薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量
作者：周世玉 徐智明
单位：成都市药品检验所 成都 610061
关键词：益母草膏；盐酸水苏碱；薄层扫描法
薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量 提要 用薄层扫描法(TLCS)测定了益母草膏中盐酸水苏碱的含量。样品在酸性条件下通过强酸性阳离子交换树脂，水洗除去糖类等水溶性杂质。再以甲醇-氨水(80∶20)洗脱，用薄层色谱分离测定，方法灵敏准确。平均回收率为97.04%，RSD为3.04%。
DETERMINATION OF STACHYDRINE HYDROCHLORIDE IN
YIMUCAO GAO BY TLC-SCANNING
Zhou Shiyu Xu Zhiming
, http://www.100md.com
(Chengdu Institute for Drug Control Chengdu 610061)
ABSTRACT Determination of stachydrine hydrochloride in Yimucao gao by TLCS. Sample in condition of acid through strong acidic positiveins exchanged resins, thus dissolved impurities like sugar etc. could be removed by water, and washed in methanol-ammonia solution(80∶20), then determined by TLC-scanning. This method is proved to be sensitive and accurate. The average recovery is 97.4%, RSD is 3.04%.
, 百拇医药
Key Words Yimucao gao Stachydrine hydrochloride TLC-scanning
益母草膏系药典品种，其原生药益母草中生物碱采用雷氏铵盐剩余比色法测定[1]、也有用雷氏铵盐沉淀溶解比色法[2]、雷氏铵盐沉淀溶解后薄层扫描法[3]。实验采用在酸性条件下过柱，水洗除杂质，再以甲醇-氨水(80∶20)洗脱，用TLCS测定。结果满意，操作较简便。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
日本岛津CS-930型薄层扫描仪；PBQI型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond公司)；硅胶G(60型，青岛海洋化工集团公司)。盐酸水苏碱(中国药品生物制品检定所)；其余试剂均为分析纯。样品来源(四川雒城制药有限公司，批号980308，贵阳中药厂，批号970913，合肥神鹿集团九华药业有限责任公司，批号9808151)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 供试品溶液的制备 取益母草膏约1 g，精密称定，加水10 ml使溶解，盐酸调pH 1～2，加于已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱上(732型，120 mm×10 mm)。水洗至流出液无糖反应(α-萘酚-浓硫酸反应)，再以甲醇-氨水(80∶20)150 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5%盐酸甲醇液溶解，定容于2 ml量瓶中，摇匀，即得。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成1 ml含1.5 mg的溶液即得。
1.2.3 薄层色谱条件 取供试品溶液4 μl，对照品溶液3、6 μl，分别点于同一0.5%羧甲基纤维素钠硅胶G板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10∶10∶1)为展开剂，展距10 cm，取出，晾干，100℃烘10 min，喷稀碘化铋钾-1%三氯化铁无水乙醇(2∶1)试液，冷风吹干。供试品色谱在与盐酸水苏碱对照品相应位置上显相同的黄色斑点。
, 百拇医药
图1 光谱扫描图
1 对照品溶液 2 供试品溶液
1.2.4 扫描条件 对以上Rf值相同的斑点进行光谱扫描(370～700 nm，图2)。盐酸水苏碱斑点在500 nm波长处有最大吸收，故选择λS=500 nm，λR=700 nm双波长反射法锯齿扫描。SX=3，狭缝1.2 mm×1.2 mm，扫描间距ΔY=0.2 mm。
1.2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8、10 μl点于同一薄层板上，按上述条件展开，经显色后扫描测定。以盐酸水苏碱对照品点样量(μg)为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，求得回归方程为：
