层粘连蛋白受体在人肝细胞癌中的表达及其与转移的关系
作者：郑世曦 阮幼冰 武忠弼 杨镇
单位：430030 武汉，同济医科大学实验医学研究中心超微病理研究室[郑世曦(现在中国科学院上海医药研究所，200031)、阮幼冰、武忠弼]；同济医科大学附属同济医院外科(杨镇)
关键词：
中华外科杂志981125 层粘连蛋白(laminin,LN)是细胞外基质的重要成分之一，它对肿瘤细胞的生长、分化、粘附和移动等具有重要作用。这种作用主要是通过细胞表面的67 kd的层粘连蛋白受体(laminin receptor,LN-R)介导的。近来研究表明,67 kd LN-R在肿瘤的侵袭转移中起主要作用。Grigioni等应用免疫组化也证实了LN-R与人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的侵袭有关[1]。我们应用分子生物学方法对HCC组织中67 kd LN-R蛋白和RNA水平进行了检测，以进一步探讨其在CC转移中的作用及意义。
, http://www.100md.com
1.材料和方法：收集我校附属医院外科手术切除的HCC标本30例，其中14例有肝外脏器转移和(或)门静脉癌栓或肝门淋巴结转移。部分癌组织经常规固定、石蜡包埋、切片；部分癌组织立即放入液氮保存。5 μm石蜡切片经微波抗原修复抗原后，按常规SABC法进行免疫组化染色。采用Dig标记的LN-R cDNA探针进行原位杂交。组织RNA提取及RT-PCR均按分子克隆进行，扩增产物为474 bp的DNA片段。
2.结果：免疫组化染色阳性信号表现为棕黄色颗粒，主要分布于癌细胞的胞浆和胞膜；原位杂交阳性信号为紫兰色或紫红色颗粒，主要分布于胞浆内；RT-PCR扩增产物为凝胶电泳上约474 bp大小特异产物带。在16例HCC未转移组中，LN-R免疫组化、原位杂交、RT-PCR阳性例数分别5、3、8例；14例HCC有转移组中，其阳性例数分别为10、8、12例。经χ2检验，HCC有转移组的LN-R蛋白、mRNA和总RNA、表达均显著高于未转移组(P<0.05)。
, 百拇医药
3.讨论：正常上皮细胞仅在其基底膜面存在LN-R，保证其沿基底膜定向排列；而肿瘤细胞的LN-R则分布于整个细胞表面，其数量大大超过正常，且浸润癌组织表面未结合的LN-R更多，这些都为肿瘤细胞粘着和侵袭过程提供了分子基础。如果癌细胞表面的LN-R已完全被LN饱和，LN则可以连接到基膜中的Ⅳ胶原上；若癌细胞表面LN-R未被饱和，癌细胞可直接结合到宿主LN上，继而与基膜相连。这种连接作用诱导肿瘤细胞分泌IV型胶原酶，降解基质[2]，从而启动转移过程。另外，LN-R尚可通过跨膜作用与细胞骨架成分如微丝、肌动蛋白结合[3]，参与细胞内外信号传递过程，进而导致瘤细胞生物学性状改变，促进转移形成。LN-R在活体癌组织中的表达及其与肿瘤的转移的预后的关系引起人们高度重视。Martignone等[4]利用免疫组化对1160例原发性乳腺癌组织中LN-R进行回顾性研究，结果显示：LN-R的表达与腋窝淋巴结转移、癌周淋巴管浸润、半数死亡率呈正相关，表明了LN-R决定肿瘤的侵袭和转移能力。Grigioni等利用免疫组化对30例HCC进行研究，表明LN-R的表达与Ⅳ型胶原酶和Ki 67抗原表达相关联，是HCC侵袭性增加的重要标志[1]。在此基础上，我们应用免疫组化、原位杂交、RT-PCR对30例HCC标本从蛋白质水平和RNA水平的对比研究表明，两者具有很大的相关性，HCC转移组阳性率显著高于未转移组，在HCC的转移过程中起重要的作用。
, http://www.100md.com
鉴于LN-R在肿瘤转移中的重要作用，人们曾试图利用LN-R抗体来抑制肿瘤细胞的转移,并取得某些成功。至于能否用以抑制HCC转移则有待进一步研究。
参考文献
1 Grigioni WF, Garbisa S, D′Errico A, et al. Evaluation of hepatocellular carcinoma aggressiveness by a panel of extracellular matrix antigens. Am J Pathol, 1991,138:647-654.
2 Yudoh K, Matsui H, Kanamori M, et al. Effects of epidermal growth factor on invasiveness through the extracellular matrix in high and low metastatic clones of RCT sarcoma in vitro.Jpn J Cancer Res,1994,85:63-71.
, 百拇医药
3 Wewer UM, Liotta LA, Jaye M, et al. Altered levels of laminin receptor mRNA in various human carcinoma cells that have different a bilities to bind laminin.Proc Natl Acad Sci USA, 1986,83:7137-7141.
4 Martignone S, Menard S, Bufalino R, et al. Prognostic signifi-cance of the 67 kd laminin receptor expression in human breast carcinoma. J Natl Cancer Inst,1993,83:398.
