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编号:10282892
体外受精-胚胎移植治疗不孕症临床分析
http://www.100md.com 《温州医学院学报》 1999年第4期
     作者:林金菊 叶碧绿 周颖 赵军招 黄学锋 郑菊芬 周红卫 历小 陈亦红 周玮

    单位:温州医学院附属第一医院生殖医学中心(325000)

    关键词:不孕 体外受精-胚胎移植

    温州医学院学报/990401 摘要 目的 总结与探讨影响常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠率的因素。方法 对1999年1月至8月在我院门诊接受IVF-ET的36对不孕夫妇采用促性腺激素释放激素(GnRH-a)/高纯促卵泡素(FSH-HP)/绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激排卵方案,B超监测卵泡发育情况并引导经阴道取卵,培养后加入丈夫精子孵育,将高质量胚胎转移至子宫。结果 取卵356个,平均每周期取卵10.2个;受精率66.5%;卵裂率

    88.9%。移植胚胎108个,平均每周期移植3.37个。结论 12例妊娠,其中10例临床妊娠,2例生化妊娠。开始周期妊娠率32.4%,卵回收周期妊娠率36.4%,移植周期妊娠率37.5%。不孕年龄、不孕年限、不孕原因、胚胎质量是影响妊娠率的因素。
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    Clinical analysis of in vitro fertilization

    and embryo transfer in the treatment of infertility

    Lin Jinju,Ye Bilu,Zhou Ying,et al.

    Department of Reproductive Medicine,The First

    Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,325000

    Abstract Objective To summarize and to evaluate the clinical efficacy of conventional in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) procedures in the treatment of infertility couples.Methods Thirty-six infertility couples underwent conventional IVF-ET procedures from January 1999 to August 1999 .Follicular stimulations by GnRH-a/FSH-HP/hCG were carried out.Ovarian response and Oocyte retrieval was assessed and guided by B-modal utrasound.After 4~6 hours incubation of oocytes,husband's sperm were added. High quality embryos were transferred into uterine cavity.Results The main data are as follows:Total number of 356 oocyte retrievals with an average of 10.2 per cycle;fertilization rate 66.5%;cleavage rate 88.9%;The number of embryos transferred is 108 with an average of 3.37 per cycle.Conclusions Twelve cases are pregnancy,of which 10 cases with clinical pregnancy and 2 cases with biochemical pregnancy.Cycle initiated pregnancy rate is 32.4%;Oocyte retrieval cycle pregnancy rate is 36.4% and transfer cycle pregnancy rate is 37.5%.Infertility age,infertility duration,cause of infertility and quality of embryo are the factors affecting the pregnancy rate.
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    Key words Infertility In vitro fertilization and embryo transfer

    英国学者Steptoe和Edwards合作进行体外受精-胚胎移植,于1978年诞生世界第一例试管婴儿 Louise Brown,标志着生殖医学的飞跃发展 ,成为不育症治疗史上的一个新的里程碑。我院从1999年1 月起开展了体外受精-胚胎移植 (IVF-ET)及卵母细胞单精子显微注射 (intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术,至1999年8月底,已进行了60例,61周期,其中包括常规 IVF-ET 36例,37周期, ICSI 24例,共20例获得妊娠,总移植周期成功率35.7%(20/56)。常规 IVF-ET是在广州中山医科大学附院生殖中心指导下开展的。现将1999年1月~1999年8月间施行常规IVF-ET的治疗情况报道如下。

    1 材料和方法
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    1.1 研究对象 1999年1月~1999年8月在附一医生殖中心行常规IVF-ET 36例,37个周期。女方年龄25~44岁,平均33.3岁,平均不育年限7.6年。不育原因:输卵管阻塞25例,子宫内膜异位症2例,盆腔结核2例,不明原因2例,男方少弱精5例。

    1.2 促排卵方案 37个周期全部使用GnRH-a/FSH/hCG长方案。在使用外源性促性腺激素(Gonadotropin,Gn)治疗的前一周期的黄体中期开始,布舍瑞林(Buserelin,suprecur,Hoechst)双侧喷鼻给药,每日3次,每日剂量900μg,至注射hCG时停止。月经来潮第3天或第5天(Buserelin后10~14天)开始给予高度纯化促卵泡素(Metrodin HP,Serono)肌肉注射,每天150~225IU,当优势卵泡的直径有一个大于18mm或二个大于17mm,或三个大于16mm时停用FSH,并于当晚9时肌肉注射hCG(Profasi,Serono)10000IU,诱导卵泡最后成熟,36小时后取卵。取卵后给hCG或黄体酮进行黄体支持。
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    1.3 卵的监测 超排卵的监测以阴道超声检查结合尿LH的酶联免疫检测。通常在治疗周期前一周期的黄体中期进行盆腔超声扫描,如未发现异常,给Buserelin喷鼻,一周后复查B超,发现非赘生性小囊肿行穿刺抽引,吸出物送病理检查。以后视卵泡发育情况每2天或3天检查1次。当主导卵泡平均径线大于14mm后,开始每天作B超检查并留晨尿测定LH峰。注射hCG当天抽血查促黄体素(LH)、雌二醇(E2)及孕酮(P)浓度。

