鼻咽癌中cyclin D1、p16、Rb蛋白表达及意义
作者：陈莉 王桂兰 曹晓蕾
单位：陈莉 王桂兰 曹晓蕾(南通医学院病理学教研室，南通 226001)
关键词：鼻咽肿瘤；癌基因蛋白质类；视网膜母细胞瘤蛋白质；cyclin；D1；p16；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990435分类号 R739.63；R392.3 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0362-01
细胞增殖周期失控是肿瘤发生的关键之一，也是近年来分子生物学研究的热点之一。我们通过对50例鼻咽癌(NPC)中细胞周期素D1(cyclin D1)、多肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor, MTS1)的表达产物p16蛋白、视网膜母细胞瘤易感基因编码的核磷酸蛋白(Rb)表达的研究，探讨这些细胞增殖周期调控因子在NPC增殖过程中的作用及其它们之间的相互关系，从细胞增殖、调控的角度深入了解NPC的发生学，为今后对NPC进行基因治疗提供线索。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 50例NPC选自于南通医学院附属医院1993～1995年存档活检蜡块标本。
1.2 方法 免疫组织化学LSAB法染色。分别检测NPC组织中的cyclin D1、p16、Rb及细胞角蛋白表达。
1.3 判断标准 cyclin D1、Rb阳性细胞定位于细胞核内，p16表达还可见于胞浆中，呈棕褐色。根据阳性细胞在切片中所占的面积百分比分为：无阳性细胞为“-”，<25%者为“+”，25%～50%者为“
”，≥50%者为“
”。
1.4 统计学处理 所有统计数据经χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 免疫组化分型 50例经免疫组化细胞角蛋白反应均为阳性，证实为来源于上皮的肿瘤。经WHO分类〔1〕分为非角化性NPC(WHO Ⅱ)和未分化型(WHO Ⅲ)，按其生长方式〔2〕分巢状膨胀性生长(Regand，R型)、弥漫浸润性生长(Schmincke，S型)，同时存在R和S型时为混合型(combination，C型)。本组NPC发生转移24例。
2.2 NPC中cyclin D1、p16、Rb的表达 50例NPC中cyclin D1阳性表达于癌细胞核内，阳性表达率56%(28/50)；p16阳性表达于癌细胞核和(或)胞浆中，阳性表达38%(19/50)；Rb阳性表达于癌细胞核内(所有核分裂细胞均为阳性)，阳性表达72%(36/50)。
2.3 cyclin D1、p16、Rb在NPC不同生长方式、分化分型、转移状态中的表达(表1) 由表可见在NPC不同生长方式中cyclin D1表达明显差异(χ2=9.69，P<0.01)，在NPC呈R型生长时癌中cyclin D1阳性率增加。非角化性NPC(WHO Ⅱ)中Rb表达阳性率显著高于未分化的WHO Ⅲ型NPC(χ2=6.91，P<0.05)。p16表达阳性率在有转移的NPC中比较无转移的NPC中显著减少(χ2=8.91，P<0.05)。
, 百拇医药
表1 cyclin D1、p16、Rb表达与NPC生长方式、分化、转移的关系 项别
n
阳性数
cyclin D1
%
p16
%
Rb
%
生长方式
R
24
, 百拇医药
18
75.00
10
41.67
18
75.00
S
18
5
27.78
6
33.33
12
, http://www.100md.com
66.67
C
8
5
62.50
3
37.50
6
75.00
癌分化
WHOⅡ
29
14
, http://www.100md.com 48.28
13
44.83
25
86.21
WHOⅢ
21
14
66.67
6
28.57
11
52.39
, http://www.100md.com
淋巴结转移
有
24
12
50.00
4
16.67
17
70.83
无
26
16
61.54
, 百拇医药
15
57.69
19
73.08
2.4 在NPC中cyclin D1、p16和Rb三者间的相互关系 NPC中p16与Rb表达阳性率之间有显著的负相关(χ2=9.20，P<0.01)。Rb阴性时p16阳性71.43%(10/14)，Rb阳性时p16阳性率减少到25.00%(9/36)。cyclin D1与p16之间，cyclin D1与Rb之间均未见显著相关性(P>0.05)。3 讨论
