膀胱癌组织中Fas和Bcl-2基因的表达及意义
作者：夏庆华 许纯孝 尉立京 劳平 王春霞
单位：山东省立医院250021
关键词：膀胱肿瘤 Fas基因 Bcl-2基因
山东医药001101 摘要 采用免疫组化SABC法检测了42例膀胱移行细胞癌患者癌组织标本中Fas和Bcl-2基因的表达情况，并观察其与病理分级、临床分期及预后的关系。结果显示，Fas基因表达与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期及是否复发有显著关系，Bcl-2基因表达与临床分期及是否复发有关。认为Fas和Bcl-2基因表达可以作为监测膀胱移行细胞癌恶性程度、预测复发的重要指标。在低分化和晚期膀胱移行细胞癌中，Fas基因介导的细胞凋亡可能被Bcl-2基因的过度表达所抑制。
Abstract Immunohistochemical method was used to determine the expression of Fas and Bcl-2 gene on 42 cases of bladder transitional cell cancer.Results showed Fas and Bcl-2 expression correlated with histological grade，clinicl stage and recurrence rate.It is concluded that the expression of Fas and Bcl-2 might have a practical significance in assessing the malignancy and recurrence of bladder cancer.Overexpression of Bcl-2 in bladder transitional cell cancer resulted in a partial inhibition of Fas-induced cell death.
, 百拇医药
Key words Bladder neoplasms Fas gene Bcl-2 gene
Fas分子是近年发现的细胞凋亡信号受体，广泛表达于正常组织及多种肿瘤细胞上，当与其特异性配体结合后，可以传导凋亡信号，诱导Fas所在细胞的凋亡；Bcl-2是抑制凋亡的基因。我们采用免疫组织化学方法对42例膀胱移行细胞癌患者癌组织中Fas和Bcl-2的表达进行了检测，以探讨Fas和Bcl-2表达与肿瘤病理分级、临床分期及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集1994～1997年有随访结果的42例原发性膀胱移行细胞癌患者的手术切除标本。患者男35例，女7例；年龄28～92岁，平均58岁，随访2～4年。所有病例术前均未作任何治疗，其中4例行膀胱全切术，30例行膀胱部分切除术，8例行经尿道膀胱肿瘤电切术。
1.2 方法 将标本经10%福尔马林液固定24小时，常规石蜡包埋。蜡块采用5μm切片，连续切片3张，1份作HE染色以核实诊断，另2份分别作Fas和Bcl-2染色观察。病理分级按WHO分级标准，Ⅰ级9例，Ⅱ级19例，Ⅲ级14例。临床分期按UICC标准，T1期13例，T2期23例，T3期6例。
, 百拇医药
Fas和Bcl-2免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德生物工程公司，免疫组化染色采用标准SABC法。Fas及Bcl-2阳性染色为肿瘤细胞膜及胞浆内见棕褐色颗粒，根据癌细胞染色程度、范围和分布不同进行判断，具体标准为：阴性(-)：整个切片未见阳性染色；轻度阳性(+)：阳性细胞占0～25%；中度阳性(++)：阳性细胞占26%～50%；强阳性(+++)：阳性细胞占50%以上。
1.3 统计方法 Fas和Bcl-2染色结果与肿瘤分级和分期的关系采用X2检验。
2 结果
2.1 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌病理分级的关系 见表1。由表1可见，Fas和Bcl-2基因的表达率随肿瘤病理分级的增高而升高，说明肿瘤恶性程度越高，其Fas和Bcl-2的表达越强。膀胱癌Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅰ级与Ⅱ级+Ⅲ级间Fas表达有显著性差异(P<0.05)。膀胱癌各病理分级之间Bcl-2的表达无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.2 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌临床分期的关系 见表2。由表2可见，浸润性(T2～T3期)膀胱癌的Fas和Bcl-2基因表达明显高于表浅性(T1期)膀胱癌，T1期与T2期+T3期两组间比较有极显著性差异(P<0.01)，表明Fas和Bcl-2基因表达越强，肿瘤侵袭力越强。
2.3 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌术后复发的关系 本组有11例膀胱癌术后复发，首次复发间隔时间为8个月至2年，11例均为Fas表达阳性，8例Bcl-2表达阳性。Fas和Bcl-2表达阳性组与未表达组间比较有极显著性差异(P<0.01)。
表1 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌病理
分级的关系 膀胱癌分级
, 百拇医药
例数
Fas基因表达阳性
Bcl-2基因表达阳性
n
(%)
n
(%)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
合计
9
19
, 百拇医药
14
42
3
15
13
31
(33.3)
(78.9)
(92.9)
(73.8)
3
10
