杭菊花花瓣组织培养
作者：王康才 张雪琼 茅毓英
单位：南京农业大学园艺系 210095
关键词：杭菊花；花瓣；组织培养
中草药000837摘 要 为了实现杭菊花优良种苗的有效快繁，用杭菊花始花期刚露白花蕾的花瓣为材料，按不同接种方向接种于不同激素配比的培养基上诱导分化。结果表明： 以 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 培养基较好，培养 40 d 后芽分化率为 72.2%～81.8%,不同的 KT 浓度与不同接种方向对花瓣组培形成不定芽有显著影响；不同品种类型间花瓣组培结果也有明显差异。
杭菊花是我国传统中药之一，具有散风清热，平肝明目之功效，主要用于风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花等病痛。随着祖国中医药事业的不断发展，各种开发产品如菊花茶、菊花酒不断推出，菊花用量急剧增加。但目前生产上存在品种混乱、退化等现象，因此良种选育工作势在必行。菊花多为无性繁殖，这对新品种快速繁殖有一定限制。本试验利用杭菊花花瓣为材料进行组培实验，其目的是为了找到一种繁殖系数和芽分化率高的快速繁殖方法。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料：取自于南京农业大学校内试验基地的杭菊花(大白菊、小白菊、黄菊)始花期花蕾的花瓣。
1.2 培养条件：以 MS 培养基为基本培养基，光照强度为 2 000 lx，光照时间 12 h ，昼夜培养温度 (25±2)℃。
1.3 方法
1.3.1 不同 KT 浓度处理：将小白菊的花瓣经过灭菌消毒处理后，在 NAA 浓度相同 KT 浓度不同的培养基 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 1 mg/L 和MS+NAA 0.2 mg/L+KT 2 mg/L进行培养。
1.3.2 正反接种方向的结果：为了确定花瓣不同接种方向对芽诱导的影响，将小白菊灭菌花瓣用正反两种方法(即将靠近花瓣基部的切面插入培养基中叫正接，反之，将靠近花瓣顶端的切面插入培养基中叫反接)。接种在 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 培养基上培养，3次重复。
, 百拇医药
1.3.3 不同品种类型间差异：将小白菊、大白菊和黄菊3 个品种的无菌花瓣接种于MS+NAA 0.2 mg/L+KT 2 mg/L培养基上培养，3 次重复。
1.3.4 沙培花瓣组织苗的观察：观察记录愈伤组织起动期、愈伤组织大小、质地、色泽、发芽块数等。
2 结果
2.1 KT 浓度对愈伤组织及芽形成的影响：从表1可知，KT 不同浓度对杭菊的愈伤组织形成率及大小差异不明显 (P>0.05)。但从表2 可知，KT 浓度对愈伤组织芽分化的影响差异明显，在 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 上愈伤组织诱芽率在培养 20 d 后就达 80.8%，而培养基 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 1 mg/L 仅为 34.4%，即使培养 40 d后也只有 42.3%。由此可见，在生长素浓度相同的条件下，较高 KT 浓度对芽诱导有利，以 2 mg/L 为较适浓度。
, http://www.100md.com
表1 KT 浓度对愈伤组织形成的影响 处理
MS(mg/L)
外植体
培养 20 d 后
培养 40 d 后
KT NAA
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
愈伤组织
形成率(%)
, 百拇医药
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
愈伤组织
形成率(%)
Ⅰ
1 0.2
26
23
0.2△0.7
88.5
23
, http://www.100md.com
0.4△1
88.5
Ⅱ
2 0.2
26
22
0.1△0.8
84.6
26
0.3△1
100
△供试品种为小白菊；正接表2 KT 浓度对愈伤组织芽分化的影响 处理
, http://www.100md.com
MS(mg/L)
外植体
培养 20 d 后
培养 40 d 后
KT NAA
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(%)
愈伤组织
形成块数
, 百拇医药
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(%)
Ⅰ
1 0.2
26
23
9
34.6
23
11
42.3
, http://www.100md.com
Ⅱ
2 0.2
26
22
21
80.8
26
22
81.8
