薄层扫描法测定复方黄芍片中芍药甙的含量
作者：郑国华 苏明武 翁德会*
单位：湖北中医学院(430061)
关键词：
湖北中医杂志990433 复方黄芍片是治疗甲亢的有效药物，由黄芪、白芍等药物组成。药效学实验和临床结果均证实该制剂具有治疗甲状腺机能亢进的作用，有效率为94.7%。为制定质量标准，本文以主药白芍的主要活性成分芍药甙为指标进行了含量测定。
1 实验方法和结果
1.1 仪器、试剂和样品 CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；微量进样器(上海医用激光器械厂)；PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器(重庆)；硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；芍药甙(购于中国药品生物制品检定所)；复方黄芍片(由本院制剂教研室提供)。所用试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
1.2 标准品溶液的制备 精密称取(105℃恒重)芍药甙标准品4.0mg，置2ml容量瓶中，加70%乙醇振摇溶解，并定容至刻度，浓度为2mg/ml，备用。
1.3 样品溶液的制备 取复方黄芍片(素片)适量，粉碎；精密称取10g，加蒸馏水100ml溶解，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液；用正丁醇饱和的水溶液洗提2次，每次50ml，弃去水液；将正丁醇提取液水浴蒸干，残渣用蒸馏水20ml溶解，加到已处理的大孔树脂柱上，加蒸馏水洗脱，流速为0.5ml/min，洗至还原糖反应呈阴性；再用50%乙醇冲洗，流速为0.5ml/min，洗至甙反应呈阴性；收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣用70%乙醇溶解，定容5ml容量瓶中，作为供试品溶液。
1.4 薄层分离及扫描条件选择 取高效薄层硅胶GF254板，厚度0.3mm，105℃活化1h，置干燥器中备用；照中国药典1995年版(一部)附录35页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液和标准液点于同一高效薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，定位后，于薄层扫描仪上测定；λs=215nm，λR=290nm，双波长反射法锯齿扫描，Sx=3，狭缝0.4×0.4mm2，灵敏度：中，光源D2。
, 百拇医药
1.5 线性范围考察 精密吸取标准品液2，4，6，8。10μl点于同一薄层板上，依上述薄层分离条件展开，扫描测定；以点样量为横座标，峰面积积分值为纵座标，绘制曲线，得到一条不能过原点的直线。回归方程：Y=32341.7。X+3475.1，r=0.9995，线性范围：4～20μg。
1.6 样品的含量测定 精密吸取样品液和标准品。液各4μl，点于同一薄层板上，依上述薄层分离条件展开，扫描测定；以外标两点法计算含量，结果见表1。
表1 复方黄芍片中芍药甙的含量测定结果(n=3) 批号
样品含量(mg/g)
RSD(%)
961203
1.05
, 百拇医药
2.16
961223
1.02
2.35
970109
0.97
1.87
970314
0.98
1.76
970410
1.03
2.42
, 百拇医药
1.7 加样回收率试验 取已知芍药甙含量的样品5份，加入芍药甙对照品适量，按样品溶液制备项下的方法进行处理，得加样回收样品液；分别精密吸取标准品液、样品液、加样回收样品液点于同一薄层板上，依上法展开后扫描测定，结果见表2。表2 芍药甙的加样回收率试验结果 编号
样含芍
药甙量
(mg)
加入芍
药甙量
(mg)
实测值
(mg)
回收率
, http://www.100md.com
(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
10.52
2.00
12.92
103.21
2
10.21
, http://www.100md.com
2.00
11.91
97.54
3
9.73
2.00
11.65
99.36
100.36
2.09
4
9.82
2.00
, 百拇医药
11.89
100.58
5
10.31
2.00
12.45
101.12
1.8 稳定性试验 精密吸取标准品溶液4μl，点于薄层板上，依上述薄层分离条件展开，每隔20分钟扫描测定一次，结果表明，在2.5h内其斑点面积积分值基本稳定，RSD=1.57%.。
1.9 精密度试验 以同一浓度的芍药甙对照品溶液4μl点样，测得板内和板间峰面积积分值的相对标准偏差，RSD=2.03%、RSD=3.12%(N=6)。
2 讨论
芍药甙的提取方法有多种，但由于本制剂处方组成药物较多，所提的供试品溶液颜色较深，背景干扰大，不便于分析，因而通过大孔树脂吸附，可排除背景干扰，得到较好的分离效果。
薄层展开时，温度对芍药甙斑点影响较大，经试验，在20～25℃时展开，效果较好。
* 湖北中医学院98届毕业生
(收稿日期：1998-12-04), http://www.100md.com(郑国华 苏明武 翁德会*)
单位：湖北中医学院(430061)
关键词：
湖北中医杂志990433 复方黄芍片是治疗甲亢的有效药物，由黄芪、白芍等药物组成。药效学实验和临床结果均证实该制剂具有治疗甲状腺机能亢进的作用，有效率为94.7%。为制定质量标准，本文以主药白芍的主要活性成分芍药甙为指标进行了含量测定。