10
, http://www.100md.com
23
(33.3)
(52.6)
(71.4)
(54.8)
表2 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌临床
分期的关系 膀胱癌分期
例数
Fas基因表达阳性
Bcl-2基因表达阳性
n
(%)
, 百拇医药
n
(%)
T1
T2
T3
合计
13
23
6
42
6
20
6
, 百拇医药
32
(46.2)
(87.0)
(100)
(76.2)
3
14
6
23
(23.1)
(60.9)
(100)
(54.8)
, http://www.100md.com
3 讨论
肿瘤形成是多种基因异常参与的复杂过程，如癌基因突变、扩增、重排及抑癌基因失活等。细胞表面的Fas分子是一种凋亡信号受体[1]，Fas受体可在多种组织中表达，但表达水平差异很大。在许多淋巴系统恶性细胞中Fas表达量极高[2]，在非淋巴系统恶性肿瘤中许多细胞也有广泛的Fas受体表达[3，4]。本组42例膀胱移行细胞癌中，有31例Fas表达阳性(占73.8%)，在低分化和晚期膀胱癌中，Fas表达强度明显增加(P<0.05)，说明Fas表达可作为监测膀胱癌恶性程度及预测复发的指标。
Bcl-2是细胞凋亡调节基因家族中的基本成员，能够抑制细胞凋亡，从而延长表达Bcl-2基因细胞的生长期[5]。另一方面，由于Bcl-2过度表达，细胞不能发生正常凋亡，故导致肿瘤形成[6]。Bcl-2主要在生长因子或激素调节的腺上皮细胞表面表达，如前列腺、乳腺和胸腺[7]。现已发现，大多数人类癌组织和癌前病变组织中有Bcl-2的异常表达。本组结果显示，Bcl-2在膀胱移行上皮细胞癌中也有表达，但各病理分级之间比较差别无显著意义(P>0.05)。在晚期浸润性膀胱癌中Bcl-2表达率增加明显(P<0.01)，说明Bcl-2基因过度表达有助于肿瘤细胞的生存，并可能导致肿瘤的进展和转移。
, 百拇医药
Fas基因在多种肿瘤组织中呈高表达，但某些高表达Fas受体的组织并不能进行由Fas所介导的细胞凋亡，提示可能存在另外的基因或途径调节Fas系统所引起的生物学作用。Bcl-2高表达可明显延长细胞的生长期，引发肿瘤的形成[9]，其调节细胞生长的可能机制为：①抑制细胞内质网中钙离子的释放；②调节抗氧化途径，抑制细胞凋亡；③与其它细胞信号传递蛋白相互作用，调控细胞死亡[10]。已有实验证实，Bcl-2的过度表达能抑制Fas抗体所诱导的细胞凋亡[2]，而且在Fas系统所介导的细胞凋亡过程中观察到，Bcl-2基因的表达水平首先下调[10]。本组42例膀胱癌中，在低分化和浸润性膀胱肿瘤中，Fas和Bcl-2基因的表达均增加，提示二者共同参与膀胱移行细胞癌的发生发展，Bcl-2的过度表达抑制了肿瘤细胞进行由Fas系统所介导的细胞凋亡，使带有遗传物质的细胞持续增殖。
4 参考文献
, http://www.100md.com 1，Nagata S，Golstein P.The Fas death Factor.Science，1995，267：1449.
2，Suda T，Takahashi T，Golstein P，et al.Molecular cloning and expression of the Fas Ligand，a novel member of the tumor necrosis factor family.Cell，1993，75：1169.
3，Onen-Schaub LB，Radinsky R，kruzel E，et al.Anti-Fas on nonhematopoietic tumors：levels of Fas/Apo-1 and bcl-2 are not predictive of biological responsiveness.Cancer Res，1995，54：1580.
, 百拇医药
4，Tachibana Q，Nakazana H，Lampe J，et al.Expression of Fas/Apo-1 during the progression of astrocytomas.Cancer Res，1995，55：528.
5，Hockenberg DG，Nunez C，williman RD，et al.Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death.Nature，1990，348：334.
6，Korsmegar SJ.Bcl-2 initiates a new category of oncogenes：regulation of cell death.Blood，1992，80：879.
7，Vaux DL，Cory S，Adams J，et al.Bcl-2 promotes haemopoietic cell surviral and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells.Nature，1998，335：440.
, http://www.100md.com
8，Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human Leukmia cell line.Blood，1993，81：151.
9，Itoh N，Tsnjimoto Y.and Nagata S.Effect of Bcl-2 on Fas antigen-mediated cell death J Immunology，1993，151：621.
10，Suzuki A，Matsuzawa A，Iguchi T.Down regulation of Bcl-2 is the first step on Fas-mediated apoptosis of male reproductive tract.Oncogene，1996，13：31.
