抗ENA多肽抗体对自身免疫病诊断价值探讨
作者：敬永霞 何兰 张国元 周祖寅 唐中 代晓峰
单位：川北医学院附属医院检验科 南充 637000
关键词：
川北医学院学报990361
文章编号：1005-3697(1999)03—0082—02 中图分类号：R446.62 文献标识码：A
自身免疫病又称结缔组织病，也称作风湿病[1]。这类疾病有很高的发病率。我们采用万孚生物技术有限公司研制的具有国际先进生物技术——免疫印迹技术，将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(ENA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维膜上。可一次检测10种自身多肽抗体。用于系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、硬皮病(PSS)、干燥综合症(SS)、类风湿性关节炎、多发生性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)等多种不同风湿病的诊断，与酶免疫法比较具有敏感性高、特异性强、用血量少(仅10ul)、操作简便、快速等优点，可为临床及时提供诊断疾病的依据。
, http://www.100md.com
1 资料和方法
1.1 临床资料 各种自身免疫病患者269例，男性42例，女性227例，年龄在10～70岁，均是我院门诊和住院病人，诊断符合国际诊断标准。正常对照100例，男性42例，女性58例，年龄在18～36岁，为体检正常人。检测标本均为静脉血清。
1.2 方 法 应用免疫印迹法技术(IBT)，检测ENA多肽抗体谱。试剂盒为万孚生物技术有限公司产品。按说明书操作，每次检测10种自身多肽抗体，即抗SM抗体、抗u1RNP抗体、抗 SS-A、抗SS-B、抗J0-1、抗rRNP、抗SCL-70、抗Liu(D′E)、抗DM-53、抗RA-54抗体等。
应用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)，以自制小白鼠肝片为抗原底物，血清以1∶5倍比稀释，阳性结果检测最高稀释度。
1.3 结果判断 将待测的膜条显色区带与标准抗体谱带图对照，即可查出对应色带的分子量与相应的特异性抗体。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 抗ENA抗体检测结果见表1 136例SLE患者，55例MCTD，39例SS，12例PSS和18例RA患者均为阳性，9例PM/DM除1例阴性外，余全部为阳性，对照组全部为阴性。通过X2检验，P<0.01，可以认为，自身免疫病患者与正常人血清中抗ENA抗体水平差异有显著性。
表1 269例自身免疫病患者抗ENA抗体检测结果 抗体名称
阳性例数及阳性率
SLE
MCTD
SS
PSS
PM/DM
, 百拇医药
PA
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
SM
, 百拇医药
38
27.9
SSA+SSB
26
19.1
18
46
6
33.4
SM+u1RNP
26
19.1
4
, 百拇医药
22.2
SSA+u1RNP
13
24.0
u1RNP
24
17.6
28
51.0
2
16.5
rRNP
16
, 百拇医药
11.8
2
16.5
SSA
6
4.4
14
36.0
2
17.0
2
22.0
4
, http://www.100md.com 22.2
SSB
3
5.0
7
18.0
2
22.0
SCL-70
6
50.0
D′E(Liu)
11
, http://www.100md.com
20.0
SA-54
4
22.2
J0-1
3
33.4
DM-53
1
11.1
2.2 ANA结果见表2 136例SLE患者ANA全部阳性，55例MCTD有54例阳性，39例SS患者有26例阳性，12例PSS患者有9例阳性，9例PM/DM患者有6例阳性。18例RA患者有6例阳性。对照组全部阴性，两组比较，差异有显著性(P<0.01)。表 269例自身免疫病患者ANA检测结果 抗体名称
, 百拇医药
阳性例数及阳性率
SLE
MCTD
SS
PSS
PM/DM
PA
例数
%
例数
%
例数
%
, http://www.100md.com 例数
%
例数
%
例数
%
ANA
136
100
54
98
26
66
9
, 百拇医药
75
6
66
6
33
3 讨 论
近年来，随着免疫学的发展，对自身免疫性疾病有了更进一步研究。SLE等自身免疫病，病变常常累及多种组织与器官，存在多种免疫学异常。其中一典型特征就是体内产生多种针对正常细胞不同成分的自身抗体，这些抗体又对疾病产生各种不同的影响，已证实其中一些自身抗体与特定的疾病有相关性。本文结果表明，抗SM抗体，阳性率27.9%，抗u1RNP抗体阳性17.6%，两项双重阳性19.1%，以往认为抗SM抗体是SLE的标记抗体，对SLE有高度的特异性，但抗SM抗体阳性的SLE患者中同时伴有抗u1RNP抗体、SS-A+SS-B抗体、同样对SLE有重要的诊断意义。
, 百拇医药
对于MCTD的诊断，以往只局限于抗u1RNP抗体。虽然MCTD患者的抗u1RNP抗体的阳性率较高，本文结果为51%，但该种抗体的特异性较低，几乎多种风湿病都可出现抗u1RNP抗体，因此，不能完全依赖抗u1RNP抗体阳性来诊断MCTD。本文结果还显示，269例风湿病中，抗Liu多肽抗体仅见于MCTD患者，阳性率20%，这表明Liu蛋白多肽的抗原表位具有MCTD的疾病特异性[2]，因此，抗Liu多肽抗体的检测，有助于提高MCTD的诊断水平。在PSS的诊断中，抗SCL-70的阳性率高达50%，并且特异性较强。抗RA-54是类风湿病的标记性抗体，但阳性率较低，仅为22.2%。
