骨痛宁擦剂提取工艺研究
作者：饶凡 杨宁宁 苏兰 许静
单位：华西医科大学附属第一医院 成都 610041
关键词：
华西医学000372
[中图分类号]R284.2 [文献标识码]D
[文章编号]1002-0179(2000)03-0369-02
骨痛宁擦剂系我院在民间验方的基础上，新近研制的一种复方中药擦剂。其处方由淫羊藿、红花、三七、洋金花、生川乌等十二味药组成。经临床观察，它对于风湿及类风湿所引起的关节疼痛有较好的疗效。我们通过紫外分光光度法，对处方中的有效成分之一淫羊藿甙进行了含量测定，并以此为依据对骨痛宁擦剂的提取工艺进行了研究，选择了最佳的提取工艺。
, 百拇医药
表1.正交试验因素、水平表 水平
因 素
A
乙醇浓度(%)
B
溶剂量(相当于药材倍数)
C
提取时间(h)
D
提取次数
1
55
8
, 百拇医药
1
1
2
65
10
1.5
2
3
75
12
2
3
表2.L9(34)(计算表 实验号
, http://www.100md.com
因 素
淫羊藿甙浸出率
(%)
A
B
C
D
1
1
1
1
1
72.00
2
, 百拇医药
1
2
2
2
81.30
3
1
3
3
3
83.50
4
2
1
, 百拇医药
2
3
88.00
5
2
2
3
1
85.78
6
2
3
1
2
, http://www.100md.com
91.05
7
3
1
3
2
90.10
8
3
2
1
3
95.22
9
, 百拇医药
3
3
2
1
87.80
Ⅰ
236.80
245.60
258.27
245.58
Ⅱ
264.83
262.30
, 百拇医药
257.10
262.45
G＝∑9
i＝1＝774.75
Ⅲ
273.12
262.35
259.38
266.72
Ⅰ2
56074.24
60319.36
, http://www.100md.com
66703.39
60309.54
Ⅱ2
70134.93
68801.29
66100.41
68880.00
CT＝G2/9＝66693.06
Ⅲ2
74594.53
68827.52
, http://www.100md.com
67277.98
71139.56
Rj
200803.70
197948.17
200081.78
200329.10
Sj
241.51
-710.34
0.87
83.31
, http://www.100md.com
表3.方差分析表 方差来源
离差平方和
自由度
方差
P
A
SA＝S1＝241.51
2
SA/2＝120.7
<0.01
B
SB＝S2＝-710.34
, 百拇医药
2
SB/2＝-355.17
<0.25
C
SC＝S3 0.87
2
SC/2＝0.44
<0.25
D
SD＝S4＝83.31
2
, 百拇医药
SD/2＝41.66
<0.05
E
SE＝SC＝0.87
2
SE/＝0.44
<0.25
1 仪器与材料
1.1 仪器 ①岛津UV-2100型紫外分光光度计(日本)，②三用紫外线分析仪(上海顾村光电仪器厂)。
1.2 材料 淫羊藿甙对照品(中国药品生物制品检定所)，骨痛宁擦剂(自制)，淫羊藿药材(成都龙泉中药材公司)，硅胶HF254板(自制)，其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 淫羊藿甙的含量测定 采用紫外分光光度法测定淫羊藿甙的含量。
2.1.1 淫羊藿甙标准品液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的淫羊藿甙标准品5mg，置10ml量瓶中，加乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5ml，置100ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，得对照品液(每毫升含淫羊藿甙0.025mg)。
2.1.2 样品液、阴性液的配制 精密吸取骨痛宁擦剂10ml，置80℃水浴上挥干，放冷，残渣加入乙醇溶解后定量转移至25ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，即得供试品液。同法可制得阴性液。
2.1.3 药材样品液的配制 精密称取淫羊藿药材粉末2g，置于500ml烧瓶中，加乙醇250ml，称重，加热回流提取5h，放冷称量，用乙醇补至原重量，过滤，滤液作为药材样品液。
, 百拇医药
2.1.4 最大吸收波长的测定 取淫羊藿甙标准品液，骨痛宁样品液及阴性对照品液，分别测定其紫外吸收图谱，确定其最大吸收波长为270nm,阴性对照品液在此波长处无吸收峰。
2.1.5 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、10.0ml，分别置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，在270nm波长处测定吸收值，得回归方程为y＝0.0433x-0.0206，γ＝0.9996。结果表明，淫羊藿甙在1.25～25.00μg/ml范围内有良好的线性关系。另经实验证实其精密度及稳定性均良好，适用于淫羊藿甙的含量测定。
