双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究水中菌落总数的测定国际标准的应用双歧杆菌DM9227和乳酸杆菌DM8121质粒的检测及药敏试验双歧杆菌粘附对肠上皮癌细
作者：程 茜 刘作义
单位：重庆医科大学儿童医院 400014
关键词：双歧杆菌；鼠伤寒沙门菌
双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究 摘 要 目的 以小鼠为模型，研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium， STM)感染的防治作用。方法 分别用大剂量悉复欢、B.bifidum、生理盐水(NS)给三组小鼠灌胃，再用STM攻击，观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和STM攻击后粪便STM培养阳性率，阳性标本STM分离值及小鼠STM感染率；同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗STM感染的小鼠，观察并比较疗效。结果 1.大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低，而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便STM培养阳性率、阳性粪便STM值明显低于用大剂量悉复欢和NS的小鼠，小鼠STM感染发病率也明显较低。2.对于STM感染鼠，双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论 1.双歧杆菌在体内对STM有拮抗作用；能预防和减少STM感染发生；2.在STM感染时，先用悉复欢，再用双歧杆菌可以达到预期疗效，双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。
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THE PREVENTIVE AND THERAPEUTIC EFFECTS OF BIFIDOBACTERIUM
ON SALMONELLA TYPHIMURIUM INFECTION IN MICE
Cheng Qian,Liu Zuo Yi.
Children′s Hospital of Chongqing University of Medical Sciences 400014
Abstract Objective To investigate whether Bifidobacterium bifidum (B.bifidum)have preventive and/or therapeutically effects on STM in fection in mice.Methods B.bifidum,physical saline (NS) of large dose of Ciprofloxacin was infused into mouse stomachs in three groups separately.Then,salmonella typhimurium(STM) was infused in all three groups.The feces were cultured for identifying Bifidobacterium and STM individually.The Bifidobacterium and STM were counted also.Results Bifidobacterium in intestines of the mice infused with large dose of ciprofloxacin decreased.But the Bifidobacterium in intestines of the mice infused B.bifidum increased.The rate of positive STM culture in feces and the morbidity of STM infection in the groups that were infused with B.bifidum were lower than the figures in groups infused with large dose of Ciprogloxacin or NS. The effect of combination of ciprofloxacin and B.bifidum was greater than that of ciprofloxacin or B.bifidum alone in STM infection.Conclusions Bifidobacterium is antagonistic and inhibitory to STM and has preventive effects on STM infection.It is batter to use ciprofloxacin prior to B.bifidum in the treatment of STM infection.However,B.bifidum serves as an auxiliary therapy only.
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Key words Bifidobacterium Salmonella typhimurium Prevention Therapy
