川芎嗪对小白鼠实验性肝损伤的保护作用
作者：张明远 郭忠兴 郭朝晖
单位：张明远(佳木斯大学基础医学院)；郭忠兴(佳木斯大学基础医学院)；郭朝晖(佳木斯大学一附院)
关键词：四氯化碳；肝损伤；川芎嗪；超氧化物歧化酶(SOD)；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)；丙二醛(MDA)；小白鼠
黑龙江医药科学000302 提要 本实验利用四氯化碳诱发小白鼠急性肝损伤模型，通过测定肝组织及血清SOD、GSH-Px和MDA、观察川芎嗪对肝损伤的保护作用。结果表明，川芎嗪能显著提高肝血清SOD、GSH-Px活性、减少MDA生成量(P<0.01)，说明川芎嗪有一定程度抗自由基与抗脂质过氧化作用、对四氯化碳肝损伤有显著的保护作用。
Protective effects of ligustrazini on experimental liver injury in mice
, 百拇医药
Zhang Mingyuan, et al
Abstract Objective: To observe the protective effects of ligustrazini on liver injury. Methods: by use of the model of acute liver damage induced by CCl4, and by determining the superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px), and malondialdehyde (MDA) in the serum and liver tissue. Results: The results showed that compared with control group, Ligustrazini evidently increased the activities of SOD and GSH-Px and decreased the production of MDA (P<0.01) in the liver tissue and serum. Conclusion: All these suggest that ligustrazini has the effects of anti-free radical and anti-lipid peroxidetion in certain degree, and has the protective effects on the liver from damage induced by CCl4.
, 百拇医药
川芎嗪(四甲基吡嗪，Ligustrazini)系从伞形科藁本属植物川芎中分离提纯的一种生物碱单体[1]。近年来，经临床验证，确认对冠心病、缺血性脑血管、血栓闭塞性血管病等有较好的疗效[2]，另有文献报道[3,4]，川芎嗪可显著降低老龄大鼠脑、心、肝中过氧化脂质含量，并能提高脑、肝中单胺氧化酶和超氧化物歧化酶活力，但川芎嗪抗自由基与肝损伤的关系尚无报告，因此我们观察了四氯化碳所致的急性肝损伤模型的小鼠肝组织及血清的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及丙二醛的变化，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明种健康雄性小白鼠18～22g，2月龄，64只。由本院动物室提供。实验药品，川芎嗪注射液(北京第四制药厂，批号890201)。
1.2 实验分组及给药方法
, http://www.100md.com
将64只小白鼠随机分为4组，每组16只，分别为正常对照组(Ⅰ组)、CCl4损伤组(Ⅱ组)，川芎嗪保护小剂量组(Ⅲ组)，川芎嗪保护大剂量组(Ⅳ组)，Ⅰ组不作特殊处理；Ⅱ组实验开始后腹腔注射99.5% CCl4 0.01ml/10g体重，以后每天注生理盐水至取材；Ⅲ、Ⅳ组CCl4用量用法同Ⅱ组，自给CCl43d开始腹腔注射川芎嗪注射液100mg/kg、200mg/kg体重，每日1次，至取材。每组随机抽样小鼠4只，于注射CCl4后6、12、24、48h分别行小鼠眶静脉窦采血、分离血清测定其SOD、GSH-Px、MDA：所有动物均于注射CCl4后48h处死并剖腹取肝组织测定其SOD、GSH-Px、MDA含量。
1.3 检测方法
肝组织及血清SOD含量测定采用南京建成生物工程研究所SOD测试盒使用说明书方法进行：肝组织及血清MDA含量采用南京建成生物工程研究所MDA。测定测试盒使用说明书方法进行；肝组织及全血GSH-Px含量测定采用南京建成生物工程研究所GSH-Px测试盒使用说明书方法进行。
, 百拇医药
1.4 数据处理
实验数据经统计学处理，各数据均以
±s表示，均数间显著性检验采用配对t检验。