2.1.6 样品液及药材样品液的测定 精密量取样品液100μl，点于硅胶HF254板上，使成条状，另点10μl的标准品液作为对照，用醋酸乙酯-丙酮-甲醇-水(10∶2∶2∶1)作展开剂展开，取出，挥干溶剂后，置紫外灯(254nm)下定位，刮取与淫羊藿甙相应位置上的暗红色荧光条斑，置10ml试管中，同时刮取同一板上供试品条斑等面积的硅
, 百拇医药
胶HF254作为空白，置另一10ml试管中。各管分别加入乙醇10ml，充分振摇，密闭，放置2h，滤过，收集过滤液，在270nm波长处测定吸收度。用回归方程计算出供试品溶液中淫羊藿甙(C33H40O15)(的百分含量。实验测得药材淫羊藿中淫羊藿甙的含量为1.26%，正交试验以此含量作比较，计算淫羊藿提取过程中淫羊藿甙的浸出率。
2.2 提取工艺优选
2.2.1 考察因素及水平 我们选取不同浓度的乙醇、溶剂量、提取时间、提取次数四个因素进行了实验。在预试中，我们发现其他提取条件相同时，乙醇浓度55%、65%、75%这三个水平提取的淫羊藿甙的含量明显要高于其他浓度。因此在选择乙醇浓度时，我们选择了这三个浓度来考察。
2.2.2 正交表的设计 以淫羊藿甙浸出率为指标，进行L9(34)(的正交试验，正交试验因素、水平见表1。
, http://www.100md.com
2.3 提取工艺过程 取按处方配制的药物粉末120g以不同浓度的乙醇为溶剂，平行操作条件下，分别按L9(34)(正交试验进行加热，回流提取。提取液过滤后，按1.6项下操作，测定其淫羊藿甙的含量并计算其浸出率。L9(34)(计算结果及方差分析见表2、表3。
2.4 结果分析 以淫羊藿甙浸出率为指标，则A因素：极显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ；B因素：较显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ；C因素：不显著性因素，且Ⅲ>Ⅰ>Ⅱ；D因素：较显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ。
因此，最佳的提取条件应是A3B3C3D3，即每次加75%乙醇12倍于药材量加热回流提取3次，每次2小时。但在本工艺中，BC因素均为不显著性因素。从生产实际出发，我们决定采用每次加10倍量乙醇，提取时间定为1小时，即A3B2C1D3。
3 讨论
3.1 通过对骨痛宁擦剂提取工艺的研究，优选出的最佳工艺为，取处方量药物粉末10倍量75%乙醇提取3次，每次1小时，合并乙醇液后过滤分装即可，方法简便易行。
3.2 由于该擦剂中所含的药物成分较多，极易发生干扰，所以我们在薄层层析时重点摸索了展开剂的选择。实验结果表明，使用醋酸乙酯-丙酮-甲醇-水(10∶2∶2∶1)作为展开剂，可有效使成分分离，保证了含量测定的准确。
(收稿日期：2000-05-07), http://www.100md.com
单位：华西医科大学附属第一医院 成都 610041
关键词：
华西医学000372
[中图分类号]R284.2 [文献标识码]D
[文章编号]1002-0179(2000)03-0369-02
骨痛宁擦剂系我院在民间验方的基础上，新近研制的一种复方中药擦剂。其处方由淫羊藿、红花、三七、洋金花、生川乌等十二味药组成。经临床观察，它对于风湿及类风湿所引起的关节疼痛有较好的疗效。我们通过紫外分光光度法，对处方中的有效成分之一淫羊藿甙进行了含量测定，并以此为依据对骨痛宁擦剂的提取工艺进行了研究，选择了最佳的提取工艺。
, 百拇医药
表1.正交试验因素、水平表 水平
因 素
A
乙醇浓度(%)
B
溶剂量(相当于药材倍数)
C
提取时间(h)
D
提取次数
1
55
8
, 百拇医药
1
1
2
65
10
1.5
2
3
75
12
2
3
表2.L9(34)(计算表 实验号
, http://www.100md.com
因 素
淫羊藿甙浸出率
(%)
A
B
C
D
1
1
1
1
1
72.00
2
, 百拇医药
1
2
2
2
81.30
3
1
3
3
3
83.50
4
2
1
, 百拇医药
2
3
88.00
5
2
2
3
1
85.78
6
2
3
1
2
, http://www.100md.com
91.05
7
3
1
3
2
90.10
8
3
2
1
3
95.22
9
, 百拇医药
3
3
2
1
87.80
Ⅰ
236.80
245.60
258.27
245.58
Ⅱ
264.83
262.30
, 百拇医药
257.10
262.45
G＝∑9
i＝1＝774.75
Ⅲ
273.12
262.35
259.38
266.72
Ⅰ2
56074.24
60319.36
, http://www.100md.com
66703.39
60309.54
Ⅱ2
70134.93
68801.29
66100.41
68880.00
CT＝G2/9＝66693.06
Ⅲ2
74594.53
68827.52
, http://www.100md.com
67277.98
71139.56
Rj
200803.70
197948.17
200081.78
200329.10
Sj
241.51
-710.34
0.87
83.31
, http://www.100md.com
表3.方差分析表 方差来源
离差平方和
自由度
方差
P
A
SA＝S1＝241.51
2
SA/2＝120.7
<0.01
B
SB＝S2＝-710.34
, 百拇医药
2
SB/2＝-355.17
<0.25
C
SC＝S3 0.87
2
SC/2＝0.44
<0.25