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium STM)感染是一个世界性卫生问题，尤其在发展中国家，STM是小儿腹泻病的重要病原，也是医院内感染的主要原因之一[1，2]。近年来，新生儿室STM感染暴发流行以及免疫低下者中STM严重感染仍然屡见不鲜[3，4]。但其发病机理未完全阐明，防治其感染一直是棘手的问题。双歧杆菌(Bifidobacterium)是革兰氏阳性无芽孢厌氧杆菌，是人和某些哺乳动物肠道内主要正常菌群。有研究[5，6]表明：一些肠道病原致病与双歧杆菌关系密切，临床亦观察到含双歧杆菌的微生态制剂对防治肠道感染有效。但双歧杆菌对STM感染防治的研究少见报道。故本研究欲从小鼠动物模型研究双歧杆菌对STM的防治作用。研究结果将为STM感染的防治提供新思路。
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1 材料与方法
1.1 动物 NIH小鼠由重庆医科大学实验动物中心提供。符合国家一级动物标准。
1.2 菌种 Bifidobacterium bifidum(B.bifidum菌种号851101)，由重庆医科大学检验系临床微生物教研室提供。STM(菌种50115，购自卫生部中国药品生物制品检定所)。
1.3 培养基 改良BL培养基[7]、BS平板[7]，SS培养基、三糖铁培养基(购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所)。
1.4 沙门菌诊断血清 购自卫生部兰州生物制品研究所。
1.5 悉复欢 广州白云山制药厂生产。按人与动物等效剂量折算公式[8]计算，算出量为小鼠治疗用量2.5mg/10g.d；扩大10倍为灌胃量。
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1.6 预防作用
1.6.1 随机抽取40只小鼠作STM带菌情况调查。
1.6.2 动物分组及处理 100只小鼠随机分成4组，每组25只。A组为空白对照组，自由进食和水7天；B组为生理盐水对照组，用0.9%NS灌胃，0.5ml/只.次，Bid×7天；C组为悉复欢组，用悉复欢灌胃，25mg/10g.d Bid×7天；D组为双歧杆菌组，先用悉复欢灌胃，25mg/10g.d，Bid×3天，再用B.bifidum灌胃0.5ml/只.次，Bid×4天(相当于7.5×107个双歧杆菌)。STM攻击：上述各组小鼠分别用STM菌液灌胃，0.5ml/只，1次(相当于5.0×107)。粪便标本的采集：各组分别于处理前后收集每只鼠粪便做双歧杆菌培养、计数。STM攻击后1、2、3天收集每只鼠粪便做STM培养、计数。
, 百拇医药
1.6.3 双歧杆菌培养方法，见文献[7]。STM培养方法，见文献[9]。
1.6.4 细菌计数 每克大便含双歧杆菌及STM量(CFU/ml)=菌落数×47×相应稀释度，以均值加减标准差(X±S)取Lg对数值表示。
1.6.5 记录STM攻击后各组小鼠发病的临床表现，凡有体重减轻、毛发竖立、食量下降、活动减少、反应不灵活和/或大便性状改变者，均算发病。
1.7 治疗作用
1.7.1 动物分组及处理 将40只雄性有鼠伤寒沙门菌感染的NIH小鼠随机分为4组，每组各10只。各组于治疗开始前分别做粪便鼠伤寒沙门菌培养计数。Ⅰ组为对照组，自由进食进水7天。Ⅱ组为悉复欢治疗组。用悉复欢灌胃2.5mg/10g.d，Bid×7天。Ⅲ组为双歧杆菌治疗组，用双歧杆菌液灌胃Bid×7天。Ⅳ组为悉复欢+双歧杆菌治疗组，先用悉复欢，2hr～3hr后再用B.bifidum灌胃Bid×7天。
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1.7.2 于治疗后1、3、5、7天收集小鼠粪便做鼠伤寒沙门菌分离培养、鉴定和计数。同时记录小鼠临床表现。
1.8 统计学处理 采用t检验、配对t检验，单因素方差分析，两因素方差分析，组间比较用Q检验。率的比较采用行×列表的X2检验。
2 结 果
2.1 预防作用
2.1.1 正常NIH小鼠肠道STM携带情况40只小鼠进行大便培养结果均未发现有STM生长，表明正常状态下，NIH小鼠肠道无STM携带。
2.1.2 各组小鼠处理前后肠道双歧杆菌变化，见表1。
表1 处理前后各组小鼠粪便双歧杆菌变化
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(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
处理前
7.33±0.40
7.29±0.28
, 百拇医药 7.15±0.68
7.37±0.30
处理后
7.29±0.32
7.14±0.20
4.22±1.05*
9.31±0.33*
注：表示P<0.001(配对t检验)
2.1.3 各组小鼠被STM攻击后不同时间培养阳性率，如表2所示。
表2 STM攻击后不同时间各组小鼠粪便STM培养阳性率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(动物培养阳性数/实验动物数)
1天
60(15/25)
48(12/25)
100(25/25)a
12(3/25)aab
, 百拇医药
39.88
<0.001
2天
60(15/25)
68(17/25)
100(23/23)a
20(5/25)aab
32.96
<0.001
3天
60(15/25)
, http://www.100md.com 66.7(16/24)
100(19/19)a
28(7/25)aab
23.99
<0.001
注：与对照组相比较，a表示P<0.005，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.1.4 各组小鼠被STM攻击后不同时间STM分离情况，如表3所示。
表3 STM攻击后双歧杆菌组与悉复欢组粪便STM值比较(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
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n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
F值
P
1GD
8.35±0.47
8.51±0.45
9.16±0.27a
, 百拇医药
7.93±0.36ab
