HPLC法测定荡涤灵冲剂中芍药甙的含量
作者：胥希龙 刘志刚
单位：胥希龙(三台县人民医院，四川三台 621100)；刘志刚(四川大学化学系，四川成都 6100 64)
关键词：
川北医学院学报000442 中图分类号：R284.2 文献标识码 ：E
文章编号：1005-3697(2000)04-0053-03
荡涤灵冲剂系由黄连、赤芍、地黄、琥珀、地龙5味中药制成， 是清热利湿药物，用于由湿热引起的尿频、尿急、尿痛等尿路感染症，收载于卫生部药品标准WS3-B-0330-90，未作含量测定控制本品质量。赤芍为本处方之臣药，投 料量较大，芍药甙为赤芍之主要活性成分，在生药中含量较高，且易溶于水，在水提浸膏制 剂中含量较高，芍药甙具有血管扩张、抗炎等药理作用，与本品治疗作用一致，故测定其含 量，能够控制本品的内在质量。本文采用了HPLC法测定荡涤灵冲剂中芍药甙的含量，取得了 满意的效果。
, 百拇医药
1 仪器、样品及试药
1.1 实验仪器：高效液相色谱仪：Waters 515泵：Waters 486检测器，Waters柱温 箱；7725Ⅰ手动进样器；CHROMTEK色谱工作站。
色谱柱：天津SUNTEK Kromasil C18(150×4.6mm,5μ)；Waters Nova pak C18(150×3.9mm,4μ)；
超声波清洗机：波达1004型(深圳)；电子分析天平：赛多利斯BP210D型(1/10万)
离心机：台式高速TGL-16G型；微量注射器：25μl,美国HAMILTON。
1.2 实验样品及试药：对照品：芍药甙购自北京中国药品生物制品检定所(含量测定用， 批号为0736-9912)；供试品：荡涤灵冲剂，20g/袋，20袋/盒，铝箔内包装，纸盒外包装。四川渔人制药有限公司提供，批号：991201、991202、991203。缺赤芍阴性空 白：四川渔人制药有限公司提供，除缺赤芍外，按处方比例与工艺模拟成品制备。
, http://www.100md.com
流动相用水：超纯水(西南技术物理研究所)；乙腈：色谱纯；磷酸：分析纯，含量不少于85 %；其他试剂：皆为分析纯。
2 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三乙胺(13∶87∶0.2)(磷酸调PH至2.3)为流动相。
相：检测波长243nm。
3 实验方法
3.1 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重芍药甙对照品，加50%甲醇溶解，制成每1ml含50μg溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，精密称定，置25ml量瓶中，加70%甲 醇20ml，超声处理10min，加70%甲醇至刻度，摇匀，取适量离心，取上清液作为供试品溶 液。
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3.3 系统适用性试验：按上述色谱条件实验，样品色谱(图1)中的芍药甙峰达到基线分离 的最低理论板数按芍药甙峰计算为5256。
图1 达到基线分离的最低理论权数的样品色谱图
3.4 线性关系的考察：精密称取芍药甙对照品适量，用50%甲醇配制芍药甙标准溶 液126μ g.ml-1。分别精密吸取2.5、5.0、7.5、10和12.5μl标准溶液注入色谱仪。以 峰面积积分值对进样量(μg)进行回归，得回归方程与标准曲线(见图2)。结果表明：进样量 在0.315～1.575μg范围内线性关系良好(r=0.99992)。
图2 芍药甙对照品标准曲线图
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3.5 精密度试验对照品溶液(126μg.ml-1)5μl和供试品溶液10μl连续3次 进样，RSD分别为1.05%和0.87%(表1)。
表1 方法精密度试验结果(n=3) 进样次序
1
2
3
RSD(%)
对照品峰面积
464610
458245
467829
, http://www.100md.com
1. 05
供试品峰面积
390475
393684
397325
0.87
3.6 重复性试验：对同一批供试品(批号：991201)按上述色谱条件进行5次平行测 定，结果见表2。表2 方法重复性试验结果 测定次序
1
2
3
4
, http://www.100md.com 5
平均
含量(mg.g-1)
1.056
1.079
1.068
1.054
1.061
1.06
RSD(%)
0.97
3.7 加样回收率试验：取供试品(批号：991201)约1g，精密称定，加入芍药甙适量 ，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表3。
