不同月龄大鼠前列腺组织中一氧化氮水平及其生理意义
作者：薛波新 颜纯海 单玉喜 殷福兴 梁建英 张宏
单位：薛波新 颜纯海 单玉喜 殷福兴(215004 苏州医学院附属第二医院泌尿外科)；梁建英 张宏(血液科)
关键词：良性前列腺增生症；一氧化氮；分光光度法测定；大鼠；膀胱出口梗阻
江苏医药000608 【摘要】 目的 探寻前列腺组织中一氧化氮(NO)水平与年龄之间的关系。方法 应用分光光度法测定2、6、12月龄各6只大鼠前列腺组织中的NO水平。结果 2、6、12月龄大鼠前列腺组织中NO水平分别为：46.48±7.16 μmol/L、27.26±5.83 μmol/L、23.83±10.21 μmol/L，随着月龄增长，NO水平逐渐下降，三者间有显著性差异(P<0.05)。结论 前列腺组织中NO水平与年龄有关，NO水平随着年龄的增长而下降。前列腺组织中L-精氨酸-一氧化氮-环磷酸鸟苷(L-ARG-NO-cGMP)系统缺陷可能正是老年性良性前列腺增生症(BPH)的发病原因之一。
, http://www.100md.com
Nitric oxide standard and its physiological significance in rat prostate
XUE Boxin YAN Chunhai SAN Yuxi
(Department of Urology，the Second Affiliated Hospital，Suzhou Medical College，Suzhou 215004)
【Abstract】 Objective To research on the relation between the age and the nitric oxide concentration in prostatic tissue of rat.Methods We used spectrophotometry to measure the NO levels in rats normal prostatic tissue with six rats of two，six and twelve months respectively.Results In two-，six-and twelve-month-old rats，the NO levels in prostatic tissue were 46.48±7.16μmol/L，27.26±5.83μmol/L，23.83±10.21μmol/L.The NO levels decreased with the advance of age，and there were significant differences in the three groups(P<0.05).Conclusion The NO levels in rats’ prostates are relative to rats’ age.The NO levels decreased with the advance of age.The defect of L-ARG-NO-cGMP system in prostatic tissue is one of the causes in development of BPH.
, 百拇医药
【Key words】 Benign prostatic hyperplasia Nitric oxide Spectrophotometry Rat Bladder outlet obstruction
良性前列腺增生症(BPH)是老年男性的常见病，其发生与年龄因素密切相关，北京高冰[1]报道在大鼠阴茎组织中一氧化氮合酶(NOS)活性水平随着年龄的增长而逐渐下降。为了解在前列腺组织中一氧化氮(NO)水平是否也与年龄相关，我们应用分光光度法测定不同月龄的雄性大鼠前列腺组织的NO，并就其生理意义进行讨论。
材料与方法
一、实验动物与主要试剂 2、6、12月龄Wistar雄性大鼠各6只，体重分别约100g、350g、550 g。由苏州医学院实验动物中心提供。为封闭群品系，遗传背景清楚，生物学特征基本稳定。NO检测试剂盒，购自深圳晶美生物工程有限公司。
, 百拇医药
二、组织匀浆的制备 大鼠脱颈椎处死，摘取前列腺腹叶(RVP)，磷酸钾缓冲液冲洗3遍去血污，用滤纸吸干液体，在电光分析天平上称重，按1∶10(W/V)比例加入40 mM，pH 7.2的磷酸钾缓冲液，用玻璃组织碾磨器碾磨匀浆化，15000转/分离心20分钟，取上清液待测。