Y=2.792×103X-1.075×103 r=0.9985，点样量在1.5～15 μg范围内与斑点峰面积值呈良好的线性关系(n=6)。
, 百拇医药
1.2.6 色斑稳定性考察 依上法操作，3 h内每隔0.5 h测一次，对照品斑点及样品斑点面积的积分值基本不变。RSD分别为1.85%及1.80%(n=7)。
1.2.7 精密度考察 将对照品显色后，同一斑点连续扫描，测得峰面积RSD为0.97%(n=6)。另将等量对照品在同一薄层板上点样并同法展开，显色后扫描测定斑点面积，其RSD为1.70%(n=5)。取含量高、中、低三批样品，每批重复测定3～6次，RSD在1.57～2.77%范围内。
1.2.8 回收率试验 取已知含量的益母草膏样品，分别添加盐酸水苏碱对照品水溶液(浓度为0.5204 mg/ml)，加水10 ml使溶解，余照“1.2.1”操作，再按“1.2.4”测定(表1)。
表1 加样回收率测定
样品
, 百拇医药
水苏碱含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
2.128
1.301
3.404
98.08
2
2.265
1.301
3.517
96.23
3
2.058
1.821
3.778
, 百拇医药
94.45
97.04
3.04
4
2.200
1.821
3.898
93.25
5
2.071
2.342
4.438
101.07
, http://www.100md.com
6
2.098
2.342
4.420
99.15
1.2.9 供试品测定 精密吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液3 μl和6 μl，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，显色，扫描，用外标两点法计算。结果第一批样品的含量为0.39%，RSD为2.41%(n=6)，第二、三批样品的含量分别为0.23%、0.05%，RSD分别为1.57%、2.77%(n=3)。
2 讨论
2.1 生物碱为益母草膏的主要有效成分，其中以水苏碱及益母草碱含量最高。由于原生药的来源、产地、采收、贮存以及生产工艺等因素导致生物碱含量差异较大，从而影响制剂质量。实验曾测定了不同厂家的几批制剂，发现一些产品含量很低，有的产品甚至TLC板上无盐酸水苏碱斑点，因此有必要对制剂的生物碱含量进行控制，以保证质量。
, 百拇医药
2.2 实验中曾将样品用硅藻土拌匀，干燥后用乙醇超声处理提取生物碱，再按文献[1]益母草项下的雷氏铵盐剩余比色法测定，发现活性炭对样液脱色不尽，直接影响测定结果，且操作步骤多，重现性差。本实验采用过柱以除去益母草膏中的糖类等水溶性成分，比较了多种洗脱剂、展开剂及显色剂，发现文中所用条件，薄层斑点圆整，Rf值约0.5，无杂质斑点干扰，效果满意。
2.3 薄层显色后，须冷风迅速吹干，并用一块大小相同的玻板覆盖，周围用胶布封好，在3 h内扫描完毕，否则影响测定结果。
参考文献
1 中国药典，一部.1995.261
2 沙世炎等.中草药有效成分分析法(上册).北京：人民卫生出版社，1984.194
3 张玲.双波长薄层扫描法测定益母口服液中水苏碱的含量.中国药科大学学报，1996，27(1)∶16, 百拇医药
单位：成都市药品检验所 成都 610061
关键词：益母草膏；盐酸水苏碱；薄层扫描法
薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量 提要 用薄层扫描法(TLCS)测定了益母草膏中盐酸水苏碱的含量。样品在酸性条件下通过强酸性阳离子交换树脂，水洗除去糖类等水溶性杂质。再以甲醇-氨水(80∶20)洗脱，用薄层色谱分离测定，方法灵敏准确。平均回收率为97.04%，RSD为3.04%。
DETERMINATION OF STACHYDRINE HYDROCHLORIDE IN
YIMUCAO GAO BY TLC-SCANNING
Zhou Shiyu Xu Zhiming
, http://www.100md.com
(Chengdu Institute for Drug Control Chengdu 610061)
ABSTRACT Determination of stachydrine hydrochloride in Yimucao gao by TLCS. Sample in condition of acid through strong acidic positiveins exchanged resins, thus dissolved impurities like sugar etc. could be removed by water, and washed in methanol-ammonia solution(80∶20), then determined by TLC-scanning. This method is proved to be sensitive and accurate. The average recovery is 97.4%, RSD is 3.04%.