, 百拇医药
表3 样品加样回收率试验结果 样品量
(g)
含芍药甙量
(mg)
加入对照
品量(mg)
测定结果
(mg)
回收 率
(%)
平均值
(%)
RSD
, 百拇医药
(%)
1.0445
1.1072
0.630
1.7382
100.2
1.1070
1.1734
0.630
1.8012
99.7
1.1230
1.1904
, 百拇医药
0.630
1.8230
100.5
99.2
1.7
1.1021
1.1682
1.26
2.3780
96.0
1.0008
1.0608
1.26
, 百拇医药
2.3125
99.3
1.0040
1.0642
1.26
2.3222
99.8
3.8 供试品中芍药甙的含量：按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μl，分别注入液相色谱仪测定，测定3批样品，按外标法进行计算其结果见表4。
表4 3批荡涤灵冲剂中芍药甙含量测定结果 批号
测定次数
, 百拇医药 平均含量
(%)
1
2
3
991201
1.06
1.08
1.07
1. 06
991202
1.24
1.22
, 百拇医药
1.23
1.23
991203
2.21
2.18
2.19
2.19
4 讨 论
4.1 由于处方组合相当复杂，未找到合适的内标物，芍药甙含量测定按外标法进行 计算(中国药典一九九五年版一部附录VID)。
4.2 不同流动相比较实验：其他实验条件不变，将乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)和甲醇 -水(34∶66)两流动相与本色谱条件进行比较，结果，本色谱条件的芍药甙峰对称性更好， 故收载入质量标准正文。
, http://www.100md.com
4.3 不同品牌色谱柱适应性实验：按正文方法操作，国产柱[天津SUNTEK Kromasil C 18(150×4.6mm,5μ)]和进口柱[(Waters Nova pak C18(150×2.9mm,4 μ)]均能使样品中的芍药甙峰达到基线分离，峰形对称，说明本色谱系统适应性良好。
4.4 专属性考察：按正文方法实验，从缺赤芍阴性空白色谱(图3)，对照品色谱(图4)，供 试品色谱(图5)，表明在芍药甙峰处基本无干扰，故本法具备实验的专属性。
4.5 提取条件的研究：由于供试品为水提浸膏剂制成的颗粒剂，考虑到芍药甙的溶 解行为，用同一批供试品(批号991202)分别对提取溶剂和提取时间进行考察，测定结果见表 5～6。
提取溶剂 水、50%甲醇和70%甲醇的测得值较高，三者几乎相同，三者色谱图几乎也无区别 ，但70%甲醇提取液的不容物较多，除杂效果应较佳。
, http://www.100md.com
提取时间 超声提取2min使样品刚好溶解。但10～30min的测得值较高。
图3 缺赤芍阴性空白色谱图
图4 对照品色谱图
图5 供试品色谱图(标准正文法)
表5 不同溶剂提取结果 提取溶剂
水
50%甲醇
, http://www.100md.com 70%甲 醇
90%甲醇
甲醇
平均含量
(mg.g-1)
1.22
1.22
1.23
1.19
1.17
：除溶剂外，其他按正文方法操作表6 不同提取时间测定结果 提取时间(min)
, 百拇医药
2
10
20
30
平均含量(%)
1.19
1.26
1.25
1.25
：除提取时间外，其他按正文方法操作
结论：供试品中芍药甙含量测定的最佳提取条件为：以70%甲醇作为提取溶剂，超声 处理10～30min。本文采用10min。
, 百拇医药 4.6 供试品溶液与对照品溶液稳定性考察
按质量标准含量测定项下方法操作，在同一天内不同时间测定对照品和供试品(批号991201) 溶液的浓度与含量(见表7)，结果表明对照品和供试品溶液在室温条件下放置24h，芍药甙的浓度没有明显改变。
在实验中也曾发现对照品溶液在冰箱中保存1mon，其浓度基本不变。表7 对照品溶液和供试品溶液稳定性考察 测试时间
0h
2h
5h
24h
RSD(%)
对照品(μg.ml-1)
, 百拇医药
126127
127
128
0.64
供试品(mg.g-1)
1.07
1.06
—
1.06
0. 54
参考文献：
[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医 药科技出版社，1994，56～89.
[2] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部).1995.
