加贝酯注射液在体外人血浆中降解的动力学
作者：王又红 段晓颖 潘灏白 冯文周 王淑君 宋子林
单位：王又红 段晓颖 潘灏白(河南中医学院附属一医院 郑州450000)；冯文周 王淑君 宋子林(河南医科大学附属一医院)
关键词：高效液相色谱法；加贝酯；半衰期
中国医院药学杂志980112 摘要 采用高效液相色谱法,以Nuclesoile-C18柱,甲醇∶水(70∶30)磷酸调pH3.5为流动相,紫外检测。研究了加贝酯在健康人血浆中的代谢降解情况。结果表明,加贝酯在血浆中代谢符合一级动力学过程,半衰期为133±19s。
加贝酯(Cabexate Mesilate)为丝氨酸蛋白激酶抑制剂,主要用于治疗胰腺炎。属小分子酯类化合物(M=417),分子中酯键极易被血浆酯酶所水解而失活。因此,了解加贝酯在血浆中浓度变化对临床用药是十分有用的。国外报道其体外凝固试验,加贝酯的生物半衰期为70～80s。用反相高效液相色谱法测定加贝酯在血浆中降解半衰期为66.9±3.0s。大剂量10mg.kg-1快速静脉注射给药,其半衰期为55s。考虑到增加剂量,可能增加毒副作用。故本文采用体外试验,研究加贝酯在健康人血浆中的代谢降解情况,为临床用药提供参考。
, http://www.100md.com
1 材料
1.1 试剂与药品 加贝酯注射剂(江苏金坛县制药厂,批号910728);加贝酯对照品(由南京药物所提供)。其它试剂为分析纯。
1.2 仪器 酸度计:pHS-3C(上海分析仪器三厂);高效液相色谱仪LP-05(北京星达公司);高速离心机:(TGL-16G上海医用分析仪器厂)。
2 方法
2.1 色谱条件 分析柱为Nuclesoile-C18 250×5mm ID(5μm),流动相为甲醇∶水(70∶30),磷酸调pH3.5,流速:1.3ml.min-1。检测波长274nm,灵敏度0.05AUFS。
2.2 样品处理 取45μl加贝酯水溶液(16.7mg.ml-1),加入3.0ml以肝素抗凝的新鲜全血中,迅速混匀,37℃孵育,依下列时间点取血:0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,4.0,5.0,6.0,7.5,9.0min,加入0.4ml乙腈,漩涡混合器混合后,离心(15000r.min-1)10min,取10μl上清液进样,采用外标法测峰面积进行定量分析。
, 百拇医药
3 结果
3.1 色谱行为 本色谱条件,加贝酯与其代谢物可完全分离,保留时间分别为3.82,4.8min。容量因子分别为0.5,1.0,色谱特征见图1。
图 1 血浆中加贝酯的色谱特征
A 孵育1.5min的色谱特征 B 孵育6min后的色谱特征
1 溶剂峰 2 加贝酯 3 加贝酯代谢物
3.2 标准曲线、线性范围、最低检出限及回收率 在0.005～0.25mg.ml-1范围内,加贝酯浓度与峰面积具有良好线性关系。峰面积Y与加贝酯浓度C之间的线性回归方程为:Y=1.514+4.029C(r=0.9998)。信噪比3∶1,加贝酯最低检出浓度为1μg.ml-1。取0.05,0.25mg.ml-1加贝酯求其回收率分别为99.2%,95.8%。
, 百拇医药
3.3 精密度、重现性测定 以标准曲线方法测定高、中、低3个不同浓度的加贝酯,方法的精密度和重现性见表1。
表 1 精密度、重现性试验结果(n=5) 样品浓度
(mg.ml-1)
批 内
批 间
±s
RSD
(%)±s
RSD
, 百拇医药
(%)
0.05
0.050±0.010
2.4
0.040±0.010
3.3
0.10
0.110±0.020
0.8
0.100±0.010
1.0
0.20
, 百拇医药 0.210±0.400
0.6
0.2±0.800
0.9
3.4 血浆降解动力学 取8名男性健康受试者血浆,按样品预处理方法测定加贝酯在血浆中的浓度变化数据。将所得每组数据以时间t对LogC进行回归分析,得加贝酯在血中降解动力学方程。加贝酯在血中的降解是一个指数衰减过程,降解半衰期见表2。平均降解半衰期为133±19s,时间-浓度变化曲线见图2。
图 2 加贝酯降解平均时间-浓度变化曲线
表 2 加贝酯的降解半衰期 组
, 百拇医药 别
回 归 方 程
r
T1/2ke
(s)±s
1
LogC=-0.553-0.264t
-0.992
98.7
133±19
2
, 百拇医药
LogC=-0.506-0.193t
-0.996
135.4
3
LogC=-0.538-0.216t
-0.997
120.6
4
LogC=-0.561-0.184t
-0.999
141.6
5
, 百拇医药
LogC=-0.508-0.218t
-0.994
119.7
6
LogC=-0.518-0.168t
-0.995
155.5
7
LogC=-0.523-0.182t
-0.994
144.3
8
, http://www.100md.com
LogC=-0.696-0.175t
-0.989
149.2
4 讨论
4.1 我们研究加贝酯在8名健康志愿者体外血浆中的代谢情况,将加贝酯直接加入血浆中,测其在不同时间点时的药物含量。结果表明,加贝酯在血浆中浓度迅速降低,代谢物迅速增加,在血浆中的代谢符合一级动力学过程,半衰期133±19s。比文献报道的体内半衰期长一倍,这是否是因为体内与体外血浆酯酶活性水平有关,或其它原因,还有待进一步研究。
4.2 实验结果提示,其体外的代谢过程与文献报道的基本一致,但是体外降解代谢的过程,是否可作体内代谢的参考有待进一步研究。 (1996年7月9日收稿), http://www.100md.com
