比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮的含量
作者：孙佩霞 叶丽卡 张晓丽 胡 民 卢 露
单位：孙佩霞 广州萝岗制药厂药检科，广州 510530；叶丽卡 张晓丽 胡 民 卢 露 沈阳202医院药剂科，沈阳 110003
关键词：淫羊藿胶囊；黄酮类化合物；比色测定法
沈阳药科大学学报990118 摘 要 通过正交设计选择最佳比色条件，以芦丁为对照品，建立了比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮含量的方法.样品经70%乙醇超声萃取后，平均回收率为97.4%(n=6)，线性范围为0.2～1.0 mg/mL，相对标准偏差(RSD%)为2.3%.
分类号 R927
Colorimetric Determination of the Total Content of the Flavonoids in Epimedium Capsules
, http://www.100md.com
Sun Peixia,Yie Lika,Zhang Xiaoli,Hu Min,Lu Lu
Guangzhou Luo Gang Pharmaceutical Factory Guangzhou,Guangzhou 510530
Abstract A colorimetric method for the determination of the total content of flavonoids in Epimedium capsules was established in this paper.The best colorimetric conditions were obtained through orthogonal layout.The mean recovery rate was 97.4%(n=6).The precision was 2.3%(n=3).
, 百拇医药 Key words Epimedium capsule;flavonoids;colorimetric determination
淫羊藿胶囊为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿(Epimedium)属植物朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum地上部分的提取物，据《本草纲目》记载，淫羊藿有“补腰肾，坚筋骨、助阳益精”等功效.据文献报道淫羊藿对心脑血管系统〔1〕、骨代谢〔2〕、核酸代谢〔3〕及性机能具有广泛的药理功效.淫羊藿胶囊中是以淫羊藿苷为代表的黄酮类成分，为了控制淫羊藿胶囊的质量，本实验参考有关文献〔4〕，通过正交设计方法选择黄酮化合物最佳比色条件，为制定产品质量标准提供参考.
1 仪器与试药
UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津公司出品)；芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所)；淫羊藿胶囊剂(沈阳药科大学药剂教研室提供)；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂均为分析纯.
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定方法依据
以芦丁为对照品测定淫羊藿胶囊中总黄酮含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物在可见区能获得稳定的特征吸收峰.
2.2 最佳比色条件选择
取供试品适量，以吸收度为指标，安排三因素、四水平的正交设计，参加试验的因素有A：5% 亚硝酸钠，B：10%硝酸铝，C：4%氢氧化钠.每个因素所取的水平如下：因素A：A1=0.1 mL，A2=0.2 mL，A3=0.3 mL，A4=0.4 mL；因素B：B1=0.1 mL，B2=0.2 mL，B3=0.3 mL，B4=0.4 mL；因素C：C1=2 mL，C2=3 mL，C3=4 mL，C4=5 mL.结果见表1.因为考察吸收度值越大越好，所以得到的最佳显色条件为：5%亚硝酸钠0.3 mL，10%硝酸铝 0.3 mL及4%氢氧化钠试剂4 mL.试验结果表明在上述比色条件下500 nm波长处测得吸收度最大，紫外-可见区扫描结果见图1.
, 百拇医药
2.3 测定方法建立
2.3.1 标准曲线制备
图1 对照品与供试品光谱图
1—对照品；2—供试品
表1 因素、水平与结果 试号
因素
A
B
C
吸收度/A
1
, http://www.100md.com
0.1
0.1
2
0.10
2
0.1
0.2
3
0.14
3
0.1
0.3
4
0.18
, http://www.100md.com
4
0.1
0.4
5
0.11
5
0.2
0.1
3
0.11
6
0.2
0.2
2
, 百拇医药
0.22
7
0.2
0.3
5
0.25
8
0.2
0.4
4
0.27
9
0.3
, 百拇医药 0.1
4
0.32
10
0.3
0.2
5
0.19
11
0.3
0.3
2
0.40
12
, 百拇医药
0.3
0.4
3
0.45
13
0.4
0.1
5
0.17
14
0.4
0.2
4
, 百拇医药 0.42
15
0.4
0.3
3
0.35
16
0.4
0.4
2
0.30
Ⅰ/4
0.13
, http://www.100md.com 0.18
0.26
Ⅱ/4
0.21
0.24
0.26
Ⅲ/4
0.34
0.30
0.30
Ⅳ/4
0.31
0.28
, 百拇医药
0.18
精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,置100 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度.精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10 mL具塞刻度试管中，各加入适量水至5 mL，分别加入5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，放置6 min，加入4%氢氧化钠4 mL，再加水至10 mL，放置10 min，于500 nm处测定吸收值，并随行空白.标准曲线回归方程为：A=1.073 C-0.023 85，r=0.999 3，线性范围为：0.2～1.0 mg/mL.
