醋酸地塞米松片的HPLC测定与23批造假品的检出
作者:饶伟文 钟雪芳 朱肇强 冀赣菁
单位:广西梧州市药品检验所 543000
关键词:醋酸地塞米松片;鉴别;含量测定;HPL1C
首都医药000316摘 要 采用HPLC法对醋酸地塞米松片进行定性鉴别和含量测定, 同时与药典法对比,结果表明HPLC法更准确、可靠,并用此法检出了23批有意造假产品。
醋酸地塞米松片是常用肾上腺皮质激素类药品,中国药典1995年版以有机氟化物的反应 作为其鉴别方法,采用紫外分光光度法测定含量[1]。实践证明,本法专属性不强 ,对于同类药品不易区分。我们采用HPLC法测定,专属性强,结果可靠,并检出23批有意造 假的产品,现报道如下。
1 仪器与试药
, 百拇医药
岛津UV-265自动记录分光光度计,Waters 501 HPLC泵,Waters 484紫外检测器,U6K进样器 ,SP 4290积分仪;实验用醋酸地塞米松片均为本所近期检品,甲醇等试剂为分析纯;醋酸 地塞米松(批号:1229202)、醋酸泼尼松对照品(批号:840903)均为中国药品生物制品检定 所出品。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18,5μm,250ⅹ4.6mmID,(大连化学 物理研究所);流动相:甲醇—水(70:30);流速:1ml/min,检测波长:240mm;按醋酸地 塞米松色谱峰计,理论塔板数为42420,醋酸地塞米松与醋酸泼尼松色谱峰分离度为3.0;连 续进样5针,醋酸地塞米松对照品色谱峰面积的相对标准差为1.0%。
2.2 对照品溶液的制备 醋酸地塞米松对照液:精密称取醋酸地 塞米松对照品约13mg,置50ml量瓶中,加甲醇35ml,振摇使溶解,加水至刻度,摇匀,即得 对照品浓溶液。精密吸取此溶液5ml,置25ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
, 百拇医药
醋酸泼尼松对照液:精密称取醋酸泼尼松对照品约13mg,同上法制备,即 得。
混合对照液:分别精密吸取上述两种对照品浓溶液各5ml,置同一25ml量瓶 中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液的制备:取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量( 约相当于醋酸地塞米松13mg),置50ml量瓶中,加甲醇35ml,振摇使溶解,加水至刻度,摇 匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置25ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
3 定性鉴别
3.1 有机氟化物显色反应 按中国药典1995年版醋酸地塞米松片项下[鉴 别]方法操作,即得。
3.2 硫酸显色反应 按中国药典1995年版醋酸尼松的[鉴别](2)方法 操作,加硫酸放置5分钟后,如显橙色,将此溶液倾入10ml水中显蓝绿色,则为 醋酸泼尼松的反应;如果加硫酸放置显红棕色,将此溶液倾入10ml水中显黄色絮状沉淀,则 为醋酸地塞米松的反应。
, http://www.100md.com
3.3 HPLC鉴别 按下述含量测定方法操作,比较样品色谱图中与对照品色 谱图,看样品是否具有与醋酸地塞米松或醋酸泼尼松对照品相对应的色谱峰。
4 含量测定
4.1 紫外分光光度法 按中国药典1995年版醋酸地塞米松片项下方法测定 。
4.2 HPLC法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,分别注入高效 液相色谱仪,记录色谱图,按外标法,以峰面积计算含量,即得。
5 结果
对照品与部分样品的HPLC图,见图1。26批醋酸地塞米松片的鉴别与含量测定结果,见表1。
图1 样品与对照品HPLC图 表1 26批样品的鉴别与含量测定结果 编
, 百拇医药
号
标 示 厂 家
批号
鉴 别
醋酸地塞米松含量
(标示量%)
醋酸泼尼松
含量mg/片
(HPLC法)
氟化物
硫酸显
色反应
HPLC
, http://www.100md.com
法
分光法
(药典法)
HPLC法
1
郑州XX制药股份有限公司
970315
+
D
D
90.8
97.8
0
, http://www.100md.com
2
郑州XX制药股份有限公司
970316
+
D
D
90.4
91.5
0
3
天津XX有限公司
981106
+
, 百拇医药
D
D
104.8
104.8
0
4
郑州XX制药有限公司
971001
+
D
D,*
96.2
27.9
, 百拇医药
0
5
郑州XX制药有限公司
980901
+
D
D,*
94.3
48.3
0
6
广东省河源市XX制药厂
980821
, http://www.100md.com
+
P
P,*
99.1
0
0.60
7
广东省河源市XX制药厂
980822
未检
P
P,*
98.9
, 百拇医药
0
0.61
8
广东省河源市XX制药厂
980908
+
P
P,*
102.6
0
0.68
9
广东省河源市XX制药厂
, http://www.100md.com
981020
未检
P
P,*
98.3
0
0.60
10
广东省河源市XX制药厂
981023
+
P
P,*
, 百拇医药
98.9
0
0.59