收稿2000-03-09, 百拇医药
单位：山东省立医院250021
关键词：膀胱肿瘤 Fas基因 Bcl-2基因
山东医药001101 摘要 采用免疫组化SABC法检测了42例膀胱移行细胞癌患者癌组织标本中Fas和Bcl-2基因的表达情况，并观察其与病理分级、临床分期及预后的关系。结果显示，Fas基因表达与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期及是否复发有显著关系，Bcl-2基因表达与临床分期及是否复发有关。认为Fas和Bcl-2基因表达可以作为监测膀胱移行细胞癌恶性程度、预测复发的重要指标。在低分化和晚期膀胱移行细胞癌中，Fas基因介导的细胞凋亡可能被Bcl-2基因的过度表达所抑制。
Abstract Immunohistochemical method was used to determine the expression of Fas and Bcl-2 gene on 42 cases of bladder transitional cell cancer.Results showed Fas and Bcl-2 expression correlated with histological grade，clinicl stage and recurrence rate.It is concluded that the expression of Fas and Bcl-2 might have a practical significance in assessing the malignancy and recurrence of bladder cancer.Overexpression of Bcl-2 in bladder transitional cell cancer resulted in a partial inhibition of Fas-induced cell death.
, 百拇医药
Key words Bladder neoplasms Fas gene Bcl-2 gene
Fas分子是近年发现的细胞凋亡信号受体，广泛表达于正常组织及多种肿瘤细胞上，当与其特异性配体结合后，可以传导凋亡信号，诱导Fas所在细胞的凋亡；Bcl-2是抑制凋亡的基因。我们采用免疫组织化学方法对42例膀胱移行细胞癌患者癌组织中Fas和Bcl-2的表达进行了检测，以探讨Fas和Bcl-2表达与肿瘤病理分级、临床分期及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集1994～1997年有随访结果的42例原发性膀胱移行细胞癌患者的手术切除标本。患者男35例，女7例；年龄28～92岁，平均58岁，随访2～4年。所有病例术前均未作任何治疗，其中4例行膀胱全切术，30例行膀胱部分切除术，8例行经尿道膀胱肿瘤电切术。
1.2 方法 将标本经10%福尔马林液固定24小时，常规石蜡包埋。蜡块采用5μm切片，连续切片3张，1份作HE染色以核实诊断，另2份分别作Fas和Bcl-2染色观察。病理分级按WHO分级标准，Ⅰ级9例，Ⅱ级19例，Ⅲ级14例。临床分期按UICC标准，T1期13例，T2期23例，T3期6例。
, 百拇医药
Fas和Bcl-2免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德生物工程公司，免疫组化染色采用标准SABC法。Fas及Bcl-2阳性染色为肿瘤细胞膜及胞浆内见棕褐色颗粒，根据癌细胞染色程度、范围和分布不同进行判断，具体标准为：阴性(-)：整个切片未见阳性染色；轻度阳性(+)：阳性细胞占0～25%；中度阳性(++)：阳性细胞占26%～50%；强阳性(+++)：阳性细胞占50%以上。
1.3 统计方法 Fas和Bcl-2染色结果与肿瘤分级和分期的关系采用X2检验。
2 结果
2.1 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌病理分级的关系 见表1。由表1可见，Fas和Bcl-2基因的表达率随肿瘤病理分级的增高而升高，说明肿瘤恶性程度越高，其Fas和Bcl-2的表达越强。膀胱癌Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅰ级与Ⅱ级+Ⅲ级间Fas表达有显著性差异(P<0.05)。膀胱癌各病理分级之间Bcl-2的表达无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.2 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌临床分期的关系 见表2。由表2可见，浸润性(T2～T3期)膀胱癌的Fas和Bcl-2基因表达明显高于表浅性(T1期)膀胱癌，T1期与T2期+T3期两组间比较有极显著性差异(P<0.01)，表明Fas和Bcl-2基因表达越强，肿瘤侵袭力越强。
2.3 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌术后复发的关系 本组有11例膀胱癌术后复发，首次复发间隔时间为8个月至2年，11例均为Fas表达阳性，8例Bcl-2表达阳性。Fas和Bcl-2表达阳性组与未表达组间比较有极显著性差异(P<0.01)。
表1 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌病理
分级的关系 膀胱癌分级
, 百拇医药
例数
Fas基因表达阳性
Bcl-2基因表达阳性
n
(%)
n
(%)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
合计
9
19
, 百拇医药
14
42
3
15
13
31
(33.3)
(78.9)
(92.9)
(73.8)
3
10
10
