膀胱移行细胞癌中c-erbB-2、p53及p16蛋白的表达
作者：王春英 刘晓江 王鲁光 陈冬青 谭真 王志慧 陈廷
单位：王春英(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；刘晓江(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；王鲁光(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；陈冬青(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；谭真(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；王志慧(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；陈廷(山东省济宁医学院 276000)
关键词：膀胱肿瘤；蛋白质p53；蛋白质p16；原癌基因蛋白质c-erbB-2类；免疫组织化学
中华病理学杂志000107 摘 要 目的 探讨膀胱癌组织中p16、c-erbB-2和p53蛋白表达与膀胱癌病理分级、临床分期和转移的关系。方法 应用免疫组化SP法对75例膀胱癌组织中p16、p53及c-erbB-2蛋白表达进行检测。结果 75例膀胱癌中p16、p53及c-erbB-2的阳性率分别为41.3%(31/75)、44.0%(33/75)和40.0%(30/75)，p16和c-erbB-2蛋白在膀胱癌中的阳性率与肿瘤病理分级和临床分期有显著意义(P<0.05)，p53 和c-erbB-2阳性率与肿瘤临床分期及转移有密切的关系(P<0.01)。77.3%(58/75)肿瘤有上述蛋白的阳性表达，其中53.3%(40/75)的肿瘤同时有多个蛋白的阳性表达。结论 肿瘤的多因素分析比单因素分析更有价值，癌基因c-erbB-2和抑癌基因p53、 p16蛋白的表达异常及协同作用在膀胱癌的发生发展中起重要作用。
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p16, p53 and c-erbB-2 gene expression in bladder carcinoma
WANG Chunying LIU Xiaojiang WANG Luguang CHEN Dongqing TAN Zhen WANG Zhihui
CHEN Ting
(Department of Pathology, Linyi Cancer Hospital, Linyi 276000，China)
Abstract Objective To investigate the expression of p16, p53 and c-erbB-2 proteins in bladder carcinoma and to analyze their correlation with tumor grade, clinic stage and metastasis. Methods Immunohistochemical method was used to detect the p16, p53 and c-erbB-2 gene expressions in 75 cases of bladder carcinoma. Results Positive rates of p16, p53 and c-erbB-2 in 75 cases of bladder cancer were 41.3%, 44.0% and 40.0%, respectively. p16 and c-erbB-2 gene expressions were related to the tumor grade and clinic stage (P<0.05); p53 and c-erbB-2 gene expressions were related to the clinic stage and metastasis (P<0.01). Oncogenes and/or antioncogenes altered expressions were found in 77.3% cases of bladder carcinoma, and oncogenes and/or antioncogenes with multiple altered expressions were found in 53.3% cases. Conclusion The analysis of multiple oncogene and/or antioncogene is more valuable than that of single oncogene and/or antioncogene. The altered expression of oncogene c-erbB-2 and antioncogenes p16 and p53 might play a promotive role in the tumorigenesis and development of bladder tumors.
