脑胶质瘤细胞增殖活性与T淋巴细胞亚群关系的研究
作者：王磊 周茂德
单位：山东医科大学附属医院250012
关键词：胶质瘤 增殖活性 T细胞亚群 恶性程度
山东医药001104 摘要 将30例脑胶质瘤患者按肿瘤恶性程度分为低度恶性、中度恶性和高度恶性组，分别检测其肿瘤细胞的增殖指数(PI)及外围血T淋巴细胞亚群含量，并分别设对照组比较。结果显示，患者组PI明显高于对照组，P<0.05；三组胶质瘤细胞的PI值有显著差异；与对照组比较，患者组辅助/诱导T淋巴细胞(CD4)降低，抑制性T淋巴细胞(CD8)升高，有统计学差异；胶质瘤细胞PI值与外周血CD4/CD8呈负相关，r＝-0.61。认为脑胶质瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关。脑胶质瘤患者的细胞免疫功能下降；肿瘤细胞增殖越活跃，细胞免疫功能失调越严重。
, http://www.100md.com
Abstract 30 cases of glioma were devided into three groups on base of tumor malignace.Proliferation Index(PI)of glioma cells and the level of peripheral blood T cell subsects were assayed and compared with controll samples.Results showed that PI of tumor cells were significantly higher than those of controlls，P<0.05.There were statistical differences in three groups.The glioma patients had low level of CD3 and CD4 than those in controlls，but high level of CD8.Change in the CD4/CD8 ratio was negative line correlated with PI of glioma cells.This suggests that PI of glioma cells are correlated with tumor malignace.In glioma patients impaired cellular immune function is present.Proliferative activity of glioma is negative correlated with the level of immune function.
, 百拇医药
Key words Glioma Proliferative activity T cell subsects Malignance
脑胶质瘤是神经外科常见的恶性肿瘤，肿瘤的生物学行为与其细胞的增殖活动密切相关〔1〕，而细胞的PI可在分子水平反映肿瘤的增殖活性。研究表明，胶质瘤患者的细胞免疫功能发生明显变化，而细胞免疫主要是由不同的T淋巴细胞亚群介导而产生的。我们采用流式细胞仪测定了30例脑胶质瘤患者肿瘤细胞的PI和外周血中T淋巴细胞亚群含量，旨在探讨肿瘤细胞增殖活性与T淋巴细胞亚群之间的关系，为临床选择治疗方法提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 患者组为30例经临床和病理证实的脑胶质瘤患者，其中男18例、女12例，年龄7～65岁、平均39.3岁。按肿瘤恶性程度分为低度恶性组9例(Ⅰ～Ⅱ级星形细胞瘤)、中度恶性组10例(间变性星形细胞瘤)、高度恶性组11例(Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤7例、多型性胶质母细胞瘤4例)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 肿瘤细胞PI测定 取脑胶质瘤患者手术中切取的新鲜肿瘤组织作为标本；同时另取12例脑外伤和18例脑出血患者手术中的正常脑组织标本作为对照组。将所取组织用剪刀剪至匀浆状加入生理盐水，低速离心2次(500～800r/min)，去掉细胞碎片，用200目尼龙网过滤，最后制成单细胞悬液。单细胞悬液用PBS液洗涤2次，取106/ml细胞加入PI染色液1.0ml，30分钟后上机分析。取待测样品及鸡红细胞标准液在流式细胞仪上进行分析，其波长为488mm，功率为15mW，激光源为氩离子。测定标本前用鸡红细胞核准液核准仪器的变异系数，使其稳定在1%～3%。PI按下列公式计算：PI＝S+G2M/G0/1+S+G2M×100%(G0/1为细胞周期中的间期，S为DNA合成期，G2M为分裂前期及分裂期)。
1.2.2 T淋巴细胞亚群含量测定 采集患者术前肝素抗凝全血2ml，对照组标本为30例健康献血员的肝素抗凝全血2ml。取肝素抗凝血100μl加入相应的荧光标记抗体15μl，放置避光处30分钟，加入溶血素2ml混匀，10分钟后离心，用PBS液漂洗沉淀，再以2500r/min离心10分钟，弃去上清液，加入0.5mlPBS液将细胞悬浮，最后用流式细胞仪测定成熟T淋巴细胞(CD3)、CD4、CD8及CD4/CD8。
