白癜风模型动物酪氨酸酶含量及血液流变性改变
作者：龙子江 吕晓英 樊彦 白玫 王元勋
单位：龙子江 樊彦 白玫 王元勋(安徽中医学院中西医结合系，安徽 合肥 230038)；吕晓英(安徽中医学院第一附属医院)
关键词：白癜风动物模型；酪氨酸酶；血液流变性
安徽中医学院学报000533 摘要：目的：研究化学脱色法复制白癜风模型动物血液中酪氨酸酶含量及血液流变性指标的变化。方法：用5%过氧化氢涂布于豚鼠的黑毛区，每日2次，连续50d，腹主动脉取血，用分光光度计测酪氨酸酶含量和用LIANG-100型血液比粘度计测血液流变性指标。结果：模型动物血中酪氨酶含量减少，血液流变性指标明显升高。结论：用化学脱色法处理的动物有模拟白癜风的作用。
中图分类号：R965.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2219(2000)05-0053-02
, http://www.100md.com
STUDY ON CONTENT OF TYROSINASE IN THE BLOOD AND HEMORRHEOLOGY IN VITILIGO ANIMAL PATHOLOGICAL PATTERN
LONG Zi-jiang,LU Xiao-ying,FAN Yan,BAI Mei,WANG Yuan-xun
(Department of Combination of Chinese and Western Medicine,Anhui College of TCM,Anhui Hefei 230038,China)
Abstract：Objective：To study the content of tyrosinase in the blood and hemorrheology in vitiligo animal pathological pattern.Method:To apply 5% H2O2 on the black skin of guinea pigs,2 daily,for 50 days,and draw blood from abdominal aorta,and determine the content of tyrosinase by spectrophotometer and indexes of hemorrheology by LIANG-100 blood rate viscosimeter.Result:the tyrosinase descended and the indexes of hemorrheology increased.Conclusion:Chemical decolorizer can be used to simulate vitiligo animal pathological pattern.
, 百拇医药
Key words：Animal pathological pattern of vitiligo;Tyrosinase;Hemorrheology
白癜风是一种难治性皮肤病。在药物实验研究中缺乏有效、简单的动物模型。采用化学脱色法处理动物，使动物皮肤黑色素明显减少[1]。为了对该模型进一步研究，本实验检测了酪氨酸酶含量和血液流变性指标，现报道如下。
1 实验材料
1.1 药品 酪氨酸酶、L-多巴均由Sigma chemical Co.生产，批号分别为232-658-4和700-445-2；过氧化氢，上海市桃浦化工厂生产，批号981010；其他药品均为市售合格药品。
1.2 动物 豚鼠，黑色或黑花色，体质量250～300g，雌雄兼用，由安徽省医科大学动物中心提供。
, 百拇医药
1.3 仪器 LIANG-100血液比粘度计，上海医科大学生产。721分光光度计，上海第二分析仪器厂生产。
2 方法与结果
2.1 酪氨酸酶标准浓度回归方程的建立 根据参考文献[2，3]适当修改。取试管5支，各加入1ml L-多巴溶液(2mg/ml)和0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)2.8ml，摇匀，放入25℃恒温水浴中预热10min，再向上述试管中分别加入不同浓度的酪氨酸酶溶液1ml，立即混匀，并准确计量，25℃水浴反应5min，迅速加入0.2%硫脲-乙醇溶液，混匀，终止反应。以0.1mol/L磷酸缓冲液为空白对照管，在721分光光度计波长为475nm处测吸收值，结果见表1。由表1数据求回归方程。y=1.961 8x+0.146 7，r=0.988 1。
表1 标准浓度酪氨酸酶吸收值 试管号
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酶浓度
(mg/ml)
吸收值
1
0.062 5
0.260
2
0.093 7
0.321
3
0.125 0
0.390
4
, 百拇医药
0.156 3
0.492
5
0.250 0
0.621
2.2 动物模型的复制[1] 取黑色或黑花色豚鼠40只，随机均分为正常组、模型组。脱去黑毛约4cm×4cm后，正常组在脱毛区涂1ml蒸馏水，每日2次；模型组涂5%过氧化氢1ml，每日2次，两组连续50d，末次药后40min，用乌拉坦麻醉，自腹主动脉取血，分别测酪氨酸酶含量和血液流变性指标。
2.3 酪氨酸酶含量的检测[2，3] 将血液离心(2 500r/min)，得上清液。然后取20支试管，方法同2.1项。但试管中加上清液1ml，而不是酪氨酸酶，同样终止反应后，以0.1mol/L磷酸缓冲液为空白对照管，在分光光度计波长为475nm处测各管的吸收值，并将其代入上述回归方程得酶含量，结果见表2。
, 百拇医药
表2 白癜风模型动物血中酪氨酸酶含量(
±s) 组 别
n
酶含量(mg/ml)
正常组
10
0.078 9±0.0212
模型组
10
0.044 0±0.0328*