11
广东省河源市XX制药厂
990112
未检
P
P,*
101.5
0
0.62
12
, http://www.100md.com
广东省河源市XX制药厂
990307
+
P
P,*
102.0
0
0.61
13
广东省河源市XX制药厂
990308
+
P
, 百拇医药
P,*
100.8
0
0.64
14
广东省河源市XX制药厂
981013
+
P
*
98.6
0
0
, http://www.100md.com
15
广东省河源市XX制药厂
980921
+
P
P
98.1
0
0.32
16
重庆XX制药厂
980910
-
, http://www.100md.com
P
P
96.4
0
0.69
17
重庆市XX制药厂
990112
-
P
P
97.8
0
, http://www.100md.com 0.67
18
重庆市XX制药厂
980610
未检
P
P
98.4
0
0.65
19
重庆市XX制药厂
980305
, http://www.100md.com
未检
P
P
92.9
0
0.66
20
重庆市XX制药厂
980301
未检
P
P
102.0
, 百拇医药
0
0.68
21
重庆市XX制药厂
980320
未检
P
P
93.5
0
0.59
22
四川省XX生物化学制药厂
, 百拇医药
980120
-
P
P
92.5
0
0.74
23
河南省新乡市XX制药厂
990306
+
D
D,*
, 百拇医药
96.7
14.2
0
24
河南省新乡市XX制药厂
990608
-
P
P
95.4
0
0.69
25
, http://www.100md.com
河南省安阳市XX制药厂
990112
未检
P
P
103.0
0
0.74
26
重庆XXX制药厂
980520
未检
P
, 百拇医药
P
98.9
0
0.65
注:“D”表示检出醋酸地塞米松的色谱峰或呈其特有显色反应。
“P”表示检出醋酸泼尼松的色谱峰或呈其特有显色反应。
“*”表示HPLC图检出未知物色谱峰。1,2,3号样品为合格品。6 讨论
6.1 从表1可见,1~3号样品三种方法鉴别的结果均一致,分光光度法和HPLC法测定的含量 结果均在合格范围,HPLC图未见有明显的杂质峰,为合格品。
4,5,23号样品鉴别均符合规定,但HPLC测定含量仅为14~50%,且检出其他色谱峰(图1-⑤ ),说明有掺假。
, 百拇医药
6,8,10,12~15号样品按药典方法鉴别、含测均符合规定,但硫酸显色反应和HPLC检测结 果显示含醋酸泼尼松而不含醋酸地塞米松,在HPLC图tR=2.5min处可见一个未知物的色谱 (图1-⑥)。
从14号的HPLC图谱可见,即未检出醋酸地塞米松也未检出醋酸泼尼松,而检出数个未知物的 色谱峰,6~13号样品也有类似的色谱峰。由于这些样品均显示有机氟化物的反应,故推测 为其他含氟化合物的色谱峰。
16~22,24~26号样品的检验结果表明,这10批样品实际上是用醋酸泼尼松伪充醋酸地塞米 松。
6.2 醋酸地塞米松与醋酸泼尼松均属肾上腺皮质激素类药品,而前者含有氟元素,其抗炎 作用约是后者的10倍。前者的片剂规格为0.75mg/片,后者为5mg/片,由于二者的UV光谱及E 1%1cm值均近似,不法分子用1片醋酸泼尼松可冒充7-8片醋酸地塞米松以牟取 暴利。
6.3 从以上结果可见,中国药典收载醋酸地塞米松片的检验方法专属性不强,无法检出故 意造假的产品,应尽快修订。
6.4 结果表明,硫酸显色法、HPLC法专属性较强。
6.5 今年以来,我所已经连续检出4个品种的故意造假产品、涉及9个厂家40多批产品,手 段恶劣,说明当前制售假劣药品的违法行为仍十分猖獗,应引起有关部门的高度重视。, 百拇医药
单位:广西梧州市药品检验所 543000
关键词:醋酸地塞米松片;鉴别;含量测定;HPL1C
首都医药000316摘 要 采用HPLC法对醋酸地塞米松片进行定性鉴别和含量测定, 同时与药典法对比,结果表明HPLC法更准确、可靠,并用此法检出了23批有意造假产品。
醋酸地塞米松片是常用肾上腺皮质激素类药品,中国药典1995年版以有机氟化物的反应 作为其鉴别方法,采用紫外分光光度法测定含量[1]。实践证明,本法专属性不强 ,对于同类药品不易区分。我们采用HPLC法测定,专属性强,结果可靠,并检出23批有意造 假的产品,现报道如下。
1 仪器与试药
, 百拇医药
岛津UV-265自动记录分光光度计,Waters 501 HPLC泵,Waters 484紫外检测器,U6K进样器 ,SP 4290积分仪;实验用醋酸地塞米松片均为本所近期检品,甲醇等试剂为分析纯;醋酸 地塞米松(批号:1229202)、醋酸泼尼松对照品(批号:840903)均为中国药品生物制品检定 所出品。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18,5μm,250ⅹ4.6mmID,(大连化学 物理研究所);流动相:甲醇—水(70:30);流速:1ml/min,检测波长:240mm;按醋酸地 塞米松色谱峰计,理论塔板数为42420,醋酸地塞米松与醋酸泼尼松色谱峰分离度为3.0;连 续进样5针,醋酸地塞米松对照品色谱峰面积的相对标准差为1.0%。
2.2 对照品溶液的制备 醋酸地塞米松对照液:精密称取醋酸地 塞米松对照品约13mg,置50ml量瓶中,加甲醇35ml,振摇使溶解,加水至刻度,摇匀,即得 对照品浓溶液。精密吸取此溶液5ml,置25ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