本文结果显示NPC中cyclin D1过表达为56%，说明NPC中cyclin D1过表达是个常见的分子现象。cyclin D1阳性率与NPC生长方式密切相关，在巢性膨胀性生长中，cyclin D1阳性率显著高于其它生长类型，认为cyclin D1在NPC发生中是个早期事件，促进癌细胞增殖与加速生长。
, 百拇医药
本文p16阳性率为38%，有52%的NPC中p16不表达，证明NPC中p16基因改变是常见的。虽然文献报道NPC p16无点突变，但是我们认为在NPC形成中，p16表达减少、低调或同源性缺失，基因失活可能在NPC发生中起作用。特别是NPC发生转移时p16表达显著减少，说明p16改变在NPC发生中是晚期事件。
本组文检测到NPC中Rb蛋白表达率为72%，Rb表达在非角化性NPC(WHO Ⅱ型)中显著高于未分化(WHO Ⅲ型)，与癌生长方式和转移无关。
Rb调控G1期停滞的作用受cyclin D1和p16两个因素的调节。本文结果显示Rb阳性时p16表达减少，为25%，Rb阴性时p16阳性率升高，为71.43%，两者呈显著负相关，其机制可能为某些因素(如cyclin D1)CDK4被激活扩增时引起Rb在G1期失活将导致p16蛋白表达增加以抑制CDK4的活性，相反当Rb高表达时，p16表达减少可获得高水平的CDK4足以使多余的Rb蛋白灭活。虽然本文未发现明显的cyclin D1与p16表达和Rb失活之间有负相关性，但在NPC中三者异常可同时存在参与肿瘤发生。
基金项目：美国中华医学基金会(CMB)资助项目(No 13729)南通市科委资助项目(No 9608)
收稿日期：1998-08-25
修回日期：1999-03-31, http://www.100md.com
单位：陈莉 王桂兰 曹晓蕾(南通医学院病理学教研室，南通 226001)
关键词：鼻咽肿瘤；癌基因蛋白质类；视网膜母细胞瘤蛋白质；cyclin；D1；p16；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990435分类号 R739.63；R392.3 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0362-01
细胞增殖周期失控是肿瘤发生的关键之一，也是近年来分子生物学研究的热点之一。我们通过对50例鼻咽癌(NPC)中细胞周期素D1(cyclin D1)、多肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor, MTS1)的表达产物p16蛋白、视网膜母细胞瘤易感基因编码的核磷酸蛋白(Rb)表达的研究，探讨这些细胞增殖周期调控因子在NPC增殖过程中的作用及其它们之间的相互关系，从细胞增殖、调控的角度深入了解NPC的发生学，为今后对NPC进行基因治疗提供线索。
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1 材料和方法
1.1 材料 50例NPC选自于南通医学院附属医院1993～1995年存档活检蜡块标本。
1.2 方法 免疫组织化学LSAB法染色。分别检测NPC组织中的cyclin D1、p16、Rb及细胞角蛋白表达。
1.3 判断标准 cyclin D1、Rb阳性细胞定位于细胞核内，p16表达还可见于胞浆中，呈棕褐色。根据阳性细胞在切片中所占的面积百分比分为：无阳性细胞为“-”，<25%者为“+”，25%～50%者为“
”，≥50%者为“”。1.4 统计学处理 所有统计数据经χ2检验。
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2 结果
2.1 免疫组化分型 50例经免疫组化细胞角蛋白反应均为阳性，证实为来源于上皮的肿瘤。经WHO分类〔1〕分为非角化性NPC(WHO Ⅱ)和未分化型(WHO Ⅲ)，按其生长方式〔2〕分巢状膨胀性生长(Regand，R型)、弥漫浸润性生长(Schmincke，S型)，同时存在R和S型时为混合型(combination，C型)。本组NPC发生转移24例。
2.2 NPC中cyclin D1、p16、Rb的表达 50例NPC中cyclin D1阳性表达于癌细胞核内，阳性表达率56%(28/50)；p16阳性表达于癌细胞核和(或)胞浆中，阳性表达38%(19/50)；Rb阳性表达于癌细胞核内(所有核分裂细胞均为阳性)，阳性表达72%(36/50)。