与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01(下同)
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2.4 血液流变性指标的检测 取血后，用LANG-100型血液比粘度计测血液流变性指标：全血比粘度、血浆比粘度、红细胞比容、红细胞电泳、红细胞聚集指数、纤维蛋白原等。结果见表3。
表3 白癜风模型动物血液流变性指标(n=10，±s) 组 别
全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
红细胞比容
(%)
红细胞
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电泳时间
(s)
聚集指数
纤维蛋白原
(g)
高切
低切
正常组
5.50±0.97
9.34±1.48
1.41±0.08
43.00±2.71
14.33±0.63
, 百拇医药
1.67±0.15
3.03±0.37
模型组
7.61±0.86**
12.17±2.03**
1.53±0.19
47.80±7.13
15.50±1.19*
1.70±0.09
3.91±0.55**
3 讨论
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酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶。该酶在黑色素细胞中将多巴氧化成金巴醌，再氧化成一些中间产物，最后合成黑色素[3]。据报道，白癜风患者的酪氨酸酶活性降低[4]。祖国医学认为，白癜风发病机制是情志内伤，肝气郁结，复受风邪，夹湿搏结于肌肤，致气血失和而成气滞血瘀，血不养肌肤[5]。白癜风患者血液粘稠度明显增加。本实验结果可见，用5%过氧化氢复制白癜风的动物模型，该动物血中酪氨酸酶含量明显下降，血液流变性指标明显升高，与正常组比较，有明显差异。说明用化学脱色法复制的白癜风动物模型与临床证型相一致，有代表性。在本模型制作中应注意两点：一是脱毛要及时，一般3～4d脱毛1次；再者在涂药时要反复擦，尽量使之渗透，增强脱色效果。
基金项目：安徽省自然科学基金资助项目(95-医-21)
作者简介：龙子江(1957-)，男，副教授，硕士生导师。
, 百拇医药
参考文献：
[1]龙子江.化学脱色法制备白癜风动物模型[J].安徽中医学院学报，1997，16(6)：60.
[2]Seymour H.Separation,Purification,and properties of Two Tyrosinases from Hamster Melanoma[J].Pomerantz S H J Biol Chem,1963,238(7):2351.
[3]李仲良.黑色素[J].生物化学与生物物理进展，1981，(4)：18.
[4]麻致中.现代皮肤学提要[M].北京：人民卫生出版社，1989.554.
[5]顾伯华.实用中医外科学[M].上海：上海科学技术出版社，1985.532.
(收稿日期：2000-06-16), 百拇医药
单位：龙子江 樊彦 白玫 王元勋(安徽中医学院中西医结合系，安徽 合肥 230038)；吕晓英(安徽中医学院第一附属医院)
关键词：白癜风动物模型；酪氨酸酶；血液流变性
安徽中医学院学报000533 摘要：目的：研究化学脱色法复制白癜风模型动物血液中酪氨酸酶含量及血液流变性指标的变化。方法：用5%过氧化氢涂布于豚鼠的黑毛区，每日2次，连续50d，腹主动脉取血，用分光光度计测酪氨酸酶含量和用LIANG-100型血液比粘度计测血液流变性指标。结果：模型动物血中酪氨酶含量减少，血液流变性指标明显升高。结论：用化学脱色法处理的动物有模拟白癜风的作用。
中图分类号：R965.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2219(2000)05-0053-02
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STUDY ON CONTENT OF TYROSINASE IN THE BLOOD AND HEMORRHEOLOGY IN VITILIGO ANIMAL PATHOLOGICAL PATTERN
LONG Zi-jiang,LU Xiao-ying,FAN Yan,BAI Mei,WANG Yuan-xun
(Department of Combination of Chinese and Western Medicine,Anhui College of TCM,Anhui Hefei 230038,China)
Abstract：Objective：To study the content of tyrosinase in the blood and hemorrheology in vitiligo animal pathological pattern.Method:To apply 5% H2O2 on the black skin of guinea pigs,2 daily,for 50 days,and draw blood from abdominal aorta,and determine the content of tyrosinase by spectrophotometer and indexes of hemorrheology by LIANG-100 blood rate viscosimeter.Result:the tyrosinase descended and the indexes of hemorrheology increased.Conclusion:Chemical decolorizer can be used to simulate vitiligo animal pathological pattern.