, 百拇医药
醋酸泼尼松对照液:精密称取醋酸泼尼松对照品约13mg,同上法制备,即 得。
混合对照液:分别精密吸取上述两种对照品浓溶液各5ml,置同一25ml量瓶 中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液的制备:取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量( 约相当于醋酸地塞米松13mg),置50ml量瓶中,加甲醇35ml,振摇使溶解,加水至刻度,摇 匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置25ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
3 定性鉴别
3.1 有机氟化物显色反应 按中国药典1995年版醋酸地塞米松片项下[鉴 别]方法操作,即得。
3.2 硫酸显色反应 按中国药典1995年版醋酸尼松的[鉴别](2)方法 操作,加硫酸放置5分钟后,如显橙色,将此溶液倾入10ml水中显蓝绿色,则为 醋酸泼尼松的反应;如果加硫酸放置显红棕色,将此溶液倾入10ml水中显黄色絮状沉淀,则 为醋酸地塞米松的反应。
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3.3 HPLC鉴别 按下述含量测定方法操作,比较样品色谱图中与对照品色 谱图,看样品是否具有与醋酸地塞米松或醋酸泼尼松对照品相对应的色谱峰。
4 含量测定
4.1 紫外分光光度法 按中国药典1995年版醋酸地塞米松片项下方法测定 。
4.2 HPLC法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,分别注入高效 液相色谱仪,记录色谱图,按外标法,以峰面积计算含量,即得。
5 结果
对照品与部分样品的HPLC图,见图1。26批醋酸地塞米松片的鉴别与含量测定结果,见表1。
图1 样品与对照品HPLC图 表1 26批样品的鉴别与含量测定结果 编
, 百拇医药
号
标 示 厂 家
批号
鉴 别
醋酸地塞米松含量
(标示量%)
醋酸泼尼松
含量mg/片
(HPLC法)
氟化物
硫酸显
色反应
HPLC
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法
分光法
(药典法)
HPLC法
1
郑州XX制药股份有限公司
970315
+
D
D
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97.8
0
, http://www.100md.com
2
郑州XX制药股份有限公司
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104.8
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+
D
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0
6
广东省河源市XX制药厂
980821
, http://www.100md.com
+
P
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99.1
0
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7
广东省河源市XX制药厂
980822
未检
P
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, 百拇医药
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广东省河源市XX制药厂
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+
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广东省河源市XX制药厂
, http://www.100md.com
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未检
P
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广东省河源市XX制药厂
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, 百拇医药
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广东省河源市XX制药厂
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未检
P
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, http://www.100md.com
广东省河源市XX制药厂
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+