, http://www.100md.com
23
(33.3)
(52.6)
(71.4)
(54.8)
表2 Fas和Bcl-2基因表达与膀胱癌临床
分期的关系 膀胱癌分期
例数
Fas基因表达阳性
Bcl-2基因表达阳性
n
(%)
, 百拇医药
n
(%)
T1
T2
T3
合计
13
23
6
42
6
20
6
, 百拇医药
32
(46.2)
(87.0)
(100)
(76.2)
3
14
6
23
(23.1)
(60.9)
(100)
(54.8)
, http://www.100md.com
3 讨论
肿瘤形成是多种基因异常参与的复杂过程，如癌基因突变、扩增、重排及抑癌基因失活等。细胞表面的Fas分子是一种凋亡信号受体[1]，Fas受体可在多种组织中表达，但表达水平差异很大。在许多淋巴系统恶性细胞中Fas表达量极高[2]，在非淋巴系统恶性肿瘤中许多细胞也有广泛的Fas受体表达[3，4]。本组42例膀胱移行细胞癌中，有31例Fas表达阳性(占73.8%)，在低分化和晚期膀胱癌中，Fas表达强度明显增加(P<0.05)，说明Fas表达可作为监测膀胱癌恶性程度及预测复发的指标。
Bcl-2是细胞凋亡调节基因家族中的基本成员，能够抑制细胞凋亡，从而延长表达Bcl-2基因细胞的生长期[5]。另一方面，由于Bcl-2过度表达，细胞不能发生正常凋亡，故导致肿瘤形成[6]。Bcl-2主要在生长因子或激素调节的腺上皮细胞表面表达，如前列腺、乳腺和胸腺[7]。现已发现，大多数人类癌组织和癌前病变组织中有Bcl-2的异常表达。本组结果显示，Bcl-2在膀胱移行上皮细胞癌中也有表达，但各病理分级之间比较差别无显著意义(P>0.05)。在晚期浸润性膀胱癌中Bcl-2表达率增加明显(P<0.01)，说明Bcl-2基因过度表达有助于肿瘤细胞的生存，并可能导致肿瘤的进展和转移。
, 百拇医药
Fas基因在多种肿瘤组织中呈高表达，但某些高表达Fas受体的组织并不能进行由Fas所介导的细胞凋亡，提示可能存在另外的基因或途径调节Fas系统所引起的生物学作用。Bcl-2高表达可明显延长细胞的生长期，引发肿瘤的形成[9]，其调节细胞生长的可能机制为：①抑制细胞内质网中钙离子的释放；②调节抗氧化途径，抑制细胞凋亡；③与其它细胞信号传递蛋白相互作用，调控细胞死亡[10]。已有实验证实，Bcl-2的过度表达能抑制Fas抗体所诱导的细胞凋亡[2]，而且在Fas系统所介导的细胞凋亡过程中观察到，Bcl-2基因的表达水平首先下调[10]。本组42例膀胱癌中，在低分化和浸润性膀胱肿瘤中，Fas和Bcl-2基因的表达均增加，提示二者共同参与膀胱移行细胞癌的发生发展，Bcl-2的过度表达抑制了肿瘤细胞进行由Fas系统所介导的细胞凋亡，使带有遗传物质的细胞持续增殖。
4 参考文献
, http://www.100md.com 1，Nagata S，Golstein P.The Fas death Factor.Science，1995，267：1449.
2，Suda T，Takahashi T，Golstein P，et al.Molecular cloning and expression of the Fas Ligand，a novel member of the tumor necrosis factor family.Cell，1993，75：1169.
3，Onen-Schaub LB，Radinsky R，kruzel E，et al.Anti-Fas on nonhematopoietic tumors：levels of Fas/Apo-1 and bcl-2 are not predictive of biological responsiveness.Cancer Res，1995，54：1580.
, 百拇医药
4，Tachibana Q，Nakazana H，Lampe J，et al.Expression of Fas/Apo-1 during the progression of astrocytomas.Cancer Res，1995，55：528.
5，Hockenberg DG，Nunez C，williman RD，et al.Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death.Nature，1990，348：334.
6，Korsmegar SJ.Bcl-2 initiates a new category of oncogenes：regulation of cell death.Blood，1992，80：879.
7，Vaux DL，Cory S，Adams J，et al.Bcl-2 promotes haemopoietic cell surviral and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells.Nature，1998，335：440.
, http://www.100md.com
8，Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human Leukmia cell line.Blood，1993，81：151.
9，Itoh N，Tsnjimoto Y.and Nagata S.Effect of Bcl-2 on Fas antigen-mediated cell death J Immunology，1993，151：621.
10，Suzuki A，Matsuzawa A，Iguchi T.Down regulation of Bcl-2 is the first step on Fas-mediated apoptosis of male reproductive tract.Oncogene，1996，13：31.
收稿2000-03-09, 百拇医药