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Key words Bladder neoplasms;Protein p53;Protein p16;Proto-oncogene proteins c-erbB-2;Immunohistochemistry
近年来分子生物学的研究结果表明，肿瘤是一种基因异常变化的疾患[1]，是基因变异蓄积的结果，癌基因的激活和抑癌基因的失活在膀胱癌的发生发展中起着重要的作用[2]。p16基因是一种新型抑癌基因，据统计，人类75%的癌细胞株有p16的缺失或突变，超过了p53基因50%的突变率[3]。为了解p16蛋白与膀胱癌生物学行为的关系及在膀胱癌发生发展中同p53、c-erbB-2可能的协同作用，我们采用免疫组化方法对膀胱癌组织中癌基因c-erbB-2和p53、p16 的表达产物进行了研究。
材料和方法
75份膀胱癌标本取自山东省临沂市肿瘤医院1988～1997年间手术切除的膀胱癌石蜡包埋组织块。患者中男62例，女13例，年龄24～81岁，平均年龄58.5岁。标本经4%甲醛固定，常规石蜡切片(厚4～5 μm)，HE染色。病理分级按WHO标准，G1 19例，G2 31例，G3 25例，临床分期按UICC的TNM标准，其中表浅性肿瘤Tis～T1期47例、浸润性肿瘤T2～T4期28例。有淋巴结及远处转移的15例、无淋巴结及远处转移的60例，另取10例正常膀胱粘膜标本做对照。p53、p16及c-erbB-2 蛋白检测采用免疫组化SP法。p53单克隆抗体(Clone Do7)、c-erbB-2单克隆抗体(Clone 100)和p16 多克隆抗体为美国Maxim公司产品，SP试剂盒为美国Zymed公司产品(均购自福州迈新生物技术公司)。实验步骤按试剂盒说明书进行，特异性第一抗体原液均按1∶50稀释。阴性对照为PBS代替特异性第一抗体。p53、p16及c-erbB-2阳性对照为肺癌阳性切片。对染色阳性细胞，高倍镜下选择10个有代表性的视野计数，每个视野计100个肿瘤细胞，阳性细胞数为0记为(-)；阳性细胞数占肿瘤细胞数15%以下为(+)；15%～30%为(++)；30%～50%为(+++)；>50%为(++++)。分为低表达(+～++)和高表达(+++～++++)。统计学处理采用χ2检验；不同病理分级、临床分期和有无转移患者蛋白表达数比较采用Ridit分析。
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结果
75例膀胱癌中c-erbB-2蛋白表达阳性者30例(40.0%)，阳性表达产物主要在细胞膜上；p53阳性者33例(44.0%),p53阳性反应为棕黄色或棕褐色的核染色(图1)；p16蛋白表达阳性者31例(41.3%)阳性表达产物主要位于细胞核内，部分位于细胞质中，为棕黄色，显色强时为棕褐色(图2)。10例正常膀胱粘膜组织p16 表达均为阳性，p53及c-erbB-2表达均为阴性。c-erbB-2、p53及p16 阳性表达与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结和远处转移的关系见表1。c-erbB-2阳性率随病理分级而上升,有转移者和T2～T4期高于无转移者和Tis～T1期(P<0.01或0.05)；p53阳性率与病理分级关系不明显, T2～T4期高于Tis～T1期；有转移者亦高于无转移者。p16阳性率与有无转移关系不明显,与前两指标相反，G1期高于G2、G3期, Tis～T1期高于T2～T4期。c-erbB-2、p53及p16 蛋白表达异常与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结和远处转移的关系见表2。由表2可见，病理G3级R大于G1、G2级，P<0.05；T2～T4 期R大于Tis～T1期，P<0.05；有转移者R虽大于无转移者，但差异无显著性，P>0.05。
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表1 不同病理分级、临床分期和有无转移患者c-erbB-2、p53、p16阳性表达的关系 项目
总例数
c-erbB-2阳性
p53阳性
p16阳性
例数(百分率%)
χ2值
例数(百分率%)
χ2值
例数(百分率%)
χ2值
, 百拇医药
病理分级
G1
19
3(16.0)
7(36.8)
13(68.4)
G2
31
9(29.0)
16.86**
12(38.7)
2.21
, http://www.100md.com 10(32.3)
7.70*
G3
25
18(72.0)
14(45.0)
8(32.0)
临床分期
Tis～T1
47
13(27.7)
7.99**
, http://www.100md.com
15(31.9)
7.46**
24(51.1)
4.91*
T2～T4
28
17(60.7)
18(64.3)
7(25.0)
转移
有
15
, 百拇医药
10(66.7)
5.56*
10(66.7)
3.91*
3(20.0)
3.52
无
60
20(33.3)
23(38.3)