三、NO的测定 按NO检测试剂盒(酶法)说明书进行，具体操作如下：
1.分别取待测上清液、KNO3、双蒸水0.1 ml加入测定管、标准管、空白管中，接着先后将0.1 ml磷酸盐缓冲液、50 μl硝酸还原酶溶液加入上述各试管中，轻轻混匀，37℃水浴1小时。
2.水浴毕，将1.0 ml显色剂加入以上各试管中混匀，室温静止10分钟后比色。
3.比色：选取550 nm波长，空白管调零后，分别读取标准管和测定管吸光值A。
, 百拇医药
四、结果计算及统计学分析
计量资料用
±s表示，用方差分析作多个样本均数间的比较。
结 果
2、6、12月龄大鼠前列腺组织中NO水平分别为46.48±7.16μmol/L、27.26±5.83μmol/L、23.83±10.21 μmol/L。随着月龄增长，大鼠前列腺组织中NO水平逐渐下降，三者间比较有显著性差异(P<0.05)。同时随着大鼠月龄的增长，前列腺也逐渐增生。测定2、6、12月龄大鼠前列腺重量(以RVP湿重/大鼠体重表示)分别为0.53±0.10mg/kg、0.85±0.04mg/kg、0.91±0.05 mg/kg，三组间同样有显著性差异(P<0.01)。
, 百拇医药
讨 论
前列腺是一个纤维肌肉腺性器官，BPH也是三者混合增生的疾病[2]。其结果是引起膀胱出口梗阻(BOO)，产生排尿症状。早在1975年，Caine等[3]就阐明了一个重要概念：BPH引起的下尿路梗阻主要有两种因素：一是前列腺增生引起的机械性梗阻(即静力因素)，二是前列腺平滑肌张力增高引起的动力因素。并且在发生BPH时，间质与腺体上皮的比例明显高于正常前列腺组织中的比例，间质中以平滑肌组织的明显增生显得更为突出[4]。因此，由前列腺平滑肌张力增高所致的动力因素是造成BPH临床表现的重要因素[5]。
以往认为前列腺平滑肌主要受α-肾上腺能神经递质的调节，最近研究发现前列腺组织中还存在另一种神经递质，即非肾上腺能非胆碱能(NANC)神经递质—NO[6]。
NO是近年来发现的一种气体信使分子，由L-精氨酸(L-ARG)在NOS催化下生成，广泛分布于细胞浆中，通过弥散方式激活鸟苷酸环化酶(GC)，生成环磷酸鸟苷(cGMP)，而发挥各种生物学效应[6～7]。即在体内许多组织中存在着一条L-ARG-NO-cGMP通路系统，NO通过该系统发挥着各种生理作用。
, 百拇医药
NO是一种内皮衍化舒张因子(EDRF)，具有强力的平滑肌舒张作用[8]。在前列腺组织，可引起前列腺平滑肌的松弛[7]，正常情况下，前列腺内α-肾上腺能受体(α-AR)作用可被NO介导的平滑肌松弛作用所拮抗，从而提示BPH患者的BOO也可能与前列腺内NO水平下降有关[9]。因此，可以认为任何导致前列腺组织NO水平下降的因素都可能是BPH所致BOO的原因之一。
BPH是老年男性的常见病。流行病学调查表明，BPH发病具有明显的年龄依赖性[1]。Berry等[10]曾报道，20～40岁年龄组病理BPH的发生率还不足10%，40～50岁年龄组为20%，至80岁时，病理BPH的发生率可达90%。Garrway等研究临床BPH的发生率，其结果也是随着年龄的增长，临床BPH的发生率增高。因此BPH的发生是与年龄因素密切相关的。本实验试图从调节前列腺平滑肌张力的生理性介质的角度探讨BPH与年龄的关系，以说明L-ARG-NO-cGMP系统缺陷在BPH发生中的意义。
, 百拇医药
我们测定2、6、12月龄雄性大鼠前列腺组织中的NO含量，结果表明随着月龄增长，大鼠前列腺逐渐增生，三者间比较，差异有显著性(P<0.01)，而前列腺组织中NO水平却逐渐下降，三者比较也有显著性差异(P<0.05)。
前列腺组织中NO水平的下降可能与NO生成减少有关。NOS是NO生成的关键酶。免疫组化方法研究表明，在人、鼠前列腺组织，NOS广泛分布于支配前列腺平滑肌的神经纤维和神经节中[9]。随着年龄增长，前列腺组织中的神经纤维、神经节发生退行性改变，NOS活性逐渐下降，导致NO生成量减少。其结果是随着年龄增长，前列腺渐增生，伴随前列腺平滑肌张力增高，导致膀胱出口梗阻，出现临床症状。因此，前列腺组织中L-ARG-NO-cGMP系统缺陷可能正是老年性BPH的发病原因之一。
参考文献
1，高冰，薛兆英，郭应禄，等.不同月龄大鼠阴茎组织一氧化氮合成酶活性测定及生理意义.中华泌尿外科杂志，1995，16：423-425.