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Key Words Yimucao gao Stachydrine hydrochloride TLC-scanning
益母草膏系药典品种，其原生药益母草中生物碱采用雷氏铵盐剩余比色法测定[1]、也有用雷氏铵盐沉淀溶解比色法[2]、雷氏铵盐沉淀溶解后薄层扫描法[3]。实验采用在酸性条件下过柱，水洗除杂质，再以甲醇-氨水(80∶20)洗脱，用TLCS测定。结果满意，操作较简便。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
日本岛津CS-930型薄层扫描仪；PBQI型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond公司)；硅胶G(60型，青岛海洋化工集团公司)。盐酸水苏碱(中国药品生物制品检定所)；其余试剂均为分析纯。样品来源(四川雒城制药有限公司，批号980308，贵阳中药厂，批号970913，合肥神鹿集团九华药业有限责任公司，批号9808151)。
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1.2 方法
1.2.1 供试品溶液的制备 取益母草膏约1 g，精密称定，加水10 ml使溶解，盐酸调pH 1～2，加于已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱上(732型，120 mm×10 mm)。水洗至流出液无糖反应(α-萘酚-浓硫酸反应)，再以甲醇-氨水(80∶20)150 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5%盐酸甲醇液溶解，定容于2 ml量瓶中，摇匀，即得。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成1 ml含1.5 mg的溶液即得。
1.2.3 薄层色谱条件 取供试品溶液4 μl，对照品溶液3、6 μl，分别点于同一0.5%羧甲基纤维素钠硅胶G板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10∶10∶1)为展开剂，展距10 cm，取出，晾干，100℃烘10 min，喷稀碘化铋钾-1%三氯化铁无水乙醇(2∶1)试液，冷风吹干。供试品色谱在与盐酸水苏碱对照品相应位置上显相同的黄色斑点。
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图1 光谱扫描图
1 对照品溶液 2 供试品溶液
1.2.4 扫描条件 对以上Rf值相同的斑点进行光谱扫描(370～700 nm，图2)。盐酸水苏碱斑点在500 nm波长处有最大吸收，故选择λS=500 nm，λR=700 nm双波长反射法锯齿扫描。SX=3，狭缝1.2 mm×1.2 mm，扫描间距ΔY=0.2 mm。
1.2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8、10 μl点于同一薄层板上，按上述条件展开，经显色后扫描测定。以盐酸水苏碱对照品点样量(μg)为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，求得回归方程为：
Y=2.792×103X-1.075×103 r=0.9985，点样量在1.5～15 μg范围内与斑点峰面积值呈良好的线性关系(n=6)。
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1.2.6 色斑稳定性考察 依上法操作，3 h内每隔0.5 h测一次，对照品斑点及样品斑点面积的积分值基本不变。RSD分别为1.85%及1.80%(n=7)。
1.2.7 精密度考察 将对照品显色后，同一斑点连续扫描，测得峰面积RSD为0.97%(n=6)。另将等量对照品在同一薄层板上点样并同法展开，显色后扫描测定斑点面积，其RSD为1.70%(n=5)。取含量高、中、低三批样品，每批重复测定3～6次，RSD在1.57～2.77%范围内。
1.2.8 回收率试验 取已知含量的益母草膏样品，分别添加盐酸水苏碱对照品水溶液(浓度为0.5204 mg/ml)，加水10 ml使溶解，余照“1.2.1”操作，再按“1.2.4”测定(表1)。
表1 加样回收率测定
样品
, 百拇医药
水苏碱含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
2.128
1.301
3.404
98.08
2
2.265
1.301
3.517
96.23
3
2.058
1.821
3.778
, 百拇医药
94.45
97.04
3.04
4
2.200
1.821
3.898
93.25
5
2.071
2.342
4.438
101.07
, http://www.100md.com
6
2.098
2.342
4.420
99.15
1.2.9 供试品测定 精密吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液3 μl和6 μl，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，显色，扫描，用外标两点法计算。结果第一批样品的含量为0.39%，RSD为2.41%(n=6)，第二、三批样品的含量分别为0.23%、0.05%，RSD分别为1.57%、2.77%(n=3)。
2 讨论
2.1 生物碱为益母草膏的主要有效成分，其中以水苏碱及益母草碱含量最高。由于原生药的来源、产地、采收、贮存以及生产工艺等因素导致生物碱含量差异较大，从而影响制剂质量。实验曾测定了不同厂家的几批制剂，发现一些产品含量很低，有的产品甚至TLC板上无盐酸水苏碱斑点，因此有必要对制剂的生物碱含量进行控制，以保证质量。
, 百拇医药
2.2 实验中曾将样品用硅藻土拌匀，干燥后用乙醇超声处理提取生物碱，再按文献[1]益母草项下的雷氏铵盐剩余比色法测定，发现活性炭对样液脱色不尽，直接影响测定结果，且操作步骤多，重现性差。本实验采用过柱以除去益母草膏中的糖类等水溶性成分，比较了多种洗脱剂、展开剂及显色剂，发现文中所用条件，薄层斑点圆整，Rf值约0.5，无杂质斑点干扰，效果满意。
2.3 薄层显色后，须冷风迅速吹干，并用一块大小相同的玻板覆盖，周围用胶布封好，在3 h内扫描完毕，否则影响测定结果。
参考文献
1 中国药典，一部.1995.261
2 沙世炎等.中草药有效成分分析法(上册).北京：人民卫生出版社，1984.194
3 张玲.双波长薄层扫描法测定益母口服液中水苏碱的含量.中国药科大学学报，1996，27(1)∶16, 百拇医药