2.2 花瓣不同接种方向对不定芽形成的影响：由表3可知，正接、反接两种方法的愈伤组织诱导率相同，但是反接的花瓣愈伤组织芽分化率为0，而正接的花瓣愈伤组织芽分化率为 80.8%。以上两者之间有极显著差异 (P<0.01)(表3)。培养过程中还发现反接的花瓣愈伤组织有向下生长的趋势，但不能出芽。表3 不同接种方向对芽诱导的影响 接种方向
, 百拇医药
外植体数
培养 20 d 后
培养 40 d 后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
发芽块数
发芽分率
(%)
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
, http://www.100md.com
大小(cm)
发芽块数
发芽分率
(%)
正接
26
22
0.1△0.8
21
80.8
26
0.3△1
22
, 百拇医药
81.8
反接
26
22
0.1△2.3
0
0
22
0.2△0.4
0
0
△供试品种为小白菊； 培养基：MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L2.3 不同品种杭菊愈伤组织及芽分化的关系：从表4可见，不同品种杭菊培养 20 d后愈伤组织诱芽率有明显差别。小白菊的诱芽率均达 80% 以上，而黄菊的诱芽率仅为 17.4%，大白菊诱芽率为66.7%，同时可见不同花色品种间不定芽形成能力有强弱，白色(大白菊、小白菊)明显强于黄色(黄菊)，而小白菊的芽分化率又高于大白菊。
, 百拇医药
表4 杭菊不同品种类型愈伤组织与芽诱导结果 品种
外植体数
培养 20 d 后
培养 40 d 后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(%)
愈伤组织
形成块数
, 百拇医药
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(%)
大白菊
26
23
17
66.7
23
19
72.2
黄 菊
, 百拇医药
26
20
5
17.4
20
6
21.1
小白菊
26
22
21
80.8
26
22
, 百拇医药
81.8
培养基为 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L；正接
3 讨论
3.1 通过试验及相关资料可知，菊花花瓣的适宜培养期为始花期花蕾，形成的愈伤组织块大，成苗率高。这是因为始花期花蕾中所含营养物质丰富，花蕾直径以 1.5～2.0 cm刚露白时为佳，外植体长度以 0.5～0.7 cm 为好[1]。培养基最适配比为 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 。
3.2 激素浓度对花瓣愈伤组织及芽诱导的影响取决于生长素与细胞分裂素之比。因为花瓣组织内缺乏内源激素，当培养基中加入的外源激素 NAA/KT 值低时就能促使不定芽分化，当外源激素不能满足芽分化即 NAA/KT 比例高则形成愈伤组织[2]。本试验的结果与该结论相符。
, http://www.100md.com
3.3 不同花色对外植体产生的不定芽数影响很大，不定芽形成强弱顺序为白色>黄色>红色>粉红色，这可能是由于过氧化物同功酶不同而引起的，因在菊花几个重要性状的酶谱表达中，花色差异最大[2]；而过氧化物同功酶在植物组织生理功能之一是具有吲哚乙酸氧化酶的作用，它可控制不定芽形成和生长发育[3～6]。花瓣接种方向不同而产生明显的结果差异，正向接种芽的分化率高于反向接种的原因还有待于探讨。
3.4 通过对花瓣组培苗的沙培观察，一般花瓣组培苗不易成活，因此成苗率偏低，而本试验组培苗沙培成苗率高达 90% 以上，且菊苗叶色正常，叶形裂缺深浅与供试品种土培苗无明显差别，植株生长旺盛，但就其染色体是否丢失或加倍而导致药效改变，因实验条件限制，有待以后进一步试验。从实验看出，在相同的激素水平条件下，不同菊花品种愈伤组织的诱导率和愈伤组织块大小不同；同一菊花品种在生长素相同，而细胞分裂素不同的条件下，虽然愈伤组织诱导率相同，但愈伤组织诱芽率则以高水平的 KT 高，所以在菊花组培中，要根据不同品种采用不同激素浓度。
, 百拇医药
王康才 1985年毕业于吉林农业大学中药材学院，分配到南京农业大学任教，在工作期间攻 读硕 士学位，现任中药材教研室副主任，副教授。在完成《药用植物栽培学》等课程教学任务同 时，进行科研和中药材生产指导工作，主要研究方向为薄荷、菊花、丹参、太子参等药材的 栽培技术、栽培生理、组织培养。近年来获江苏省科技进步三等奖等奖励。
参考文献
1，刘兴玉.西南农业大学学报，1990，12(2)：203
2，侯喜林.南京农业大学学报，1990，13(3)：42
3，李招文.园艺学报，1989，16(3)：233
4，裘文达，李曙轩.浙江农业大学学报，1983，9(3)：243
5，李英，黄建华，董彩霞，等.河南职技师院学报，1992，20(1)：37
6，钱秀苇.上海农学院学报，1996，14(3)：201
