 50 mg/片，批号B739A)；LTG对照 品 (英国Wellcome公司提供，批号1556)；辛烷基磺酸钠(SOS，光谱纯，日本Tokyo Kasei Kogyo 公司生产)；乙腈、甲醇为国产光谱纯；乙酰苯胺及其他试剂均为分析纯；水为重蒸 馏水。
1.2 色谱分离条件 分析柱为Sino Chrom C18(250 mm×4.6 mm，5 μm )色谱柱；流动相为乙腈∶0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 3.5，内含SOS 0.005 mol/L )(28∶72)，流速为1.0 ml/min；检测波长265 nm；0.005 AUFS；室温。
, 百拇医药
1.3 患者 59例癫患者按其治疗状况分成4组：LTG治疗组4例、LTG+丙戊酸治疗 组32例、LTG+卡马西平治疗组12例和LTG+丙戊酸+卡马西平治疗组11例。LTG口服给药剂量分 别为(1.89±1.56),(2.03±1.02),(2.17±0.61)和(2.07±0.64) mg/(d*kg)，于开始 治疗后8 d(LTG+丙戊酸组在治疗后20 d)清晨服药前空腹抽血2 ml，测定LTG的血药浓度。
1.4 血样预处理 精密吸取血样0.5 ml，加入0.5 ml冷乙腈，涡旋混合10 s，冰 水中放置10 min，离心2 000 g×15 min(4℃)，移取上清液再次离心2 000 g×1 5 min(4℃)，取20 μl上清液进样。LTG、乙酰苯胺保留时间分别为13.3和8.6 min，分离 效果良好。色谱分离结果见图1。
图 1 LTG的HPLC图谱
, http://www.100md.com
A: 空白血清； B： 样品
2 结 果
2.1 标准曲线 取450 μl人空白血浆，加入25 μl 60 μg/ml乙酰苯胺内标液 ，分别加入适量的LTG对照品液，配制质量浓度为0.5，1.0，1.5，2.0，5.0，1 0.0 μg/ml的血浆样品。 按1.4项下操作，以LTG浓度(c)与LTG/内标峰面积比(A)作线性回归，得回归方 程：A=-4.601 3×10-3+0.051 25 c， r=0.999 2(n=5)。说 明血药浓度在0.5～10.0 μg/ml范围内线性关系良好。
2.2 最低检测限 按S/N=3计算，血浆中LTG最低检测浓度为0.2 μg/ml。
2.3 回收率和精密度 取450 μl人空白血浆，加入25 μl 60 μg/ml乙酰苯胺内 标溶液，分别加入LTG对照品液，配成质量浓度为1.0，2.0，10.0 μg/ml的标准血样。按1. 4项下操作,计算。回收率分别为(102.0±13.7)%；(90.2±14.0)%和(100.9±2.7)%( n=5)。日内RSD分别为5.0 %，1.1 %和0.7 %(n=5)；日间RSD分别为6.4 %，2.2 %和1.2 % (n=5)。
, 百拇医药
2.4 干扰实验 取临床常与LTG合用的抗癫药物卡马西平、丙戊酸，配制成质量 浓度均为10.0 μg/ml，各取20 μl进样。实验表明，这两种药物对LTG和乙酰苯胺测定均无 干扰。
2.5 LTG血药浓度测定结果 结果表明，LTG治疗组的血药浓度为(3.08±2.53) μ g/ml，LTG+丙戊酸治疗组的血药浓度为(4.86±2.85) μg/ml，LTG+卡马西平治疗组的血药 浓度为(0.82±0.92) μg/ml，三药合用治疗组的血药浓度为(2.84±1.62) μg/ml。
3 讨 论
本法采用乙腈沉淀法测定血浆中LTG的浓度，简化了样品预处理的过程，可在短时间 内处理大批样品。该方法快速、简便、准确，适用于临床LTG的血药浓度监测，为LTG的合理 用药提供依据。
各治疗组中，经方差分析比较三组联合治疗组的给药剂量无显著差异。而方差分析 比较三组联合治疗组的血药浓度存在非常显著的差异(P<0.01)。据文献报道，LTG的 t1/2为 24.1～37.4 h,合并应用丙戊酸时t1/2 延长为44.2～92 h，合并应用卡马西平时其t1/2 缩短为7.7～10.6 h，而半衰期的延长和缩短均 可影响药物的血药浓度和疗效持续时间[5]。
, 百拇医药
通过本实验可以发现，LTG在临床应用过程中，包括在与卡马西平、丙戊酸的联合用药 中，血药浓度个体差异较大。联合应用丙戊酸可显著提高LTG的血药浓度，联合应用卡马西 平则会明显降低LTG的血药浓度，此结果与国外报道一致[5]。因此，开展LTG的血 药浓度监测有助于进一步完善抗癫治疗，使治疗方案更具个体化，以产生最佳的治疗效果 ，并减少不良反应的发生。
[作者简介] 钱方(1965-)，女(汉族)，硕士，主管药师.
[参 考 文 献]
[1] Pellock JM. The clinical efficacy of lamotrigine as an antiep ileptic drug[J]. Neurology， 1994，44(11， Suppl 8)： 29-35.
[2] Brodie MJ，Richens A，Yuen AW. Double-blind comparison of lamotrigi ne and carbamazepine in newly diagnosed epilepsy[J].Lancet，1995，345(8948) ：476-479.
, 百拇医药
[3] Ren S, Scheuer ML, Zheng W. Determination of lamotrigine in biologic materials by a simple and rapid liquid chromatographic method[J].Ther Drug Mon it,1998,20(2)：209-214.
[4] Yamashita S， Furuno K， Kawasaki H, et al. Simple and rapid anal ysis of lamotrigine,a novel antiepileptic in human serum by high-performance li quid chromatography using a solid-phase extraction technique[J]. J Chromatogr B Biomed Appl, 1995，670(2)：354-357.
[5] Rambeck B, Wolf P. Lamotrigine clinical pharmacokinetics[J].Clin Ph armacokinet,1993,25(6):433-443.
[收稿日期] 2000-06-09
[修回日期] 2000-08-08, http://www.100md.com