, 百拇医药
2，谷现恩，潘柏年主编.现代前列腺疾病.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1996，41-44.
3，Caine M，Raz S， Zeigler M.Adrenergic and cholinergic receptor in the human prostate，prostate capsule and bladder neck.Br J Urol，1975，47：193-202.
4，邓方明，夏同礼，顾方六，等.正常前列腺和前列腺增生的组织形态学定量研究.中华泌尿外科杂志，1995，16：708-710.
5，邓方明，夏同礼，顾方六，等.BPH组织中平滑肌成分的定量分析及意义.中华泌尿外科杂志，1994，15：184-186.
6，Burnett AL，Lowenstein CJ，Bredt DS，et al.Nitric oxide：a physiologic mediator of penile erection.Scince，1992，257：401-403.
, 百拇医药
7，Takeda M，Tang R，Shapiro E，et al.Effects of nitric oxide on human and canine prostates.Urology，1995，45：440-446.
8，Palmer RM，Ferrige AG， Moncada S.Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor.Nature，1987，327：524-526.
9，Burnett AL，Takeda M，Maguire M，et al.Characterization and localization of nitric oxide synthase in the human prostate.Urology，1995，45：435-439.
10，Berry SJ，Coffey DS，Walsh PC，et al.The development of human benign prostatic hyperplasia with age.J Urol，1984，132：474-478.
(收稿：1999-06-23 修回：1999-09-20), 百拇医药
单位：薛波新 颜纯海 单玉喜 殷福兴(215004 苏州医学院附属第二医院泌尿外科)；梁建英 张宏(血液科)
关键词：良性前列腺增生症；一氧化氮；分光光度法测定；大鼠；膀胱出口梗阻
江苏医药000608 【摘要】 目的 探寻前列腺组织中一氧化氮(NO)水平与年龄之间的关系。方法 应用分光光度法测定2、6、12月龄各6只大鼠前列腺组织中的NO水平。结果 2、6、12月龄大鼠前列腺组织中NO水平分别为：46.48±7.16 μmol/L、27.26±5.83 μmol/L、23.83±10.21 μmol/L，随着月龄增长，NO水平逐渐下降，三者间有显著性差异(P<0.05)。结论 前列腺组织中NO水平与年龄有关，NO水平随着年龄的增长而下降。前列腺组织中L-精氨酸-一氧化氮-环磷酸鸟苷(L-ARG-NO-cGMP)系统缺陷可能正是老年性良性前列腺增生症(BPH)的发病原因之一。
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Nitric oxide standard and its physiological significance in rat prostate
XUE Boxin YAN Chunhai SAN Yuxi
(Department of Urology，the Second Affiliated Hospital，Suzhou Medical College，Suzhou 215004)
【Abstract】 Objective To research on the relation between the age and the nitric oxide concentration in prostatic tissue of rat.Methods We used spectrophotometry to measure the NO levels in rats normal prostatic tissue with six rats of two，six and twelve months respectively.Results In two-，six-and twelve-month-old rats，the NO levels in prostatic tissue were 46.48±7.16μmol/L，27.26±5.83μmol/L，23.83±10.21μmol/L.The NO levels decreased with the advance of age，and there were significant differences in the three groups(P<0.05).Conclusion The NO levels in rats’ prostates are relative to rats’ age.The NO levels decreased with the advance of age.The defect of L-ARG-NO-cGMP system in prostatic tissue is one of the causes in development of BPH.