2.3.2 回收率试验
精密称取同一批号淫羊藿胶囊供试品，测定含量，然后加入不同量芦丁对照品，依法测定，结果见表2，平均回收率为97.4%(n=6).
2.3.3 精密度试验
, 百拇医药
精密称取同一批号淫羊藿胶囊供试品3份，每份测试3次，结果见表3，相对标准偏差为2.3%(n=3).表2 回试率试验结果 试号
加入芦丁对照品量/mg
测得总黄酮量/mg
回收率/%
1
0.200
0.191
95.5
2
0.200
0.194
, 百拇医药
97.0
3
0.200
0.195
97.5
4
0.400
0.394
98.5
5
0.400
0.391
97.8
, http://www.100md.com
6
0.400
0.392
98.0
平均回收率(
±s)%=(97.4±1.05%)% n=6
2.4 样品测定
取适量胶囊粉末，置乳钵中研细，精密称取0.2 g，一次准确加入70%乙醇60 mL，超声萃取1 h，减压浓缩提取液，定容于10 mL容量瓶中，过滤，精密量取滤液1 mL，置10 mL具塞刻度试管中，按标准曲线制备项下方法测定含量，测定成品4批，结果见表4.表3 精密度试验结果 试号
测定次数
, http://www.100md.com
测得药量/mg±s
RSD/%
1
1
2
3
0.754
0.773
0.781
0.769
±0.014
1.8
, 百拇医药
2
1
2
3
0.744
0.758
0.767
0.756
±0.012
1.6
3
1
2
, 百拇医药 3
0.731
0.746
0.729
0.735
±0.009 3
1.3±s=0.753±0.017 RSD%=2.3% n=3
表4 淫羊藿胶囊中的总黄酮含量 样品批号
称重/g
黄酮含量/%±s
, http://www.100md.com
RSD/%
95410
0.200 6
3.517
95422
0.200 4
3.569
3.404
4.8
96315
0.201 2
3.286
±0.164
, 百拇医药
96518
0.200 9
3.242
参考文献
[1] 刘崇铭，于庆海，张利民.淫羊藿甙对心脏的影响.中草药，1982，11(9)：30～32
[2] 李青南，吴铁，谢华.淫羊藿提取液对去睾丸大鼠骨代谢的影响.中草药，1993，24(12)：637～638
[3] 施玉华，施九，陈计.某些助阳药对阳虚动物模型.上海中医药杂志，1980，2：6～7
[4] 沙世炎.中草药有效成分分析法：上册.北京：人民卫生出版社，1982.212
收稿日期:1998-07-20, 百拇医药
单位：孙佩霞 广州萝岗制药厂药检科，广州 510530；叶丽卡 张晓丽 胡 民 卢 露 沈阳202医院药剂科，沈阳 110003
关键词：淫羊藿胶囊；黄酮类化合物；比色测定法
沈阳药科大学学报990118 摘 要 通过正交设计选择最佳比色条件，以芦丁为对照品，建立了比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮含量的方法.样品经70%乙醇超声萃取后，平均回收率为97.4%(n=6)，线性范围为0.2～1.0 mg/mL，相对标准偏差(RSD%)为2.3%.
分类号 R927
Colorimetric Determination of the Total Content of the Flavonoids in Epimedium Capsules
, http://www.100md.com
Sun Peixia,Yie Lika,Zhang Xiaoli,Hu Min,Lu Lu
Guangzhou Luo Gang Pharmaceutical Factory Guangzhou,Guangzhou 510530
Abstract A colorimetric method for the determination of the total content of flavonoids in Epimedium capsules was established in this paper.The best colorimetric conditions were obtained through orthogonal layout.The mean recovery rate was 97.4%(n=6).The precision was 2.3%(n=3).
, 百拇医药 Key words Epimedium capsule;flavonoids;colorimetric determination
淫羊藿胶囊为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿(Epimedium)属植物朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum地上部分的提取物，据《本草纲目》记载，淫羊藿有“补腰肾，坚筋骨、助阳益精”等功效.据文献报道淫羊藿对心脑血管系统〔1〕、骨代谢〔2〕、核酸代谢〔3〕及性机能具有广泛的药理功效.淫羊藿胶囊中是以淫羊藿苷为代表的黄酮类成分，为了控制淫羊藿胶囊的质量，本实验参考有关文献〔4〕，通过正交设计方法选择黄酮化合物最佳比色条件，为制定产品质量标准提供参考.
1 仪器与试药
UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津公司出品)；芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所)；淫羊藿胶囊剂(沈阳药科大学药剂教研室提供)；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂均为分析纯.
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定方法依据
以芦丁为对照品测定淫羊藿胶囊中总黄酮含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物在可见区能获得稳定的特征吸收峰.