28(46.7)
*P<0.05，**P<0.01表2 不同病理分级、临床分期及有无转移患者蛋白表达数分布的Ridit分析 项目
, 百拇医药
例数
蛋白表达例数(百分率%)
Ridit分析
单个
多个
±S
R95%可信限
病理分级
G1
19
5(26.3)
, 百拇医药 4(21.1)
0.305±0.057
0.194～0.417
G2
31
10(32.3)
14(45.2)
0.469±0.047
0.377～0.560
G3
25
3(12.0)
, http://www.100md.com
22(88.0)
0.687±0.026
0.637～0.737
临床分期
Tis～T1
47
13(27.7)
19(40.4)
0.428±0.039
0.351～0.506
T2～T4
28
, http://www.100md.com
5(17.9)
21(75.0)
0.620±0.039
0.543～0.697
转移
有
15
3(20.0)
11(73.3)
0.615±0.054
0.508～0.721
无
, 百拇医药
60
15(25.0)
29(48.3)
0.471±0.035
0.403～0.539
注：越大表示多基因异常越多，R 95%可信限无重叠时，表示P<0.05 
图1 膀胱癌组织中p53的表达，阳性物质位于细胞核中 SP法×200 图2 膀胱癌组织中p16蛋白的表达，阳性物质位于细胞核中 SP法×200
, 百拇医药
讨论
c-erbB-2癌基因定位于17p21带上，编码具有蛋白激酶活性的细胞膜糖蛋白，参与对细胞生长、繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长，c-erbB-2基因结构的改变，如过度扩增表达促进细胞有丝分裂，在疾病启动阶段后期，这种机制使某些不正常细胞获得不受机体控制而独立生长的能力。抑癌基因p53的失活则表现为突变型p53的过度表达。突变型p53蛋白不仅失去了正常的抑癌作用，而且还有促进恶性转化的作用。由于正常野生型p53蛋白的半衰期很短，仅大约20 min，用一般免疫组化方法不易检测出[4]。故用免疫组化方法检测到的p53蛋白多为突变型p53蛋白。
p16蛋白是细胞周期素依赖性激酶(CDK)的抑制蛋白[5]。目前研究认为，细胞周期的正常演进依赖于周期蛋白(cyclin)和抑制蛋白的调节而完成，具体为两者对CDK的正负平衡调节作用，过度的周期蛋白激活和(或)抑制蛋白缺失，都会导致CDK的过度作用，从而引起细胞的非典型增生。p16蛋白可与细胞周期素 D (cyclin D)竞争结合细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)，抑制cyclin D/CDK4复合物对细胞周期G1期转化所必需的一些关键底物(如pRb)的磷酸化作用，阻止细胞从G1期进入S期，从而抑制细胞增殖[6]。当p16基因突变致结构和功能缺失时，对CDK4的抑制作用解除，cyclin D/CDK4复合物活性增强，刺激细胞旺盛分裂，最终失去控制，并向癌变发展。
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我们的结果显示，75例膀胱癌中c-erbB-2、p53及p16的表达异常均有检出。c-erbB-2、p53过度表达及p16蛋白的失表达均多见于低分化、浸润性和转移的肿瘤中，其中，p53的过度表达率为44.0%，与临床分期、转移有显著性相关，c-erbB-2 过度表达率为40.0%,与肿瘤分级、临床分期和转移密切相关(P<0.05)，p16的表达率为41.3%,与肿瘤分级、临床分期有显著性相关(P<0.05)。 研究提示，上述蛋白与膀胱癌的发生发展， 尤其与肿瘤的侵袭性和转移均有一定的相关性。将c-erbB-2、p53及p16的表达综合分析发现：在75例膀胱癌中，58例(77.3%)有一种或多种蛋白表达异常，与无蛋白表达异常组比较，此组病人分级较高、分期较晚。另外本组资料中，有40例(53.3%)同时出现2种以上(含2种)的表达异常，这种表达异常与分级(P<0.01)、分期(P<0.01)关系密切，与转移无相关性(P>0.05)。以上结果说明，多个蛋白表达异常与膀胱癌的生物学行为极为密切，可以作为判断肿瘤恶性程度、侵袭的重要指标。本组中的p16阳性率较低为41.0%，可能与不同的肿瘤组织类型p16蛋白改变不同有关，也可能与检测方法、病例选择和病程不同有关。
, 百拇医药
基金项目：山东省自然科学基金资助项目(y 95C0931)
参考文献：
[1]Weiberg RA. Oncogene,antioncogenes ,and the molecular bases of multistep carcinogenesis. Cancer Res,1989,49:3713-3721.
[2]Strohmeyer TG, Slamon DJ. Proto-oncogenes and tumor suppressor genes in human urological malignancies. J Urol,1994,151:1479-1497.
