儿童恒前牙冠折露髓的牙髓组织学观察
作者：方 军 文玲英
单位：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：年轻恒牙；冠折；牙髓；组织学；免疫组化
牙体牙髓牙周病学杂志990206 摘要 目的：了解不同外伤时期内的牙髓组织学改变,为冠折露髓年轻恒牙的活髓保存治疗提供组织学依据。方法：通过组织学和免疫组化法对牙髓组织进行组织学和生长因子(bFGF)分布特征的观察。结果：本组患牙牙髓组织内均未见到局灶性炎症或局灶性坏死现象，即使冠髓出现炎症，而根髓组织基本正常。bFGF染色冠折露髓1周内血管内皮细胞弱阳性，而后染色逐渐增强，且神经纤维也出现阳性。结论；年轻恒牙外伤牙折后牙髓组织的炎症程度并非随着牙髓暴露的时间而加重；bFGF参与了外伤牙髓的修复。
中图号：R788.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0107-03
, http://www.100md.com
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：107]
A histological observation of the exposed pulp tissues of
permanent incisors with crown fracture in children
FangJun, Wen Lingying
School of Stomatology ,The Fourth Military Medical University , Xi'an 710032
Abstract Aim: To observe the histological change of pulp tissues in different traumatic period and offer the histological evidence for vital pulp conservative treatment of young permanent teeth. Methods: Pulp tissues were stained with HE and bFGF-avidin biotin peroxiase complex. Results: No focal inflammations or necrosis phenomena were found in pulp tissues, and bFGF staining was positive in endothelial cells and nerve fiber cells .Conclusions： It suggested that the inflammation of the exposed pulp tissues of young permanent teeth with crown fracture is not severe as time goes by, and bFGF plays an important role during injured pulpal restoration.
, 百拇医药
Keywords young permanent tooth；crown fracture；pulp tissue；histology；immunohistochemistry
[Chinese Journal of Conservtive Dentistry, 1999,9(2):107]
学龄期儿童活泼好动，但自我防护能力较差，常因跌打、碰撞而造成恒前牙的意外创伤，甚至冠折露髓，因儿童恒前牙是萌出不久的牙齿，外伤冠折后极需保存生活牙髓，以利牙根继续发育。本研究目的是通过观察冠折露髓后的牙髓组织学变化，了解外伤后的时期与牙髓组织学改变的关系，以便为临床活髓保存治疗提供组织学依据。同时通过对生长因子(bFGF)分布的观察，求证bFGF与外伤牙髓修复的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
因外伤冠折露髓并需施行去髓术的患儿14例18个患牙。其中男性7例，女性7例，年龄9～14岁，均为上颌中切牙，外伤时间最短为1d以内(14h)，最长达1年(表1)。
表1 冠折露髓时间
<1d
<1周
>1周
合计
例数
2
7
5
14
, 百拇医药 牙数
3
9
6
18
bFGF多克隆抗体(博士德公司)；ABC试剂盒(美国Santa Cruz公司)。
1.2 方法
常规麻醉下完整取出牙髓组织，于40g/L多聚甲醛中固定(4℃)。常规制作组织学切片，分别进行HE和免疫组化染色，光镜下观察。
免疫组织化学染色采用ABC法。常规制做切片后脱蜡至水，30ml/L 过氧化氢液室温10min灭活内源性酶，0.01mol/L PBS振洗。复合消化液10min，PBS振洗。封闭液10min后，加稀释后的兔抗bFGF多克隆抗体，4℃过夜，PBS振洗。生物素化羊抗兔IgG，室温20min，PBS振洗。DAB显色，苏木素轻度复染。脱水透明封片，显微镜观察。