(收稿日期：2000-09-20), http://www.100md.com
单位：胥希龙(三台县人民医院，四川三台 621100)；刘志刚(四川大学化学系，四川成都 6100 64)
关键词：
川北医学院学报000442 中图分类号：R284.2 文献标识码 ：E
文章编号：1005-3697(2000)04-0053-03
荡涤灵冲剂系由黄连、赤芍、地黄、琥珀、地龙5味中药制成， 是清热利湿药物，用于由湿热引起的尿频、尿急、尿痛等尿路感染症，收载于卫生部药品标准WS3-B-0330-90，未作含量测定控制本品质量。赤芍为本处方之臣药，投 料量较大，芍药甙为赤芍之主要活性成分，在生药中含量较高，且易溶于水，在水提浸膏制 剂中含量较高，芍药甙具有血管扩张、抗炎等药理作用，与本品治疗作用一致，故测定其含 量，能够控制本品的内在质量。本文采用了HPLC法测定荡涤灵冲剂中芍药甙的含量，取得了 满意的效果。
, 百拇医药
1 仪器、样品及试药
1.1 实验仪器：高效液相色谱仪：Waters 515泵：Waters 486检测器，Waters柱温 箱；7725Ⅰ手动进样器；CHROMTEK色谱工作站。
色谱柱：天津SUNTEK Kromasil C18(150×4.6mm,5μ)；Waters Nova pak C18(150×3.9mm,4μ)；
超声波清洗机：波达1004型(深圳)；电子分析天平：赛多利斯BP210D型(1/10万)
离心机：台式高速TGL-16G型；微量注射器：25μl,美国HAMILTON。
1.2 实验样品及试药：对照品：芍药甙购自北京中国药品生物制品检定所(含量测定用， 批号为0736-9912)；供试品：荡涤灵冲剂，20g/袋，20袋/盒，铝箔内包装，纸盒外包装。四川渔人制药有限公司提供，批号：991201、991202、991203。缺赤芍阴性空 白：四川渔人制药有限公司提供，除缺赤芍外，按处方比例与工艺模拟成品制备。
, http://www.100md.com
流动相用水：超纯水(西南技术物理研究所)；乙腈：色谱纯；磷酸：分析纯，含量不少于85 %；其他试剂：皆为分析纯。
2 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三乙胺(13∶87∶0.2)(磷酸调PH至2.3)为流动相。
相：检测波长243nm。
3 实验方法
3.1 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重芍药甙对照品，加50%甲醇溶解，制成每1ml含50μg溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，精密称定，置25ml量瓶中，加70%甲 醇20ml，超声处理10min，加70%甲醇至刻度，摇匀，取适量离心，取上清液作为供试品溶 液。
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3.3 系统适用性试验：按上述色谱条件实验，样品色谱(图1)中的芍药甙峰达到基线分离 的最低理论板数按芍药甙峰计算为5256。
图1 达到基线分离的最低理论权数的样品色谱图
3.4 线性关系的考察：精密称取芍药甙对照品适量，用50%甲醇配制芍药甙标准溶 液126μ g.ml-1。分别精密吸取2.5、5.0、7.5、10和12.5μl标准溶液注入色谱仪。以 峰面积积分值对进样量(μg)进行回归，得回归方程与标准曲线(见图2)。结果表明：进样量 在0.315～1.575μg范围内线性关系良好(r=0.99992)。
图2 芍药甙对照品标准曲线图
, http://www.100md.com
3.5 精密度试验对照品溶液(126μg.ml-1)5μl和供试品溶液10μl连续3次 进样，RSD分别为1.05%和0.87%(表1)。
表1 方法精密度试验结果(n=3) 进样次序
1
2
3
RSD(%)
对照品峰面积
464610
458245
467829
, http://www.100md.com
1. 05
供试品峰面积
390475
393684
397325
0.87
3.6 重复性试验：对同一批供试品(批号：991201)按上述色谱条件进行5次平行测 定，结果见表2。表2 方法重复性试验结果 测定次序
1
2
3
4
, http://www.100md.com 5
平均
含量(mg.g-1)
1.056
1.079
1.068
1.054
1.061
1.06
RSD(%)
0.97
3.7 加样回收率试验：取供试品(批号：991201)约1g，精密称定，加入芍药甙适量 ，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表3。
, 百拇医药