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Key words：Animal pathological pattern of vitiligo;Tyrosinase;Hemorrheology
白癜风是一种难治性皮肤病。在药物实验研究中缺乏有效、简单的动物模型。采用化学脱色法处理动物，使动物皮肤黑色素明显减少[1]。为了对该模型进一步研究，本实验检测了酪氨酸酶含量和血液流变性指标，现报道如下。
1 实验材料
1.1 药品 酪氨酸酶、L-多巴均由Sigma chemical Co.生产，批号分别为232-658-4和700-445-2；过氧化氢，上海市桃浦化工厂生产，批号981010；其他药品均为市售合格药品。
1.2 动物 豚鼠，黑色或黑花色，体质量250～300g，雌雄兼用，由安徽省医科大学动物中心提供。
, 百拇医药
1.3 仪器 LIANG-100血液比粘度计，上海医科大学生产。721分光光度计，上海第二分析仪器厂生产。
2 方法与结果
2.1 酪氨酸酶标准浓度回归方程的建立 根据参考文献[2，3]适当修改。取试管5支，各加入1ml L-多巴溶液(2mg/ml)和0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)2.8ml，摇匀，放入25℃恒温水浴中预热10min，再向上述试管中分别加入不同浓度的酪氨酸酶溶液1ml，立即混匀，并准确计量，25℃水浴反应5min，迅速加入0.2%硫脲-乙醇溶液，混匀，终止反应。以0.1mol/L磷酸缓冲液为空白对照管，在721分光光度计波长为475nm处测吸收值，结果见表1。由表1数据求回归方程。y=1.961 8x+0.146 7，r=0.988 1。
表1 标准浓度酪氨酸酶吸收值 试管号
, 百拇医药
酶浓度
(mg/ml)
吸收值
1
0.062 5
0.260
2
0.093 7
0.321
3
0.125 0
0.390
4
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0.156 3
0.492
5
0.250 0
0.621
2.2 动物模型的复制[1] 取黑色或黑花色豚鼠40只，随机均分为正常组、模型组。脱去黑毛约4cm×4cm后，正常组在脱毛区涂1ml蒸馏水，每日2次；模型组涂5%过氧化氢1ml，每日2次，两组连续50d，末次药后40min，用乌拉坦麻醉，自腹主动脉取血，分别测酪氨酸酶含量和血液流变性指标。
2.3 酪氨酸酶含量的检测[2，3] 将血液离心(2 500r/min)，得上清液。然后取20支试管，方法同2.1项。但试管中加上清液1ml，而不是酪氨酸酶，同样终止反应后，以0.1mol/L磷酸缓冲液为空白对照管，在分光光度计波长为475nm处测各管的吸收值，并将其代入上述回归方程得酶含量，结果见表2。
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表2 白癜风模型动物血中酪氨酸酶含量(
±s) 组 别n
酶含量(mg/ml)
正常组
10
0.078 9±0.0212
模型组
10
0.044 0±0.0328*
与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01(下同)
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2.4 血液流变性指标的检测 取血后，用LANG-100型血液比粘度计测血液流变性指标：全血比粘度、血浆比粘度、红细胞比容、红细胞电泳、红细胞聚集指数、纤维蛋白原等。结果见表3。
表3 白癜风模型动物血液流变性指标(n=10，
±s) 组 别全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
红细胞比容
(%)
红细胞
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电泳时间
(s)
聚集指数
纤维蛋白原
(g)
高切
低切
正常组
5.50±0.97
9.34±1.48
1.41±0.08
43.00±2.71
14.33±0.63
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1.67±0.15
3.03±0.37
模型组
7.61±0.86**
12.17±2.03**
1.53±0.19
47.80±7.13
15.50±1.19*
1.70±0.09
3.91±0.55**
3 讨论
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酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶。该酶在黑色素细胞中将多巴氧化成金巴醌，再氧化成一些中间产物，最后合成黑色素[3]。据报道，白癜风患者的酪氨酸酶活性降低[4]。祖国医学认为，白癜风发病机制是情志内伤，肝气郁结，复受风邪，夹湿搏结于肌肤，致气血失和而成气滞血瘀，血不养肌肤[5]。白癜风患者血液粘稠度明显增加。本实验结果可见，用5%过氧化氢复制白癜风的动物模型，该动物血中酪氨酸酶含量明显下降，血液流变性指标明显升高，与正常组比较，有明显差异。说明用化学脱色法复制的白癜风动物模型与临床证型相一致，有代表性。在本模型制作中应注意两点：一是脱毛要及时，一般3～4d脱毛1次；再者在涂药时要反复擦，尽量使之渗透，增强脱色效果。
基金项目：安徽省自然科学基金资助项目(95-医-21)
作者简介：龙子江(1957-)，男，副教授，硕士生导师。
, 百拇医药
参考文献：
[1]龙子江.化学脱色法制备白癜风动物模型[J].安徽中医学院学报，1997，16(6)：60.
[2]Seymour H.Separation,Purification,and properties of Two Tyrosinases from Hamster Melanoma[J].Pomerantz S H J Biol Chem,1963,238(7):2351.
[3]李仲良.黑色素[J].生物化学与生物物理进展，1981，(4)：18.
[4]麻致中.现代皮肤学提要[M].北京：人民卫生出版社，1989.554.
[5]顾伯华.实用中医外科学[M].上海：上海科学技术出版社，1985.532.
(收稿日期：2000-06-16), 百拇医药