单位：王又红 段晓颖 潘灏白(河南中医学院附属一医院 郑州450000)；冯文周 王淑君 宋子林(河南医科大学附属一医院)
关键词：高效液相色谱法；加贝酯；半衰期
中国医院药学杂志980112 摘要 采用高效液相色谱法,以Nuclesoile-C18柱,甲醇∶水(70∶30)磷酸调pH3.5为流动相,紫外检测。研究了加贝酯在健康人血浆中的代谢降解情况。结果表明,加贝酯在血浆中代谢符合一级动力学过程,半衰期为133±19s。
加贝酯(Cabexate Mesilate)为丝氨酸蛋白激酶抑制剂,主要用于治疗胰腺炎。属小分子酯类化合物(M=417),分子中酯键极易被血浆酯酶所水解而失活。因此,了解加贝酯在血浆中浓度变化对临床用药是十分有用的。国外报道其体外凝固试验,加贝酯的生物半衰期为70～80s。用反相高效液相色谱法测定加贝酯在血浆中降解半衰期为66.9±3.0s。大剂量10mg.kg-1快速静脉注射给药,其半衰期为55s。考虑到增加剂量,可能增加毒副作用。故本文采用体外试验,研究加贝酯在健康人血浆中的代谢降解情况,为临床用药提供参考。
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1 材料
1.1 试剂与药品 加贝酯注射剂(江苏金坛县制药厂,批号910728);加贝酯对照品(由南京药物所提供)。其它试剂为分析纯。
1.2 仪器 酸度计:pHS-3C(上海分析仪器三厂);高效液相色谱仪LP-05(北京星达公司);高速离心机:(TGL-16G上海医用分析仪器厂)。
2 方法
2.1 色谱条件 分析柱为Nuclesoile-C18 250×5mm ID(5μm),流动相为甲醇∶水(70∶30),磷酸调pH3.5,流速:1.3ml.min-1。检测波长274nm,灵敏度0.05AUFS。
2.2 样品处理 取45μl加贝酯水溶液(16.7mg.ml-1),加入3.0ml以肝素抗凝的新鲜全血中,迅速混匀,37℃孵育,依下列时间点取血:0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,4.0,5.0,6.0,7.5,9.0min,加入0.4ml乙腈,漩涡混合器混合后,离心(15000r.min-1)10min,取10μl上清液进样,采用外标法测峰面积进行定量分析。
, 百拇医药
3 结果
3.1 色谱行为 本色谱条件,加贝酯与其代谢物可完全分离,保留时间分别为3.82,4.8min。容量因子分别为0.5,1.0,色谱特征见图1。
图 1 血浆中加贝酯的色谱特征
A 孵育1.5min的色谱特征 B 孵育6min后的色谱特征
1 溶剂峰 2 加贝酯 3 加贝酯代谢物
3.2 标准曲线、线性范围、最低检出限及回收率 在0.005～0.25mg.ml-1范围内,加贝酯浓度与峰面积具有良好线性关系。峰面积Y与加贝酯浓度C之间的线性回归方程为:Y=1.514+4.029C(r=0.9998)。信噪比3∶1,加贝酯最低检出浓度为1μg.ml-1。取0.05,0.25mg.ml-1加贝酯求其回收率分别为99.2%,95.8%。
, 百拇医药
3.3 精密度、重现性测定 以标准曲线方法测定高、中、低3个不同浓度的加贝酯,方法的精密度和重现性见表1。
表 1 精密度、重现性试验结果(n=5) 样品浓度
(mg.ml-1)
批 内
批 间
±sRSD
(%)
±sRSD
, 百拇医药
(%)
0.05
0.050±0.010
2.4
0.040±0.010
3.3
0.10
0.110±0.020
0.8
0.100±0.010
1.0
0.20
, 百拇医药 0.210±0.400
0.6
0.2±0.800
0.9
3.4 血浆降解动力学 取8名男性健康受试者血浆,按样品预处理方法测定加贝酯在血浆中的浓度变化数据。将所得每组数据以时间t对LogC进行回归分析,得加贝酯在血中降解动力学方程。加贝酯在血中的降解是一个指数衰减过程,降解半衰期见表2。平均降解半衰期为133±19s,时间-浓度变化曲线见图2。
图 2 加贝酯降解平均时间-浓度变化曲线
表 2 加贝酯的降解半衰期 组
, 百拇医药 别
回 归 方 程
r
T1/2ke
(s)
±s1
LogC=-0.553-0.264t
-0.992
98.7
133±19
2
, 百拇医药
LogC=-0.506-0.193t
-0.996
135.4
3
LogC=-0.538-0.216t
-0.997
120.6
4
LogC=-0.561-0.184t
-0.999
141.6
5
, 百拇医药
LogC=-0.508-0.218t
-0.994
119.7
6
LogC=-0.518-0.168t
-0.995
155.5
7
LogC=-0.523-0.182t
-0.994
144.3
8
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LogC=-0.696-0.175t
-0.989
149.2
4 讨论
4.1 我们研究加贝酯在8名健康志愿者体外血浆中的代谢情况,将加贝酯直接加入血浆中,测其在不同时间点时的药物含量。结果表明,加贝酯在血浆中浓度迅速降低,代谢物迅速增加,在血浆中的代谢符合一级动力学过程,半衰期133±19s。比文献报道的体内半衰期长一倍,这是否是因为体内与体外血浆酯酶活性水平有关,或其它原因,还有待进一步研究。
4.2 实验结果提示,其体外的代谢过程与文献报道的基本一致,但是体外降解代谢的过程,是否可作体内代谢的参考有待进一步研究。 (1996年7月9日收稿), http://www.100md.com