2 结果
①肝组织及血清SOD含量：肝组织SOD含量，川芎嗪保护组明显高于损伤组(P<0.01)。见表1。表2表明CCl4损伤后24、48h川芎嗪保护组血清SOD含量显著高于损伤组(P<0.01)。
表1 注射CCl4后48h肝组织SOD、GSH-Px及MDA含量(±s,n=16) 分组
SOD(ug/g)
, 百拇医药
GSH-PX(ug/g)
MDA(nmol/g)
Ⅰ组
349.189±45.250
163.324±12.314
23.495±6.059
Ⅱ组
93.499±28.112
102.125±11.036
41.333±5.937
Ⅲ组
, 百拇医药 166.886±32.806*△
186.246±13.269*△
28.546±6.034*△
Ⅳ组
174.374±30.645*△
193.439±14.001*△
29.332±5.865*△
注：*与Ⅰ组相比，P<0.05，△与Ⅱ组相比，P<0.01
表2 血清SOD含量(nu/ml,±s, n=4) 分组
, 百拇医药
6h
12h
24h
48h
Ⅰ组
35.857±2.198
30.199±2.304
36.321±2.466
38.913±3.125
Ⅱ组
36.776±2.215
35.408±2.376
, 百拇医药
30.344±0.935
28.822±2.011
Ⅲ组
43.533±2.314
40.899±3.735
45.824±2.956**
46.842±3.115**
Ⅳ组
42.914±2.434
43.941±3.546
42.899±2.316**
, 百拇医药
45.946±3.612**
注：与Ⅱ组相比**P<0.01
②肝组织及血清GSH-Px含量：肝组织GSH-Px含量，川芎嗪保护组(Ⅲ、Ⅳ组)均显著高于损伤组(P<0.01)，见表1。表3表明CCl4损伤后24、48h川芎嗪保护组全血GSH-Px含量显著高于损伤组(P<0.01)。
表3 全血GSH-Px含量(μg/ml，±s, n=4) 分组
6h
12h
24h
48h
, 百拇医药
Ⅰ组
81.636±3.436
80/426±2.765
79.396±2.919
81.346±2.916
Ⅱ组
85.727±2.388
81.360±2.719
73.483±2.412
68.149±3.699
Ⅲ组
83.824±2.457
, http://www.100md.com
85.645±3.105
88.123±3.440**
89.936±3.117**
Ⅳ组
86.723±3.031
87.843±2.668
90.499±3.129**
88.961±3.660**
注：与Ⅱ组相比**P<0.01
③肝组织及血清MDA含量：川芎嗪保护组(Ⅲ、Ⅳ组)肝组织MDA含量显著低于损伤组(P<0.01)，见表1。表4显示损伤组MDA含量，各时相均高于Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ组，经统计学处理各组间有显著差异(P<0.01)。但Ⅲ和Ⅳ组之间无显著差异(P>0.05)。
, 百拇医药
表4 血清MDA含量(nmol/ml,±s, n=4) 分组
6h
12h
24h
48h
Ⅰ组
5.063±1.315
5.455±1.336
5.642±1.401
5.129±1.291
Ⅱ组
, 百拇医药
6.039±3.012
8.939±3.169
10.856±3.381
11.936±3.435
Ⅲ组
4.936±0.925
5.594±2.934
5.427±2.064
5.021±2.036
Ⅲ组
5.846±0.836
, 百拇医药 5.966±1.342
4.964±1.944
4.834±0.984
注：各组间比较P均<0.01
3 讨论
四氯化碳所致肝损伤模型，是经典的实验性肝损伤动物模型，其肝损伤机制主要是通过CCl4活性代谢物引起，CCl4在内质网依赖于细胞色素p-450混合功能氧化酶代谢，产生
和
自由基，这些自由基既可与细胞内蛋白质、核酸等大分子发生共价键结合，也可攻击生物膜多聚不饱和脂质。导致脂质过氧化损害；脂质过氧化及共价键结合可导致细胞内
浓度升高[5]，细胞内积聚又可激活一种使黄嘌呤脱氢变成黄嘌呤氧化酶的蛋白酶，同时由于细胞缺血缺氧。细胞内ATP升高，并分解成次黄嘌呤，次黄嘌呤作为黄嘌呤氧化酶基质，通过黄嘌呤氧化体系产生大量活性氧自由基(
)。加之白细胞在肝组织浸润及激活又可导致大量产生[7]，加重CCl4所致的膜脂质过氧化作用。
, 百拇医药