, 百拇医药
1.2.3 统计学分析 全部数据均采用
±S表示，各组间指标比较用t检验。胶质瘤细胞PI值与外周血CD4/CD8作单因素直线相关分析。
2 结果
患者组与对照组PI值测定结果见表1，T细胞亚群测定结果见表2。
由表1可以看出，与对照组比较，患者组的PI值高于对照组，P<0.05；低度恶性组与对照组比较无明显差异；而胶质瘤三个亚组之间互相比较，PI值均有显著差异。
表1 患者组与对照组PI值比较(±S) 分类
, http://www.100md.com
例数
PI(%)
患者组
低度恶性组
中度恶性组
高度恶性组
对照组
30
9
10
11
30
23.23±1.71*
, 百拇医药
20.23±1.65
23.85±1.76*△
25.62±1.64*△
19.75±1.72
注：与对照组比较，*P<0.05；与低度恶性组比较，△P<0.05 表2 患者组与对照组T淋巴细胞亚群结果比较(±S) 分类
例数
CD3(%)
, http://www.100md.com
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
患者组
低度恶性组
中度恶性组
高度恶性组
对照组
30
9
10
11
, 百拇医药
30
57.81±8.96*
59.46±8.71
57.26±10.12*
56.72±9.21*
59.98±9.04
37.48±3.75*
38.35±4.04*
37.52±3.98*
36.56±3.82*
, http://www.100md.com
39.92±4.84
25.48±2.87*
25.16±2.18
26.12±3.12
27.37±2.06*
24.88±3.04
1.17±0.24*
1.35±0.21
1.19±0.18*
0.99±0.16*
, 百拇医药
1.40±0.20
注：与对照组比较，*P<0.05
由表2看出，与对照组比较，胶质瘤患者的CD3、CD4值均降低，而CD8升高，且均有显著性差异(P<0.05)。患者组CD4/CD8与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。胶质瘤患者三个亚组之间两两比较，CD4/CD8均有显著性差异(P<0.05)。
对患者组PI值和外周血CD4/CD8进行单因素直线相关分析，两者之间为负相关，相关指数r＝-0.61，P<0.05。
3 讨论
, http://www.100md.com 胶质瘤细胞与正常细胞最主要的区别在于前者具有相对无限的增殖活性。PI值可反映细胞增殖分裂的趋势，在分子水平上表达肿瘤的生物学行为，是判断肿瘤恶性程度及预后的客观指标。本文结果显示，脑胶质瘤患者低度恶性组、中度恶性组和高度恶性组之间的PI值有明显差异，并随肿瘤恶性程度的增高而相应增加。胶质瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关，细胞增殖活跃的胶质瘤恶性程度高，预后较差〔2、3〕。目前，对胶质瘤恶性程度及预后的判断主要依靠肿瘤的临床病理分级，但常规病理分级对介于良恶性之间者很难准确判断。我们认为，在常规病理基础上行胶质瘤细胞PI值测定，有助于提高判断肿瘤恶性程度的准确性，为临床治疗提供依据。
机体免疫包括细胞免疫和体液免疫，细胞免疫在抗肿瘤效应中起主要作用。细胞免疫功能主要由不同的T淋巴细胞亚群产生。正常机体的CD4/CD8是恒定的，此比值改变能够敏感地反映机体细胞免疫功能的变化。本文结果显示，脑胶质瘤患者的CD3、CD4和CD4/CD8均降低，CD8值升高，表明其细胞免疫功能降低。免疫功能失调的原因可能是淋巴细胞增殖及克隆扩增能力下降。淋巴细胞增殖和克隆的关键是白细胞介素-2(IL-2)含量和IL-2受体的表达，而脑胶质瘤患者IL-2含量低于正常，IL-2受体的表达也存在障碍〔4〕。近来有学者提出神经内分泌―免疫网络学说，认为免疫器官亦受神经系统的调节，而这种调节是通过某些神经递质和激素来实现的。脑胶质瘤患者的免疫功能低下可能是由于患者中枢神经系统完整性受到破坏，去甲肾上腺素和肾上腺素含量明显降低〔5〕。
, 百拇医药
对脑胶质瘤细胞PI值和CD4/CD8行直线相关分析表明，两者呈负相关，即PI值越高，CD4/CD8越低，表明胶质瘤细胞增殖活性越强，机体免疫功能失调越严重。胶质瘤细胞可分泌免疫抑制因子，通过活化CD8和糖蛋白而干扰效应淋巴细胞发挥作用，导致CD4/CD8下降〔6〕。胶质瘤细胞增殖越活跃，抑制因子分泌越多，机体细胞免疫功能下降越明显。而机体细胞免疫功能越差，清除和抑制胶质瘤细胞的能力也越差，更有利于胶质瘤的进一步发生、发展。我们认为，对PI值、CD4/CD8两项指标综合分析可以更全面地了解患者的免疫功能状况及胶质瘤的恶性程度。
4 参考文献
1，Mcrkel DE，Mcguire MD，Loploidy W.Proliferative activity and prognoss.DNA flow cytometry of sol：a tumors.Cancer，1990，1194.