    1.4 取卵 经阴道超声引导下行穿刺取卵,病人术前30分钟肌注杜冷丁50mg,排空膀胱,取截石位,以无菌生理盐水清洗外阴及阴道,阴道探头涂上耦合剂后套上经环氧一烷气体消毒的乳胶薄膜套,装上针导后置入阴道,B超扫描清晰显示卵泡后,沿着针导管置入穿刺针,来回抽吸卵泡液。进针前或出针后以含肝素PBS缓冲液冲洗针管。术毕常规扫描盆腔及检查阴道穿刺点有无出血。患者平卧6小时,如无异常可回家。

    1.5 卵子受精 将取到的卵母细胞轻轻冲洗后,放入含10%母体血清的Earl's培养液中,37°C、5%CO2湿化空气条件下孵育4~6小时,每个卵子加5万条经处理的丈夫活动精子继续培养,受精后16~20小时观察卵子受精情况,受精后24小时观察胚胎发育情况。选择细胞数多、均匀透亮、无核碎片少的胚胎转移到移植管(K-OPS1035-RWH-B-ET)置入宫腔,离宫底0.5cm处注入。
, 百拇医药
    1.6 妊娠测定 移植后两周留晨尿作妊娠试验,如阳性为生化妊娠,并于第7周行B超检查见原始血管搏动者为临床妊娠。

    1.7 统计方法 采用t检验。

    2 结果

    32个周期进行胚胎移植,结果10例临床妊娠(包括2例双胞胎,1例3胞胎),2例生化妊娠。最大妊娠月份为6个半月。移植周期(transfer cycle)妊娠率37.5%(12/32),种植率14.8%(16/108)。25~34岁的移植周期妊娠率34.5%(10/29),1例流产。35~39岁妊娠2例(2/3),为生化妊娠但均已流产。妊娠流产率25%(3/12)。4例因弱精而未受精,其中3例改为ICSI,1例放弃。4例未取到卵细胞,包括2例基础FSH升高(13.0~14.0IU/L)的妇女中,1例取到1个不成熟卵,1例超排无反应;1例基础FSH正常范围(7.34IU/L)但超排无反应;1例提早出现LH峰,病人因故未按时来院取卵。开始周期(cycle initiated)妊娠率32.4%(12/37)。卵回收周期(Oocyte Retrieval Cycle)妊娠率36.4%(12/33)。本组36例中,输卵管因素25例,其中11例妊娠,妊娠率44.0%;子宫内膜异位症、盆腔结核及未明原因各2例,均未妊娠;男方少弱精症5例,其中1例妊娠。按妊娠与否分为二组,注射hCG当天的E2、LH、P及子宫内膜厚度见表1。二组激素测定结果及子宫内膜厚度比较,差异均无显著性意义。二组年龄、不孕年限、取卵数、卵裂率、移植胚胎数及胚胎评分结果见表2。表2中,不孕年限及胚胎评分比较,二组差异有统计学意义。本组共取卵356个,平均每周期取卵10.2个;受精率66.5%,卵裂率88.9%,移植胚胎108个,平均每周期移植3.37个。
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    表1 注射hCG两组E2、LH、P值及子宫内膜厚度(±s)

    n

    E2(pg/ml)

    LH(IU/L)

    P(IU/L)

    内膜(mm)

    妊娠组

    12

    2925±1765

    2.25±1.34
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    0.62±0.36

    10.75±1.88

    非妊娠组

    20

    3203±1834

    2.15±1.08

    0.89±0.39

    9.88±1.81

    表2 妊娠组与非妊娠组的各项指标(±s)

    n

    年龄
, 百拇医药
    不孕年限

    取卵数/周期

    卵裂率(%)