SOD、GSH-Px是特异性清除剂，MDA是脂质过氧化物(LPO)的代谢产物，所以测定SOD、GSH-Px及MDA可反映自由基生成及清除情况。本实验结果表明，川芎嗪能明显降低CCl4引起的SOD及GSH-Px耗竭，能明显降低肝组织MDA生成量。根据本实验及其他报道[4,5]，川芎嗪可能通过下列途径发挥抗自由基作用；(1)抑制黄嘌呤氧化酶形成，保护内源性SOD和GSH-Px活性[8]；(2)通过抑制血小板聚集、溶解血栓作用，扩张小动脉、降低血管阻力[2]，改善肝微循环、改善肝脏能量代谢、阻断CCl4损伤后氧自由基对肝脏进一步损伤。
总之，川芎嗪能显著提高肝组织及血清SOD及GSH-Px活性，减少MDA含量，有一定程度抗自由基及抗脂质过氧化作用，对CCl4性肝损伤有较为肯定的保护作用。
, 百拇医药
参考文献
1.北京制药工业研究所.川芎嗪有效成分的研究.中华医学杂志,1991,61(7)420
2.徐理纳.关于活血化瘀药研究途径的概况.中医杂志,1995;7:74
3.郭忠兴,李怀荆,张明远.川芎嗪注射液对老年大鼠SOD活性和MDA含量的影响.佳木斯医学院学报,1996,19(5)10
4.郭忠兴,徐志敏,当归和川芎嗪对老年大鼠脑、肝MAO-B活性的影响.老年学杂志,1993;13(6):62
5.郭忠兴,郭朝阳.川芎嗪对老龄大鼠脑、心、肝过氧化脂质含量的影响.佳木斯医学院学报,1997,20(1)11
6.Waller RL. Carbon-tetrachloride and bromotrichloromethane toxity.Biochemical pharmacol, 1987;32:1613
, http://www.100md.com
7.Fantone JC. Rale of oxygen-derived free radical and metabolites in leukocyte dependent inflammatory reactions. Am J pathol 1986;107:397
8.Li X. protection effects of panax notogiseng saponin on experimental myocardial injury induced by ischemia and reperfusion in rat. Acta pharmacol sin, 1994;11:26
(2000-02-20收稿 2000-03-05修回), http://www.100md.com
单位：张明远(佳木斯大学基础医学院)；郭忠兴(佳木斯大学基础医学院)；郭朝晖(佳木斯大学一附院)
关键词：四氯化碳；肝损伤；川芎嗪；超氧化物歧化酶(SOD)；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)；丙二醛(MDA)；小白鼠
黑龙江医药科学000302 提要 本实验利用四氯化碳诱发小白鼠急性肝损伤模型，通过测定肝组织及血清SOD、GSH-Px和MDA、观察川芎嗪对肝损伤的保护作用。结果表明，川芎嗪能显著提高肝血清SOD、GSH-Px活性、减少MDA生成量(P<0.01)，说明川芎嗪有一定程度抗自由基与抗脂质过氧化作用、对四氯化碳肝损伤有显著的保护作用。
Protective effects of ligustrazini on experimental liver injury in mice
, 百拇医药
Zhang Mingyuan, et al
Abstract Objective: To observe the protective effects of ligustrazini on liver injury. Methods: by use of the model of acute liver damage induced by CCl4, and by determining the superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px), and malondialdehyde (MDA) in the serum and liver tissue. Results: The results showed that compared with control group, Ligustrazini evidently increased the activities of SOD and GSH-Px and decreased the production of MDA (P<0.01) in the liver tissue and serum. Conclusion: All these suggest that ligustrazini has the effects of anti-free radical and anti-lipid peroxidetion in certain degree, and has the protective effects on the liver from damage induced by CCl4.