(1999-06-29收稿), 百拇医药
单位：南京农业大学园艺系 210095
关键词：杭菊花；花瓣；组织培养
中草药000837摘 要 为了实现杭菊花优良种苗的有效快繁，用杭菊花始花期刚露白花蕾的花瓣为材料，按不同接种方向接种于不同激素配比的培养基上诱导分化。结果表明： 以 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 培养基较好，培养 40 d 后芽分化率为 72.2%～81.8%,不同的 KT 浓度与不同接种方向对花瓣组培形成不定芽有显著影响；不同品种类型间花瓣组培结果也有明显差异。
杭菊花是我国传统中药之一，具有散风清热，平肝明目之功效，主要用于风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花等病痛。随着祖国中医药事业的不断发展，各种开发产品如菊花茶、菊花酒不断推出，菊花用量急剧增加。但目前生产上存在品种混乱、退化等现象，因此良种选育工作势在必行。菊花多为无性繁殖，这对新品种快速繁殖有一定限制。本试验利用杭菊花花瓣为材料进行组培实验，其目的是为了找到一种繁殖系数和芽分化率高的快速繁殖方法。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料：取自于南京农业大学校内试验基地的杭菊花(大白菊、小白菊、黄菊)始花期花蕾的花瓣。
1.2 培养条件：以 MS 培养基为基本培养基，光照强度为 2 000 lx，光照时间 12 h ，昼夜培养温度 (25±2)℃。
1.3 方法
1.3.1 不同 KT 浓度处理：将小白菊的花瓣经过灭菌消毒处理后，在 NAA 浓度相同 KT 浓度不同的培养基 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 1 mg/L 和MS+NAA 0.2 mg/L+KT 2 mg/L进行培养。
1.3.2 正反接种方向的结果：为了确定花瓣不同接种方向对芽诱导的影响，将小白菊灭菌花瓣用正反两种方法(即将靠近花瓣基部的切面插入培养基中叫正接，反之，将靠近花瓣顶端的切面插入培养基中叫反接)。接种在 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 培养基上培养，3次重复。
, 百拇医药
1.3.3 不同品种类型间差异：将小白菊、大白菊和黄菊3 个品种的无菌花瓣接种于MS+NAA 0.2 mg/L+KT 2 mg/L培养基上培养，3 次重复。
1.3.4 沙培花瓣组织苗的观察：观察记录愈伤组织起动期、愈伤组织大小、质地、色泽、发芽块数等。
2 结果
2.1 KT 浓度对愈伤组织及芽形成的影响：从表1可知，KT 不同浓度对杭菊的愈伤组织形成率及大小差异不明显 (P>0.05)。但从表2 可知，KT 浓度对愈伤组织芽分化的影响差异明显，在 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 上愈伤组织诱芽率在培养 20 d 后就达 80.8%，而培养基 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 1 mg/L 仅为 34.4%，即使培养 40 d后也只有 42.3%。由此可见，在生长素浓度相同的条件下，较高 KT 浓度对芽诱导有利，以 2 mg/L 为较适浓度。
, http://www.100md.com
表1 KT 浓度对愈伤组织形成的影响 处理
MS(mg/L)
外植体
培养 20 d 后
培养 40 d 后
KT NAA
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
愈伤组织
形成率(%)
, 百拇医药
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
愈伤组织
形成率(%)
Ⅰ
1 0.2
26
23
0.2△0.7
88.5
23
, http://www.100md.com
0.4△1
88.5
Ⅱ
2 0.2
26
22
0.1△0.8
84.6
26
0.3△1
100
△供试品种为小白菊；正接表2 KT 浓度对愈伤组织芽分化的影响 处理
, http://www.100md.com
MS(mg/L)
外植体
培养 20 d 后
培养 40 d 后
KT NAA
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(%)
愈伤组织
形成块数
, 百拇医药
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(%)
Ⅰ
1 0.2
26
23
9
34.6
23
11
42.3
, http://www.100md.com
Ⅱ
2 0.2
26
22
21
80.8
26
22
81.8