, 百拇医药
2 结果
2.1 冠折露髓后不同时期的牙髓组织学变化
冠折露髓不足1d的3个牙，牙髓组织未见明显的血管变化和炎性细胞渗出，接近正常组织相。外伤在1周内的9个牙齿，见牙髓组织内有轻度血管扩张、充血和组织水肿，并有少量淋巴细胞和中性粒细胞浸润(图1)。其中3个牙的牙髓组织内有血管内皮细胞增生，毛细血管数增多，和散在的炎性细胞浸润。而外伤时间在1周以上的牙齿，牙髓组织内的细胞成分增多，有成纤维细胞和神经纤维增生，有较多的淋巴细胞和中性粒细胞浸润(图2)。外伤后6个月的1个牙齿，牙髓组织内血管增生、充血明显，组织水肿，冠髓部分见有较多的炎细胞浸润。而外伤达1年的1颗牙齿，其牙髓组织仅见血管轻度扩张、充血和少量淋巴细胞浸润。本组患牙牙髓组织内均未见到局灶性炎症或局灶性坏死现象，即使冠髓出现炎症现象，而根髓组织基本正常。
, 百拇医药
图1 外伤1周内牙髓组织轻度炎症反应 (HE,10×10)
图2 外伤1周以上，牙髓组织中度炎症反应(HE,10×40)
2.2 冠折露髓后不同时期的bFGF分布
经免疫组织化学染色表明，bFGF在外伤1d内的牙髓组织染色为阴性。外伤1周内的牙髓组织，首先出现了血管内皮细胞和神经纤维的弱阳性染色(图3)。至外伤1周以上的组织染色，二者出现明显的阳性反应(图4)(表2)。
表2 冠折露髓后不同时期的bFGF分布
<1d
<1周
, 百拇医药
>1周
血管内皮细胞
阴性
弱阳性
阳性
神经纤维
阴性
弱阳性
阳性
图3 外伤1周内bFGF染色弱阳性 (ABC,10×10)
, 百拇医药
图4 外伤1周以上bFGF染色阳性 (ABC,10×10)
3 讨论
18个外伤的年轻恒前牙中，随着外伤时间的不同，其组织学表现也有所不同。因年轻恒牙根管粗大，牙髓组织疏松，血运丰富，细胞成分较多，从而使其防御及修复能力均增强。同时渗出作用较弱，增生现象显著[1]。而且牙周血管能在牙髓内建立侧枝循环，保持断牙的活力[2]。本研究中外伤时间在1d内的牙髓组织未见有明显炎症表现，而且1周内的牙髓组织亦无明显的炎症表现。除外伤6个月的1例患牙的冠髓部位有明显的炎症表现外，冠折露髓1年的1例患牙，牙髓组织也无明显的炎症反应。这说明儿童恒牙牙髓组织抗御疾病的能力较强，即使较长时间暴露于口腔中也不易感染而发生炎症。有的患牙虽见有牙髓组织的增生现象，但组织切片并未见明显的炎症，这可能由于去髓时扩大露髓点，将暴露于口腔的炎性组织去除，而未能在镜下见到炎性病变部位。但是，不论其外伤时间多长，大部分的牙髓组织并无明显的炎症变化，也无局灶性的化脓和坏死现象。这提示，年轻恒牙外伤牙折后牙髓组织的炎症程度，并非随着牙髓暴露的时间而加重。从而，本研究结果为冠折露髓年轻恒牙的活髓保存治疗提供了组织学依据。只要操作得当，切除感染牙髓，即使牙折时间较长，也可能取得满意的效果。
, 百拇医药
杨如美[3]报道17例年轻恒前牙外伤冠折后活髓切断术，其中包括3例72h以上者，经2年复查仅1例因根内吸收失败，其余16例均取得成功。王林艳、吴海珍[4]报道，60例外伤露髓青少年的活髓切断术，盖髓后1～2年观察结果表明，露髓时间与成功率无明显相关。因此，对于外伤牙折的年轻恒牙，不能轻易放弃保存活髓的机会，尤其对于根尖尚未发育完成的年轻恒牙，即使保留部分根髓也有利于牙根的继续发育。本文认为，外伤冠折露髓的儿童恒牙应尽力保存牙髓活力，若可保存全部牙髓的应尽量保存全部牙髓，若不能保存全部牙髓的应尽量保存部分牙髓。保存活髓治疗是年轻恒牙冠折露髓的首选治疗，但治疗中定期观察极为重要。
成纤维细胞生长因子(FGF)分布于多种组织中，作用广泛，可诱导大多数来自中胚层和神经外胚层的培养细胞有丝分裂，促进毛细血管内皮细胞的增生和分化，在创伤修复中起着重要作用。FGF在体内强烈促进成纤维细胞的增殖，刺激血管新生，同时参与神经再生过程[5]。本研究采用bFGF免疫组化染色结果表明，外伤1周内血管内皮细胞bFGF染色弱阳性。而后，血管内皮细胞染色阳性增强，同时牙髓神经纤维也出现阳性，有的显色十分明显。说明在外伤后的牙髓组织除自身防御外，很快就出现了以血管和神经为先导的修复现象。这是bFGF参与外伤牙髓修复的佐证。
, 百拇医药
参考文献
1 杨是，石四箴主编. 口腔预防医学及儿童口腔医学. 第二版. 北京：人民卫生出版社，1995.240
2 吴奇光主编. 口腔组织病理学. 第三版. 北京：人民卫生出版社，1994.229
3 杨如美. 年轻恒前牙外伤冠折活髓切断术临床疗效观察. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(2)：100
4 王林艳，吴海珍. 羟基磷灰石复合制剂用于活髓切断术的临床效果. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(1)：38
5 文玲英，吴海珍. 现代牙髓免疫学. 合肥：安徽科学技术出版社，1998.129