2.2 最佳比色条件选择
取供试品适量，以吸收度为指标，安排三因素、四水平的正交设计，参加试验的因素有A：5% 亚硝酸钠，B：10%硝酸铝，C：4%氢氧化钠.每个因素所取的水平如下：因素A：A1=0.1 mL，A2=0.2 mL，A3=0.3 mL，A4=0.4 mL；因素B：B1=0.1 mL，B2=0.2 mL，B3=0.3 mL，B4=0.4 mL；因素C：C1=2 mL，C2=3 mL，C3=4 mL，C4=5 mL.结果见表1.因为考察吸收度值越大越好，所以得到的最佳显色条件为：5%亚硝酸钠0.3 mL，10%硝酸铝 0.3 mL及4%氢氧化钠试剂4 mL.试验结果表明在上述比色条件下500 nm波长处测得吸收度最大，紫外-可见区扫描结果见图1.
, 百拇医药
2.3 测定方法建立
2.3.1 标准曲线制备
图1 对照品与供试品光谱图
1—对照品；2—供试品
表1 因素、水平与结果 试号
因素
A
B
C
吸收度/A
1
, http://www.100md.com
0.1
0.1
2
0.10
2
0.1
0.2
3
0.14
3
0.1
0.3
4
0.18
, http://www.100md.com
4
0.1
0.4
5
0.11
5
0.2
0.1
3
0.11
6
0.2
0.2
2
, 百拇医药
0.22
7
0.2
0.3
5
0.25
8
0.2
0.4
4
0.27
9
0.3
, 百拇医药 0.1
4
0.32
10
0.3
0.2
5
0.19
11
0.3
0.3
2
0.40
12
, 百拇医药
0.3
0.4
3
0.45
13
0.4
0.1
5
0.17
14
0.4
0.2
4
, 百拇医药 0.42
15
0.4
0.3
3
0.35
16
0.4
0.4
2
0.30
Ⅰ/4
0.13
, http://www.100md.com 0.18
0.26
Ⅱ/4
0.21
0.24
0.26
Ⅲ/4
0.34
0.30
0.30
Ⅳ/4
0.31
0.28
, 百拇医药
0.18
精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,置100 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度.精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10 mL具塞刻度试管中，各加入适量水至5 mL，分别加入5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，放置6 min，加入4%氢氧化钠4 mL，再加水至10 mL，放置10 min，于500 nm处测定吸收值，并随行空白.标准曲线回归方程为：A=1.073 C-0.023 85，r=0.999 3，线性范围为：0.2～1.0 mg/mL.
2.3.2 回收率试验
精密称取同一批号淫羊藿胶囊供试品，测定含量，然后加入不同量芦丁对照品，依法测定，结果见表2，平均回收率为97.4%(n=6).
2.3.3 精密度试验
, 百拇医药
精密称取同一批号淫羊藿胶囊供试品3份，每份测试3次，结果见表3，相对标准偏差为2.3%(n=3).表2 回试率试验结果 试号
加入芦丁对照品量/mg
测得总黄酮量/mg
回收率/%
1
0.200
0.191
95.5
2
0.200
0.194
, 百拇医药
97.0
3
0.200
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97.5
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98.5
5
0.400
0.391
97.8
, http://www.100md.com
6
0.400
0.392
98.0
平均回收率(
±s)%=(97.4±1.05%)% n=62.4 样品测定
取适量胶囊粉末，置乳钵中研细，精密称取0.2 g，一次准确加入70%乙醇60 mL，超声萃取1 h，减压浓缩提取液，定容于10 mL容量瓶中，过滤，精密量取滤液1 mL，置10 mL具塞刻度试管中，按标准曲线制备项下方法测定含量，测定成品4批，结果见表4.表3 精密度试验结果 试号
测定次数
, http://www.100md.com
测得药量/mg
±sRSD/%
1
1
2
3
0.754
0.773
0.781
0.769
±0.014
1.8
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2
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0.767
0.756
±0.012
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±0.009 3
1.3
±s=0.753±0.017 RSD%=2.3% n=3表4 淫羊藿胶囊中的总黄酮含量 样品批号
称重/g
黄酮含量/%
±s, http://www.100md.com
RSD/%
95410
0.200 6
3.517
95422
0.200 4
3.569
3.404
4.8
96315
0.201 2
3.286
±0.164
, 百拇医药
96518
0.200 9
3.242
参考文献
[1] 刘崇铭，于庆海，张利民.淫羊藿甙对心脏的影响.中草药，1982，11(9)：30～32
[2] 李青南，吴铁，谢华.淫羊藿提取液对去睾丸大鼠骨代谢的影响.中草药，1993，24(12)：637～638
[3] 施玉华，施九，陈计.某些助阳药对阳虚动物模型.上海中医药杂志，1980，2：6～7
[4] 沙世炎.中草药有效成分分析法：上册.北京：人民卫生出版社，1982.212
收稿日期:1998-07-20, 百拇医药