2.2 花瓣不同接种方向对不定芽形成的影响：由表3可知，正接、反接两种方法的愈伤组织诱导率相同，但是反接的花瓣愈伤组织芽分化率为0，而正接的花瓣愈伤组织芽分化率为 80.8%。以上两者之间有极显著差异 (P<0.01)(表3)。培养过程中还发现反接的花瓣愈伤组织有向下生长的趋势，但不能出芽。表3 不同接种方向对芽诱导的影响 接种方向
, 百拇医药
外植体数
培养 20 d 后
培养 40 d 后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小(cm)
发芽块数
发芽分率
(%)
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
, http://www.100md.com
大小(cm)
发芽块数
发芽分率
(%)
正接
26
22
0.1△0.8
21
80.8
26
0.3△1
22
, 百拇医药
81.8
反接
26
22
0.1△2.3
0
0
22
0.2△0.4
0
0
△供试品种为小白菊； 培养基：MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L2.3 不同品种杭菊愈伤组织及芽分化的关系：从表4可见，不同品种杭菊培养 20 d后愈伤组织诱芽率有明显差别。小白菊的诱芽率均达 80% 以上，而黄菊的诱芽率仅为 17.4%，大白菊诱芽率为66.7%，同时可见不同花色品种间不定芽形成能力有强弱，白色(大白菊、小白菊)明显强于黄色(黄菊)，而小白菊的芽分化率又高于大白菊。
, 百拇医药
表4 杭菊不同品种类型愈伤组织与芽诱导结果 品种
外植体数
培养 20 d 后
培养 40 d 后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(%)
愈伤组织
形成块数
, 百拇医药
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(%)
大白菊
26
23
17
66.7
23
19
72.2
黄 菊
, 百拇医药
26
20
5
17.4
20
6
21.1
小白菊
26
22
21
80.8
26
22
, 百拇医药
81.8
培养基为 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L；正接
3 讨论
3.1 通过试验及相关资料可知，菊花花瓣的适宜培养期为始花期花蕾，形成的愈伤组织块大，成苗率高。这是因为始花期花蕾中所含营养物质丰富，花蕾直径以 1.5～2.0 cm刚露白时为佳，外植体长度以 0.5～0.7 cm 为好[1]。培养基最适配比为 MS+NAA 0.2 mg/L +KT 2 mg/L 。
3.2 激素浓度对花瓣愈伤组织及芽诱导的影响取决于生长素与细胞分裂素之比。因为花瓣组织内缺乏内源激素，当培养基中加入的外源激素 NAA/KT 值低时就能促使不定芽分化，当外源激素不能满足芽分化即 NAA/KT 比例高则形成愈伤组织[2]。本试验的结果与该结论相符。
, http://www.100md.com
3.3 不同花色对外植体产生的不定芽数影响很大，不定芽形成强弱顺序为白色>黄色>红色>粉红色，这可能是由于过氧化物同功酶不同而引起的，因在菊花几个重要性状的酶谱表达中，花色差异最大[2]；而过氧化物同功酶在植物组织生理功能之一是具有吲哚乙酸氧化酶的作用，它可控制不定芽形成和生长发育[3～6]。花瓣接种方向不同而产生明显的结果差异，正向接种芽的分化率高于反向接种的原因还有待于探讨。
3.4 通过对花瓣组培苗的沙培观察，一般花瓣组培苗不易成活，因此成苗率偏低，而本试验组培苗沙培成苗率高达 90% 以上，且菊苗叶色正常，叶形裂缺深浅与供试品种土培苗无明显差别，植株生长旺盛，但就其染色体是否丢失或加倍而导致药效改变，因实验条件限制，有待以后进一步试验。从实验看出，在相同的激素水平条件下，不同菊花品种愈伤组织的诱导率和愈伤组织块大小不同；同一菊花品种在生长素相同，而细胞分裂素不同的条件下，虽然愈伤组织诱导率相同，但愈伤组织诱芽率则以高水平的 KT 高，所以在菊花组培中，要根据不同品种采用不同激素浓度。
, 百拇医药
王康才 1985年毕业于吉林农业大学中药材学院，分配到南京农业大学任教，在工作期间攻 读硕 士学位，现任中药材教研室副主任，副教授。在完成《药用植物栽培学》等课程教学任务同 时，进行科研和中药材生产指导工作，主要研究方向为薄荷、菊花、丹参、太子参等药材的 栽培技术、栽培生理、组织培养。近年来获江苏省科技进步三等奖等奖励。
参考文献
1，刘兴玉.西南农业大学学报，1990，12(2)：203
2，侯喜林.南京农业大学学报，1990，13(3)：42
3，李招文.园艺学报，1989，16(3)：233
4，裘文达，李曙轩.浙江农业大学学报，1983，9(3)：243
5，李英，黄建华，董彩霞，等.河南职技师院学报，1992，20(1)：37
6，钱秀苇.上海农学院学报，1996，14(3)：201
(1999-06-29收稿), 百拇医药