收稿日期：1998-07-24, 百拇医药
单位：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：年轻恒牙；冠折；牙髓；组织学；免疫组化
牙体牙髓牙周病学杂志990206 摘要 目的：了解不同外伤时期内的牙髓组织学改变,为冠折露髓年轻恒牙的活髓保存治疗提供组织学依据。方法：通过组织学和免疫组化法对牙髓组织进行组织学和生长因子(bFGF)分布特征的观察。结果：本组患牙牙髓组织内均未见到局灶性炎症或局灶性坏死现象，即使冠髓出现炎症，而根髓组织基本正常。bFGF染色冠折露髓1周内血管内皮细胞弱阳性，而后染色逐渐增强，且神经纤维也出现阳性。结论；年轻恒牙外伤牙折后牙髓组织的炎症程度并非随着牙髓暴露的时间而加重；bFGF参与了外伤牙髓的修复。
中图号：R788.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0107-03
, http://www.100md.com
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：107]
A histological observation of the exposed pulp tissues of
permanent incisors with crown fracture in children
FangJun, Wen Lingying
School of Stomatology ,The Fourth Military Medical University , Xi'an 710032
Abstract Aim: To observe the histological change of pulp tissues in different traumatic period and offer the histological evidence for vital pulp conservative treatment of young permanent teeth. Methods: Pulp tissues were stained with HE and bFGF-avidin biotin peroxiase complex. Results: No focal inflammations or necrosis phenomena were found in pulp tissues, and bFGF staining was positive in endothelial cells and nerve fiber cells .Conclusions： It suggested that the inflammation of the exposed pulp tissues of young permanent teeth with crown fracture is not severe as time goes by, and bFGF plays an important role during injured pulpal restoration.
, 百拇医药
Keywords young permanent tooth；crown fracture；pulp tissue；histology；immunohistochemistry
[Chinese Journal of Conservtive Dentistry, 1999,9(2):107]
学龄期儿童活泼好动，但自我防护能力较差，常因跌打、碰撞而造成恒前牙的意外创伤，甚至冠折露髓，因儿童恒前牙是萌出不久的牙齿，外伤冠折后极需保存生活牙髓，以利牙根继续发育。本研究目的是通过观察冠折露髓后的牙髓组织学变化，了解外伤后的时期与牙髓组织学改变的关系，以便为临床活髓保存治疗提供组织学依据。同时通过对生长因子(bFGF)分布的观察，求证bFGF与外伤牙髓修复的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
因外伤冠折露髓并需施行去髓术的患儿14例18个患牙。其中男性7例，女性7例，年龄9～14岁，均为上颌中切牙，外伤时间最短为1d以内(14h)，最长达1年(表1)。
表1 冠折露髓时间
<1d
<1周
>1周
合计
例数
2
7
5
14
, 百拇医药 牙数
3
9
6
18
bFGF多克隆抗体(博士德公司)；ABC试剂盒(美国Santa Cruz公司)。
1.2 方法
常规麻醉下完整取出牙髓组织，于40g/L多聚甲醛中固定(4℃)。常规制作组织学切片，分别进行HE和免疫组化染色，光镜下观察。
免疫组织化学染色采用ABC法。常规制做切片后脱蜡至水，30ml/L 过氧化氢液室温10min灭活内源性酶，0.01mol/L PBS振洗。复合消化液10min，PBS振洗。封闭液10min后，加稀释后的兔抗bFGF多克隆抗体，4℃过夜，PBS振洗。生物素化羊抗兔IgG，室温20min，PBS振洗。DAB显色，苏木素轻度复染。脱水透明封片，显微镜观察。