21.52
<0.001
2天
8.59±0.41
8.60±0.49
9.36±0.34a
7.92±0.44ab
25.89
<0.001
3天
, 百拇医药
8.29±0.32
8.48±0.36
9.82±0.29a
7.81±0.42ab
88.91
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，与悉复欢组比较b表示P<0.01。
2.1.5 各组被STM攻击后不同时间发病率，从表4可见各组均有发病，以悉复欢组最为明显共死亡6只(6/25，达24%)。双歧杆菌组发病率最低。
表4 STM攻击后不同时间各组发病率(%)
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空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(发病动物数/实验动物数)
1天
60(15/25)
36(9/25)
68(17/25)aa
4(1/25)aab
, 百拇医药
25.45
<0.001
2天
52(13/25)
56(14/25)
87(20/23)a
16(4/25)aab
24.40
<0.001
3天
52(13/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
84.2(16/19)a
20(5/25)aab
20.19
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.2 治疗作用
2.2.1 各组治疗前粪STM分离值相差不显著(P>0.05)。
2.2.2 治疗后不同时间小鼠粪便鼠伤寒沙门菌分离情况，见表5。
, 百拇医药
表5 STM感染小鼠治疗后不同时间粪便STM分离情况(CFU/g，以Lg表示)
对照组
n=10
悉复欢治疗组
n=10
双歧杆菌治疗组
n=10
悉复欢+双歧杆菌治疗组
n=10
F值
P
1天
, 百拇医药
9.45±0.24a
8.41±0.36
9.33±0.26b
8.43±0.43
40.47
<0.001
3天
9.20±0.27
7.24±0.31
8.30±0.27b
7.34±0.32
, 百拇医药
76.64
<0.001
5天
8.62±0.18
7.34±0.30
8.23±0.23
6.21±0.28
179.01
<0.001
7天
8.50±0.15
6.18±0.28
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8.04±0.28
5.09±0.47
164.47
<0.001
注：组间比较用Q检验。a表示治疗第一天对照组与双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，b表示治疗第三天悉复欢治疗组与悉复欢+双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，其余P值均小于0.05。
2.2.3 各组治疗后小鼠粪便鼠伤寒沙门菌培养转阴率，见表6。
表6 各组治疗后不同时间小鼠粪便STM转阴率(%)
对照组
悉复欢治疗组
, 百拇医药
双歧杆菌治疗组
悉复欢+双歧杆菌治疗组
X2值
P
1天
0
0
0
0
0
>0.05
3天
10
, 百拇医药
0
0
20
0.39
>0.05
5天
10
30
20
20
1.24
>0.05
7天
, http://www.100md.com 10
20
20
40
2.71
>0.05
注：各组N为10。
3 讨 论
STM感染是婴幼儿腹泻和医院内感染的重要原因。我们用小鼠模型体内研究证明，用悉复欢3天清除或破坏肠道双歧杆菌，再加续用B.bifidum液灌胃，小鼠粪便中双歧杆菌数量明显增多(7.37±0.30升至9.31±0.33)，当STM攻击后小鼠粪便STM培养阳性率、阳性大便分离STM值、STM感染发病率明显低于对照组，而用悉复欢7天彻底破坏小鼠肠道正常菌群，则小鼠粪便双歧杆菌数量明显减少(7.15±0.68降至4.22±1.05)，STM攻击后小鼠的STM值、STM培养阳性率、发病率则明显高于对照组。说明在本实验条件下，双歧杆菌的增加可以使大便STM培养阳性率降低，STM定植减少，STM感染发病率下降。提示在体内双歧杆菌有拮抗STM的作用，可以预防或减少STM感染发生。
, 百拇医药
双歧杆菌作为正常菌群中的优势菌，在肠道与其它正常菌群一起构成了阻止外来菌入侵的定植抗力。关于双歧杆菌对肠道病原体生物拮抗作用的机理，目前认为有以下几种可能：(1)在肠粘膜表面形成一层生物菌膜，抑制致病菌粘附到肠粘膜上，起到占位性保护作用；(2)代谢过程中产生有机酸如乙酸、乳酸等，降低肠道pH和氧化还原电势(Eh)，抑制致病菌繁殖；(3)调节和协同其他肠道菌群，促进肠蠕动，使致病菌粘附到肠粘膜上的机会减少；(4)产生抗菌物质，直接杀伤致病菌；(5)减少或弱化肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素受体，使其致病作用受阻。
从双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌治疗作用的实验可以看出，悉复欢和双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌都有抑制作用，但悉复欢与双歧杆菌联合使用抑制鼠伤寒沙门菌的作用更强。并且随着治疗时间的延长，鼠伤寒沙门菌菌量值逐渐减少(治疗前与治疗后第7天比较P<0.05)。不同治疗显示，悉复欢组在第5天时比双歧杆菌组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率高，第7天上则两组相似。悉复欢与双歧杆菌联合组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率最高。这表明，悉复欢和双歧杆菌在治疗鼠伤寒沙门菌感染时有协同作用。同时，也可能说明，在致病菌已入侵的前提下，双歧杆菌更多是利用产酸降低pH、Eh，调整肠道菌群等作用来发挥生物拮抗作用，而占位性保护失去了效力。特别是治疗刚开始时，外源双歧杆菌要与鼠伤寒沙门菌竞争肠粘膜结合位点，代谢尚不够旺盛。而当抗生素使用先杀灭了鼠伤寒沙门菌，外源双歧杆菌的使用可以重新占据肠粘膜结合位点，并与其他肠道正常菌群一道，发挥拮抗致病菌的综合效应，使鼠伤寒沙门菌部分或全部被清除。因此，应该说双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染的治疗作用是辅助作用。