, 百拇医药
川芎嗪(四甲基吡嗪，Ligustrazini)系从伞形科藁本属植物川芎中分离提纯的一种生物碱单体[1]。近年来，经临床验证，确认对冠心病、缺血性脑血管、血栓闭塞性血管病等有较好的疗效[2]，另有文献报道[3,4]，川芎嗪可显著降低老龄大鼠脑、心、肝中过氧化脂质含量，并能提高脑、肝中单胺氧化酶和超氧化物歧化酶活力，但川芎嗪抗自由基与肝损伤的关系尚无报告，因此我们观察了四氯化碳所致的急性肝损伤模型的小鼠肝组织及血清的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及丙二醛的变化，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明种健康雄性小白鼠18～22g，2月龄，64只。由本院动物室提供。实验药品，川芎嗪注射液(北京第四制药厂，批号890201)。
1.2 实验分组及给药方法
, http://www.100md.com
将64只小白鼠随机分为4组，每组16只，分别为正常对照组(Ⅰ组)、CCl4损伤组(Ⅱ组)，川芎嗪保护小剂量组(Ⅲ组)，川芎嗪保护大剂量组(Ⅳ组)，Ⅰ组不作特殊处理；Ⅱ组实验开始后腹腔注射99.5% CCl4 0.01ml/10g体重，以后每天注生理盐水至取材；Ⅲ、Ⅳ组CCl4用量用法同Ⅱ组，自给CCl43d开始腹腔注射川芎嗪注射液100mg/kg、200mg/kg体重，每日1次，至取材。每组随机抽样小鼠4只，于注射CCl4后6、12、24、48h分别行小鼠眶静脉窦采血、分离血清测定其SOD、GSH-Px、MDA：所有动物均于注射CCl4后48h处死并剖腹取肝组织测定其SOD、GSH-Px、MDA含量。
1.3 检测方法
肝组织及血清SOD含量测定采用南京建成生物工程研究所SOD测试盒使用说明书方法进行：肝组织及血清MDA含量采用南京建成生物工程研究所MDA。测定测试盒使用说明书方法进行；肝组织及全血GSH-Px含量测定采用南京建成生物工程研究所GSH-Px测试盒使用说明书方法进行。
, 百拇医药
1.4 数据处理
实验数据经统计学处理，各数据均以
±s表示，均数间显著性检验采用配对t检验。2 结果
①肝组织及血清SOD含量：肝组织SOD含量，川芎嗪保护组明显高于损伤组(P<0.01)。见表1。表2表明CCl4损伤后24、48h川芎嗪保护组血清SOD含量显著高于损伤组(P<0.01)。
表1 注射CCl4后48h肝组织SOD、GSH-Px及MDA含量(
±s,n=16) 分组SOD(ug/g)
, 百拇医药
GSH-PX(ug/g)
MDA(nmol/g)
Ⅰ组
349.189±45.250
163.324±12.314
23.495±6.059
Ⅱ组
93.499±28.112
102.125±11.036
41.333±5.937
Ⅲ组
, 百拇医药 166.886±32.806*△
186.246±13.269*△
28.546±6.034*△
Ⅳ组
174.374±30.645*△
193.439±14.001*△
29.332±5.865*△
注：*与Ⅰ组相比，P<0.05，△与Ⅱ组相比，P<0.01
表2 血清SOD含量(nu/ml,
±s, n=4) 分组, 百拇医药
6h
12h
24h
48h
Ⅰ组
35.857±2.198
30.199±2.304
36.321±2.466
38.913±3.125
Ⅱ组
36.776±2.215
35.408±2.376
, 百拇医药
30.344±0.935
28.822±2.011
Ⅲ组
43.533±2.314
40.899±3.735
45.824±2.956**
46.842±3.115**
Ⅳ组
42.914±2.434
43.941±3.546
42.899±2.316**
, 百拇医药
45.946±3.612**
注：与Ⅱ组相比**P<0.01
②肝组织及血清GSH-Px含量：肝组织GSH-Px含量，川芎嗪保护组(Ⅲ、Ⅳ组)均显著高于损伤组(P<0.01)，见表1。表3表明CCl4损伤后24、48h川芎嗪保护组全血GSH-Px含量显著高于损伤组(P<0.01)。
表3 全血GSH-Px含量(μg/ml，
±s, n=4) 分组6h
12h
24h
48h
, 百拇医药
Ⅰ组
81.636±3.436
80/426±2.765
79.396±2.919
81.346±2.916
Ⅱ组
85.727±2.388
81.360±2.719
73.483±2.412
68.149±3.699
Ⅲ组
83.824±2.457
, http://www.100md.com