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【Key words】 Benign prostatic hyperplasia Nitric oxide Spectrophotometry Rat Bladder outlet obstruction
良性前列腺增生症(BPH)是老年男性的常见病，其发生与年龄因素密切相关，北京高冰[1]报道在大鼠阴茎组织中一氧化氮合酶(NOS)活性水平随着年龄的增长而逐渐下降。为了解在前列腺组织中一氧化氮(NO)水平是否也与年龄相关，我们应用分光光度法测定不同月龄的雄性大鼠前列腺组织的NO，并就其生理意义进行讨论。
材料与方法
一、实验动物与主要试剂 2、6、12月龄Wistar雄性大鼠各6只，体重分别约100g、350g、550 g。由苏州医学院实验动物中心提供。为封闭群品系，遗传背景清楚，生物学特征基本稳定。NO检测试剂盒，购自深圳晶美生物工程有限公司。
, 百拇医药
二、组织匀浆的制备 大鼠脱颈椎处死，摘取前列腺腹叶(RVP)，磷酸钾缓冲液冲洗3遍去血污，用滤纸吸干液体，在电光分析天平上称重，按1∶10(W/V)比例加入40 mM，pH 7.2的磷酸钾缓冲液，用玻璃组织碾磨器碾磨匀浆化，15000转/分离心20分钟，取上清液待测。
三、NO的测定 按NO检测试剂盒(酶法)说明书进行，具体操作如下：
1.分别取待测上清液、KNO3、双蒸水0.1 ml加入测定管、标准管、空白管中，接着先后将0.1 ml磷酸盐缓冲液、50 μl硝酸还原酶溶液加入上述各试管中，轻轻混匀，37℃水浴1小时。
2.水浴毕，将1.0 ml显色剂加入以上各试管中混匀，室温静止10分钟后比色。
3.比色：选取550 nm波长，空白管调零后，分别读取标准管和测定管吸光值A。
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四、结果计算及统计学分析
计量资料用
±s表示，用方差分析作多个样本均数间的比较。结 果
2、6、12月龄大鼠前列腺组织中NO水平分别为46.48±7.16μmol/L、27.26±5.83μmol/L、23.83±10.21 μmol/L。随着月龄增长，大鼠前列腺组织中NO水平逐渐下降，三者间比较有显著性差异(P<0.05)。同时随着大鼠月龄的增长，前列腺也逐渐增生。测定2、6、12月龄大鼠前列腺重量(以RVP湿重/大鼠体重表示)分别为0.53±0.10mg/kg、0.85±0.04mg/kg、0.91±0.05 mg/kg，三组间同样有显著性差异(P<0.01)。
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讨 论
前列腺是一个纤维肌肉腺性器官，BPH也是三者混合增生的疾病[2]。其结果是引起膀胱出口梗阻(BOO)，产生排尿症状。早在1975年，Caine等[3]就阐明了一个重要概念：BPH引起的下尿路梗阻主要有两种因素：一是前列腺增生引起的机械性梗阻(即静力因素)，二是前列腺平滑肌张力增高引起的动力因素。并且在发生BPH时，间质与腺体上皮的比例明显高于正常前列腺组织中的比例，间质中以平滑肌组织的明显增生显得更为突出[4]。因此，由前列腺平滑肌张力增高所致的动力因素是造成BPH临床表现的重要因素[5]。
以往认为前列腺平滑肌主要受α-肾上腺能神经递质的调节，最近研究发现前列腺组织中还存在另一种神经递质，即非肾上腺能非胆碱能(NANC)神经递质—NO[6]。
NO是近年来发现的一种气体信使分子，由L-精氨酸(L-ARG)在NOS催化下生成，广泛分布于细胞浆中，通过弥散方式激活鸟苷酸环化酶(GC)，生成环磷酸鸟苷(cGMP)，而发挥各种生物学效应[6～7]。即在体内许多组织中存在着一条L-ARG-NO-cGMP通路系统，NO通过该系统发挥着各种生理作用。
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NO是一种内皮衍化舒张因子(EDRF)，具有强力的平滑肌舒张作用[8]。在前列腺组织，可引起前列腺平滑肌的松弛[7]，正常情况下，前列腺内α-肾上腺能受体(α-AR)作用可被NO介导的平滑肌松弛作用所拮抗，从而提示BPH患者的BOO也可能与前列腺内NO水平下降有关[9]。因此，可以认为任何导致前列腺组织NO水平下降的因素都可能是BPH所致BOO的原因之一。