ANA是以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称[3]，不同的自身免疫性疾病有不同的抗核抗体谱。本文用免疫荧光法检测269例自身免疫病患者，其中136例SLE患者血中ANA阳性为100%，MCTD阳性为98%，PSS、SS、PM/DM、RA的阳性率分别为75%、66%、66%和33%。与文献报导基本相同[4]。SLE患者的血清最高稀释度为1∶640阳性，最低稀释度为1∶40阳性，两种核型(均质型与斑点型)的占56%，其余的为一种核型(周边型)。ANA高稀释度者多同时检出抗ds-DNA抗体，阳性25%，说明SLE正处于活动期，且表现有肾脏损害病情较重。
, 百拇医药
本文还发现一个值得关注的问题，有6例患者，全是女性，年龄在10～35岁，ANA阳性，血清稀释度高的有1∶160阳性，低的1∶20阳性，ENA全部阴性。但是，有5例分别在膜条的u1RNP带上出现了一至二条不明带，有1例患者在抗SS-A带上出现了一条不明带，是否与治疗或病因有关?有待进一步研究。
随着免疫学的不断发展，自身免疫性疾病存在一些对疾病诊断具有高度特异性抗体已广泛应用于临床，抗ENA抗体的检测对疾病鉴别诊断具有较高的特异性，敏感性和准确性，在自身免疫性疾病的诊断、分型和治疗等方面都有着十分重要的价值。
作者简介：代晓峰，实习生
参考文献
1 孔宪涛.应重视临床免疫学这一新兴学科.中华医学检验杂志，1997；7(4)：201～202
2 黄立群.混合性结缔组织病的抗D′E多肽抗体检测意义.中华医学检验杂志，1998；1：26
3 叶应妩，等.全国临床检验操作规程.东南大学出版社，1997
4 靳淑玲，等.系统性红斑狼疮抗ENA及抗核抗体的检测.中国实验临床免疫学杂志，1998；5
(收稿日期：1999-07-05), 百拇医药
单位：川北医学院附属医院检验科 南充 637000
关键词：
川北医学院学报990361
文章编号：1005-3697(1999)03—0082—02 中图分类号：R446.62 文献标识码：A
自身免疫病又称结缔组织病，也称作风湿病[1]。这类疾病有很高的发病率。我们采用万孚生物技术有限公司研制的具有国际先进生物技术——免疫印迹技术，将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(ENA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维膜上。可一次检测10种自身多肽抗体。用于系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、硬皮病(PSS)、干燥综合症(SS)、类风湿性关节炎、多发生性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)等多种不同风湿病的诊断，与酶免疫法比较具有敏感性高、特异性强、用血量少(仅10ul)、操作简便、快速等优点，可为临床及时提供诊断疾病的依据。
, http://www.100md.com
1 资料和方法
1.1 临床资料 各种自身免疫病患者269例，男性42例，女性227例，年龄在10～70岁，均是我院门诊和住院病人，诊断符合国际诊断标准。正常对照100例，男性42例，女性58例，年龄在18～36岁，为体检正常人。检测标本均为静脉血清。
1.2 方 法 应用免疫印迹法技术(IBT)，检测ENA多肽抗体谱。试剂盒为万孚生物技术有限公司产品。按说明书操作，每次检测10种自身多肽抗体，即抗SM抗体、抗u1RNP抗体、抗 SS-A、抗SS-B、抗J0-1、抗rRNP、抗SCL-70、抗Liu(D′E)、抗DM-53、抗RA-54抗体等。
应用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)，以自制小白鼠肝片为抗原底物，血清以1∶5倍比稀释，阳性结果检测最高稀释度。
1.3 结果判断 将待测的膜条显色区带与标准抗体谱带图对照，即可查出对应色带的分子量与相应的特异性抗体。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 抗ENA抗体检测结果见表1 136例SLE患者，55例MCTD，39例SS，12例PSS和18例RA患者均为阳性，9例PM/DM除1例阴性外，余全部为阳性，对照组全部为阴性。通过X2检验，P<0.01，可以认为，自身免疫病患者与正常人血清中抗ENA抗体水平差异有显著性。
表1 269例自身免疫病患者抗ENA抗体检测结果 抗体名称
阳性例数及阳性率
SLE
MCTD
SS
PSS
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SSA+SSB
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26
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4
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22.2
SSA+u1RNP
13
24.0
u1RNP
24
17.6
28
51.0
2
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rRNP