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参考文献
1 From the centers for disease control and prevention. Multidrugresistant Salmonella serotype typhimurium United States. 1996. JAMA. 1997 May 21;277(19):1513
2 Threlfall EJ,Frost JA,et al.Increasing sectrum of resistance in multiresistant Salmonella typhimurium.Lancet,1996 Apr 13;347(9007):1053-1054
3 Kumar A,Nath G,Bhatia BD,et al.An outbreak of multidrug resistant salmonlla typhimurium in a nursery.Indiam Pediatr.1995 Aug;32(8):881-885
, 百拇医药
4 Solodovnikov Iup,Lytkina IN,Filatov NN,et al.Salmonellosis in Moscow:its epidemiolgical characteristics and the provention tasks Zh Mikrobil Epidemiol Immunobiol.1996 Jul-Aug;(4);46-49
5 Saavedra JM,Bauman NA,Oung I,et al.Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention diarrhea and shedding of rotavirus.Lancet.1994;344:1046-1049
6 戴立人，龚丽君.急性痢疾肠道菌群变化及双歧杆菌活菌制剂疗效观察.中国微生态学杂志.1991；3(1)：34-36
, 百拇医药
7 陈敏聪，王文凤.厌氧菌及其感染.上海医科大学出版社.1992.第二版
8 药理学实验.人民卫生出版社.1985.第一版
9 冯仁丰主编.实用医学检验学.上海科技大学出版社.1996.第二版
(收稿日期：1999-04-12)
中国微生态学杂志 1999年第1期第11卷 技术与方法
水中菌落总数的测定国际标准的应用
作者：张淑兰 于凌琪 韩秀媛 路金爽
单位：张淑兰 于凌琪 韩秀媛 路金爽 天津市卫生防病中心 天津 300011
关键词：
, http://www.100md.com
中国微生态学杂志 1999年第4期第11卷 论著
双歧杆菌DM9227和乳酸杆菌DM8121质粒的检测及药敏试验
作者：易 庆 王关林 袁杰利 文 姝
单位：
关键词：双歧杆菌；乳酸杆菌；质粒；药敏试验
中国微生态学杂志 2000年第3期第12卷 论 著
双歧杆菌粘附对肠上皮癌细胞酶的影响
作者：葛常辉 蒋寒青 杨佩满 康白
单位：葛常辉 杨佩满(大连医科大学 医学细胞分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023)；蒋寒青 康白(大连医科大学 微生态学研究所，辽宁 大连 116023)
关键词：双歧杆菌；粘附；大肠癌., 百拇医药
单位：重庆医科大学儿童医院 400014
关键词：双歧杆菌；鼠伤寒沙门菌
双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究 摘 要 目的 以小鼠为模型，研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium， STM)感染的防治作用。方法 分别用大剂量悉复欢、B.bifidum、生理盐水(NS)给三组小鼠灌胃，再用STM攻击，观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和STM攻击后粪便STM培养阳性率，阳性标本STM分离值及小鼠STM感染率；同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗STM感染的小鼠，观察并比较疗效。结果 1.大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低，而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便STM培养阳性率、阳性粪便STM值明显低于用大剂量悉复欢和NS的小鼠，小鼠STM感染发病率也明显较低。2.对于STM感染鼠，双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论 1.双歧杆菌在体内对STM有拮抗作用；能预防和减少STM感染发生；2.在STM感染时，先用悉复欢，再用双歧杆菌可以达到预期疗效，双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。
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THE PREVENTIVE AND THERAPEUTIC EFFECTS OF BIFIDOBACTERIUM
ON SALMONELLA TYPHIMURIUM INFECTION IN MICE
Cheng Qian,Liu Zuo Yi.