85.645±3.105
88.123±3.440**
89.936±3.117**
Ⅳ组
86.723±3.031
87.843±2.668
90.499±3.129**
88.961±3.660**
注：与Ⅱ组相比**P<0.01
③肝组织及血清MDA含量：川芎嗪保护组(Ⅲ、Ⅳ组)肝组织MDA含量显著低于损伤组(P<0.01)，见表1。表4显示损伤组MDA含量，各时相均高于Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ组，经统计学处理各组间有显著差异(P<0.01)。但Ⅲ和Ⅳ组之间无显著差异(P>0.05)。
, 百拇医药
表4 血清MDA含量(nmol/ml,
±s, n=4) 分组6h
12h
24h
48h
Ⅰ组
5.063±1.315
5.455±1.336
5.642±1.401
5.129±1.291
Ⅱ组
, 百拇医药
6.039±3.012
8.939±3.169
10.856±3.381
11.936±3.435
Ⅲ组
4.936±0.925
5.594±2.934
5.427±2.064
5.021±2.036
Ⅲ组
5.846±0.836
, 百拇医药 5.966±1.342
4.964±1.944
4.834±0.984
注：各组间比较P均<0.01
3 讨论
四氯化碳所致肝损伤模型，是经典的实验性肝损伤动物模型，其肝损伤机制主要是通过CCl4活性代谢物引起，CCl4在内质网依赖于细胞色素p-450混合功能氧化酶代谢，产生
和自由基，这些自由基既可与细胞内蛋白质、核酸等大分子发生共价键结合，也可攻击生物膜多聚不饱和脂质。导致脂质过氧化损害；脂质过氧化及共价键结合可导致细胞内浓度升高[5]，细胞内积聚又可激活一种使黄嘌呤脱氢变成黄嘌呤氧化酶的蛋白酶，同时由于细胞缺血缺氧。细胞内ATP升高，并分解成次黄嘌呤，次黄嘌呤作为黄嘌呤氧化酶基质，通过黄嘌呤氧化体系产生大量活性氧自由基()。加之白细胞在肝组织浸润及激活又可导致大量产生[7]，加重CCl4所致的膜脂质过氧化作用。, 百拇医药
SOD、GSH-Px是
特异性清除剂，MDA是脂质过氧化物(LPO)的代谢产物，所以测定SOD、GSH-Px及MDA可反映自由基生成及清除情况。本实验结果表明，川芎嗪能明显降低CCl4引起的SOD及GSH-Px耗竭，能明显降低肝组织MDA生成量。根据本实验及其他报道[4,5]，川芎嗪可能通过下列途径发挥抗自由基作用；(1)抑制黄嘌呤氧化酶形成，保护内源性SOD和GSH-Px活性[8]；(2)通过抑制血小板聚集、溶解血栓作用，扩张小动脉、降低血管阻力[2]，改善肝微循环、改善肝脏能量代谢、阻断CCl4损伤后氧自由基对肝脏进一步损伤。总之，川芎嗪能显著提高肝组织及血清SOD及GSH-Px活性，减少MDA含量，有一定程度抗自由基及抗脂质过氧化作用，对CCl4性肝损伤有较为肯定的保护作用。
, 百拇医药
参考文献
1.北京制药工业研究所.川芎嗪有效成分的研究.中华医学杂志,1991,61(7)420
2.徐理纳.关于活血化瘀药研究途径的概况.中医杂志,1995;7:74
3.郭忠兴,李怀荆,张明远.川芎嗪注射液对老年大鼠SOD活性和MDA含量的影响.佳木斯医学院学报,1996,19(5)10
4.郭忠兴,徐志敏,当归和川芎嗪对老年大鼠脑、肝MAO-B活性的影响.老年学杂志,1993;13(6):62
5.郭忠兴,郭朝阳.川芎嗪对老龄大鼠脑、心、肝过氧化脂质含量的影响.佳木斯医学院学报,1997,20(1)11
6.Waller RL. Carbon-tetrachloride and bromotrichloromethane toxity.Biochemical pharmacol, 1987;32:1613
, http://www.100md.com
7.Fantone JC. Rale of oxygen-derived free radical and metabolites in leukocyte dependent inflammatory reactions. Am J pathol 1986;107:397
8.Li X. protection effects of panax notogiseng saponin on experimental myocardial injury induced by ischemia and reperfusion in rat. Acta pharmacol sin, 1994;11:26
(2000-02-20收稿 2000-03-05修回), http://www.100md.com