[3]Marx J. New tumor suppressor may rival p53. Science,1994,264:344-345.
, 百拇医药
[4Gannon JV,Greaves R,Iggo R,et al. Activating mutations in p53 produce a common conformational effect. A monoclonal antibody specific the mutant form. EMBO J,1990,9:1595-1602.
[5]Kamb A,Gruis NA,Weaver Feldhaus J,et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264:436-440.
[6]Serrano M,Hannon GJ,Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature, 1993, 366:704-707.
收稿日期：1999-03-30, 百拇医药
单位：王春英(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；刘晓江(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；王鲁光(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；陈冬青(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；谭真(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；王志慧(山东省临沂市肿瘤医院病理科 276000)；陈廷(山东省济宁医学院 276000)
关键词：膀胱肿瘤；蛋白质p53；蛋白质p16；原癌基因蛋白质c-erbB-2类；免疫组织化学
中华病理学杂志000107 摘 要 目的 探讨膀胱癌组织中p16、c-erbB-2和p53蛋白表达与膀胱癌病理分级、临床分期和转移的关系。方法 应用免疫组化SP法对75例膀胱癌组织中p16、p53及c-erbB-2蛋白表达进行检测。结果 75例膀胱癌中p16、p53及c-erbB-2的阳性率分别为41.3%(31/75)、44.0%(33/75)和40.0%(30/75)，p16和c-erbB-2蛋白在膀胱癌中的阳性率与肿瘤病理分级和临床分期有显著意义(P<0.05)，p53 和c-erbB-2阳性率与肿瘤临床分期及转移有密切的关系(P<0.01)。77.3%(58/75)肿瘤有上述蛋白的阳性表达，其中53.3%(40/75)的肿瘤同时有多个蛋白的阳性表达。结论 肿瘤的多因素分析比单因素分析更有价值，癌基因c-erbB-2和抑癌基因p53、 p16蛋白的表达异常及协同作用在膀胱癌的发生发展中起重要作用。
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p16, p53 and c-erbB-2 gene expression in bladder carcinoma
WANG Chunying LIU Xiaojiang WANG Luguang CHEN Dongqing TAN Zhen WANG Zhihui
CHEN Ting
(Department of Pathology, Linyi Cancer Hospital, Linyi 276000，China)
Abstract Objective To investigate the expression of p16, p53 and c-erbB-2 proteins in bladder carcinoma and to analyze their correlation with tumor grade, clinic stage and metastasis. Methods Immunohistochemical method was used to detect the p16, p53 and c-erbB-2 gene expressions in 75 cases of bladder carcinoma. Results Positive rates of p16, p53 and c-erbB-2 in 75 cases of bladder cancer were 41.3%, 44.0% and 40.0%, respectively. p16 and c-erbB-2 gene expressions were related to the tumor grade and clinic stage (P<0.05); p53 and c-erbB-2 gene expressions were related to the clinic stage and metastasis (P<0.01). Oncogenes and/or antioncogenes altered expressions were found in 77.3% cases of bladder carcinoma, and oncogenes and/or antioncogenes with multiple altered expressions were found in 53.3% cases. Conclusion The analysis of multiple oncogene and/or antioncogene is more valuable than that of single oncogene and/or antioncogene. The altered expression of oncogene c-erbB-2 and antioncogenes p16 and p53 might play a promotive role in the tumorigenesis and development of bladder tumors.