Children′s Hospital of Chongqing University of Medical Sciences 400014
Abstract Objective To investigate whether Bifidobacterium bifidum (B.bifidum)have preventive and/or therapeutically effects on STM in fection in mice.Methods B.bifidum,physical saline (NS) of large dose of Ciprofloxacin was infused into mouse stomachs in three groups separately.Then,salmonella typhimurium(STM) was infused in all three groups.The feces were cultured for identifying Bifidobacterium and STM individually.The Bifidobacterium and STM were counted also.Results Bifidobacterium in intestines of the mice infused with large dose of ciprofloxacin decreased.But the Bifidobacterium in intestines of the mice infused B.bifidum increased.The rate of positive STM culture in feces and the morbidity of STM infection in the groups that were infused with B.bifidum were lower than the figures in groups infused with large dose of Ciprogloxacin or NS. The effect of combination of ciprofloxacin and B.bifidum was greater than that of ciprofloxacin or B.bifidum alone in STM infection.Conclusions Bifidobacterium is antagonistic and inhibitory to STM and has preventive effects on STM infection.It is batter to use ciprofloxacin prior to B.bifidum in the treatment of STM infection.However,B.bifidum serves as an auxiliary therapy only.
, http://www.100md.com
Key words Bifidobacterium Salmonella typhimurium Prevention Therapy
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium STM)感染是一个世界性卫生问题，尤其在发展中国家，STM是小儿腹泻病的重要病原，也是医院内感染的主要原因之一[1，2]。近年来，新生儿室STM感染暴发流行以及免疫低下者中STM严重感染仍然屡见不鲜[3，4]。但其发病机理未完全阐明，防治其感染一直是棘手的问题。双歧杆菌(Bifidobacterium)是革兰氏阳性无芽孢厌氧杆菌，是人和某些哺乳动物肠道内主要正常菌群。有研究[5，6]表明：一些肠道病原致病与双歧杆菌关系密切，临床亦观察到含双歧杆菌的微生态制剂对防治肠道感染有效。但双歧杆菌对STM感染防治的研究少见报道。故本研究欲从小鼠动物模型研究双歧杆菌对STM的防治作用。研究结果将为STM感染的防治提供新思路。
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1 材料与方法
1.1 动物 NIH小鼠由重庆医科大学实验动物中心提供。符合国家一级动物标准。
1.2 菌种 Bifidobacterium bifidum(B.bifidum菌种号851101)，由重庆医科大学检验系临床微生物教研室提供。STM(菌种50115，购自卫生部中国药品生物制品检定所)。
1.3 培养基 改良BL培养基[7]、BS平板[7]，SS培养基、三糖铁培养基(购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所)。
1.4 沙门菌诊断血清 购自卫生部兰州生物制品研究所。