16
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11.8
2
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SSA
6
4.4
14
36.0
2
17.0
2
22.0
4
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SSB
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SCL-70
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D′E(Liu)
11
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SA-54
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J0-1
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DM-53
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11.1
2.2 ANA结果见表2 136例SLE患者ANA全部阳性，55例MCTD有54例阳性，39例SS患者有26例阳性，12例PSS患者有9例阳性，9例PM/DM患者有6例阳性。18例RA患者有6例阳性。对照组全部阴性，两组比较，差异有显著性(P<0.01)。表 269例自身免疫病患者ANA检测结果 抗体名称
, 百拇医药
阳性例数及阳性率
SLE
MCTD
SS
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PM/DM
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136
100
54
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75
6
66
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33
3 讨 论
近年来，随着免疫学的发展，对自身免疫性疾病有了更进一步研究。SLE等自身免疫病，病变常常累及多种组织与器官，存在多种免疫学异常。其中一典型特征就是体内产生多种针对正常细胞不同成分的自身抗体，这些抗体又对疾病产生各种不同的影响，已证实其中一些自身抗体与特定的疾病有相关性。本文结果表明，抗SM抗体，阳性率27.9%，抗u1RNP抗体阳性17.6%，两项双重阳性19.1%，以往认为抗SM抗体是SLE的标记抗体，对SLE有高度的特异性，但抗SM抗体阳性的SLE患者中同时伴有抗u1RNP抗体、SS-A+SS-B抗体、同样对SLE有重要的诊断意义。
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对于MCTD的诊断，以往只局限于抗u1RNP抗体。虽然MCTD患者的抗u1RNP抗体的阳性率较高，本文结果为51%，但该种抗体的特异性较低，几乎多种风湿病都可出现抗u1RNP抗体，因此，不能完全依赖抗u1RNP抗体阳性来诊断MCTD。本文结果还显示，269例风湿病中，抗Liu多肽抗体仅见于MCTD患者，阳性率20%，这表明Liu蛋白多肽的抗原表位具有MCTD的疾病特异性[2]，因此，抗Liu多肽抗体的检测，有助于提高MCTD的诊断水平。在PSS的诊断中，抗SCL-70的阳性率高达50%，并且特异性较强。抗RA-54是类风湿病的标记性抗体，但阳性率较低，仅为22.2%。
ANA是以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称[3]，不同的自身免疫性疾病有不同的抗核抗体谱。本文用免疫荧光法检测269例自身免疫病患者，其中136例SLE患者血中ANA阳性为100%，MCTD阳性为98%，PSS、SS、PM/DM、RA的阳性率分别为75%、66%、66%和33%。与文献报导基本相同[4]。SLE患者的血清最高稀释度为1∶640阳性，最低稀释度为1∶40阳性，两种核型(均质型与斑点型)的占56%，其余的为一种核型(周边型)。ANA高稀释度者多同时检出抗ds-DNA抗体，阳性25%，说明SLE正处于活动期，且表现有肾脏损害病情较重。
, 百拇医药
本文还发现一个值得关注的问题，有6例患者，全是女性，年龄在10～35岁，ANA阳性，血清稀释度高的有1∶160阳性，低的1∶20阳性，ENA全部阴性。但是，有5例分别在膜条的u1RNP带上出现了一至二条不明带，有1例患者在抗SS-A带上出现了一条不明带，是否与治疗或病因有关?有待进一步研究。
随着免疫学的不断发展，自身免疫性疾病存在一些对疾病诊断具有高度特异性抗体已广泛应用于临床，抗ENA抗体的检测对疾病鉴别诊断具有较高的特异性，敏感性和准确性，在自身免疫性疾病的诊断、分型和治疗等方面都有着十分重要的价值。
作者简介：代晓峰，实习生
参考文献
1 孔宪涛.应重视临床免疫学这一新兴学科.中华医学检验杂志，1997；7(4)：201～202
2 黄立群.混合性结缔组织病的抗D′E多肽抗体检测意义.中华医学检验杂志，1998；1：26
3 叶应妩，等.全国临床检验操作规程.东南大学出版社，1997
4 靳淑玲，等.系统性红斑狼疮抗ENA及抗核抗体的检测.中国实验临床免疫学杂志，1998；5
(收稿日期：1999-07-05), 百拇医药