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Key words Bladder neoplasms;Protein p53;Protein p16;Proto-oncogene proteins c-erbB-2;Immunohistochemistry
近年来分子生物学的研究结果表明，肿瘤是一种基因异常变化的疾患[1]，是基因变异蓄积的结果，癌基因的激活和抑癌基因的失活在膀胱癌的发生发展中起着重要的作用[2]。p16基因是一种新型抑癌基因，据统计，人类75%的癌细胞株有p16的缺失或突变，超过了p53基因50%的突变率[3]。为了解p16蛋白与膀胱癌生物学行为的关系及在膀胱癌发生发展中同p53、c-erbB-2可能的协同作用，我们采用免疫组化方法对膀胱癌组织中癌基因c-erbB-2和p53、p16 的表达产物进行了研究。
材料和方法
75份膀胱癌标本取自山东省临沂市肿瘤医院1988～1997年间手术切除的膀胱癌石蜡包埋组织块。患者中男62例，女13例，年龄24～81岁，平均年龄58.5岁。标本经4%甲醛固定，常规石蜡切片(厚4～5 μm)，HE染色。病理分级按WHO标准，G1 19例，G2 31例，G3 25例，临床分期按UICC的TNM标准，其中表浅性肿瘤Tis～T1期47例、浸润性肿瘤T2～T4期28例。有淋巴结及远处转移的15例、无淋巴结及远处转移的60例，另取10例正常膀胱粘膜标本做对照。p53、p16及c-erbB-2 蛋白检测采用免疫组化SP法。p53单克隆抗体(Clone Do7)、c-erbB-2单克隆抗体(Clone 100)和p16 多克隆抗体为美国Maxim公司产品，SP试剂盒为美国Zymed公司产品(均购自福州迈新生物技术公司)。实验步骤按试剂盒说明书进行，特异性第一抗体原液均按1∶50稀释。阴性对照为PBS代替特异性第一抗体。p53、p16及c-erbB-2阳性对照为肺癌阳性切片。对染色阳性细胞，高倍镜下选择10个有代表性的视野计数，每个视野计100个肿瘤细胞，阳性细胞数为0记为(-)；阳性细胞数占肿瘤细胞数15%以下为(+)；15%～30%为(++)；30%～50%为(+++)；>50%为(++++)。分为低表达(+～++)和高表达(+++～++++)。统计学处理采用χ2检验；不同病理分级、临床分期和有无转移患者蛋白表达数比较采用Ridit分析。
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结果
75例膀胱癌中c-erbB-2蛋白表达阳性者30例(40.0%)，阳性表达产物主要在细胞膜上；p53阳性者33例(44.0%),p53阳性反应为棕黄色或棕褐色的核染色(图1)；p16蛋白表达阳性者31例(41.3%)阳性表达产物主要位于细胞核内，部分位于细胞质中，为棕黄色，显色强时为棕褐色(图2)。10例正常膀胱粘膜组织p16 表达均为阳性，p53及c-erbB-2表达均为阴性。c-erbB-2、p53及p16 阳性表达与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结和远处转移的关系见表1。c-erbB-2阳性率随病理分级而上升,有转移者和T2～T4期高于无转移者和Tis～T1期(P<0.01或0.05)；p53阳性率与病理分级关系不明显, T2～T4期高于Tis～T1期；有转移者亦高于无转移者。p16阳性率与有无转移关系不明显,与前两指标相反，G1期高于G2、G3期, Tis～T1期高于T2～T4期。c-erbB-2、p53及p16 蛋白表达异常与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结和远处转移的关系见表2。由表2可见，病理G3级R大于G1、G2级，P<0.05；T2～T4 期R大于Tis～T1期，P<0.05；有转移者R虽大于无转移者，但差异无显著性，P>0.05。
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表1 不同病理分级、临床分期和有无转移患者c-erbB-2、p53、p16阳性表达的关系 项目
总例数
c-erbB-2阳性
p53阳性
p16阳性
例数(百分率%)
χ2值
例数(百分率%)
χ2值
例数(百分率%)
χ2值
, 百拇医药
病理分级
G1
19
3(16.0)
7(36.8)
13(68.4)
G2
31
9(29.0)
16.86**
12(38.7)
2.21
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7.70*
G3
25
18(72.0)
14(45.0)
8(32.0)
临床分期
Tis～T1
47
13(27.7)
7.99**
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15(31.9)
7.46**
24(51.1)
4.91*
T2～T4
28
17(60.7)
18(64.3)
7(25.0)
转移
有
15
, 百拇医药
10(66.7)
5.56*
10(66.7)
3.91*
3(20.0)
3.52
无
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20(33.3)