1.5 悉复欢 广州白云山制药厂生产。按人与动物等效剂量折算公式[8]计算，算出量为小鼠治疗用量2.5mg/10g.d；扩大10倍为灌胃量。
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1.6 预防作用
1.6.1 随机抽取40只小鼠作STM带菌情况调查。
1.6.2 动物分组及处理 100只小鼠随机分成4组，每组25只。A组为空白对照组，自由进食和水7天；B组为生理盐水对照组，用0.9%NS灌胃，0.5ml/只.次，Bid×7天；C组为悉复欢组，用悉复欢灌胃，25mg/10g.d Bid×7天；D组为双歧杆菌组，先用悉复欢灌胃，25mg/10g.d，Bid×3天，再用B.bifidum灌胃0.5ml/只.次，Bid×4天(相当于7.5×107个双歧杆菌)。STM攻击：上述各组小鼠分别用STM菌液灌胃，0.5ml/只，1次(相当于5.0×107)。粪便标本的采集：各组分别于处理前后收集每只鼠粪便做双歧杆菌培养、计数。STM攻击后1、2、3天收集每只鼠粪便做STM培养、计数。
, 百拇医药
1.6.3 双歧杆菌培养方法，见文献[7]。STM培养方法，见文献[9]。
1.6.4 细菌计数 每克大便含双歧杆菌及STM量(CFU/ml)=菌落数×47×相应稀释度，以均值加减标准差(X±S)取Lg对数值表示。
1.6.5 记录STM攻击后各组小鼠发病的临床表现，凡有体重减轻、毛发竖立、食量下降、活动减少、反应不灵活和/或大便性状改变者，均算发病。
1.7 治疗作用
1.7.1 动物分组及处理 将40只雄性有鼠伤寒沙门菌感染的NIH小鼠随机分为4组，每组各10只。各组于治疗开始前分别做粪便鼠伤寒沙门菌培养计数。Ⅰ组为对照组，自由进食进水7天。Ⅱ组为悉复欢治疗组。用悉复欢灌胃2.5mg/10g.d，Bid×7天。Ⅲ组为双歧杆菌治疗组，用双歧杆菌液灌胃Bid×7天。Ⅳ组为悉复欢+双歧杆菌治疗组，先用悉复欢，2hr～3hr后再用B.bifidum灌胃Bid×7天。
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1.7.2 于治疗后1、3、5、7天收集小鼠粪便做鼠伤寒沙门菌分离培养、鉴定和计数。同时记录小鼠临床表现。
1.8 统计学处理 采用t检验、配对t检验，单因素方差分析，两因素方差分析，组间比较用Q检验。率的比较采用行×列表的X2检验。
2 结 果
2.1 预防作用
2.1.1 正常NIH小鼠肠道STM携带情况40只小鼠进行大便培养结果均未发现有STM生长，表明正常状态下，NIH小鼠肠道无STM携带。
2.1.2 各组小鼠处理前后肠道双歧杆菌变化，见表1。
表1 处理前后各组小鼠粪便双歧杆菌变化
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(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
处理前
7.33±0.40
7.29±0.28
, 百拇医药 7.15±0.68
7.37±0.30
处理后
7.29±0.32
7.14±0.20
4.22±1.05*
9.31±0.33*
注：表示P<0.001(配对t检验)
2.1.3 各组小鼠被STM攻击后不同时间培养阳性率，如表2所示。
表2 STM攻击后不同时间各组小鼠粪便STM培养阳性率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(动物培养阳性数/实验动物数)
1天
60(15/25)
48(12/25)
100(25/25)a
12(3/25)aab
, 百拇医药
39.88
<0.001
2天
60(15/25)
68(17/25)
100(23/23)a
20(5/25)aab
32.96
<0.001
3天
60(15/25)
, http://www.100md.com 66.7(16/24)
100(19/19)a
28(7/25)aab
23.99
<0.001
注：与对照组相比较，a表示P<0.005，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.1.4 各组小鼠被STM攻击后不同时间STM分离情况，如表3所示。
表3 STM攻击后双歧杆菌组与悉复欢组粪便STM值比较(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
, http://www.100md.com
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
F值
P
1GD
8.35±0.47
8.51±0.45
9.16±0.27a
, 百拇医药
7.93±0.36ab
21.52
<0.001
2天
8.59±0.41
8.60±0.49
9.36±0.34a
