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编号:10283770
视网膜表面膜的电镜标本制备方法
http://www.100md.com 《第二军医大学学报》 2000年第6期
     作者:颜永碧 谢志芳 陆月良

    单位:颜永碧(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室,上海 200433);谢志芳(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室,上海 200433);陆月良(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室,上海 200433)

    关键词:视网膜;表面膜;超薄切片;显微镜检查,电子

    第二军医大学学报000628 【中图分类号】 R 774.12 【文献标识码】 B

    【文章编号】 0258-879X(2000)06-0507-01

    病变视网膜表面的一层膜在眼底病诊断中有重要意义,但其不仅组织薄,而且非常软,手术取下来的表面膜组织易卷缩在一起,须飘浮在液体表面才能展开。视网膜表面膜如用常规电镜标本制样方法显示不出其细胞层次。为了能很好地观察表面膜组织中各种细胞形态及它们相互之间的关系,我们摸索出了一种简单、方便、易行的方法,现报告如下。

    1 材料和方法

    标本为上海市第一人民医院眼科收治的孔源性视网膜脱离,PVR分级C2以上,进行玻璃体手术治疗患者的视网膜表面膜。标本用2%多聚甲醛+0.5%戊二醛(0.2 mol/L二甲砷酸钠缓冲液配制,pH 7.4)固定4 h,经0.1 mol/L二甲砷酸钠缓冲液漂洗数次,然后将1滴22%的白蛋白滴在清洁载玻片上,用解剖针或牙签轻轻地把视网膜表面膜捞入白蛋白中,让它自然铺展,再滴3%戊二醛2~3滴于白蛋白上,微波高火力固定5 s (微波炉型号National 6850,800 W,245 MHz),室温放置2 min,使白蛋白和戊二醛固定凝成块状。微波固定时,在标本周围加适量冷水,使温度不超过35℃。然后用双面刀片从底部刮下,修掉没有组织的部分,再用0.1 mol/L二甲砷酸钠缓冲液漂洗后、经1%锇酸后固定2 h,逐级酒精脱水,用多角孔的平板把标本块竖立包埋,切厚片定位,超薄切片,铀-铅染色,H-800透射电镜观察。

    2 结果和讨论

    应用上述方法制作的视网膜表面膜,有如下优点: (1)用22%白蛋白能将皱缩、折叠的视网膜表面膜自然铺展,经戊二醛固定凝成块状,这样不仅使表面膜标本展平,也使之有了支撑作用,使脱水、包埋、切片等过程能顺利进行。以前我室曾以琼脂作为预包埋剂,虽然也能将膜展开并凝成块状,但温度不易掌握,液体容易随着组织一起带入琼脂使其凝块不理想。还须将膜组织直接覆在多聚赖氨酸涂片上,进行倒扣包埋,结果不如用白蛋白与戊二醛的固定效果好。 (2)视网膜表面膜很薄,加之周围有白蛋白支撑,故在行超薄切片时,用白蛋白凝块较琼脂凝块的样品好切,如同肝、肾组织一样能切成厚薄均匀的连续切片。(3)用多角孔的平板包埋视网膜表面膜,使组织块竖立在多角孔的包埋板中,超薄切片时,通过不同的角度调整切片方向,选择最佳切片部位,使之能同时切到表面膜的全层,以便在电镜下进行观察其各个层次细胞形态,为研究视网膜脱离与表面膜各层细胞之间的关系,提供稳定、可靠的技术方法。

    【作者简介】颜永碧(1953~),女(汉族),高级实验师

    【收稿日期】2000-02-05

    【修回日期】2000-06-07, http://www.100md.com