, 百拇医药
2 结果
2.1 冠折露髓后不同时期的牙髓组织学变化
冠折露髓不足1d的3个牙，牙髓组织未见明显的血管变化和炎性细胞渗出，接近正常组织相。外伤在1周内的9个牙齿，见牙髓组织内有轻度血管扩张、充血和组织水肿，并有少量淋巴细胞和中性粒细胞浸润(图1)。其中3个牙的牙髓组织内有血管内皮细胞增生，毛细血管数增多，和散在的炎性细胞浸润。而外伤时间在1周以上的牙齿，牙髓组织内的细胞成分增多，有成纤维细胞和神经纤维增生，有较多的淋巴细胞和中性粒细胞浸润(图2)。外伤后6个月的1个牙齿，牙髓组织内血管增生、充血明显，组织水肿，冠髓部分见有较多的炎细胞浸润。而外伤达1年的1颗牙齿，其牙髓组织仅见血管轻度扩张、充血和少量淋巴细胞浸润。本组患牙牙髓组织内均未见到局灶性炎症或局灶性坏死现象，即使冠髓出现炎症现象，而根髓组织基本正常。
, 百拇医药
图1 外伤1周内牙髓组织轻度炎症反应 (HE,10×10)
图2 外伤1周以上，牙髓组织中度炎症反应(HE,10×40)
2.2 冠折露髓后不同时期的bFGF分布
经免疫组织化学染色表明，bFGF在外伤1d内的牙髓组织染色为阴性。外伤1周内的牙髓组织，首先出现了血管内皮细胞和神经纤维的弱阳性染色(图3)。至外伤1周以上的组织染色，二者出现明显的阳性反应(图4)(表2)。
表2 冠折露髓后不同时期的bFGF分布
<1d
<1周
, 百拇医药
>1周
血管内皮细胞
阴性
弱阳性
阳性
神经纤维
阴性
弱阳性
阳性
图3 外伤1周内bFGF染色弱阳性 (ABC,10×10)
, 百拇医药
图4 外伤1周以上bFGF染色阳性 (ABC,10×10)
3 讨论
18个外伤的年轻恒前牙中，随着外伤时间的不同，其组织学表现也有所不同。因年轻恒牙根管粗大，牙髓组织疏松，血运丰富，细胞成分较多，从而使其防御及修复能力均增强。同时渗出作用较弱，增生现象显著[1]。而且牙周血管能在牙髓内建立侧枝循环，保持断牙的活力[2]。本研究中外伤时间在1d内的牙髓组织未见有明显炎症表现，而且1周内的牙髓组织亦无明显的炎症表现。除外伤6个月的1例患牙的冠髓部位有明显的炎症表现外，冠折露髓1年的1例患牙，牙髓组织也无明显的炎症反应。这说明儿童恒牙牙髓组织抗御疾病的能力较强，即使较长时间暴露于口腔中也不易感染而发生炎症。有的患牙虽见有牙髓组织的增生现象，但组织切片并未见明显的炎症，这可能由于去髓时扩大露髓点，将暴露于口腔的炎性组织去除，而未能在镜下见到炎性病变部位。但是，不论其外伤时间多长，大部分的牙髓组织并无明显的炎症变化，也无局灶性的化脓和坏死现象。这提示，年轻恒牙外伤牙折后牙髓组织的炎症程度，并非随着牙髓暴露的时间而加重。从而，本研究结果为冠折露髓年轻恒牙的活髓保存治疗提供了组织学依据。只要操作得当，切除感染牙髓，即使牙折时间较长，也可能取得满意的效果。
, 百拇医药
杨如美[3]报道17例年轻恒前牙外伤冠折后活髓切断术，其中包括3例72h以上者，经2年复查仅1例因根内吸收失败，其余16例均取得成功。王林艳、吴海珍[4]报道，60例外伤露髓青少年的活髓切断术，盖髓后1～2年观察结果表明，露髓时间与成功率无明显相关。因此，对于外伤牙折的年轻恒牙，不能轻易放弃保存活髓的机会，尤其对于根尖尚未发育完成的年轻恒牙，即使保留部分根髓也有利于牙根的继续发育。本文认为，外伤冠折露髓的儿童恒牙应尽力保存牙髓活力，若可保存全部牙髓的应尽量保存全部牙髓，若不能保存全部牙髓的应尽量保存部分牙髓。保存活髓治疗是年轻恒牙冠折露髓的首选治疗，但治疗中定期观察极为重要。
成纤维细胞生长因子(FGF)分布于多种组织中，作用广泛，可诱导大多数来自中胚层和神经外胚层的培养细胞有丝分裂，促进毛细血管内皮细胞的增生和分化，在创伤修复中起着重要作用。FGF在体内强烈促进成纤维细胞的增殖，刺激血管新生，同时参与神经再生过程[5]。本研究采用bFGF免疫组化染色结果表明，外伤1周内血管内皮细胞bFGF染色弱阳性。而后，血管内皮细胞染色阳性增强，同时牙髓神经纤维也出现阳性，有的显色十分明显。说明在外伤后的牙髓组织除自身防御外，很快就出现了以血管和神经为先导的修复现象。这是bFGF参与外伤牙髓修复的佐证。
, 百拇医药
参考文献
1 杨是，石四箴主编. 口腔预防医学及儿童口腔医学. 第二版. 北京：人民卫生出版社，1995.240
2 吴奇光主编. 口腔组织病理学. 第三版. 北京：人民卫生出版社，1994.229
3 杨如美. 年轻恒前牙外伤冠折活髓切断术临床疗效观察. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(2)：100
4 王林艳，吴海珍. 羟基磷灰石复合制剂用于活髓切断术的临床效果. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(1)：38
5 文玲英，吴海珍. 现代牙髓免疫学. 合肥：安徽科学技术出版社，1998.129
收稿日期：1998-07-24, 百拇医药