7.92±0.44ab
25.89
<0.001
3天
, 百拇医药
8.29±0.32
8.48±0.36
9.82±0.29a
7.81±0.42ab
88.91
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，与悉复欢组比较b表示P<0.01。
2.1.5 各组被STM攻击后不同时间发病率，从表4可见各组均有发病，以悉复欢组最为明显共死亡6只(6/25，达24%)。双歧杆菌组发病率最低。
表4 STM攻击后不同时间各组发病率(%)
, http://www.100md.com
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(发病动物数/实验动物数)
1天
60(15/25)
36(9/25)
68(17/25)aa
4(1/25)aab
, 百拇医药
25.45
<0.001
2天
52(13/25)
56(14/25)
87(20/23)a
16(4/25)aab
24.40
<0.001
3天
52(13/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
84.2(16/19)a
20(5/25)aab
20.19
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.2 治疗作用
2.2.1 各组治疗前粪STM分离值相差不显著(P>0.05)。
2.2.2 治疗后不同时间小鼠粪便鼠伤寒沙门菌分离情况，见表5。
, 百拇医药
表5 STM感染小鼠治疗后不同时间粪便STM分离情况(CFU/g，以Lg表示)
对照组
n=10
悉复欢治疗组
n=10
双歧杆菌治疗组
n=10
悉复欢+双歧杆菌治疗组
n=10
F值
P
1天
, 百拇医药
9.45±0.24a
8.41±0.36
9.33±0.26b
8.43±0.43
40.47
<0.001
3天
9.20±0.27
7.24±0.31
8.30±0.27b
7.34±0.32
, 百拇医药
76.64
<0.001
5天
8.62±0.18
7.34±0.30
8.23±0.23
6.21±0.28
179.01
<0.001
7天
8.50±0.15
6.18±0.28
, http://www.100md.com
8.04±0.28
5.09±0.47
164.47
<0.001
注：组间比较用Q检验。a表示治疗第一天对照组与双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，b表示治疗第三天悉复欢治疗组与悉复欢+双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，其余P值均小于0.05。
2.2.3 各组治疗后小鼠粪便鼠伤寒沙门菌培养转阴率，见表6。
表6 各组治疗后不同时间小鼠粪便STM转阴率(%)
对照组
悉复欢治疗组
, 百拇医药
双歧杆菌治疗组
悉复欢+双歧杆菌治疗组
X2值
P
1天
0
0
0
0
0
>0.05
3天
10
, 百拇医药
0
0
20
0.39
>0.05
5天
10
30
20
20
1.24
>0.05
7天
, http://www.100md.com 10
20
20
40
2.71
>0.05
注：各组N为10。
3 讨 论
STM感染是婴幼儿腹泻和医院内感染的重要原因。我们用小鼠模型体内研究证明，用悉复欢3天清除或破坏肠道双歧杆菌，再加续用B.bifidum液灌胃，小鼠粪便中双歧杆菌数量明显增多(7.37±0.30升至9.31±0.33)，当STM攻击后小鼠粪便STM培养阳性率、阳性大便分离STM值、STM感染发病率明显低于对照组，而用悉复欢7天彻底破坏小鼠肠道正常菌群，则小鼠粪便双歧杆菌数量明显减少(7.15±0.68降至4.22±1.05)，STM攻击后小鼠的STM值、STM培养阳性率、发病率则明显高于对照组。说明在本实验条件下，双歧杆菌的增加可以使大便STM培养阳性率降低，STM定植减少，STM感染发病率下降。提示在体内双歧杆菌有拮抗STM的作用，可以预防或减少STM感染发生。
, 百拇医药
双歧杆菌作为正常菌群中的优势菌，在肠道与其它正常菌群一起构成了阻止外来菌入侵的定植抗力。关于双歧杆菌对肠道病原体生物拮抗作用的机理，目前认为有以下几种可能：(1)在肠粘膜表面形成一层生物菌膜，抑制致病菌粘附到肠粘膜上，起到占位性保护作用；(2)代谢过程中产生有机酸如乙酸、乳酸等，降低肠道pH和氧化还原电势(Eh)，抑制致病菌繁殖；(3)调节和协同其他肠道菌群，促进肠蠕动，使致病菌粘附到肠粘膜上的机会减少；(4)产生抗菌物质，直接杀伤致病菌；(5)减少或弱化肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素受体，使其致病作用受阻。