(收稿：1997-08-26 修回：1998-08-30), 百拇医药
单位：430030 武汉，同济医科大学实验医学研究中心超微病理研究室[郑世曦(现在中国科学院上海医药研究所，200031)、阮幼冰、武忠弼]；同济医科大学附属同济医院外科(杨镇)
关键词：
中华外科杂志981125 层粘连蛋白(laminin,LN)是细胞外基质的重要成分之一，它对肿瘤细胞的生长、分化、粘附和移动等具有重要作用。这种作用主要是通过细胞表面的67 kd的层粘连蛋白受体(laminin receptor,LN-R)介导的。近来研究表明,67 kd LN-R在肿瘤的侵袭转移中起主要作用。Grigioni等应用免疫组化也证实了LN-R与人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的侵袭有关[1]。我们应用分子生物学方法对HCC组织中67 kd LN-R蛋白和RNA水平进行了检测，以进一步探讨其在CC转移中的作用及意义。
, http://www.100md.com
1.材料和方法：收集我校附属医院外科手术切除的HCC标本30例，其中14例有肝外脏器转移和(或)门静脉癌栓或肝门淋巴结转移。部分癌组织经常规固定、石蜡包埋、切片；部分癌组织立即放入液氮保存。5 μm石蜡切片经微波抗原修复抗原后，按常规SABC法进行免疫组化染色。采用Dig标记的LN-R cDNA探针进行原位杂交。组织RNA提取及RT-PCR均按分子克隆进行，扩增产物为474 bp的DNA片段。
2.结果：免疫组化染色阳性信号表现为棕黄色颗粒，主要分布于癌细胞的胞浆和胞膜；原位杂交阳性信号为紫兰色或紫红色颗粒，主要分布于胞浆内；RT-PCR扩增产物为凝胶电泳上约474 bp大小特异产物带。在16例HCC未转移组中，LN-R免疫组化、原位杂交、RT-PCR阳性例数分别5、3、8例；14例HCC有转移组中，其阳性例数分别为10、8、12例。经χ2检验，HCC有转移组的LN-R蛋白、mRNA和总RNA、表达均显著高于未转移组(P<0.05)。
, 百拇医药
3.讨论：正常上皮细胞仅在其基底膜面存在LN-R，保证其沿基底膜定向排列；而肿瘤细胞的LN-R则分布于整个细胞表面，其数量大大超过正常，且浸润癌组织表面未结合的LN-R更多，这些都为肿瘤细胞粘着和侵袭过程提供了分子基础。如果癌细胞表面的LN-R已完全被LN饱和，LN则可以连接到基膜中的Ⅳ胶原上；若癌细胞表面LN-R未被饱和，癌细胞可直接结合到宿主LN上，继而与基膜相连。这种连接作用诱导肿瘤细胞分泌IV型胶原酶，降解基质[2]，从而启动转移过程。另外，LN-R尚可通过跨膜作用与细胞骨架成分如微丝、肌动蛋白结合[3]，参与细胞内外信号传递过程，进而导致瘤细胞生物学性状改变，促进转移形成。LN-R在活体癌组织中的表达及其与肿瘤的转移的预后的关系引起人们高度重视。Martignone等[4]利用免疫组化对1160例原发性乳腺癌组织中LN-R进行回顾性研究，结果显示：LN-R的表达与腋窝淋巴结转移、癌周淋巴管浸润、半数死亡率呈正相关，表明了LN-R决定肿瘤的侵袭和转移能力。Grigioni等利用免疫组化对30例HCC进行研究，表明LN-R的表达与Ⅳ型胶原酶和Ki 67抗原表达相关联，是HCC侵袭性增加的重要标志[1]。在此基础上，我们应用免疫组化、原位杂交、RT-PCR对30例HCC标本从蛋白质水平和RNA水平的对比研究表明，两者具有很大的相关性，HCC转移组阳性率显著高于未转移组，在HCC的转移过程中起重要的作用。
, http://www.100md.com
鉴于LN-R在肿瘤转移中的重要作用，人们曾试图利用LN-R抗体来抑制肿瘤细胞的转移,并取得某些成功。至于能否用以抑制HCC转移则有待进一步研究。
参考文献
1 Grigioni WF, Garbisa S, D′Errico A, et al. Evaluation of hepatocellular carcinoma aggressiveness by a panel of extracellular matrix antigens. Am J Pathol, 1991,138:647-654.
2 Yudoh K, Matsui H, Kanamori M, et al. Effects of epidermal growth factor on invasiveness through the extracellular matrix in high and low metastatic clones of RCT sarcoma in vitro.Jpn J Cancer Res,1994,85:63-71.
, 百拇医药
3 Wewer UM, Liotta LA, Jaye M, et al. Altered levels of laminin receptor mRNA in various human carcinoma cells that have different a bilities to bind laminin.Proc Natl Acad Sci USA, 1986,83:7137-7141.
4 Martignone S, Menard S, Bufalino R, et al. Prognostic signifi-cance of the 67 kd laminin receptor expression in human breast carcinoma. J Natl Cancer Inst,1993,83:398.
(收稿：1997-08-26 修回：1998-08-30), 百拇医药