    移植胚胎数

    胚胎评分

    妊娠组

    12

    29.92±3.50

    5.33±3.77**

    12.25±5.81

    89.1±13.2

    3.33±0.47
, 百拇医药
    4.78±1.29*

    非妊娠组

    20

    30.71±2.02

    8.71±3.54

    11±5.17

    91.5±14.0

    3.4±0.97

    4.33±1.20

    与非妊娠组比:*P<0.05,**P<0.01

    3 讨论

, 百拇医药     体外受精与胚胎移植的基础理论研究乃是华裔生物学家张明觉在1959年首次成功兔的体外受精,直到70年代,英国基础与临床医生配合,将此技术应用于人类,于1978年诞生了世界第一例试管婴儿,这是医学史上一大奇迹。而后全世界每年都有上千个试管婴儿出生。我国自北京医科大学于1988年剖宫产诞生大陆首例试管婴儿以来,湖南医科大学、中山医科大学附属第一医院相继获得成功。1995年以来各省市医院纷纷开始建立IVF-ET中心,说明我国生殖医学已取得重大突破。生殖工程的迅速发展也推动了其他相应学科诸如生殖内分泌学、实验胚胎学、遗传工程学的发展。它不仅用来解决不孕夫妇的生育问题,而且也带来了新的技术革命,使人类有可能控制和指导自身的生物进化,以达到优生的目的。我院在生殖工程的研究方面起步较晚,最初开展的生殖工程是宫腔内人工受精工作,在取得了超排卵的经验及学习了国内外IVF-ET的先进经验后,从1999年1 月正式开展试管婴儿。由于吸取了各家的经验与失败的教训,故摸索的时间较短,发展较快。

    香港大学玛丽医院1998年年报[1]中,常规IVF-ET的周期开始妊娠率19.0%、卵回收周期妊娠率20.8%、移植周期妊娠率22.9%。我院此三项妊娠率分别为32.4%、36.4%、37.5%,我们的妊娠率较该院的妊娠率高的原因可能与该院所治疗的不孕症病人中,60.0%的年龄在31~35岁,而且一年内共作了368个常规IVF周期,其中不孕的原因也比我们复杂而多样。我们作为开展IVF-ET技术起步较晚的单位,上述的结果表明,这项涉及临床与实验室多个复杂环节的人类生殖工程,已在我院取得较稳定的结果。
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    影响体外受精-胚胎移植的成功因素是多方面的。Tan等[2]统计发现20~34岁之间的患者接受IVF治疗5个周期的累积妊娠率为54.0%,而年龄超过40岁者仅为20.2%。本资料年龄组25~34岁妊娠率为37.0%。年龄大于35岁仅2例妊娠。本组3例对促性腺激素反应差的妇女,年龄均在38岁以上。年龄的增长使健康卵泡数减少,甾体激素生成能力减退,因而E2合成减少,直接影响卵子数目与质量以及内膜的组织学的血流动力学变化,降低子宫内膜容受性而导致种植失败。此外,本组3例妊娠流产中有2例发生在35岁以上组,分别在ET后16天及17天流产。可能因年龄增大,黄体功能不足,体内激素环境不利于胚胎发育,而且因卵母细胞在第一次减数分裂后长期处于静止期,晚排卵的卵细胞受到环境等有害因素的广泛影响,使染色体异常机率增加,影响了卵子质量从而增加了流产率。

    本组12例妊娠妇女的不孕年限平均5.33年,而非妊娠妇女平均8.71年。二者差异有统计学意义,说明不孕年限对妊娠结果有影响。可能因导致不孕的病因复杂,并缺乏系统化及规范化治疗所致。目前,辅助生育技术发展十分迅速,不论是由于卵巢、输卵管等女性不育或无精少精等男性不育,都已不存在绝对不育的问题,故对不育夫妇应及时进行规范化的诊断与治疗,争取早日妊娠。此外,本组妊娠妇女的不孕原因中输卵管阻塞占69.4%,而且大多数有流产或宫外孕病史,加上年龄较轻,故妊娠率较高。
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    ET前胚胎细胞发育与妊娠率密切相关。Almagor M等[3]发现,在胚胎的形态学和裂解率相似情况下,胚胎在种植前的生长越好,形态学评分越高,其周期的妊娠率越高。有作者认为受精40小时后,移植胚胎中至少有一个是4个细胞以上的,可显著提高妊娠率。为了减少多胎妊娠的发生,提高种植率,我们认为,如将ET数限制在2~3个,就必须提高胚胎质量,提高胚胎的形态学评分及种植前胚胎的生长发育。

    参考文献

    1 Department of Obstetrics and Gynecology,Queen Mary Hospital:Assisted Reproduction.Annu Rep,1998

    2 Tan SL,poyatone P,Campbell S.Cumulative conception and livebirth rates after in vitro fertilization.Lancet,1992,339:1390

    3 Almagot M,Bejar C,Kafka I,et al.Pregnancy rates after communal growth of preimplantation human embryos in vitro. Fertile Steril,1996,66:394

    (收稿:1999-09-28,修回:1999-10-18), 百拇医药