1 实验方法和结果
1.1 仪器、试剂和样品 CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；微量进样器(上海医用激光器械厂)；PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器(重庆)；硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；芍药甙(购于中国药品生物制品检定所)；复方黄芍片(由本院制剂教研室提供)。所用试剂均为分析纯。
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1.2 标准品溶液的制备 精密称取(105℃恒重)芍药甙标准品4.0mg，置2ml容量瓶中，加70%乙醇振摇溶解，并定容至刻度，浓度为2mg/ml，备用。
1.3 样品溶液的制备 取复方黄芍片(素片)适量，粉碎；精密称取10g，加蒸馏水100ml溶解，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液；用正丁醇饱和的水溶液洗提2次，每次50ml，弃去水液；将正丁醇提取液水浴蒸干，残渣用蒸馏水20ml溶解，加到已处理的大孔树脂柱上，加蒸馏水洗脱，流速为0.5ml/min，洗至还原糖反应呈阴性；再用50%乙醇冲洗，流速为0.5ml/min，洗至甙反应呈阴性；收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣用70%乙醇溶解，定容5ml容量瓶中，作为供试品溶液。
1.4 薄层分离及扫描条件选择 取高效薄层硅胶GF254板，厚度0.3mm，105℃活化1h，置干燥器中备用；照中国药典1995年版(一部)附录35页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液和标准液点于同一高效薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，定位后，于薄层扫描仪上测定；λs=215nm，λR=290nm，双波长反射法锯齿扫描，Sx=3，狭缝0.4×0.4mm2，灵敏度：中，光源D2。
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1.5 线性范围考察 精密吸取标准品液2，4，6，8。10μl点于同一薄层板上，依上述薄层分离条件展开，扫描测定；以点样量为横座标，峰面积积分值为纵座标，绘制曲线，得到一条不能过原点的直线。回归方程：Y=32341.7。X+3475.1，r=0.9995，线性范围：4～20μg。
1.6 样品的含量测定 精密吸取样品液和标准品。液各4μl，点于同一薄层板上，依上述薄层分离条件展开，扫描测定；以外标两点法计算含量，结果见表1。
表1 复方黄芍片中芍药甙的含量测定结果(n=3) 批号
样品含量(mg/g)
RSD(%)
961203
1.05
, 百拇医药
2.16
961223
1.02
2.35
970109
0.97
1.87
970314
0.98
1.76
970410
1.03
2.42
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1.7 加样回收率试验 取已知芍药甙含量的样品5份，加入芍药甙对照品适量，按样品溶液制备项下的方法进行处理，得加样回收样品液；分别精密吸取标准品液、样品液、加样回收样品液点于同一薄层板上，依上法展开后扫描测定，结果见表2。表2 芍药甙的加样回收率试验结果 编号
样含芍
药甙量
(mg)
加入芍
药甙量
(mg)
实测值
(mg)
回收率
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(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
10.52
2.00
12.92
103.21
2
10.21
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2.00
11.91
97.54
3
9.73
2.00
11.65
99.36
100.36
2.09
4
9.82
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11.89
100.58
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10.31
2.00
12.45
101.12
1.8 稳定性试验 精密吸取标准品溶液4μl，点于薄层板上，依上述薄层分离条件展开，每隔20分钟扫描测定一次，结果表明，在2.5h内其斑点面积积分值基本稳定，RSD=1.57%.。
1.9 精密度试验 以同一浓度的芍药甙对照品溶液4μl点样，测得板内和板间峰面积积分值的相对标准偏差，RSD=2.03%、RSD=3.12%(N=6)。
2 讨论
芍药甙的提取方法有多种，但由于本制剂处方组成药物较多，所提的供试品溶液颜色较深，背景干扰大，不便于分析，因而通过大孔树脂吸附，可排除背景干扰，得到较好的分离效果。
薄层展开时，温度对芍药甙斑点影响较大，经试验，在20～25℃时展开，效果较好。
* 湖北中医学院98届毕业生
(收稿日期：1998-12-04), http://www.100md.com(郑国华 苏明武 翁德会*)