表3 样品加样回收率试验结果 样品量
(g)
含芍药甙量
(mg)
加入对照
品量(mg)
测定结果
(mg)
回收 率
(%)
平均值
(%)
RSD
, 百拇医药
(%)
1.0445
1.1072
0.630
1.7382
100.2
1.1070
1.1734
0.630
1.8012
99.7
1.1230
1.1904
, 百拇医药
0.630
1.8230
100.5
99.2
1.7
1.1021
1.1682
1.26
2.3780
96.0
1.0008
1.0608
1.26
, 百拇医药
2.3125
99.3
1.0040
1.0642
1.26
2.3222
99.8
3.8 供试品中芍药甙的含量：按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μl，分别注入液相色谱仪测定，测定3批样品，按外标法进行计算其结果见表4。
表4 3批荡涤灵冲剂中芍药甙含量测定结果 批号
测定次数
, 百拇医药 平均含量
(%)
1
2
3
991201
1.06
1.08
1.07
1. 06
991202
1.24
1.22
, 百拇医药
1.23
1.23
991203
2.21
2.18
2.19
2.19
4 讨 论
4.1 由于处方组合相当复杂，未找到合适的内标物，芍药甙含量测定按外标法进行 计算(中国药典一九九五年版一部附录VID)。
4.2 不同流动相比较实验：其他实验条件不变，将乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)和甲醇 -水(34∶66)两流动相与本色谱条件进行比较，结果，本色谱条件的芍药甙峰对称性更好， 故收载入质量标准正文。
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4.3 不同品牌色谱柱适应性实验：按正文方法操作，国产柱[天津SUNTEK Kromasil C 18(150×4.6mm,5μ)]和进口柱[(Waters Nova pak C18(150×2.9mm,4 μ)]均能使样品中的芍药甙峰达到基线分离，峰形对称，说明本色谱系统适应性良好。
4.4 专属性考察：按正文方法实验，从缺赤芍阴性空白色谱(图3)，对照品色谱(图4)，供 试品色谱(图5)，表明在芍药甙峰处基本无干扰，故本法具备实验的专属性。
4.5 提取条件的研究：由于供试品为水提浸膏剂制成的颗粒剂，考虑到芍药甙的溶 解行为，用同一批供试品(批号991202)分别对提取溶剂和提取时间进行考察，测定结果见表 5～6。
提取溶剂 水、50%甲醇和70%甲醇的测得值较高，三者几乎相同，三者色谱图几乎也无区别 ，但70%甲醇提取液的不容物较多，除杂效果应较佳。
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提取时间 超声提取2min使样品刚好溶解。但10～30min的测得值较高。
图3 缺赤芍阴性空白色谱图
图4 对照品色谱图
图5 供试品色谱图(标准正文法)
表5 不同溶剂提取结果 提取溶剂
水
50%甲醇
, http://www.100md.com 70%甲 醇
90%甲醇
甲醇
平均含量
(mg.g-1)
1.22
1.22
1.23
1.19
1.17
：除溶剂外，其他按正文方法操作表6 不同提取时间测定结果 提取时间(min)
, 百拇医药
2
10
20
30
平均含量(%)
1.19
1.26
1.25
1.25
：除提取时间外，其他按正文方法操作
结论：供试品中芍药甙含量测定的最佳提取条件为：以70%甲醇作为提取溶剂，超声 处理10～30min。本文采用10min。
, 百拇医药 4.6 供试品溶液与对照品溶液稳定性考察
按质量标准含量测定项下方法操作，在同一天内不同时间测定对照品和供试品(批号991201) 溶液的浓度与含量(见表7)，结果表明对照品和供试品溶液在室温条件下放置24h，芍药甙的浓度没有明显改变。
在实验中也曾发现对照品溶液在冰箱中保存1mon，其浓度基本不变。表7 对照品溶液和供试品溶液稳定性考察 测试时间
0h
2h
5h
24h
RSD(%)
对照品(μg.ml-1)
, 百拇医药
126127
127
128
0.64
供试品(mg.g-1)
1.07
1.06
—
1.06
0. 54
参考文献：
[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医 药科技出版社，1994，56～89.
[2] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部).1995.
(收稿日期：2000-09-20), http://www.100md.com