, 百拇医药
2，Danova.M，Gaetani.P，Lombardi.D，et al.Multiparametei flow cytonalysis of neoplasms of the central nervous systom：correl of nuclear antigen p 105 and DNA content with cl：behavior.Neurosurgery，1990，83.
4，Daniel W，Mcvicar PH，Donna F，et al.In vitro analysis of the proliferative potential of T cells from patients with brain tumor：glioma-associated inmunosuppresion unrelated to intrinsic celluar defect.J Neurosurg，1992，251.
5，林彤，浦佩玉，钟述猷。神经胶质瘤患者细胞免疫功能变化及其降低机制.中国免疫学杂志，1991，4：238.
6，Wrann M，Thomas L，Larry K，et al.T cell suppressor factor from human glioblastoma cells is a 12.5 kd protein related to transforming growth factor.The EMBO Joural，1987，6：1633.
收稿2000-02-08, 百拇医药
单位：山东医科大学附属医院250012
关键词：胶质瘤 增殖活性 T细胞亚群 恶性程度
山东医药001104 摘要 将30例脑胶质瘤患者按肿瘤恶性程度分为低度恶性、中度恶性和高度恶性组，分别检测其肿瘤细胞的增殖指数(PI)及外围血T淋巴细胞亚群含量，并分别设对照组比较。结果显示，患者组PI明显高于对照组，P<0.05；三组胶质瘤细胞的PI值有显著差异；与对照组比较，患者组辅助/诱导T淋巴细胞(CD4)降低，抑制性T淋巴细胞(CD8)升高，有统计学差异；胶质瘤细胞PI值与外周血CD4/CD8呈负相关，r＝-0.61。认为脑胶质瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关。脑胶质瘤患者的细胞免疫功能下降；肿瘤细胞增殖越活跃，细胞免疫功能失调越严重。
, http://www.100md.com
Abstract 30 cases of glioma were devided into three groups on base of tumor malignace.Proliferation Index(PI)of glioma cells and the level of peripheral blood T cell subsects were assayed and compared with controll samples.Results showed that PI of tumor cells were significantly higher than those of controlls，P<0.05.There were statistical differences in three groups.The glioma patients had low level of CD3 and CD4 than those in controlls，but high level of CD8.Change in the CD4/CD8 ratio was negative line correlated with PI of glioma cells.This suggests that PI of glioma cells are correlated with tumor malignace.In glioma patients impaired cellular immune function is present.Proliferative activity of glioma is negative correlated with the level of immune function.