2.3 cyclin D1、p16、Rb在NPC不同生长方式、分化分型、转移状态中的表达(表1) 由表可见在NPC不同生长方式中cyclin D1表达明显差异(χ2=9.69，P<0.01)，在NPC呈R型生长时癌中cyclin D1阳性率增加。非角化性NPC(WHO Ⅱ)中Rb表达阳性率显著高于未分化的WHO Ⅲ型NPC(χ2=6.91，P<0.05)。p16表达阳性率在有转移的NPC中比较无转移的NPC中显著减少(χ2=8.91，P<0.05)。
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表1 cyclin D1、p16、Rb表达与NPC生长方式、分化、转移的关系 项别
n
阳性数
cyclin D1
%
p16
%
Rb
%
生长方式
R
24
, 百拇医药
18
75.00
10
41.67
18
75.00
S
18
5
27.78
6
33.33
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C
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62.50
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37.50
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75.00
癌分化
WHOⅡ
29
14
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13
44.83
25
86.21
WHOⅢ
21
14
66.67
6
28.57
11
52.39
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淋巴结转移
有
24
12
50.00
4
16.67
17
70.83
无
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16
61.54
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15
57.69
19
73.08
2.4 在NPC中cyclin D1、p16和Rb三者间的相互关系 NPC中p16与Rb表达阳性率之间有显著的负相关(χ2=9.20，P<0.01)。Rb阴性时p16阳性71.43%(10/14)，Rb阳性时p16阳性率减少到25.00%(9/36)。cyclin D1与p16之间，cyclin D1与Rb之间均未见显著相关性(P>0.05)。3 讨论
本文结果显示NPC中cyclin D1过表达为56%，说明NPC中cyclin D1过表达是个常见的分子现象。cyclin D1阳性率与NPC生长方式密切相关，在巢性膨胀性生长中，cyclin D1阳性率显著高于其它生长类型，认为cyclin D1在NPC发生中是个早期事件，促进癌细胞增殖与加速生长。
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本文p16阳性率为38%，有52%的NPC中p16不表达，证明NPC中p16基因改变是常见的。虽然文献报道NPC p16无点突变，但是我们认为在NPC形成中，p16表达减少、低调或同源性缺失，基因失活可能在NPC发生中起作用。特别是NPC发生转移时p16表达显著减少，说明p16改变在NPC发生中是晚期事件。
本组文检测到NPC中Rb蛋白表达率为72%，Rb表达在非角化性NPC(WHO Ⅱ型)中显著高于未分化(WHO Ⅲ型)，与癌生长方式和转移无关。
Rb调控G1期停滞的作用受cyclin D1和p16两个因素的调节。本文结果显示Rb阳性时p16表达减少，为25%，Rb阴性时p16阳性率升高，为71.43%，两者呈显著负相关，其机制可能为某些因素(如cyclin D1)CDK4被激活扩增时引起Rb在G1期失活将导致p16蛋白表达增加以抑制CDK4的活性，相反当Rb高表达时，p16表达减少可获得高水平的CDK4足以使多余的Rb蛋白灭活。虽然本文未发现明显的cyclin D1与p16表达和Rb失活之间有负相关性，但在NPC中三者异常可同时存在参与肿瘤发生。
基金项目：美国中华医学基金会(CMB)资助项目(No 13729)南通市科委资助项目(No 9608)
收稿日期：1998-08-25
修回日期：1999-03-31, http://www.100md.com