D
SD＝S4＝83.31
2
, 百拇医药
SD/2＝41.66
<0.05
E
SE＝SC＝0.87
2
SE/＝0.44
<0.25
1 仪器与材料
1.1 仪器 ①岛津UV-2100型紫外分光光度计(日本)，②三用紫外线分析仪(上海顾村光电仪器厂)。
1.2 材料 淫羊藿甙对照品(中国药品生物制品检定所)，骨痛宁擦剂(自制)，淫羊藿药材(成都龙泉中药材公司)，硅胶HF254板(自制)，其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 淫羊藿甙的含量测定 采用紫外分光光度法测定淫羊藿甙的含量。
2.1.1 淫羊藿甙标准品液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的淫羊藿甙标准品5mg，置10ml量瓶中，加乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5ml，置100ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，得对照品液(每毫升含淫羊藿甙0.025mg)。
2.1.2 样品液、阴性液的配制 精密吸取骨痛宁擦剂10ml，置80℃水浴上挥干，放冷，残渣加入乙醇溶解后定量转移至25ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，即得供试品液。同法可制得阴性液。
2.1.3 药材样品液的配制 精密称取淫羊藿药材粉末2g，置于500ml烧瓶中，加乙醇250ml，称重，加热回流提取5h，放冷称量，用乙醇补至原重量，过滤，滤液作为药材样品液。
, 百拇医药
2.1.4 最大吸收波长的测定 取淫羊藿甙标准品液，骨痛宁样品液及阴性对照品液，分别测定其紫外吸收图谱，确定其最大吸收波长为270nm,阴性对照品液在此波长处无吸收峰。
2.1.5 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、10.0ml，分别置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，在270nm波长处测定吸收值，得回归方程为y＝0.0433x-0.0206，γ＝0.9996。结果表明，淫羊藿甙在1.25～25.00μg/ml范围内有良好的线性关系。另经实验证实其精密度及稳定性均良好，适用于淫羊藿甙的含量测定。
2.1.6 样品液及药材样品液的测定 精密量取样品液100μl，点于硅胶HF254板上，使成条状，另点10μl的标准品液作为对照，用醋酸乙酯-丙酮-甲醇-水(10∶2∶2∶1)作展开剂展开，取出，挥干溶剂后，置紫外灯(254nm)下定位，刮取与淫羊藿甙相应位置上的暗红色荧光条斑，置10ml试管中，同时刮取同一板上供试品条斑等面积的硅
, 百拇医药
胶HF254作为空白，置另一10ml试管中。各管分别加入乙醇10ml，充分振摇，密闭，放置2h，滤过，收集过滤液，在270nm波长处测定吸收度。用回归方程计算出供试品溶液中淫羊藿甙(C33H40O15)(的百分含量。实验测得药材淫羊藿中淫羊藿甙的含量为1.26%，正交试验以此含量作比较，计算淫羊藿提取过程中淫羊藿甙的浸出率。
2.2 提取工艺优选
2.2.1 考察因素及水平 我们选取不同浓度的乙醇、溶剂量、提取时间、提取次数四个因素进行了实验。在预试中，我们发现其他提取条件相同时，乙醇浓度55%、65%、75%这三个水平提取的淫羊藿甙的含量明显要高于其他浓度。因此在选择乙醇浓度时，我们选择了这三个浓度来考察。
2.2.2 正交表的设计 以淫羊藿甙浸出率为指标，进行L9(34)(的正交试验，正交试验因素、水平见表1。
, http://www.100md.com
2.3 提取工艺过程 取按处方配制的药物粉末120g以不同浓度的乙醇为溶剂，平行操作条件下，分别按L9(34)(正交试验进行加热，回流提取。提取液过滤后，按1.6项下操作，测定其淫羊藿甙的含量并计算其浸出率。L9(34)(计算结果及方差分析见表2、表3。
2.4 结果分析 以淫羊藿甙浸出率为指标，则A因素：极显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ；B因素：较显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ；C因素：不显著性因素，且Ⅲ>Ⅰ>Ⅱ；D因素：较显著性因素，且Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ。
因此，最佳的提取条件应是A3B3C3D3，即每次加75%乙醇12倍于药材量加热回流提取3次，每次2小时。但在本工艺中，BC因素均为不显著性因素。从生产实际出发，我们决定采用每次加10倍量乙醇，提取时间定为1小时，即A3B2C1D3。
3 讨论
3.1 通过对骨痛宁擦剂提取工艺的研究，优选出的最佳工艺为，取处方量药物粉末10倍量75%乙醇提取3次，每次1小时，合并乙醇液后过滤分装即可，方法简便易行。
3.2 由于该擦剂中所含的药物成分较多，极易发生干扰，所以我们在薄层层析时重点摸索了展开剂的选择。实验结果表明，使用醋酸乙酯-丙酮-甲醇-水(10∶2∶2∶1)作为展开剂，可有效使成分分离，保证了含量测定的准确。
(收稿日期：2000-05-07), http://www.100md.com