, 百拇医药
Key words Glioma Proliferative activity T cell subsects Malignance
脑胶质瘤是神经外科常见的恶性肿瘤，肿瘤的生物学行为与其细胞的增殖活动密切相关〔1〕，而细胞的PI可在分子水平反映肿瘤的增殖活性。研究表明，胶质瘤患者的细胞免疫功能发生明显变化，而细胞免疫主要是由不同的T淋巴细胞亚群介导而产生的。我们采用流式细胞仪测定了30例脑胶质瘤患者肿瘤细胞的PI和外周血中T淋巴细胞亚群含量，旨在探讨肿瘤细胞增殖活性与T淋巴细胞亚群之间的关系，为临床选择治疗方法提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 患者组为30例经临床和病理证实的脑胶质瘤患者，其中男18例、女12例，年龄7～65岁、平均39.3岁。按肿瘤恶性程度分为低度恶性组9例(Ⅰ～Ⅱ级星形细胞瘤)、中度恶性组10例(间变性星形细胞瘤)、高度恶性组11例(Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤7例、多型性胶质母细胞瘤4例)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 肿瘤细胞PI测定 取脑胶质瘤患者手术中切取的新鲜肿瘤组织作为标本；同时另取12例脑外伤和18例脑出血患者手术中的正常脑组织标本作为对照组。将所取组织用剪刀剪至匀浆状加入生理盐水，低速离心2次(500～800r/min)，去掉细胞碎片，用200目尼龙网过滤，最后制成单细胞悬液。单细胞悬液用PBS液洗涤2次，取106/ml细胞加入PI染色液1.0ml，30分钟后上机分析。取待测样品及鸡红细胞标准液在流式细胞仪上进行分析，其波长为488mm，功率为15mW，激光源为氩离子。测定标本前用鸡红细胞核准液核准仪器的变异系数，使其稳定在1%～3%。PI按下列公式计算：PI＝S+G2M/G0/1+S+G2M×100%(G0/1为细胞周期中的间期，S为DNA合成期，G2M为分裂前期及分裂期)。
1.2.2 T淋巴细胞亚群含量测定 采集患者术前肝素抗凝全血2ml，对照组标本为30例健康献血员的肝素抗凝全血2ml。取肝素抗凝血100μl加入相应的荧光标记抗体15μl，放置避光处30分钟，加入溶血素2ml混匀，10分钟后离心，用PBS液漂洗沉淀，再以2500r/min离心10分钟，弃去上清液，加入0.5mlPBS液将细胞悬浮，最后用流式细胞仪测定成熟T淋巴细胞(CD3)、CD4、CD8及CD4/CD8。
, 百拇医药
1.2.3 统计学分析 全部数据均采用
±S表示，各组间指标比较用t检验。胶质瘤细胞PI值与外周血CD4/CD8作单因素直线相关分析。2 结果
患者组与对照组PI值测定结果见表1，T细胞亚群测定结果见表2。
由表1可以看出，与对照组比较，患者组的PI值高于对照组，P<0.05；低度恶性组与对照组比较无明显差异；而胶质瘤三个亚组之间互相比较，PI值均有显著差异。
表1 患者组与对照组PI值比较(
±S) 分类, http://www.100md.com
例数
PI(%)
患者组
低度恶性组
中度恶性组
高度恶性组
对照组
30
9
10
11
30
23.23±1.71*
, 百拇医药
20.23±1.65
23.85±1.76*△
25.62±1.64*△
19.75±1.72
注：与对照组比较，*P<0.05；与低度恶性组比较，△P<0.05 表2 患者组与对照组T淋巴细胞亚群结果比较(
±S) 分类例数
CD3(%)
, http://www.100md.com
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
患者组
低度恶性组
中度恶性组
高度恶性组
对照组
30
9
10
11
, 百拇医药
30
57.81±8.96*
59.46±8.71
57.26±10.12*
56.72±9.21*
59.98±9.04
37.48±3.75*
38.35±4.04*
37.52±3.98*
36.56±3.82*
, http://www.100md.com
39.92±4.84
25.48±2.87*
25.16±2.18
26.12±3.12
27.37±2.06*
24.88±3.04
1.17±0.24*
1.35±0.21
1.19±0.18*
0.99±0.16*
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1.40±0.20
注：与对照组比较，*P<0.05