从双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌治疗作用的实验可以看出，悉复欢和双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌都有抑制作用，但悉复欢与双歧杆菌联合使用抑制鼠伤寒沙门菌的作用更强。并且随着治疗时间的延长，鼠伤寒沙门菌菌量值逐渐减少(治疗前与治疗后第7天比较P<0.05)。不同治疗显示，悉复欢组在第5天时比双歧杆菌组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率高，第7天上则两组相似。悉复欢与双歧杆菌联合组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率最高。这表明，悉复欢和双歧杆菌在治疗鼠伤寒沙门菌感染时有协同作用。同时，也可能说明，在致病菌已入侵的前提下，双歧杆菌更多是利用产酸降低pH、Eh，调整肠道菌群等作用来发挥生物拮抗作用，而占位性保护失去了效力。特别是治疗刚开始时，外源双歧杆菌要与鼠伤寒沙门菌竞争肠粘膜结合位点，代谢尚不够旺盛。而当抗生素使用先杀灭了鼠伤寒沙门菌，外源双歧杆菌的使用可以重新占据肠粘膜结合位点，并与其他肠道正常菌群一道，发挥拮抗致病菌的综合效应，使鼠伤寒沙门菌部分或全部被清除。因此，应该说双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染的治疗作用是辅助作用。
, http://www.100md.com
参考文献
1 From the centers for disease control and prevention. Multidrugresistant Salmonella serotype typhimurium United States. 1996. JAMA. 1997 May 21;277(19):1513
2 Threlfall EJ,Frost JA,et al.Increasing sectrum of resistance in multiresistant Salmonella typhimurium.Lancet,1996 Apr 13;347(9007):1053-1054
3 Kumar A,Nath G,Bhatia BD,et al.An outbreak of multidrug resistant salmonlla typhimurium in a nursery.Indiam Pediatr.1995 Aug;32(8):881-885
, 百拇医药
4 Solodovnikov Iup,Lytkina IN,Filatov NN,et al.Salmonellosis in Moscow:its epidemiolgical characteristics and the provention tasks Zh Mikrobil Epidemiol Immunobiol.1996 Jul-Aug;(4);46-49
5 Saavedra JM,Bauman NA,Oung I,et al.Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention diarrhea and shedding of rotavirus.Lancet.1994;344:1046-1049
6 戴立人，龚丽君.急性痢疾肠道菌群变化及双歧杆菌活菌制剂疗效观察.中国微生态学杂志.1991；3(1)：34-36
, 百拇医药
7 陈敏聪，王文凤.厌氧菌及其感染.上海医科大学出版社.1992.第二版
8 药理学实验.人民卫生出版社.1985.第一版
9 冯仁丰主编.实用医学检验学.上海科技大学出版社.1996.第二版
(收稿日期：1999-04-12)
中国微生态学杂志 1999年第1期第11卷 技术与方法
水中菌落总数的测定国际标准的应用
作者：张淑兰 于凌琪 韩秀媛 路金爽
单位：张淑兰 于凌琪 韩秀媛 路金爽 天津市卫生防病中心 天津 300011
关键词：
, http://www.100md.com
中国微生态学杂志 1999年第4期第11卷 论著
双歧杆菌DM9227和乳酸杆菌DM8121质粒的检测及药敏试验
作者：易 庆 王关林 袁杰利 文 姝
单位：
关键词：双歧杆菌；乳酸杆菌；质粒；药敏试验
中国微生态学杂志 2000年第3期第12卷 论 著
双歧杆菌粘附对肠上皮癌细胞酶的影响
作者：葛常辉 蒋寒青 杨佩满 康白
单位：葛常辉 杨佩满(大连医科大学 医学细胞分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023)；蒋寒青 康白(大连医科大学 微生态学研究所，辽宁 大连 116023)
关键词：双歧杆菌；粘附；大肠癌., 百拇医药