乙型肝炎病毒核心抗原核酸疫苗对猕猴的体液免疫原性观察
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南京医科大学学报 2000年第1期第20卷 科研简报
作者：黄祖瑚 庄辉 卢山 朱万孚 蔡洁 郭人花 朱永红
单位：黄祖瑚 蔡洁 郭人花(南京医科大学第一附属医院传染病科，南京 210029)；庄辉 朱万孚(北京医科大学微生物学系，北京 100083)；卢山 朱永红(美国马萨诸塞大学医学中心)
关键词：乙型肝炎病毒；核酸疫苗；猕猴
南京医科大学学报000127
核酸疫苗(DNA疫苗)能够有效地刺激机体的特异性免疫应答已经成为共识。鉴于乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)是机体细胞毒性T细胞(CTL)识别和攻击HBV感染肝细胞的主要靶抗原，我们构建了HBcAg核酸疫苗，并已观察到该核酸疫苗经不同接种方法免疫不同品系小鼠均可引起特异性体液免疫和细胞免疫应答。为进一步观察该核酸疫苗对非人灵长类动物的免疫原性，我们用该核酸疫苗接种猕猴，发现猕猴对该核酸疫苗具有良好的抗体应答反应。
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1 材料和方法
(1)HBcAg核酸疫苗的制备 HBcAg核酸疫苗(pJW4303/HBc)及对照质粒(pJW4303)分别转化工程菌HB101，经大量增菌后，采用QIAGEN质粒纯化试剂盒(德国)制备高纯度核酸疫苗及对照质粒。每800 ml菌液约可获得核酸疫苗或对照质粒2 mg。(2)猕猴来源及分组 3岁左右广西猕猴共4只，随机分为实验组和对照组，每组各2只猕猴。(3)核酸疫苗或对照质粒接种剂量、方法及程序 每只猕猴每次接种核酸疫苗或对照质粒2 mg。核酸疫苗或对照质粒以生理盐水配成1 mg/ml，总量为2 ml。每次在每只猕猴近臀部肌肉分4处各注射0.5 ml。接种程序为0月，第2月、第4月。每次接种时的剂量及方法相同。每次免疫前及末次接种后2个月时分别采集，置-30℃保存待测。(4)猕猴血清HBcAg特异性抗体(抗-HBc)的检测采用国产ELISA试剂，部分标本用雅培(ABBOTT)IMx检测系统检测。
2 结 果
, 百拇医药
HBcAg核酸疫苗接种前后猕猴血清HBcAg特异性抗体(抗-HBc)检测结果见表1。
表1 猕猴血清中抗-HBc检测结果 编号
接种材料
抗-HBc检测结果
0月
2月
4月
6月
＃1
pJW4303/HBc
-
+(0.117*)
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N/D**
N/D
＃2
pJW4303/HBc
-
-(2.073)
+(0.720)
+(0.153)
＃3
pJW4303
-
-
, 百拇医药 -(1.550)
-(1.688)
＃4
pJW4303
-
-
-(1.572)
-(1.900)
*括号内数值为Abbott Imx系统检测结果，<1.00者为抗-HBc阳性。**因死于无关疾病而未能进一步检测。
3 讨 论
从本文结果可以看出4只猕猴接种前血清中均未检出HBcAg的特异性抗体——抗-HBc，接种HBcAg核酸疫苗的2只猕猴(＃1和＃2)在接种后均产生了抗-HBc，而接种对照质粒的2只猕猴(＃3和＃4)在接种后均未能检出抗-HBc，说明HBcAg核酸疫苗已成功地刺激猕猴产生了特异性抗体应答。
, 百拇医药
就猕猴产生抗-HBc的时间而言，接种HBcAg核酸疫苗的2只猕猴中，＃1猕猴在第一次接种后就出现了高水平的抗-HBc，而＃2猕猴则在第二次接种后开始呈抗-HBc阳性，至第三次接种后才出现较高水平的抗-HBc。这一结果一方面提示HBcAg核酸疫苗具有良好的体液免疫原性，另一方面又反映出猕猴免疫应答的个体间差异。
核酸疫苗在理论上具有治疗慢性病毒感染性疾病的作用。HBcAg核酸疫苗用于治疗慢性乙型肝炎的可能性正在引起人们的关注。在小鼠实验中我们已经观察到HBcAg核酸疫苗具有良好的体液免疫和细胞免疫原性，现在我们又首次证实HBcAg核酸疫苗对于非人灵长类动物——猕猴也有良好的体液免疫原性，这就为今后进行HBcAg核酸疫苗的临床试验提供了重要依据。HBcAg核酸疫苗对猕猴的细胞免疫原性和安全性观察正在进行中。
卫生部科学研究基金资助项目(96-1-347)
(1999-11-23收稿), http://www.100md.com