23(38.3)
28(46.7)
*P<0.05，**P<0.01表2 不同病理分级、临床分期及有无转移患者蛋白表达数分布的Ridit分析 项目
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例数
蛋白表达例数(百分率%)
Ridit分析
单个
多个
±SR95%可信限
病理分级
G1
19
5(26.3)
, 百拇医药 4(21.1)
0.305±0.057
0.194～0.417
G2
31
10(32.3)
14(45.2)
0.469±0.047
0.377～0.560
G3
25
3(12.0)
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22(88.0)
0.687±0.026
0.637～0.737
临床分期
Tis～T1
47
13(27.7)
19(40.4)
0.428±0.039
0.351～0.506
T2～T4
28
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5(17.9)
21(75.0)
0.620±0.039
0.543～0.697
转移
有
15
3(20.0)
11(73.3)
0.615±0.054
0.508～0.721
无
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60
15(25.0)
29(48.3)
0.471±0.035
0.403～0.539
注：
越大表示多基因异常越多，R 95%可信限无重叠时，表示P<0.05 图1 膀胱癌组织中p53的表达，阳性物质位于细胞核中 SP法×200 图2 膀胱癌组织中p16蛋白的表达，阳性物质位于细胞核中 SP法×200
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讨论
c-erbB-2癌基因定位于17p21带上，编码具有蛋白激酶活性的细胞膜糖蛋白，参与对细胞生长、繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长，c-erbB-2基因结构的改变，如过度扩增表达促进细胞有丝分裂，在疾病启动阶段后期，这种机制使某些不正常细胞获得不受机体控制而独立生长的能力。抑癌基因p53的失活则表现为突变型p53的过度表达。突变型p53蛋白不仅失去了正常的抑癌作用，而且还有促进恶性转化的作用。由于正常野生型p53蛋白的半衰期很短，仅大约20 min，用一般免疫组化方法不易检测出[4]。故用免疫组化方法检测到的p53蛋白多为突变型p53蛋白。
p16蛋白是细胞周期素依赖性激酶(CDK)的抑制蛋白[5]。目前研究认为，细胞周期的正常演进依赖于周期蛋白(cyclin)和抑制蛋白的调节而完成，具体为两者对CDK的正负平衡调节作用，过度的周期蛋白激活和(或)抑制蛋白缺失，都会导致CDK的过度作用，从而引起细胞的非典型增生。p16蛋白可与细胞周期素 D (cyclin D)竞争结合细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)，抑制cyclin D/CDK4复合物对细胞周期G1期转化所必需的一些关键底物(如pRb)的磷酸化作用，阻止细胞从G1期进入S期，从而抑制细胞增殖[6]。当p16基因突变致结构和功能缺失时，对CDK4的抑制作用解除，cyclin D/CDK4复合物活性增强，刺激细胞旺盛分裂，最终失去控制，并向癌变发展。
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我们的结果显示，75例膀胱癌中c-erbB-2、p53及p16的表达异常均有检出。c-erbB-2、p53过度表达及p16蛋白的失表达均多见于低分化、浸润性和转移的肿瘤中，其中，p53的过度表达率为44.0%，与临床分期、转移有显著性相关，c-erbB-2 过度表达率为40.0%,与肿瘤分级、临床分期和转移密切相关(P<0.05)，p16的表达率为41.3%,与肿瘤分级、临床分期有显著性相关(P<0.05)。 研究提示，上述蛋白与膀胱癌的发生发展， 尤其与肿瘤的侵袭性和转移均有一定的相关性。将c-erbB-2、p53及p16的表达综合分析发现：在75例膀胱癌中，58例(77.3%)有一种或多种蛋白表达异常，与无蛋白表达异常组比较，此组病人分级较高、分期较晚。另外本组资料中，有40例(53.3%)同时出现2种以上(含2种)的表达异常，这种表达异常与分级(P<0.01)、分期(P<0.01)关系密切，与转移无相关性(P>0.05)。以上结果说明，多个蛋白表达异常与膀胱癌的生物学行为极为密切，可以作为判断肿瘤恶性程度、侵袭的重要指标。本组中的p16阳性率较低为41.0%，可能与不同的肿瘤组织类型p16蛋白改变不同有关，也可能与检测方法、病例选择和病程不同有关。
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基金项目：山东省自然科学基金资助项目(y 95C0931)
参考文献：
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收稿日期：1999-03-30, 百拇医药