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广东省河源市XX制药厂
990308
+
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, 百拇医药
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广东省河源市XX制药厂
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0
, http://www.100md.com
15
广东省河源市XX制药厂
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+
P
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16
重庆XX制药厂
980910
-
, http://www.100md.com
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重庆市XX制药厂
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18
重庆市XX制药厂
980610
未检
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19
重庆市XX制药厂
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, http://www.100md.com
未检
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重庆市XX制药厂
980301
未检
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102.0
, 百拇医药
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重庆市XX制药厂
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四川省XX生物化学制药厂
, 百拇医药
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+
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0
24
河南省新乡市XX制药厂
990608
-
P
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95.4
0
0.69
25
, http://www.100md.com
河南省安阳市XX制药厂
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未检
P
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103.0
0
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26
重庆XXX制药厂
980520
未检
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, 百拇医药
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98.9
0
0.65
注:“D”表示检出醋酸地塞米松的色谱峰或呈其特有显色反应。
“P”表示检出醋酸泼尼松的色谱峰或呈其特有显色反应。
“*”表示HPLC图检出未知物色谱峰。1,2,3号样品为合格品。6 讨论
6.1 从表1可见,1~3号样品三种方法鉴别的结果均一致,分光光度法和HPLC法测定的含量 结果均在合格范围,HPLC图未见有明显的杂质峰,为合格品。
4,5,23号样品鉴别均符合规定,但HPLC测定含量仅为14~50%,且检出其他色谱峰(图1-⑤ ),说明有掺假。
, 百拇医药
6,8,10,12~15号样品按药典方法鉴别、含测均符合规定,但硫酸显色反应和HPLC检测结 果显示含醋酸泼尼松而不含醋酸地塞米松,在HPLC图tR=2.5min处可见一个未知物的色谱 (图1-⑥)。
从14号的HPLC图谱可见,即未检出醋酸地塞米松也未检出醋酸泼尼松,而检出数个未知物的 色谱峰,6~13号样品也有类似的色谱峰。由于这些样品均显示有机氟化物的反应,故推测 为其他含氟化合物的色谱峰。
16~22,24~26号样品的检验结果表明,这10批样品实际上是用醋酸泼尼松伪充醋酸地塞米 松。
6.2 醋酸地塞米松与醋酸泼尼松均属肾上腺皮质激素类药品,而前者含有氟元素,其抗炎 作用约是后者的10倍。前者的片剂规格为0.75mg/片,后者为5mg/片,由于二者的UV光谱及E 1%1cm值均近似,不法分子用1片醋酸泼尼松可冒充7-8片醋酸地塞米松以牟取 暴利。
6.3 从以上结果可见,中国药典收载醋酸地塞米松片的检验方法专属性不强,无法检出故 意造假的产品,应尽快修订。
6.4 结果表明,硫酸显色法、HPLC法专属性较强。
6.5 今年以来,我所已经连续检出4个品种的故意造假产品、涉及9个厂家40多批产品,手 段恶劣,说明当前制售假劣药品的违法行为仍十分猖獗,应引起有关部门的高度重视。, 百拇医药