由表2看出，与对照组比较，胶质瘤患者的CD3、CD4值均降低，而CD8升高，且均有显著性差异(P<0.05)。患者组CD4/CD8与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。胶质瘤患者三个亚组之间两两比较，CD4/CD8均有显著性差异(P<0.05)。
对患者组PI值和外周血CD4/CD8进行单因素直线相关分析，两者之间为负相关，相关指数r＝-0.61，P<0.05。
3 讨论
, http://www.100md.com 胶质瘤细胞与正常细胞最主要的区别在于前者具有相对无限的增殖活性。PI值可反映细胞增殖分裂的趋势，在分子水平上表达肿瘤的生物学行为，是判断肿瘤恶性程度及预后的客观指标。本文结果显示，脑胶质瘤患者低度恶性组、中度恶性组和高度恶性组之间的PI值有明显差异，并随肿瘤恶性程度的增高而相应增加。胶质瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关，细胞增殖活跃的胶质瘤恶性程度高，预后较差〔2、3〕。目前，对胶质瘤恶性程度及预后的判断主要依靠肿瘤的临床病理分级，但常规病理分级对介于良恶性之间者很难准确判断。我们认为，在常规病理基础上行胶质瘤细胞PI值测定，有助于提高判断肿瘤恶性程度的准确性，为临床治疗提供依据。
机体免疫包括细胞免疫和体液免疫，细胞免疫在抗肿瘤效应中起主要作用。细胞免疫功能主要由不同的T淋巴细胞亚群产生。正常机体的CD4/CD8是恒定的，此比值改变能够敏感地反映机体细胞免疫功能的变化。本文结果显示，脑胶质瘤患者的CD3、CD4和CD4/CD8均降低，CD8值升高，表明其细胞免疫功能降低。免疫功能失调的原因可能是淋巴细胞增殖及克隆扩增能力下降。淋巴细胞增殖和克隆的关键是白细胞介素-2(IL-2)含量和IL-2受体的表达，而脑胶质瘤患者IL-2含量低于正常，IL-2受体的表达也存在障碍〔4〕。近来有学者提出神经内分泌―免疫网络学说，认为免疫器官亦受神经系统的调节，而这种调节是通过某些神经递质和激素来实现的。脑胶质瘤患者的免疫功能低下可能是由于患者中枢神经系统完整性受到破坏，去甲肾上腺素和肾上腺素含量明显降低〔5〕。
, 百拇医药
对脑胶质瘤细胞PI值和CD4/CD8行直线相关分析表明，两者呈负相关，即PI值越高，CD4/CD8越低，表明胶质瘤细胞增殖活性越强，机体免疫功能失调越严重。胶质瘤细胞可分泌免疫抑制因子，通过活化CD8和糖蛋白而干扰效应淋巴细胞发挥作用，导致CD4/CD8下降〔6〕。胶质瘤细胞增殖越活跃，抑制因子分泌越多，机体细胞免疫功能下降越明显。而机体细胞免疫功能越差，清除和抑制胶质瘤细胞的能力也越差，更有利于胶质瘤的进一步发生、发展。我们认为，对PI值、CD4/CD8两项指标综合分析可以更全面地了解患者的免疫功能状况及胶质瘤的恶性程度。
4 参考文献
1，Mcrkel DE，Mcguire MD，Loploidy W.Proliferative activity and prognoss.DNA flow cytometry of sol：a tumors.Cancer，1990，1194.
, 百拇医药
2，Danova.M，Gaetani.P，Lombardi.D，et al.Multiparametei flow cytonalysis of neoplasms of the central nervous systom：correl of nuclear antigen p 105 and DNA content with cl：behavior.Neurosurgery，1990，83.
4，Daniel W，Mcvicar PH，Donna F，et al.In vitro analysis of the proliferative potential of T cells from patients with brain tumor：glioma-associated inmunosuppresion unrelated to intrinsic celluar defect.J Neurosurg，1992，251.
5，林彤，浦佩玉，钟述猷。神经胶质瘤患者细胞免疫功能变化及其降低机制.中国免疫学杂志，1991，4：238.
6，Wrann M，Thomas L，Larry K，et al.T cell suppressor factor from human glioblastoma cells is a 12.5 kd protein related to transforming growth factor.The EMBO Joural，1987，6：1633.
收稿2000-02-08, 百拇医药