单位：黄祖瑚 蔡洁 郭人花(南京医科大学第一附属医院传染病科，南京 210029)；庄辉 朱万孚(北京医科大学微生物学系，北京 100083)；卢山 朱永红(美国马萨诸塞大学医学中心)
关键词：乙型肝炎病毒；核酸疫苗；猕猴
南京医科大学学报000127
核酸疫苗(DNA疫苗)能够有效地刺激机体的特异性免疫应答已经成为共识。鉴于乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)是机体细胞毒性T细胞(CTL)识别和攻击HBV感染肝细胞的主要靶抗原，我们构建了HBcAg核酸疫苗，并已观察到该核酸疫苗经不同接种方法免疫不同品系小鼠均可引起特异性体液免疫和细胞免疫应答。为进一步观察该核酸疫苗对非人灵长类动物的免疫原性，我们用该核酸疫苗接种猕猴，发现猕猴对该核酸疫苗具有良好的抗体应答反应。
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1 材料和方法
(1)HBcAg核酸疫苗的制备 HBcAg核酸疫苗(pJW4303/HBc)及对照质粒(pJW4303)分别转化工程菌HB101，经大量增菌后，采用QIAGEN质粒纯化试剂盒(德国)制备高纯度核酸疫苗及对照质粒。每800 ml菌液约可获得核酸疫苗或对照质粒2 mg。(2)猕猴来源及分组 3岁左右广西猕猴共4只，随机分为实验组和对照组，每组各2只猕猴。(3)核酸疫苗或对照质粒接种剂量、方法及程序 每只猕猴每次接种核酸疫苗或对照质粒2 mg。核酸疫苗或对照质粒以生理盐水配成1 mg/ml，总量为2 ml。每次在每只猕猴近臀部肌肉分4处各注射0.5 ml。接种程序为0月，第2月、第4月。每次接种时的剂量及方法相同。每次免疫前及末次接种后2个月时分别采集，置-30℃保存待测。(4)猕猴血清HBcAg特异性抗体(抗-HBc)的检测采用国产ELISA试剂，部分标本用雅培(ABBOTT)IMx检测系统检测。
2 结 果
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HBcAg核酸疫苗接种前后猕猴血清HBcAg特异性抗体(抗-HBc)检测结果见表1。
表1 猕猴血清中抗-HBc检测结果 编号
接种材料
抗-HBc检测结果
0月
2月
4月
6月
＃1
pJW4303/HBc
-
+(0.117*)
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N/D**
N/D
＃2
pJW4303/HBc
-
-(2.073)
+(0.720)
+(0.153)
＃3
pJW4303
-
-
, 百拇医药 -(1.550)
-(1.688)
＃4
pJW4303
-
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-(1.572)
-(1.900)
*括号内数值为Abbott Imx系统检测结果，<1.00者为抗-HBc阳性。**因死于无关疾病而未能进一步检测。
3 讨 论
从本文结果可以看出4只猕猴接种前血清中均未检出HBcAg的特异性抗体——抗-HBc，接种HBcAg核酸疫苗的2只猕猴(＃1和＃2)在接种后均产生了抗-HBc，而接种对照质粒的2只猕猴(＃3和＃4)在接种后均未能检出抗-HBc，说明HBcAg核酸疫苗已成功地刺激猕猴产生了特异性抗体应答。
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就猕猴产生抗-HBc的时间而言，接种HBcAg核酸疫苗的2只猕猴中，＃1猕猴在第一次接种后就出现了高水平的抗-HBc，而＃2猕猴则在第二次接种后开始呈抗-HBc阳性，至第三次接种后才出现较高水平的抗-HBc。这一结果一方面提示HBcAg核酸疫苗具有良好的体液免疫原性，另一方面又反映出猕猴免疫应答的个体间差异。
核酸疫苗在理论上具有治疗慢性病毒感染性疾病的作用。HBcAg核酸疫苗用于治疗慢性乙型肝炎的可能性正在引起人们的关注。在小鼠实验中我们已经观察到HBcAg核酸疫苗具有良好的体液免疫和细胞免疫原性，现在我们又首次证实HBcAg核酸疫苗对于非人灵长类动物——猕猴也有良好的体液免疫原性，这就为今后进行HBcAg核酸疫苗的临床试验提供了重要依据。HBcAg核酸疫苗对猕猴的细胞免疫原性和安全性观察正在进行中。
卫生部科学研究基金资助项目(96-1-347)
(1999-11-23收稿), http://www.100md.com