BPH是老年男性的常见病。流行病学调查表明，BPH发病具有明显的年龄依赖性[1]。Berry等[10]曾报道，20～40岁年龄组病理BPH的发生率还不足10%，40～50岁年龄组为20%，至80岁时，病理BPH的发生率可达90%。Garrway等研究临床BPH的发生率，其结果也是随着年龄的增长，临床BPH的发生率增高。因此BPH的发生是与年龄因素密切相关的。本实验试图从调节前列腺平滑肌张力的生理性介质的角度探讨BPH与年龄的关系，以说明L-ARG-NO-cGMP系统缺陷在BPH发生中的意义。
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我们测定2、6、12月龄雄性大鼠前列腺组织中的NO含量，结果表明随着月龄增长，大鼠前列腺逐渐增生，三者间比较，差异有显著性(P<0.01)，而前列腺组织中NO水平却逐渐下降，三者比较也有显著性差异(P<0.05)。
前列腺组织中NO水平的下降可能与NO生成减少有关。NOS是NO生成的关键酶。免疫组化方法研究表明，在人、鼠前列腺组织，NOS广泛分布于支配前列腺平滑肌的神经纤维和神经节中[9]。随着年龄增长，前列腺组织中的神经纤维、神经节发生退行性改变，NOS活性逐渐下降，导致NO生成量减少。其结果是随着年龄增长，前列腺渐增生，伴随前列腺平滑肌张力增高，导致膀胱出口梗阻，出现临床症状。因此，前列腺组织中L-ARG-NO-cGMP系统缺陷可能正是老年性BPH的发病原因之一。
参考文献
1，高冰，薛兆英，郭应禄，等.不同月龄大鼠阴茎组织一氧化氮合成酶活性测定及生理意义.中华泌尿外科杂志，1995，16：423-425.
, 百拇医药
2，谷现恩，潘柏年主编.现代前列腺疾病.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1996，41-44.
3，Caine M，Raz S， Zeigler M.Adrenergic and cholinergic receptor in the human prostate，prostate capsule and bladder neck.Br J Urol，1975，47：193-202.
4，邓方明，夏同礼，顾方六，等.正常前列腺和前列腺增生的组织形态学定量研究.中华泌尿外科杂志，1995，16：708-710.
5，邓方明，夏同礼，顾方六，等.BPH组织中平滑肌成分的定量分析及意义.中华泌尿外科杂志，1994，15：184-186.
6，Burnett AL，Lowenstein CJ，Bredt DS，et al.Nitric oxide：a physiologic mediator of penile erection.Scince，1992，257：401-403.
, 百拇医药
7，Takeda M，Tang R，Shapiro E，et al.Effects of nitric oxide on human and canine prostates.Urology，1995，45：440-446.
8，Palmer RM，Ferrige AG， Moncada S.Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor.Nature，1987，327：524-526.
9，Burnett AL，Takeda M，Maguire M，et al.Characterization and localization of nitric oxide synthase in the human prostate.Urology，1995，45：435-439.
10，Berry SJ，Coffey DS，Walsh PC，et al.The development of human benign prostatic hyperplasia with age.J Urol，1984，132：474-478.
(收稿：1999-06-23 修回：1999-09-20), 百拇医药