CD2胞内区结合蛋白的分子克隆及其功能研究
作者：郑德先 刘彦信 刘士廉 邵源
单位：郑德先 刘彦信 刘士廉(中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学研究所，北京 100005)；邵源(血液学研究所， 天津 300020)
关键词：
中国病理生理杂志0010198
CD2分子分布于胸腺细胞、所有的成熟T淋巴细胞和大部分天然杀伤细胞的表面，是T细胞粘附和信号分子，在细胞分化成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面具有重要作用。CD2胞内区具有能分别调节细胞识别、粘附和细胞信号传递作用的不同功能区。近年研究发现，以抗CD2不同抗原决定簇的单克隆抗体处理T细胞，可引起不同应答反应。单克隆抗体T112和T113的组合可引起T细胞激活，而单克隆抗体T111和D66的组合则可引起T细胞激活后凋亡，其机制尚不明了。本实验室在多年研究的基础上，推测CD2胞内区可能具有与不同蛋白质结合的能力，从而介导不同刺激信号并引起不同应答反应。为了验证这一假说，采用酵母双杂交系统，克隆到一个CD2胞内区结合蛋白，并初步研究了其功能。首先，利用RT-PCR从人外周血淋巴细胞mRNA中扩增CD2胞内区cDNA，命名为CD2c。然后，将此DNA片段插入TA克隆载体中。经序列分析证明CD2c的核苷酸序列准确无误。再将此片段亚克隆入pAS2-1载体，以此载体和人T细胞KT3的cDNA文库共转染酵母细胞，通过营养缺陷(His-)、报告基因(LacZ)双重标记筛选阳性克隆，获得了多个His+和LacZ+克隆。核苷酸序列同源性分析发现其中一阳性克隆与人v-fos转化效应蛋白(v-fos transformation effector protein, Fte-1)同源，命名为CD2cBP。Fte-1是c-fos和v-fos引起细胞转化的效应蛋白，与核糖体蛋白S3A和TNFα诱导的TU-11高度同源，参与细胞转化、增殖和激活；在蛋白转运过程中，Fte-1起重要作用，且与细胞转化及一些线粒体相关蛋白(如Bcl-2)的功能有关。经氨基酸序列分析发现，CD2cBP分子中含有PKC结合位点，提示CD2cBP可能是PKC的底物。据此进行PKC磷酸化的研究发现，PKC确可使CD2cBP发生磷酸化。同时，转染分析表明，CD2cBP过量表达显著影响细胞的增殖能力，提示CD2cBP是与CD2胞内区相互作用的下游信号分子，参与T细胞激活与激活后凋亡的信号传递。此结果为国内外首次报道。, 百拇医药
单位：郑德先 刘彦信 刘士廉(中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学研究所，北京 100005)；邵源(血液学研究所， 天津 300020)
关键词：
中国病理生理杂志0010198
CD2分子分布于胸腺细胞、所有的成熟T淋巴细胞和大部分天然杀伤细胞的表面，是T细胞粘附和信号分子，在细胞分化成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面具有重要作用。CD2胞内区具有能分别调节细胞识别、粘附和细胞信号传递作用的不同功能区。近年研究发现，以抗CD2不同抗原决定簇的单克隆抗体处理T细胞，可引起不同应答反应。单克隆抗体T112和T113的组合可引起T细胞激活，而单克隆抗体T111和D66的组合则可引起T细胞激活后凋亡，其机制尚不明了。本实验室在多年研究的基础上，推测CD2胞内区可能具有与不同蛋白质结合的能力，从而介导不同刺激信号并引起不同应答反应。为了验证这一假说，采用酵母双杂交系统，克隆到一个CD2胞内区结合蛋白，并初步研究了其功能。首先，利用RT-PCR从人外周血淋巴细胞mRNA中扩增CD2胞内区cDNA，命名为CD2c。然后，将此DNA片段插入TA克隆载体中。经序列分析证明CD2c的核苷酸序列准确无误。再将此片段亚克隆入pAS2-1载体，以此载体和人T细胞KT3的cDNA文库共转染酵母细胞，通过营养缺陷(His-)、报告基因(LacZ)双重标记筛选阳性克隆，获得了多个His+和LacZ+克隆。核苷酸序列同源性分析发现其中一阳性克隆与人v-fos转化效应蛋白(v-fos transformation effector protein, Fte-1)同源，命名为CD2cBP。Fte-1是c-fos和v-fos引起细胞转化的效应蛋白，与核糖体蛋白S3A和TNFα诱导的TU-11高度同源，参与细胞转化、增殖和激活；在蛋白转运过程中，Fte-1起重要作用，且与细胞转化及一些线粒体相关蛋白(如Bcl-2)的功能有关。经氨基酸序列分析发现，CD2cBP分子中含有PKC结合位点，提示CD2cBP可能是PKC的底物。据此进行PKC磷酸化的研究发现，PKC确可使CD2cBP发生磷酸化。同时，转染分析表明，CD2cBP过量表达显著影响细胞的增殖能力，提示CD2cBP是与CD2胞内区相互作用的下游信号分子，参与T细胞激活与激活后凋亡的信号传递。此结果为国内外首次报道。, 百拇医药